GB5009.124-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸的測(cè)定.pdf

中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 6食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸的測(cè)定2 0 1 6 - 1 2 - 2 3發(fā)布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)國(guó) 家 食 品 藥 品 監(jiān) 督 管 理 總 局發(fā) 布G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 6 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替G B/T5 0 0 9.1 2 42 0 0 3 食品中氨基酸的測(cè)定 。本標(biāo)準(zhǔn)與G B/T5 0 0 9.1 2 42 0 0 3相比, 主要變化如下: 標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“ 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測(cè)定” ; 擴(kuò)大了適用范圍; 增加了方法的檢出限和定量限; 修改了結(jié)果計(jì)算的公式。G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 61 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用氨基酸分析儀( 茚三酮柱后衍生離子交換色譜儀) 測(cè)定食品中氨基酸的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中酸水解氨基酸的測(cè)定, 包括天冬氨酸、 蘇氨酸、 絲氨酸、 谷氨酸、 脯氨酸、 甘氨酸、 丙氨酸、 纈氨酸、 蛋氨酸、 異亮氨酸、 亮氨酸、 酪氨酸、 苯丙氨酸、 組氨酸、 賴氨酸和精氨酸共1 6種氨基酸。2 原理食品中的蛋白質(zhì)經(jīng)鹽酸水解成為游離氨基酸, 經(jīng)離子交換柱分離后, 與茚三酮溶液產(chǎn)生顏色反應(yīng),再通過(guò)可見(jiàn)光分光光度檢測(cè)器測(cè)定氨基酸含量。3 試劑和材料除非另有說(shuō)明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2中規(guī)定的一級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 鹽酸(HC l) : 濃度3 6%, 優(yōu)級(jí)純。3.1.2 苯酚(C6H5OH) 。3.1.3 氮?dú)? 純度9 9.9%。3.1.4 檸檬酸鈉(N a3C6H5O72 H2O) : 優(yōu)級(jí)純。3.1.5 氫氧化鈉(N a OH) : 優(yōu)級(jí)純。3.2 試劑配制3.2.1 鹽酸溶液(6m o l/L) : 取5 0 0m L鹽酸加水稀釋至10 0 0m L, 混勻。3.2.2 冷凍劑: 市售食鹽與冰塊按質(zhì)量13混合。3.2.3 氫氧化鈉溶液(5 0 0g/L) : 稱取5 0 g氫氧化鈉, 溶于5 0m L水中, 冷卻至室溫后, 用水稀釋至1 0 0m L, 混勻。3.2.4 檸檬酸鈉緩沖溶液c(N a+)=0.2m o l/L : 稱取1 9.6g檸檬酸鈉加入5 0 0m L水溶解, 加入1 6.5m L鹽酸, 用水稀釋至10 0 0m L, 混勻, 用6m o l/L鹽酸溶液或5 0 0g/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)p H至2.2。3.2.5 不同p H和離子強(qiáng)度的洗脫用緩沖溶液: 參照儀器說(shuō)明書配制或購(gòu)買。3.2.6 茚三酮溶液: 參照儀器說(shuō)明書配制或購(gòu)買。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液: 經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液。G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 62 3.3.2 1 6種單個(gè)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品: 固體, 純度9 8%。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1m o l/m L) : 分別準(zhǔn)確稱取單個(gè)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品( 精確至0.0 0 00 1g) 于同一5 0m L燒杯中, 用8.3m L 6m o l/L鹽酸溶液溶解, 精確轉(zhuǎn)移至2 5 0m L容量瓶中, 用水稀釋定容至刻度, 混勻( 各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品稱量質(zhì)量參考值見(jiàn)表1) 。