五血型交叉配血.ppt

ABO血型鑒定實驗原理,正定型 根據(jù)IgM類特異性血型抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗原結(jié)合出現(xiàn)凝集反應(yīng)的原理，用已知IgM類特異性標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B血清室溫下與被檢紅細(xì)胞在鹽水中反應(yīng)，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，表明被檢紅細(xì)胞膜上有血型抗體相對應(yīng)的抗原，來判斷和鑒定被檢者的血型。,反定型 用已知標(biāo)準(zhǔn)A，B，O型紅細(xì)胞分別與被檢血清反應(yīng)，若出現(xiàn)凝集，證明被檢血清中存在與該紅細(xì)胞抗原相對應(yīng)的抗體。根據(jù)血清中存在的血型抗體和Landsteiner定律判斷和鑒定被檢者血型。,試劑器材,試劑 標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B血型定型試劑 5%（體積比）A，B，型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞生理鹽水懸液。 生理鹽水 器材 試管、試管架、記號筆、吸管、離心機、玻片、顯微鏡 標(biāo)本 5%被檢紅細(xì)胞生理鹽水懸液，血清或血漿,操作步驟 正定型,試管法： 1：標(biāo)記試管 取試管兩支，分別標(biāo)記抗A，抗B。 2：加定型試劑 將抗A、抗B試劑各1滴分別加入抗A，抗B試管中。 3：加入紅細(xì)胞懸液 各加5%被檢者紅細(xì)胞生理鹽水懸液1滴于試管中，混勻，以1000r/min離心1min。 4：觀察結(jié)果 先觀察上層液有無溶血現(xiàn)象，再斜持試管輕輕搖動或彈動，使管底紅細(xì)胞再懸浮，觀察有無凝集，如僅輕微凝集或不見凝集，必須將反應(yīng)物倒于玻片上以低倍鏡觀察。,5：判斷結(jié)果 凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)：完全凝集者，上層液無色清亮，底部有紅細(xì)胞凝塊，呈花邊狀，輕彈試管凝塊不散開。完全不凝集的試管，上層液無色清亮，血細(xì)胞均勻沉積管底，邊緣整齊，重懸細(xì)胞后成均勻的紅色懸液。,試管法： 1：標(biāo)記試管 取試管3支，分別標(biāo)記A，B，O。 2：加入樣本血清或血漿 血樣經(jīng)2500r/min離心3min分離出血漿或血清，在A，B，O試管中分別加1滴血漿或血清， 3：加標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液 再分別加入5%A型、B型、型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞生理鹽水懸液各1滴，混勻，以1000r/min離心1min。 4：觀察結(jié)果 先觀察上層液有無溶血現(xiàn)象，再斜持試管輕輕搖動或彈動，使管底紅細(xì)胞再懸浮，觀察有無凝集，如僅輕微凝集或不見凝集，必須將反應(yīng)物倒于玻片上以低倍鏡觀察。,反定型,紅細(xì)胞的ABO正反定型結(jié)果判斷,正向定型 反向定型 抗A 抗B 抗A,B A細(xì)胞 B細(xì)胞 O細(xì)胞 - - - + + - O + - + - + - A - + + + - - B + + + - - - AB,判斷 結(jié)果,注意事項：,1.嚴(yán)格標(biāo)記，器材干燥潔凈，防止溶血，避免交叉污染。 2.試管法出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，表明存在抗原抗體反應(yīng)并有補體激活。 3.46個月以內(nèi)嬰兒反定型可能不凝集或凝集很弱，年老體弱者抗原較弱，最好用試管法鑒定血型。 4.亞型紅細(xì)胞抗原較弱，凝集較弱。 5.防止冷凝集素的干擾。 6.某些疾病可能使紅細(xì)胞定型困難：嚴(yán)重的腸道細(xì)菌感染出現(xiàn)類B抗原；血清中存在病理性冷凝集素；部分高球蛋白與異常球蛋白癥患者。,毛細(xì)血管采血標(biāo)準(zhǔn)操作程序,操作步驟 1 采血部位成人以左手無名指內(nèi)側(cè)為宜,6月以下嬰幼兒通常選拇指內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。 