GB14755-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑維生素D2(麥角鈣化醇).pdf

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 147552010中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布2010-12-21 發(fā)布 2011-02-21 實(shí)施食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 維生素 D2（麥角鈣化醇） GB 14755-2010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替 GB 147551993食品添加劑 維生素 D2。 本標(biāo)準(zhǔn)與 GB 147551993 相比，主要變化如下： 增加了紅外光譜鑒別； 維生素 D2的測定系統(tǒng)適用性試驗(yàn)所用樣品由維生素 D2改為維生素 D3，高效液相色譜含量測定方法由內(nèi)標(biāo)法改為外標(biāo)法； 洋地黃皂苷試驗(yàn)檢查麥角甾醇修改為薄層色譜法； 增加了還原性物質(zhì)指標(biāo)和試驗(yàn)方法； 增加了重金屬指標(biāo)和試驗(yàn)方法； 增加了砷指標(biāo)和試驗(yàn)方法。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 和附錄 B 為規(guī)范性附錄，附錄 C 為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB 14755-1993 GB 14755-2010 1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 維生素 D2（麥角鈣化醇） 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于以麥角甾醇為原料制得的食品添加劑維生素 D2。 2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 3 化學(xué)名稱、分子式、結(jié)構(gòu)式和相對分子質(zhì)量 3.1 化學(xué)名稱 9,10-開環(huán)麥角甾-5,7,10（19）,22-四烯-3-醇 3.2 分子式 C28H44O 3.3 結(jié)構(gòu)式 CH2HOCHCHH3CCH3CHCHCH3CH(CH3)2 3.4 相對分子質(zhì)量 396.66（按 2007 年國際相對原子質(zhì)量） 4 技術(shù)要求 4.1 感官要求：應(yīng)符合表 1 的規(guī)定。 表 1 感官要求 項(xiàng) 目 要 求 檢驗(yàn)方法 色澤 無色或白色 取適量樣品置于清潔、干燥的試管中，在自然光線下，觀察色澤和組織狀態(tài)，嗅其氣味。 氣味 無臭 組織狀態(tài) 針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末 4.2 理化指標(biāo)：應(yīng)符合表 2 的規(guī)定。 GB 14755-2010 2 表 2 理化指標(biāo) 項(xiàng)目 指標(biāo) 檢驗(yàn)方法 維生素 D2（C28H44O）,/ % 98.0103.0 附錄A中A.4 麥角甾醇，w /% 0.2 附錄A中A.5 比旋光度m(20,D)/( )dm2 kg-1 +102.0 +107.0 附錄A中A.6 質(zhì)量吸收系數(shù)（265nm）/（L/cmg） 4649 附錄A中A.7 還原性物質(zhì) （四唑藍(lán)顯色試驗(yàn)），w /% 0.002 附錄A中A.8 砷（As）/(mg/kg) 2 附錄A中A.9 重金屬（以Pb計(jì)）/(mg/kg) 20 附錄A中A.10 GB 14755-2010 3 附 錄 A （規(guī)范性附錄） 檢驗(yàn)方法 A.1 安全提示 本標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法中使用的部分試劑具有毒性或腐蝕性，按相關(guān)規(guī)定操作，使用時(shí)需小心謹(jǐn)慎。若濺到皮膚上應(yīng)立即用水沖洗，嚴(yán)重者應(yīng)立即治療。在使用揮發(fā)性酸時(shí)，要在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。 