雷公藤減毒炮制方法綜述.doc

雷公藤減毒炮制方法綜述王英晶1，彭偉文2（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山醫(yī)院，廣東 中山 528401）摘要:目的 介紹毒性中藥雷公藤的幾種炮制方法。方法 概要性地比較雷公藤炮制減毒方法的效果，包括凈制去毒、水煮去毒、經(jīng)羊血炮制減毒、蒸制減毒、靈芝雙向發(fā)酵解毒。結(jié)果 經(jīng)羊血炮制減毒效果較好。結(jié)論 雷公藤解毒增效炮制方法及原理值得進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞: 毒性中藥；雷公藤；炮制解毒 毒性中藥是中醫(yī)“治病攻邪”的常用藥物, 長(zhǎng)期的中醫(yī)藥臨床實(shí)踐證明, 毒性中藥對(duì)于疾病的防治具有十分積極的意義,尤其在救治疑難重癥方面發(fā)揮重要作用, 因此素有“以毒攻毒”之說(shuō)。但是毒性中藥多含有毒成分，藥性峻猛，治療劑量與中毒劑量非常接近，濫用、亂用毒性中藥，不可避免地給病人造成身體損害，嚴(yán)重者造成病人中毒死亡。因而了解毒性中藥炮制原理，掌握有毒中藥的正確炮制方法，能使毒性中藥減毒增效，保證臨床用藥安全。雷公藤為衛(wèi)矛科植物雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.的根或根的木質(zhì)部。本品苦，辛，寒，有大毒，歸肝、腎經(jīng)。能祛風(fēng)濕，活血通絡(luò)，消腫止痛，殺蟲(chóng)解毒。臨床研究表明，雷公藤是一種強(qiáng)力抗風(fēng)濕藥，治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及強(qiáng)直性脊柱炎有較好療效，起效較快，其抗風(fēng)濕作用次于類固醇藥物而優(yōu)于其他抗風(fēng)濕中西藥物，可大部分替代類固醇藥物的治療，減少對(duì)其依賴性和用量，停藥后無(wú)反跳現(xiàn)象。使用雷公藤，輕者可出現(xiàn)惡心，嘔吐，食少，頭暈，乏力，嗜睡，月經(jīng)紊亂，閉經(jīng)等，一般停藥后自行恢復(fù)正常；長(zhǎng)期服用雷公藤，對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者骨骼系統(tǒng)有顯著影響，使之以后發(fā)生骨質(zhì)疏松和骨折的危險(xiǎn)度增加。若服用過(guò)量，重者可致中毒，主要死因?yàn)檠髡吆?jiǎn)介：王英晶（1988-），女，在讀碩士研究生，電話郵箱：624874550。通訊作者：彭偉文，教授，主任中藥師，碩士生導(dǎo)師。環(huán)及腎功能衰竭。雷公藤具有復(fù)雜的化學(xué)成分。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)雷公藤進(jìn)行了大量的化學(xué)研究工作，分離出生物堿、二萜、三萜和苷類等多種化合物，均具有藥理活性。各類成分毒性大小為公藤甲素（二萜）、雷公藤內(nèi)酯醇（二萜）、雷公藤紅素（三萜）、山海棠素（二萜），而雷公藤戊的毒性則較小。因此，對(duì)雷公藤進(jìn)行炮制減毒主要是將其雷公藤甲素、雷公藤內(nèi)酯醇的含量降低，以達(dá)到臨床用藥的安全性。而雷公藤內(nèi)酯醇既是毒性成分，又是有效成分，因此在炮制時(shí)一定要注重去毒與存效并重,否則顧此失彼,可能造成毒去效失, 甚至效失毒存的結(jié)果。下面就雷公藤幾種不同的炮制方法進(jìn)行概述，并簡(jiǎn)要評(píng)價(jià)各種方法的減毒效果。1 凈制去毒 田磊磊等1綜述，雷公藤傳統(tǒng)藥用須去根皮，現(xiàn)認(rèn)為應(yīng)去其根皮及韌皮部?jī)刹糠郑闷淠举|(zhì)部。藥理實(shí)驗(yàn)證明，小鼠腹腔注射雷公藤不同部位煎劑，全根的LD50為4.81g/kg，根皮LD50為3.92g/kg,而去皮根心LD50為7.25g/kg。