GB 28310-2012 食品添加劑 β-胡蘿卜素(發(fā)酵法).pdf

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB 283102012 中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2012-04-25 發(fā)布 2012-06-25 實(shí)施 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 -胡蘿卜素（發(fā)酵法） GB 283102012 1 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 -胡蘿卜素（發(fā)酵法） 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于經(jīng)絲狀真菌三孢布拉霉（Blakeslea trispora）發(fā)酵而得的食品添加劑 -胡蘿卜素。 2 分子式、結(jié)構(gòu)式、相對(duì)分子質(zhì)量 2.1 分子式 C40H56 2.2 結(jié)構(gòu)式 2.3 相對(duì)分子質(zhì)量 536.88（按 2007 年國(guó)際相對(duì)原子質(zhì)量） 3 技術(shù)要求 3.1 感官要求：應(yīng)符合表 1 的規(guī)定。 表 1 感官要求 項(xiàng) 目 要 求 檢驗(yàn)方法 色澤 暗紅色至棕紅色 取適量樣品置于清潔、干燥的白瓷盤(pán)中，在自然光線 下，觀察其色澤和狀態(tài) 狀態(tài) 結(jié)晶或結(jié)晶性粉末 3.2 理化指標(biāo)：應(yīng)符合表 2 的規(guī)定。 GB 283102012 2 表2 理化指標(biāo) 項(xiàng) 目 指 標(biāo) 檢驗(yàn)方法 總 -胡蘿卜素含量（以 C40H56計(jì)），w/% 96.0 附錄 A 中 A.3 吸光度 比值 A455/A483 1.141.19 附錄 A 中 A.4 A455/A340 0.75 灼燒殘?jiān)瑆/% 0.2 附錄 A 中 A.5 乙醇，w/% 0.8（單獨(dú)或兩者之和） 附錄 A 中 A.6 乙酸乙酯，w/% 異丙醇，w/% 0.1 乙酸異丁酯，w/% 1.0 鉛（Pb）/（mg/kg） 2 GB 5009.12 總砷（以 As 計(jì)）/（mg/kg） 3 GB/T 5009.11 注：商品化的 -胡蘿卜素產(chǎn)品應(yīng)以符合本標(biāo)準(zhǔn)的 -胡蘿卜素為原料，可添加符合食品添加劑質(zhì)量規(guī)格要求的明膠、抗氧化 劑和(或)食用的植物油、糊精、淀粉制成的產(chǎn)品，其總 -胡蘿卜素含量和吸光度比值符合標(biāo)識(shí)值。 GB 283102012 3 附 錄 A 檢驗(yàn)方法 A.1 一般規(guī)定 標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水，在沒(méi)有注明其他要求時(shí)，均指分析純?cè)噭┖虶B/T66822008中規(guī)定的三級(jí)水。試 驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品，在沒(méi)有注明其他要求時(shí)，均按GB/T601、 GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。 A.2 鑒別試驗(yàn) A.2.1 溶解性試驗(yàn) A.2.1.1 試劑和材料 A.2.1.1.1 乙醇。 A.2.1.1.2 植物油。 A.2.1.2 分析步驟 室溫下稱取一定量的樣品分別加入到一定量水、乙醇和植物油中，搖動(dòng)0.5 min5 min，觀察樣品的溶 解情況。-胡蘿卜素幾乎不溶于水和乙醇（溶質(zhì)/溶劑）（1/10000），微溶于植物油（1/100）（溶 質(zhì)/溶劑）（1/1000）。 A.2.2 類胡蘿卜素試驗(yàn) A.2.2.1 試劑和材料 A.2.2.1.1 丙酮。 A.2.2.1.2 5%亞硝酸鈉溶液: 稱取50 g亞硝酸鈉，加水溶解，稀釋并定容至1000 mL。 A.2.2.1.3 0.5 mol/L硫酸溶液。 