四川大學(xué)現(xiàn)代生命科學(xué)基礎(chǔ)實驗報告.doc

四川大學(xué)實驗報告專 業(yè) 計算機(jī)科學(xué)與技術(shù) 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年10月13日題目： 光學(xué)顯微鏡的使用實驗步驟：1. 觀察前，將顯微鏡放在自己身體的左前方，目鏡與實驗桌側(cè)面在一條水平面上。然后插上電源線，代開電源開關(guān)。2. 調(diào)節(jié)光圈：通過調(diào)節(jié)電流旋鈕來調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度，并且物鏡的放大倍數(shù)應(yīng)該與光圈的倍數(shù)相同。3. 低倍鏡觀察：在使用高倍鏡之前，先用低倍鏡找到目標(biāo)位置。將牛蛙血細(xì)胞玻片標(biāo)本正面朝上放在鏡臺上，用推片器彈簧夾夾住，然后旋轉(zhuǎn)推片器螺旋，將所要觀察的部位調(diào)到通光孔的正中。以左手按逆時針方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺緩慢上升至物鏡據(jù)標(biāo)本5mm處。然后，兩眼同時睜開，在目鏡上觀察，左手順時針方向緩慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，直到視野中出現(xiàn)清晰地物象為止。如果物象不在視野中心，可調(diào)節(jié)推片器將其調(diào)到中心。如果視野亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調(diào)節(jié)。4. 高倍鏡觀察：在低倍鏡下把需要進(jìn)一步觀察的部位調(diào)到中心，同時把物象調(diào)節(jié)到最清晰的程度，才能進(jìn)行高倍鏡觀察。轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，調(diào)換上高倍鏡頭，轉(zhuǎn)換高倍鏡時轉(zhuǎn)動速度要慢，并從側(cè)面進(jìn)行觀察，如高倍鏡碰到玻片，說明低倍鏡的焦距沒有調(diào)好，應(yīng)重新操作。調(diào)節(jié)焦距：轉(zhuǎn)換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察，此時一般能夠見到一個不太清楚的物象，可將細(xì)調(diào)節(jié)器的螺旋逆時針移動約0.5-1圈，即可獲得清晰地物象。如果視野亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調(diào)節(jié)。如果需要更換玻片標(biāo)本時，必須順時針轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡臺下降，方可取下玻片標(biāo)本。5. 使用完畢后，必須復(fù)原：取消玻片標(biāo)本，轉(zhuǎn)動旋轉(zhuǎn)器使鏡頭離開通光孔，下降鏡臺，平放反光鏡，下降集光器，關(guān)閉光圈，推片器回位，關(guān)掉電源開關(guān)，拔下電源線，蓋上外罩，將顯微鏡放回原位。四川大學(xué)實驗報告專 業(yè) 計算機(jī)科學(xué)與技術(shù) 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年10月13日題目： 人類ABO血型鑒定實驗步驟：1. 取清潔載玻片一張，用蠟筆劃為兩格，表明A、B。2. 將抗A、抗B血清各一滴滴在A、B格內(nèi)。3. 待檢紅細(xì)胞的制備：用75%酒精棉球消毒無名指指端的皮膚或指腹，待酒精干后，用無菌采血針刺破表皮。4. 用兩只牙簽分別在手指上蘸取一些血液，分別加到抗A、抗B格內(nèi)，并用牙簽混勻，使血清和細(xì)胞充分混合。在室溫下靜止數(shù)分鐘，在白色背景下肉眼觀察，也可以顯微觀察。實驗結(jié)果：抗A血清發(fā)生凝集，抗B血清沒有發(fā)生凝集。實驗結(jié)論：我是A型血。