雷公藤全根用藥安全范圍小，臨床毒副作用癥狀嚴(yán)重，用藥劑量不易掌握，去皮的木質(zhì)部應(yīng)用則相對(duì)安全。2 傳統(tǒng)的水煮去毒 雷公藤藥用部位是嚴(yán)格去凈根皮的木質(zhì)部分根芯。根皮因有較大的毒性一般棄之不用。但為能充分利用藥材資源，對(duì)雷公藤根皮進(jìn)行降毒炮制研究，以期減少根皮中雷公藤內(nèi)酯醇的含量，降低毒性，達(dá)到與根芯相類似的臨床作用。劉奇鐸等2用傳統(tǒng)的炮制方法對(duì)雷公藤根皮進(jìn)行去毒。炮制方法采用稱取三份雷公藤根皮各1g,置夾層蒸氣煎藥鍋中，加水淹過(guò)藥面，分別煮沸0.5h、1h和2h（水減少后則添加水適量），取出根皮曬干。薄層層析檢查采用分別取雷公藤根芯、根皮和三種不同煮沸時(shí)間的根皮粗粉，用氯仿提取，以乙醚、石油醚（4:1）為展開(kāi)劑展開(kāi)，噴Kedde試液顯色。結(jié)果對(duì)照品雷公藤內(nèi)酯醇顯紫紅色斑點(diǎn)；而層析圖中的斑點(diǎn)大小和顏色可以看出，雷公藤根皮中的雷公藤內(nèi)酯醇的含量明顯高于根芯。3種水煮炮制的雷公藤根皮中，雷公藤內(nèi)酯醇的含量均有明顯降低，水煮時(shí)間越長(zhǎng)，降低越明顯。藥理實(shí)驗(yàn)采用昆明種小鼠腹腔灌注法，對(duì)5種雷公藤供試液進(jìn)行了考察，其分別為根芯、根皮生品及上述3種水煮炮制品。結(jié)果顯示：雷公藤根芯的毒性小于根皮，水煮炮制能明顯降低根皮的毒性。水煮時(shí)間越長(zhǎng)，毒性相對(duì)越小?？寡鬃饔脤?shí)驗(yàn)采用雄性 大白鼠腹腔灌注給藥方式，以生理鹽水為對(duì)照組，雷公藤根芯為陽(yáng)性對(duì)照組，給藥后足趾皮下注射1%角叉菜膠，致炎后分別于不同時(shí)間測(cè)定足跖腫脹程度。結(jié)果顯示:水煮炮制后的雷公藤根皮仍具有較強(qiáng)的抗炎活性，只是隨著水煮的時(shí)間延長(zhǎng)，抗炎活性降低。綜上所述，雷公藤根皮經(jīng)水煮后，其雷公藤內(nèi)酯醇的含量能明顯降低，毒性也隨著降低。水煮1h后的根皮其毒性和藥理活性均可達(dá)到與根芯相近的結(jié)果。這為雷公藤根皮炮制制品的臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。3 經(jīng)羊血炮制減毒 劉錫鈞等3采用三種實(shí)驗(yàn)樣品即：雷公藤水提取液、醇提取液及羊血炮制品醇提取液，分別進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)、亞急性毒性試驗(yàn)以及對(duì)大白鼠腳腫脹的抗炎試驗(yàn)。試驗(yàn)一采用小白鼠灌胃給藥，觀察48小時(shí)內(nèi)各組小鼠死亡數(shù)，用簡(jiǎn)氏計(jì)算法算出LD50及95%可信限。結(jié)果顯示：雷公藤水提取液, 醇提取物液和炮制品液的LD50值分別為37.512.5, 31.93.7，98.97.8(g/kg體重)。說(shuō)明雷公藤醇提取物液的毒性最大,水提取液次之,炮制品液毒性最小, 毒性較原生藥降低約3倍。實(shí)驗(yàn)二采用小白鼠灌胃給藥，分別給予醇提取物液和炮制品液, 對(duì)照2組,分別給予同體積的賦形劑混懸液和生理鹽水, 每日一次, 連續(xù)二周, 于第二周末處死一半動(dòng)物, 余下的動(dòng)物到第三周末處死。結(jié)果顯示：對(duì)于體重和一般情況的觀察而言，各組動(dòng)物體重都有增長(zhǎng), 用對(duì)比限法比較均無(wú)明顯差異，說(shuō)明雷公藤生藥和羊血炮制品在安全劑量范圍內(nèi)都不影響動(dòng)物的正常生長(zhǎng)。一般情況觀察也未見(jiàn)有明顯差異。對(duì)于外周血象檢查而言，對(duì)血紅蛋白的影響：醇提取物液比炮制品組的血紅蛋白值下降明顯,用藥一周后相差顯著（P0.05）,二周后相差非常顯著（P0.01）, 其它各組比較均無(wú)明顯差異（P0.05）,說(shuō)明雷公藤羊血炮制品的毒性較原生藥顯著減小。