A.2.2.2 分析步驟 稱取一定量的樣品加丙酮溶解， 樣品的丙酮溶液的顏色在連續(xù)滴加5%亞硝酸鈉溶液和0.5 mol/L硫酸溶 液后逐漸消失。 A.3 總-胡蘿卜素含量的測(cè)定 A.3.1 試劑和材料 A.3.1.1 三氯甲烷。 A.3.1.2 環(huán)己烷。 A.3.2 儀器和設(shè)備 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)。 A.3.3 分析步驟 A.3.3.1 溶液A制備 準(zhǔn)確稱取 0.05 g 試樣，精確至 0.000 1 g，置于 100 mL 容量瓶中，加三氯甲烷 10 mL 溶解試樣，用環(huán) 己烷定容至刻度。取此試樣液 5.0 mL 于 100 mL 棕色容量瓶中，用環(huán)己烷定容至刻度，搖勻，即得。 A.3.3.2 溶液B制備 取溶液 A 5.0mL 于 50mL 棕色容量瓶中，用環(huán)己烷定容至刻度，搖勻，即得。 A.3.3.3 測(cè)定 將溶液 B 置于 1 cm 比色皿中，以環(huán)己烷做空白對(duì)照，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在 455 nm2 nm 范圍內(nèi) 的最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。吸光度應(yīng)控制在 0.30.7 之間，否則應(yīng)調(diào)整試樣液濃度，再重新測(cè)定吸光 GB 283102012 4 度。 A.3.4 結(jié)果計(jì)算 總 -胡蘿卜素含量以 -胡蘿卜素（C40H56）的質(zhì)量分?jǐn)?shù) w1計(jì)，數(shù)值以%表示，按公式（A.1）計(jì)算： （A.1） 式中： A實(shí)際測(cè)定試樣液吸光度的數(shù)值； c被測(cè)試樣液濃度的數(shù)值，單位為克每毫升（g/mL） ； 2500-胡蘿卜素在環(huán)己烷中的百分吸光系數(shù)(E 1% 1cm)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不 得超過(guò)算術(shù)平均值的 1.5 %。 A.4 吸光度比值的測(cè)定 A.4.1 試劑和材料 A.4.1.1 三氯甲烷。 A.4.1.2 環(huán)己烷。 A.4.2 儀器和設(shè)備 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)。 A.4.3 分析步驟 A.4.3.1 樣品溶液的制備 溶液A制備同A.3.3.1，溶液B制備同A.3.3.2。 A.4.3.2 A455/A483的測(cè)定 將溶液B置于1 cm比色皿中， 以環(huán)己烷做空白對(duì)照， 在波長(zhǎng)455 nm和波長(zhǎng)483 nm處分別測(cè)定吸光度(A)， A455/A483的比值應(yīng)在1.141.19之間。 A.4.3.3 A455/A340的測(cè)定 將溶液B和溶液A分別置于1 cm比色皿中，以環(huán)己烷做空白對(duì)照，在波長(zhǎng)455 nm處測(cè)定溶液B的吸光度 （A455），在波長(zhǎng)340 nm處測(cè)定溶液A的吸光度（A340），A455/A340的比值應(yīng)不小于0.75。 A.5 灼燒殘?jiān)臏y(cè)定 A.5.1 試劑和材料 硫酸。 A.5.2 分析步驟 稱取約2 g試樣，精確至0.0001 g，置于已在800 25 灼燒至恒重的坩堝中，用小火緩緩加熱至試 樣完全炭化，放冷后，加約1.0 mL硫酸使其濕潤(rùn)，低溫加熱至硫酸蒸汽除盡后，移入高溫爐中，在800 25 灼燒至恒重。 A.5.3 結(jié)果計(jì)算 灼燒殘?jiān)再|(zhì)量分?jǐn)?shù)w2計(jì)，數(shù)值以%表示，按公式(A.2)計(jì)算： %100 21 2 m mm w(A.2) 式中： m1 殘?jiān)涂折釄遒|(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g ）； 2500 1 1 c w A GB 283102012 5 m2 空坩堝質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g ）； m 稱取的試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)，二次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.05%。 