2 輕輕按摩采血部位。 3 用棉簽蘸取消毒液消毒局部皮膚、待干。,4 緊捏刺血部位,使其自然充血。 5 用無菌刺針穿刺,動作應(yīng)迅速,深度23mm,稍加擠壓以血液流出為宜。 6 用干棉球擦去第一滴血。 7 按需要依次采血。 8 采血完畢,用干棉球壓住傷口,止血3min。,標(biāo)本要求,1 除特殊情況外，不在耳垂采血。采血應(yīng)避開凍瘡、炎癥、損傷、水腫等部位。 2采血后輕輕擠壓血液順暢流出，避免過度擠壓，混入組織液易致凝固。 3進(jìn)行多項檢驗時,采血次序為血小板計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白測定、白細(xì)胞計數(shù)、涂片等。出血時間、凝血時間用APTT、PT和PLT計數(shù)聯(lián)合取代。,二、交叉配血實驗,分類 1.“主側(cè)”配血 2.“次側(cè)”配血,獻(xiàn)血者 受血者 紅細(xì)胞 紅細(xì)胞 血清 血清,主側(cè),次側(cè),供血者紅細(xì)胞與受血者血清反應(yīng)（主側(cè)交叉配血） 受血者紅細(xì)胞與供血者血清反應(yīng)（次側(cè)交叉配血） 其目的是檢查受血者與供血者是否存在血型抗原與抗體不合的情況。,交叉配血實驗技術(shù),1.鹽水介質(zhì)法 2.酶介質(zhì)法 3.抗人球蛋白介質(zhì)法 4.凝聚胺法 5.微柱凝膠免疫技術(shù),實驗原理,鹽水介質(zhì)法（Immediatespin，IS ）是利用天然IgM類血型抗體與對應(yīng)紅細(xì)胞抗原在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)，通過離心觀察受血者血清與供血者紅細(xì)胞以及受血者紅細(xì)胞與供血者血清之間有無凝集現(xiàn)象，判斷供血者與受血者之間有無ABO血型不合的情況。,酶技術(shù),利用木瓜酶或菠蘿酶破壞紅細(xì)胞表面唾液酸，使紅細(xì)胞失去電荷，縮小細(xì)胞間距離 同時改變紅細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原暴露，從而增強凝集反應(yīng) 主要用于一些不完全抗體的檢測,凝聚胺技術(shù),利用多聚季胺鹽在介質(zhì)溶液中產(chǎn)生大量正電荷中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減少紅細(xì)胞間排斥，形成可逆凝集，加入解聚液僅可使非特異性聚集分散，而發(fā)生抗原抗體特異性反應(yīng)凝集不會散開。,凝膠卡式檢測法的工作原理,將紅細(xì)胞懸液和血清加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察 凝集的紅細(xì)胞，被阻擋在微柱中凝膠的上部或中央，證明發(fā)生凝集反應(yīng)，判斷凝集反應(yīng)陽性 游離的紅細(xì)胞，擠過裝有過濾介質(zhì)的微柱到達(dá)底部，證明未發(fā)生凝集，判斷凝集反應(yīng)陰性,試劑器材,1：試劑 生理鹽水 2：器材 試管，試管架、記號筆、一次性塑料吸管，玻片、離心機，顯微鏡， 3：標(biāo)本 患者、獻(xiàn)血員靜脈血,操作步驟,1：患者標(biāo)本準(zhǔn)備 分離血清，標(biāo)記為PS（patient serum） 配制5患者紅細(xì)胞生理鹽水懸液，標(biāo)記為PC（patient cell） ：獻(xiàn)血員標(biāo)本準(zhǔn)備 分離血清，標(biāo)記為DS（donor serum） 配制5獻(xiàn)血員紅細(xì)胞生理鹽水懸液，標(biāo)記為DC（donor cell）,交叉配血,1. 取兩支試管，分別標(biāo)明主，次，即主側(cè)配血管和次側(cè)配血管。 2.在主側(cè)配血管中加PS 1滴，滴， 3.在次側(cè)配血管中加DS 1滴，滴， 4.混勻，1000r/min離心1min。 5.觀察結(jié)果 先觀察試管上層液有無溶血，再斜持試管輕輕搖動，觀察管底反應(yīng)物有無凝集，重懸液在低倍鏡下觀察有無紅細(xì)胞凝集。,判斷結(jié)果：,凝集結(jié)果判斷： 判斷標(biāo)準(zhǔn)同正定型試管法 配血是否相合判斷標(biāo)準(zhǔn)：AB