對(duì)白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的影響均無(wú)明顯差異（P0.05），對(duì)中性、單核、嗜酸（堿）性細(xì)胞的影響不明顯。對(duì)于病理切片觀察，各組動(dòng)物處死后,即摘取心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、腸等臟器,經(jīng)10%福爾馬林液固定、切片進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察：給藥組均有不同程度的病變,主要表現(xiàn)在肝、心、腎、腦等出現(xiàn)血管擴(kuò)張充血間質(zhì)水腫、組織濁腫或空胞變性,嚴(yán)重者組織產(chǎn)生壞死,可認(rèn)為是藥物損害性的反應(yīng),但各組比較無(wú)明顯差異?？寡讓?shí)驗(yàn)采用大白鼠灌胃給藥，分別給予醇提取液和炮制品液, 以等體積生理鹽水為對(duì)照組,給藥后于大白鼠腳踝皮下注射雞蛋清，在不同時(shí)間測(cè)得大鼠腳在致炎前后的體積,按公式算出腳腫脹率。結(jié)果顯示：大白鼠給藥后致炎腳腫脹率的順序?yàn)?炮制品液醇提取物液生理鹽水對(duì)照組，且隨時(shí)間的延長(zhǎng)，炮制品液組的腳腫脹率下降幅度變化較大。說(shuō)明雷公藤炮制品液的抗炎作用較醇提取物液的抗炎作用強(qiáng)。4 蒸制減毒 李飛等4根據(jù)傳統(tǒng)炮制經(jīng)驗(yàn)和炮制減毒理論自擬雷公藤蒸制工藝，采用高效液相色譜法（Waters1525-2489型高效液相色譜儀）檢測(cè)雷公藤生品及蒸制品中雷公藤甲素的含量，比較炮制前后雷公藤甲素的含量變化。試藥為雷公藤生品及蒸制雷公藤；方法采用取雷公藤樣品，精密稱定，加氯仿浸泡，超聲提取，抽濾。濾液濃縮，濃縮液上氧化鋁柱，用氯仿：甲醇洗脫，洗脫液減壓回收至干，殘?jiān)蛹状既芙?，定容?0ml。方法學(xué)考察分別進(jìn)行了：線性關(guān)系考察，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算回歸方程為：y=1655455.61x+370.54(n=6),r=0.9999,線性范圍是0.02080.208ug。精密度試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示：雷公藤甲素色譜峰相對(duì)峰面積RSD為1.07%，精密度良好。穩(wěn)定性試驗(yàn)采用測(cè)定供試品溶液中雷公藤甲素在12小時(shí)內(nèi)的穩(wěn)定性，雷公藤甲素色譜峰相對(duì)峰面積RSD為0.84%，表示供試品在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示：雷公藤甲素色譜峰相對(duì)峰面積RSD為1.29%，表明重現(xiàn)性良好。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算得到的雷公藤甲素回收率為102.19%，RSD為2.30%。采用色譜法測(cè)定雷公藤生品及蒸制品中雷公藤甲素含量的測(cè)定結(jié)果為：二者雷公藤甲素的平均含量分別為11.53ug/g,7.11ug/g,RSD分別為4.32%,3.35%。表明雷公藤經(jīng)蒸制后毒性成分雷公藤甲素含量明顯降低，達(dá)到了預(yù)期效果。5 靈芝雙向發(fā)酵解毒 莊毅等5運(yùn)用雙向發(fā)酵工程的原理和方法獲得靈雷菌質(zhì)（G30），用常規(guī)急性毒性試驗(yàn)、免疫學(xué)試驗(yàn)、自身免疫疾病動(dòng)物模型試驗(yàn)等進(jìn)行G30的毒性和藥效學(xué)研究。實(shí)驗(yàn)藥物靈雷菌質(zhì)（G30）采用“發(fā)酵過(guò)程成分、藥效動(dòng)態(tài)比較法”獲得。