A.2 一般規(guī)定 本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和 GB/T 66822008 中規(guī)定的三級水。 試驗(yàn)方法中所用雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時(shí)，均按 GB/T 602 、GB/T 603 之規(guī)定制備。 A.3 鑒別試驗(yàn) A.3.1 醋酐濃硫酸呈色試驗(yàn) A.3.1.1 試劑和材料 A.3.1.1.1 三氯甲烷。 A.3.1.1.2 乙酸酐。 A.3.1.1.3 硫酸。 A.3.1.2 分析步驟 取約0.5 mg實(shí)驗(yàn)室樣品， 加5 mL三氯甲烷溶解后， 加0.3 mL醋酐與0.1 mL硫酸， 振搖， 初顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙詈笞優(yōu)榫G色。 A.3.2 紅外光譜試驗(yàn) 采用溴化鉀壓片法， 按照 GB/T 6040 進(jìn)行試驗(yàn)， 實(shí)驗(yàn)室樣品的紅外光譜應(yīng)與對照的圖譜一致 （對照圖譜見附錄 B）。 A.4 維生素D2的測定 A.4.1 方法提要 用高效液相色譜法，在選定的工作條件下，通過色譜柱使樣品分離，用紫外吸收檢測器檢測，用外標(biāo)法定量，計(jì)算樣品中維生素 D2的含量。 A.4.2 試劑和材料 A.4.2.1 正戊醇：色譜純。 A.4.2.2 正己烷：色譜純。 A.4.2.3 異辛烷：色譜純。 A.4.2.4 維生素D2對照品。 GB 14755-2010 4 A.4.2.5 維生素D3對照品。 A.4.3 儀器和設(shè)備 高效液相色譜儀（HPLC）。 A.4.4 色譜分析條件 推薦的色譜柱及典型色譜操作條件見表 A.1，維生素 D3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)高效液相色譜圖參見圖C.1，各組分的相對保留時(shí)間參見表 C.1。其他能達(dá)到同等分離程度的色譜柱和色譜條件均可使用。 表 A.1 色譜柱和典型色譜操作條件 色譜柱 柱長 250mm，柱內(nèi)徑 4.6mm，硅膠色譜柱 流動(dòng)相 正己烷-正戊醇 （1000+3） 流速 2 mL/min 檢測器檢測波長 254 nm A.4.5 分析步驟 A.4.5.1 維生素D3對照品系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)貯備液的制備 稱取約 25 mg 維生素 D3對照品，精確至 0.000 1 g，置 100 mL 棕色容量瓶中，加 80 mL 異辛烷，用超聲處理助溶 1min，避免加熱，使完全溶解，再加異辛烷至刻度，搖勻充氮密塞，避光，0以下保存。 A.4.5.2 實(shí)驗(yàn)室樣品溶液的制備 稱取約 25 mg 實(shí)驗(yàn)室樣品，精確至 0.000 1 g，置 100 mL 棕色容量瓶中，加 80 mL 異辛烷，用超聲處理助溶 1min，避免加熱，使完全溶解，再加異辛烷至刻度，搖勻。量取 5 mL0.05 mL 上述溶液，置 10 mL 棕色容量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻。 A.4.5.3 維生素D2對照品溶液的制備 稱取約 25 mg 維生素 D2對照品，精確至 0.000 1 g，置 100 mL 棕色容量瓶中，加 80 mL 異辛烷，用超聲處理助溶 1min，避免加熱，使完全溶解，再加異辛烷至刻度，量取上述溶液 5 mL0.05 mL，置 10 mL 棕色容量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻。 A.4.5.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以硅膠為填充劑的色譜柱，正己烷-正戊醇（1000+3）為流動(dòng)相，檢測波長254 nm，流速約為2 mL/min。量取維生素D3對照品貯備溶液5 mL，置具塞玻璃容器中，充氮后密塞，置90水浴加熱1h，取出迅速冷卻， 加正己烷5 mL0.05 mL， 搖勻， 置1 cm具塞石英吸收池中， 在2支主波長分別為254 nm和365 nm的紫外光燈下，將石英吸收池斜放成45，并距燈管5 cm6 cm，照射5min，使溶液中含有前維生素D3、反式維生素D3、維生素D3和速甾醇D3。