問題與討論：1. 根據(jù)你的血型，判斷你能接受何種血型并且能夠給何種血型供血？我是A型血，我的最佳受血是A型血，也可以接受O型血。我只能給A型血供血。2. O型血人又被稱為“萬能供血者”，試根據(jù)ABO血型分型做出你對這一說法的理解。O型血中紅細(xì)胞膜上沒有A和B抗原，血清中同時存在抗A抗B抗體。具有A抗原的紅細(xì)胞可被抗A抗體凝集；具有B抗原的紅細(xì)胞可被抗B抗體凝集輸O型血時，因為O型血中紅細(xì)胞膜上沒有A和B抗原，不會和血清中的抗A、抗B抗體發(fā)生凝集現(xiàn)象，所以，O型血是萬能血。3. 如何區(qū)別血液的凝集和凝固？其機(jī)理有何差別？血液的凝集：在一定條件下，懸浮的紅細(xì)胞集合成團(tuán)，這種現(xiàn)象叫做凝集。血液凝集是一種血清免疫反應(yīng)，當(dāng)含有某一種凝集原的紅細(xì)胞和抗該凝集原的凝集素相遇時，就會發(fā)生血液凝集現(xiàn)象。 血液凝固是血液從溶膠狀態(tài)變成凝膠狀態(tài)的過程。 血液凝集反應(yīng) 當(dāng)人體有些異型血液相遇時，一方血液中的血清凝聚素會導(dǎo)致另一方血液中血細(xì)胞表面相應(yīng)的凝聚原發(fā)生免疫反應(yīng)，在顯微鏡下可以看到，血液中的血細(xì)胞會發(fā)生相互粘連成團(tuán)的現(xiàn)象。血液凝集反應(yīng)是不同血型的血液相遇時可能發(fā)生的血清免疫反應(yīng)，而血液凝固是一個人的血液在自己血液中的凝血因子作用下發(fā)生的酶促反應(yīng)。四川大學(xué)實驗報告專 業(yè) 計算機(jī)科學(xué)與技術(shù) 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年10月13日題目： 血涂片的制備與血細(xì)胞的觀察實驗步驟：1. 采血前用70%酒精棉球消毒人的指腹（由于第一滴血中含單核白細(xì)胞較多，因此棄去第一滴血）。2. 推片：擠出第二滴血置于載玻片的右側(cè)。3. 再另取一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀。4. 兩玻片的角度儀3045為宜，輕輕將雙凹片向前勻速推進(jìn)，即涂成血液薄膜。5. 染色：待涂片在空氣中完全干燥后，滴加數(shù)滴Wrights染液蓋滿血膜位置，染色13min。然后滴加等量蒸餾水，使其與染液均與混合，靜止1015min。用蒸餾水沖去染液，吸水紙吸干，鏡檢。問題與討論：1. 血細(xì)胞由紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等組成，每種細(xì)胞有什么特點和作用？紅細(xì)胞：中心部凹陷的圓板狀。哺乳動物成熟的紅細(xì)胞無核結(jié)構(gòu)，鳥類動物 的紅細(xì)胞呈橢圓形，有核，中心部向兩面突出。在體內(nèi)作為運送氧 氣的主要媒介，攜氧排碳。白細(xì)胞：無色呈球形凸起，有細(xì)胞核，體積比紅細(xì)胞大?？筛鶕?jù)其形態(tài)差異 和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有無特有的顆粒分為兩大類五種。吞噬血液中細(xì)菌保護(hù) 機(jī)體不受外邪侵害。在體內(nèi)作為免疫系統(tǒng)的一部分幫助身體抵抗傳 染病及外來的東西，是血液中一種重要的血細(xì)胞。血小板：形狀不規(guī)則，比紅細(xì)胞白細(xì)胞小得多，無細(xì)胞核，一般呈圓形。釋 放凝血因子防止出血。在止血、傷口愈合、炎癥反應(yīng)、血栓形成及 器官排斥等生理和病理過程中有重要作用。四川大學(xué)實驗報告專 業(yè) 計算機(jī)科學(xué)與技術(shù) 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年10月27日題目： 人類巴氏小體的觀察實驗步驟：口腔粘膜細(xì)胞Barr氏小體顯示方法：（1） 取材與固定：實驗前用可食用水漱口，然后以無菌牙簽刮取口腔頰部粘膜（第一次的刮取物棄去），將刮取物均與涂于載玻片上，放在空氣中干燥?