經(jīng)分析，雙向發(fā)酵雷公藤解毒持效的發(fā)酵終點(diǎn)應(yīng)在菌絲長(zhǎng)滿瓶后第30天。對(duì)靈雷菌質(zhì)的急性毒性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，靈雷菌質(zhì)的LD50較雷公藤生藥顯著提高，說(shuō)明其毒性降低，其中以G30的毒性最低。在免疫功能實(shí)驗(yàn)中，G30不僅能顯著抑制小鼠T、B淋巴細(xì)胞的增殖，還能降低小鼠血清溶血素的分泌，顯示出較好的細(xì)胞和體液免疫抑制功能。由此得出：G30較雷公藤生藥比較，在毒性降低的同時(shí)保持了較好的免疫抑制功能。阿霉素誘導(dǎo)的大鼠腎炎及佐劑性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是用于研究自身免疫性疾病腎炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的常見(jiàn)動(dòng)物模型。研究結(jié)果表明：與腎炎模型組比較，G30組用藥后降低其24h尿蛋白量及血中BUN、Scr、TC和TG水平，升高TP量，同時(shí)AST、ALT、CK和CK-MB水平與對(duì)照組保持同一水平。與生藥、滅菌藥比較，G30能降低24h尿蛋白量，使CK、ALT保持正常水平，而生藥、滅菌藥在生理和病理狀態(tài)下均引起CK、ALT的升高。光鏡下顯示G30較生藥、滅菌藥改善了腎病大鼠腎臟的病理?yè)p害程度。生藥在治療腎病大鼠時(shí)效果較G30差，可能原因有劑量不夠和毒性太大，致使生藥在生理、病理狀態(tài)下都會(huì)引起CK、ALT升高，在生理狀態(tài)下還會(huì)引起尿蛋白量的增加，引發(fā)心臟、肝臟、腎臟毒性。該結(jié)果表明G30比生藥毒性低，同時(shí)對(duì)腎病大鼠有一定的治療作用且效果比生藥好，表明了G30對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的大鼠腎病有一定的治療作用。佐劑性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)表明G30能顯著緩解模型大鼠原發(fā)性及繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎的腫脹程度，對(duì)佐劑性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有一定的治療作用。6 結(jié)論與展望 關(guān)于雷公藤，歷代文獻(xiàn)均無(wú)炮制方法的記載，主要是凈制和切制，但此種方法有很大的缺陷。臨床報(bào)道，在10例雷公藤中毒的患者中，就有4例是因根韌皮部處理不凈而致；雷公藤根皮經(jīng)水煮后，其雷公藤內(nèi)酯醇的含量能明顯降低，毒性也隨著降低；雷公藤經(jīng)羊血炮制后可以降低毒性,急性毒性試驗(yàn)表明羊血炮制品毒性較原生藥降低約3倍,亞急性毒性試驗(yàn)也表明毒性降低明顯,且未見(jiàn)產(chǎn)生特殊的不良反應(yīng)。羊血炮制后的雷公藤抗炎作用沒(méi)有降低, 而且優(yōu)于原生藥。因此，在傳統(tǒng)炮制方法中，羊血炮制法綜合效果較好。 雷公藤的臨床應(yīng)用始終受到其毒副作用限制，如何炮制才能最大限度達(dá)到增效減毒的目的，并詳細(xì)研究其機(jī)理，制定標(biāo)準(zhǔn)化的指標(biāo)來(lái)評(píng)定雷公藤的毒副作用，是將來(lái)值得研究的課題。參考文獻(xiàn)1田磊磊,譚鵬,李飛.炮制對(duì)雷公藤毒性影響的研究綜述C.中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥炮制分會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集,2009，16