3.4.2 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液(1 0 0n m o l/m L) : 準(zhǔn)確吸取混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0m L于1 0m L容量瓶中, 加p H 2.2檸檬酸鈉緩沖溶液定容至刻度, 混勻, 為標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)液。4 儀器和設(shè)備4.1 實(shí)驗(yàn)室用組織粉碎機(jī)或研磨機(jī)。4.2 勻漿機(jī)。4.3 分析天平: 感量分別為0.0 0 01g和0.0 0 00 1g。4.4 水解管: 耐壓螺蓋玻璃試管或安瓿瓶, 體積為2 0m L3 0m L。4.5 真空泵: 排氣量4 0L/m i n。4.6 酒精噴燈。4.7 電熱鼓風(fēng)恒溫箱或水解爐。4.8 試管濃縮儀或平行蒸發(fā)儀( 附帶配套1 5m L2 5m L試管) 。4.9 氨基酸分析儀: 茚三酮柱后衍生離子交換色譜儀。5 分析步驟5.1 試樣制備固體或半固體試樣使用組織粉碎機(jī)或研磨機(jī)粉碎, 液體試樣用勻漿機(jī)打成勻漿密封冷凍保存, 分析用時(shí)將其解凍后使用。5.2 試樣稱量均勻性好的樣品, 如奶粉等, 準(zhǔn)確稱取一定量試樣( 精確至0.0 0 01g) , 使試樣中蛋白質(zhì)含量在1 0m g 2 0m g范圍內(nèi)。對(duì)于蛋白質(zhì)含量未知的樣品, 可先測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)含量。將稱量好的樣品置于水解管中。很難獲得高均勻性的試樣, 如鮮肉等, 為減少誤差可適當(dāng)增大稱樣量, 測(cè)定前再做稀釋。對(duì)于蛋白質(zhì)含量低的樣品, 如蔬菜、 水果、 飲料和淀粉類食品等, 固體或半固體試樣稱樣量不大于2g, 液體試樣稱樣量不大于5g。5.3 試樣水解根據(jù)試樣的蛋白質(zhì)含量, 在水解管內(nèi)加1 0m L1 5m L 6m o l/L鹽酸溶液。對(duì)于含水量高、 蛋白質(zhì)含量低的試樣, 如飲料、 水果、 蔬菜等, 可先加入約相同體積的鹽酸混勻后, 再用6m o l/L鹽酸溶液補(bǔ)充至大約1 0m L。繼續(xù)向水解管內(nèi)加入苯酚3滴4滴。將水解管放入冷凍劑中, 冷凍3m i n 5m i n, 接到真空泵的抽氣管上, 抽真空( 接近0P a) , 然后充入氮?dú)? 重復(fù)抽真空-充入氮?dú)?次后, 在充氮?dú)鉅顟B(tài)下封口或擰緊螺絲蓋。將已封口的水解管放在1 1 01 的電熱鼓風(fēng)恒溫箱或水解爐內(nèi), 水解2 2h后, 取出, 冷卻至室溫。G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 63 打開(kāi)水解管, 將水解液過(guò)濾至5 0m L容量瓶?jī)?nèi), 用少量水多次沖洗水解管, 水洗液移入同一5 0m L容量瓶?jī)?nèi), 最后用水定容至刻度, 振蕩混勻。準(zhǔn)確吸取1.0m L濾液移入到1 5m L或2 5m L試管內(nèi), 用試管濃縮儀或平行蒸發(fā)儀在4 0 5 0加熱環(huán)境下減壓干燥, 干燥后殘留物用1m L2m L水溶解, 再減壓干燥, 最后蒸干。用1.0m L2.0m Lp H 2.2檸檬酸鈉緩沖溶液加入到干燥后試管內(nèi)溶解, 振蕩混勻后, 吸取溶液通過(guò)0.2 2m濾膜后, 轉(zhuǎn)移至儀器進(jìn)樣瓶, 為樣品測(cè)定液, 供儀器測(cè)定用。5.4 測(cè)定5.4.1 儀器條件使用混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液注入氨基酸自動(dòng)分析儀, 參照J(rèn) J G1 0 6 42 0 1 1氨基酸分析儀檢定規(guī)程及儀器說(shuō)明書, 適當(dāng)調(diào)整儀器操作程序及參數(shù)和洗脫用緩沖溶液試劑配比, 確認(rèn)儀器操作條件。5.4.2 色譜參考條件a) 色譜柱: 磺酸型陽(yáng)離子樹(shù)脂;b) 檢測(cè)波長(zhǎng):5 7 0n m和4 4 0n m。5.4.3 試樣的測(cè)定混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品測(cè)定液分別以相同體積注入氨基酸分析儀, 以外標(biāo)法通過(guò)峰面積計(jì)算樣品測(cè)定液中氨基酸的濃度。6 分析結(jié)果的表述6.1 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中各氨基酸濃度的計(jì)算各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品稱量質(zhì)量參考值見(jiàn)表1。表1 配制混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液時(shí)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品的稱量質(zhì)量參考值及分子量氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品名稱稱量質(zhì)量參考值m g摩爾質(zhì)量g/m o l氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品名稱稱量質(zhì)量參考值m g摩爾質(zhì)量g/m o lL -天門冬氨酸3 31 3 3.1L -蛋氨酸3 71 4 9.2L -蘇氨酸3 01 1 9.1L -異亮氨酸3 31 3 1.2L -絲氨酸2 