；蛞跃凭珶敉庋婵靖?，注意材料不可過熱加溫。（2） 染色與觀察：用改良苯酚品紅染液染色1015min，傾斜載玻片，倒掉染液。用吸水紙輕輕擦拭干載玻片上面的染液。放在顯微鏡下觀察。注意事項：在制作的玻片標(biāo)本中，選擇細(xì)胞輪廓清楚、染色清晰，核大，核質(zhì)呈均勻細(xì)網(wǎng)狀的細(xì)胞100個，統(tǒng)計巴氏小體的頻率（可與男性細(xì)胞對照觀察）。實驗結(jié)果：我的細(xì)胞中沒有找到巴氏小體。實驗結(jié)論：正常男性細(xì)胞中沒有巴氏小體，正常女性細(xì)胞中有巴氏小體。問題與討論：1.血分別觀察男女各50個可數(shù)細(xì)胞，計算現(xiàn)實X染色質(zhì)所占百分比。X染色質(zhì)所占百分比：男：0/50=0%。 女：20/50=40%。四川大學(xué)實驗報告專 業(yè) 計算機(jī)科學(xué)與技術(shù) 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年11月3日題目： PCR擴(kuò)增與人性別分子鑒定實驗步驟：1. PCR反應(yīng)液的配制：于冰上在200l薄壁離心管中加入ddH2O 35.5l、10xPCR反應(yīng)緩沖液5l、MgCl2 4l、dNTP 1l、引物P1和引物P2各1l、模板DNA2l、TaqDNA聚合酶0.5l，混合均勻。2. PCR反應(yīng)：將配制好的反應(yīng)液放到PCR熱循環(huán)儀中，按以下反應(yīng)程序進(jìn)行PCR反應(yīng)：953min、9430s、5530s、721min循環(huán)30次，72延伸7min。3. 配制1%瓊脂糖凝膠：取3g瓊脂粉和30ml水，混合均勻，加入緩沖液，在微波爐中用中火加熱（不能燒糊）。，4. 電泳檢測：反應(yīng)結(jié)束后取出PCR產(chǎn)物，取5l樣品在1%瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳分析（電壓100V，時間30min），然后將凝膠轉(zhuǎn)到紫外成像系統(tǒng)中顯影，參照DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)，觀察在500bp出有無單一的亮帶。實驗結(jié)果：待測基因中含有SRY基因。實驗結(jié)論：正常男性細(xì)胞中有SRY基因，正常女性細(xì)胞中沒有SRY基因。問題與討論：1.若凝膠成像是沒有觀察到理想的實驗結(jié)果，回顧整個操作過程，分析造成PCR失敗的可能原因是什么?？赡茉蛴校号渲凭彌_液時沒有在冰上進(jìn)行配制的緩沖液的濃度不合適、培 養(yǎng)液受到污染、PCR熱循環(huán)儀設(shè)置不當(dāng)、電泳時間不夠等等。四川大學(xué)實驗報告專 業(yè) 計算機(jī)科學(xué)與技術(shù) 姓 名 夏超 2011級 1 班 組同實驗者 無 2012年11月10日題目： 葉脈書簽的制作實驗步驟：1. 選擇合適制作葉脈書簽的樹葉首先要求選用的樹葉葉脈發(fā)達(dá)。不容易在隨后的堿處理和沖刷葉肉的過程中損傷；其次是要求葉肉堿液處理后容易除去，這就要求葉片較嫩；再就是依據(jù)個人習(xí)慣，選擇形狀、大小適合的葉片。2. 用堿液處理葉片，使葉肉與葉脈分離配制大約4%的NaOH溶液500ml，將葉片浸沒與溶液中，煮15分鐘左右。此時可見葉肉開始脫落，溶液逐漸變成墨綠色。取出葉片，用流水沖洗，若葉肉隨流水沖洗面大塊脫落，則表明處理完全。若堿液處理時間太短，也容易不易除去，而處理時間過長，則葉脈易受損傷。3. 刷去葉肉組織在流水沖刷下，葉肉已經(jīng)大量脫落。此時用牙刷順著葉脈輕刷，把葉肉完全刷去。此時要小心不要損傷葉脈，影響成品的美觀。要注意NaOH有一定的腐蝕性！要用流水沖洗徹底，除去葉脈上的殘留堿液。4. 染色配制各種染色液：品紅紅色，品綠綠色，品藍(lán)藍(lán)色。將葉脈浸入染色液中侵染20分鐘，也可用毛筆蘸取染液在葉脈上繪圖。將染色結(jié)束的葉脈晾干，或者夾在吸水紙中以吸去水分。將處理好的葉脈放于過塑膜中過塑，也可夾入松針、小花