取此溶液注入液相色譜儀，測定維生素D3的峰值，先后進(jìn)樣5次，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%，前維生素D3（與維生素D3的比保留時(shí)間為0.5）與反式維生素D3（與維生素D3的比保留時(shí)間約為0.6）以及維生素D3與速甾醇D3（與維生素D3的比保留時(shí)間約為1.1）的峰分離度均應(yīng)大于1.0。 A.4.5.5 測定 取20L實(shí)驗(yàn)室樣品溶液注入液相色譜儀, 記錄色譜圖，另取維生素D2對照品溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出供試品中維生素D2的含量。 A.4.6 結(jié)果計(jì)算 GB 14755-2010 5 根據(jù)色譜圖計(jì)算維生素D2的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1，數(shù)值以%表示，按公式(A.1)計(jì)算 12112100%mAwAm= （A.1） 式中： 1m對照品溶液中維生素D2的進(jìn)樣量的數(shù)值，單位為微克（g）； 2A實(shí)驗(yàn)室樣品溶液中維生素D2的峰面積的數(shù)值； 1A對照品溶液中維生素D2的峰面積的數(shù)值； 2m實(shí)驗(yàn)室樣品溶液中維生素D2的進(jìn)樣量的數(shù)值，單位為微克（g）。 取兩次平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為測定結(jié)果，兩次平行測定的允許絕對差不大于 1.5 %。 A.5 麥角甾醇的測定 A.5.1 方法提要 將維生素 D2溶液點(diǎn)樣于薄層板上，經(jīng)展開，顯色后，所得的色譜圖與對照品溶液按同法所得的色譜圖作對比，對維生素 D2進(jìn)行雜質(zhì)檢查。 A.5.2 試劑和材料 A.5.2.1 角鯊?fù)槁确氯芤海?0 g/L。 A.5.2.2 展開劑:環(huán)己烷-乙醚（1+1） 。 A.5.2.3 維生素D2對照品。 A.5.2.4 麥角甾醇對照品。 A.5.3 分析步驟 A.5.3.1 對照品溶液的配制 稱取約 50 mg 維生素 D2對照品，精確至 0.000 2 g，用 1 mL 角鯊?fù)槁确氯芤喝芙?，得對照品溶液?A.5.3.2 實(shí)驗(yàn)室樣品溶液的配制 稱取約50 mg維生素D2實(shí)驗(yàn)室樣品，精確至0.000 2 g，用1 mL角鯊?fù)槁确氯芤喝芙猓脤?shí)驗(yàn)室樣品溶液。 A.5.3.3 麥角甾醇對照溶液的配制 稱取約5 mg麥角甾醇對照品，精確至0.1 mg，置于50 mL容量瓶中，加角鯊?fù)槁确氯芤?0 mL溶解并稀釋至刻度，搖勻。 A.5.3.4 顯色劑的配制 取1.0 g三氯化銻，加20 mL乙酰氯溶解。 A.5.3.5 測定 分別取10 L對照品溶液、實(shí)驗(yàn)室樣品溶液及麥角甾醇對照溶液，分別點(diǎn)于以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G 薄層板上，用展開劑暗處展開，晾干，用顯色劑顯色。實(shí)驗(yàn)室樣品溶液與對照品溶液的主斑點(diǎn)Rf值及顏色應(yīng)一致，實(shí)驗(yàn)室樣品溶液的雜質(zhì)斑點(diǎn)不得深于麥角甾醇對照溶液相應(yīng)的斑點(diǎn)。 A.6 比旋光度的測定 GB 14755-2010 6 A.6.1 試劑和材料 無水乙醇。 A.6.2 儀器和設(shè)備 旋光儀。 A.6.3 分析步驟 取實(shí)驗(yàn)室樣品適量，精確至0.000 2 g，加無水乙醇制成1 mL中約含40 mg的溶液，其他按GB/T 613-2007規(guī)定的方法進(jìn)行。（注：在溶液配制后30min內(nèi)測定）。 A.6.4 結(jié)果計(jì)算 比旋光度m(20,D)按公式(A.2)計(jì)算： ()20,mC Dl= (A.2) 式中： 測得的旋光角,單位為度()； l 旋光管的長度,單位為分米(dm)； 溶液中有效組分的質(zhì)量濃度,單位為克每毫升(g/mL)。 A.7 質(zhì)量吸收系數(shù)的測定 A.7.1 試劑和材料 無水乙醇。 A.7.2 儀器和設(shè)備 紫外分光光度儀。 A.7.3 分析步驟 稱取實(shí)驗(yàn)室樣品適量，精確至0.000 2 g，加乙醇制成每1 mL中約含10 g樣品的溶液，按照GB/T 9721 在265 nm1 nm的波長處測定吸光度A，求其質(zhì)量吸收系數(shù)。 