A.6 乙醇、乙酸乙酯、異丙醇、乙酸異丁酯的測(cè)定 A.6.1 試劑和材料 A.6.1.1 乙醇。 A.6.1.2 異丙醇。 A.6.1.3 乙酸乙酯。 A.6.1.4 乙酸異丁酯。 A.6.1.5 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)：色譜純。 A.6.2 儀器和設(shè)備 氣相色譜儀，帶氫火焰離子檢測(cè)器（FID）和頂空進(jìn)樣器。 A.6.3 參考色譜條件 A.6.3.1 色譜柱：DB-624毛細(xì)管柱，30 m0.53mm，膜厚3.0 m；或其他等效的色譜柱。 A.6.3.2 載氣：氦氣或氮?dú)狻?A.6.3.3 載氣流量：4.8 mL/min。 A.6.3.4 進(jìn)樣口溫度：250 。 A.6.3.5 柱溫：50 ，以1 /min升至60 ，再以9.2 min升至115 ，再以35 min升至220 保持6 min。 A.6.3.6 檢測(cè)器溫度：270 。 A.6.3.7 分流比：51。 A.6.3.8 進(jìn)樣體積：1 mL定量環(huán)。 A.6.4 頂空條件 A.6.4.1 頂空瓶溫度：100 。 A.6.4.2 定量環(huán)溫度：110 。 A.6.4.3 傳輸線溫度：120 。 A.6.4.4 頂空瓶平衡時(shí)間：50 min。 A.6.4.5 氣相循環(huán)時(shí)間：30.0 min。 A.6.4.6 加壓時(shí)間：0.2 min。 A.6.4.7 定量環(huán)填充時(shí)間：0.2 min。 A.6.4.8 定量環(huán)平衡時(shí)間：0.05 min。 A.6.4.9 進(jìn)樣時(shí)間：1.0 min。 A.6.4.10 頂空瓶壓力：95.15kPa（13.8 psi） 。 A.6.5 分析步驟 A.6.5.1 對(duì)照液制備 A.6.5.1.1 對(duì)照液制備：精密吸取乙醇34 L、異丙醇4.5 L、乙酸乙酯30 L、乙酸異丁酯38 L，置于100 mL容量瓶中， 用DMF稀釋至刻度， 搖勻， 移取3.0 mL到10 mL頂空瓶中， 封蓋。 該對(duì)照溶液中含有乙醇0.2686 mg/mL，異丙醇0.035325 mg/mL，乙酸乙酯0.2703 mg/mL, 乙酸異丁酯0.3325 mg/mL。 注:乙醇密度0.790 g/mL，異丙醇密度0.785 g/mL，乙酸乙酯密度0.901 g/mL，乙酸異丁酯密度0.875 g/mL。 A.6.5.1.2 靈敏度溶液制備：精密吸取5.0 mL對(duì)照液于50 mL 容量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻，移取 3.0 mL到10 mL頂空瓶中，封蓋。該溶液中含有乙醇0.02686 mg/mL（相對(duì)應(yīng)于試樣中濃度約0.08%），異 GB 283102012 6 丙醇0.0035325 mg/mL（相對(duì)應(yīng)于試樣中濃度約0.01%），乙酸乙酯0.02703 mg/mL（相對(duì)應(yīng)于試樣中濃度 約0.08%），乙酸異丁酯0.03325 mg/mL（相對(duì)應(yīng)于試樣中濃度約0.1%）。 A.6.5.2 試樣液制備 精確稱取試樣約 0.1 g 到 10 mL 頂空瓶中，加 3.0 mLDMF 稀釋，封蓋，搖勻，此為試樣液。 A.6.5.3 系統(tǒng)適應(yīng)性要求 分別移取上述A.6.5.1對(duì)照液3.0 mL于6個(gè)10 mL頂空瓶中，分別進(jìn)樣，各個(gè)峰理論板數(shù)應(yīng)不小于5000， 峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得大于10.0%，靈敏度溶液中主峰信噪比應(yīng)不小于10。 A.6.5.4 測(cè)定 分別取對(duì)照液和試樣液頂空進(jìn)樣， 用外標(biāo)法計(jì)算樣品中的乙醇、 異丙醇、 乙酸乙酯和乙酸異丁酯含量。 A.6.6 結(jié)果計(jì)算 乙醇、 異丙醇、 乙酸乙酯和乙酸異丁酯的含量分別以質(zhì)量分?jǐn)?shù)wi計(jì)， 數(shù)