61 0 5.1L -亮氨酸3 31 3 1.2L -谷氨酸3 71 4 7.1L -酪氨酸4 51 8 1.2L -脯氨酸2 91 1 5.1L -苯丙氨酸4 11 6 5.2甘氨酸1 97 5.0 7L -組氨酸鹽酸鹽5 22 0 9.7L -丙氨酸2 28 9.0 6L -賴氨酸鹽酸鹽4 61 8 2.7L -纈氨酸2 91 1 7.2L -精氨酸鹽酸鹽5 32 1 0.7 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中各氨基酸的含量按式(1) 計(jì)算:cj=mjMj2 5 010 0 0(1) 式中:G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 64 cj 混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中氨基酸j的濃度, 單位為微摩爾每毫升(m o l/m L) ;mj 稱取氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品j的質(zhì)量, 單位為毫克(m g) ;Mj 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品j的分子量;2 5 0 定容體積, 單位為毫升(m L) ;10 0 0 換算系數(shù)。結(jié)果保留4位有效數(shù)字。6.2 樣品中氨基酸含量的計(jì)算樣品測(cè)定液氨基酸的含量按式(2) 計(jì)算:ci=csAsAi(2) 式中:ci 樣品測(cè)定液氨基酸i的含量, 單位為納摩爾每毫升(n m o l/m L) ;Ai 試樣測(cè)定液氨基酸i的峰面積;As 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的峰面積;cs 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的含量, 單位為納摩爾每毫升(n m o l/m L) 。試樣中各氨基酸的含量按式(3) 計(jì)算:Xi=ciFVMm1 091 0 0(3) 式中:Xi 試樣中氨基酸i的含量, 單位為克每百克(g/1 0 0g) ;ci 試樣測(cè)定液中氨基酸i的含量, 單位為納摩爾每毫升(n m o l/m L) ;F 稀釋倍數(shù);V 試樣水解液轉(zhuǎn)移定容的體積, 單位為毫升(m L) ;M 氨基酸i的摩爾質(zhì)量, 單位為克每摩爾(g/m o l) , 各氨基酸的名稱及摩爾質(zhì)量見(jiàn)表2;m 稱樣量, 單位為克(g) ;1 09 將試樣含量由納克(n g) 折算成克(g) 的系數(shù);1 0 0 換算系數(shù)。表2 1 6種氨基酸的名稱和摩爾質(zhì)量氨基酸名稱摩爾質(zhì)量/ (g/m o l)氨基酸名稱摩爾質(zhì)量/ (g/m o l)天門冬氨酸1 3 3.1蛋氨酸1 4 9.2蘇氨酸1 1 9.1異亮氨酸1 3 1.2絲氨酸1 0 5.1亮氨酸1 3 1.2谷氨酸1 4 7.1酪氨酸1 8 1.2脯氨酸1 1 5.1苯丙氨酸1 6 5.2甘氨酸7 5.1組氨酸1 5 5.2丙氨酸8 9.1賴氨酸1 4 6.2纈氨酸1 1 7.2精氨酸1 7 4.2 試樣氨基酸含量在1.0 0g/1 0 0g以下, 保留2位有效數(shù)字; 含量在1.0 0g/1 0 0g以上, 保留3位有效數(shù)字。G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 65 7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的1 2%。8 其他當(dāng)試樣為固體或半固體時(shí), 最大試樣量為2g, 干燥后溶解體積為1m L, 各氨基酸的檢出限和定量限見(jiàn)表3。表3 固體樣品中各氨基酸的檢出限和定量限氨基酸名稱檢出限/ (g/1 0 0)定量限/ (g/1 0 0)氨基酸名稱檢出限/ (g/1 0 0)定量限/ (g/1 0 0)天門冬氨酸0.0 0 01 30.0 0 03 6異亮氨酸0.0 0 04 30.0 0 13蘇氨酸0.0 0 01 40.0 0 04 8亮氨酸0.0 0 110.0 0 36絲氨酸0.0 0 01 80.0 0 06 0酪氨酸0.0 0 280.0 0 95谷氨酸0.0 0 02 40.0 0 07 0苯丙氨酸0.0 0 250.0 0 83甘氨酸0.0 0 02 50.0 0 08 4賴氨酸0.0 0 01 30.0 0 04 4丙氨酸0.0 0 290.0 0 97組氨酸0.0 0 05 90.0 0 20纈氨酸0.0 0 01 20.0 0 03 2精氨酸0.0 0 200.0 0 65蛋氨酸0.0 0 230.0 0 75脯氨酸0.0 0 260.0 0 87 當(dāng)試樣為液體時(shí), 最大試樣量為5g, 干燥后溶解體積為1m L, 各氨基酸的檢出限和定量限見(jiàn)表4。表4 液體樣品中各氨基酸的檢出限和定量限氨基酸名稱檢出限/ (g/1 0 0)定量限/ (g/1 0 0)氨基酸名稱檢出限/ (g/1 0 0)定量限/ (g/1 0 0)天門冬氨酸0.0 0 00 5 00.0 0 01 4異亮氨酸0.0 0 01 50.0 0 05 0蘇氨酸0.0 0 00 5 70.0 0 01 9亮氨酸0.0 0 04 30.0 0 14絲氨酸0.0 0 00 7 20.0 0 02 4酪氨酸0.0 0 110.0 0 38谷氨酸0.0 0 00 9 00.0 0 02 8苯丙氨酸0.0 0 09 90.0 0 33甘氨酸0.0 0 01 00.0 0 03 4賴氨酸0.