A.7.4 結(jié)果計(jì)算 根據(jù)吸光度A計(jì)算維生素D2的質(zhì)量吸收系數(shù)，數(shù)值以 ( )dm2 kg-1表示，按公式(A.3)計(jì)算： Ab= (A.3) 式中： A樣品溶液的吸光度的數(shù)值； b光路長度（即吸收池厚度）的數(shù)值，單位為厘米（cm） ； 實(shí)驗(yàn)室樣品溶液的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為克每升（g/L） 。 A.8 還原性物質(zhì)的測定 A.8.1 方法原理 GB 14755-2010 7 還原性物質(zhì)在強(qiáng)堿性溶液中能將四唑藍(lán)還原為有色甲月替（formazan） ，與對甲二酚無水乙醇還原物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色比較做限量檢查。 A.8.2 試劑和材料 A.8.2.1 無水乙醇。 A.8.2.2 甲醇。 A.8.2.3 冰乙酸。 A.8.2.4 四唑藍(lán)甲醇溶液：50 mg/mL。 A.8.2.5 羥化四甲銨溶液：羥化四甲銨水溶液(100 g/L) -無水乙醇（1+9） 。 A.8.2.6 對甲二酚無水乙醇溶液：0.2 g/mL。 A.8.3 分析步驟 A.8.3.1 實(shí)驗(yàn)室樣品溶液的制備 稱取約0.1 g實(shí)驗(yàn)室樣品，精確至0.001 g，溶解于無水乙醇中，稀釋至10 mL，加入0.5 mL四唑藍(lán)甲醇溶液和0.5 mL羥化四甲銨溶液，靜置5min，加入1.0 mL冰乙酸，搖勻。 A.8.3.2 對照溶液的制備 量取10 mL0.05 mL 0.2 g/mL對甲二酚無水乙醇溶液，加入0.5 mL四唑藍(lán)甲醇溶液和0.5 mL羥化四甲銨溶液，靜置5min，加入1.0 mL冰乙酸，搖勻。 A.8.3.3 空白溶液的制備 取 10 mL 無水乙醇，加入 0.5 mL 四唑藍(lán)甲醇溶液和 0.5 mL 羥化四甲銨溶液，靜置 5min，加入1.0 mL 冰乙酸，搖勻。 A.8.3.4 測定 在525 nm波長處，用空白溶液調(diào)零，分別測定實(shí)驗(yàn)室樣品溶液與對照溶液的吸光度，實(shí)驗(yàn)室樣品溶液的吸光度不得大于對照溶液。 A.9 砷的測定 取5 g0.01 g實(shí)驗(yàn)室樣品，用干灰化法處理樣品。取相同量的氧化鎂、硝酸鎂與試樣同法處理，做試劑空白試驗(yàn)。量取10 mL0.05 mL砷標(biāo)準(zhǔn)溶液（含砷2.0g），同法處理，制備砷限量標(biāo)準(zhǔn)。按GB/T5009.762003砷斑法的規(guī)定進(jìn)行。 A.10 重金屬的測定 A.10.1 試劑和材料 A.10.1.1 硝酸。 A.10.1.2 硫酸。 A.10.1.3 鹽酸。 A.10.1.4 甘油。 A.10.1.5 乙酸銨。 A.10.1.6 硝酸鉛。 A.10.1.7 硫代乙酰胺。 A.10.1.8 氨試液：4001000。 GB 14755-2010 8 A.10.1.9 氫氧化鈉溶液：c（NaOH）=1 mol/L。 A.10.1.10 鹽酸溶液：c（HCl）=2 mol/L。 A.10.1.11 鹽酸溶液：c（HCl）=7 mol/L。 A.10.1.12 氨水溶液：c（NH3H2O）=5 mol/L。 A.10.1.13 酚酞指示液：10g/L乙醇溶液。 A.10.1.14 乙酸鹽緩沖液（pH3.5） ：取25 g 乙酸銨，加水25 mL溶解后，加7 mol/L鹽酸溶液38 mL，用2 mol/L鹽酸溶液或氨水溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH至3.5（pH計(jì)） ，用水稀釋至100 mL。 A.10.1.15 硫代乙酰胺試液：取4 g硫代乙酰胺，精確至0.01 g，加水使溶解成100 mL，置冰箱中保存。臨用前取5.0 mL混合液（由1 mol/L 15 mL氫氧化鈉溶液、5.0 mL水及20 mL甘油組成） ，加上述1.0 mL硫代乙酰胺溶液，置水浴上加熱20s，冷卻，立即使用。 A.10.1.16 鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.160 g硝酸鉛，精確至0.000 2g,置于1000 mL容量瓶中，加5 mL硝酸與50 mL水溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，移?。?00.02）mL貯備液，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于10 g的Pb） 。配置與貯存用的玻璃儀器均不得含鉛。 A.10.2 分析步驟 按中華人民共和國藥典200