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藥劑學專業(yè)實驗論文 班級：藥劑101班姓名：xxx學號：復方雙黃連膠囊的研制摘要：目的:掌握常用的中藥提取的方法和原理、掌握濕法制粒的方法和技術；掌握膠囊劑項下的質量檢查項目和檢查方法及藥效學研究方法；掌握薄層色譜的操作技術、崩解儀、及紫外分光光度計的使用。方法：水煎法、回流提取法、微博輔助提取法等方法提取金銀花、連翹和黃芩，濕法制粒制備膠囊，薄層鑒別法進行膠囊劑鑒別，使用崩解儀測定膠囊的崩解時限，雙波長分光光度法測定雙黃連膠囊中黃芩苷含量，用小鼠耳腫脹模型進行雙黃連膠囊的藥效學研究。結果：制備得到了復方雙黃連膠囊60粒，膠囊質量符合要求，制備的膠囊具有抗炎作用。結論:通過以上制備方法完全可以制備出合格的復方雙黃連膠囊，該膠囊具抗炎作用，且藥量越大，抗炎效果越好。關鍵詞：復方雙黃連，水煎提取法，濕法制粒，鑒別，檢查，含量測定，藥效學Preparation of compound Shuanghuanglian capsulesAbstract：objective To master the commonly used extraction methods and principles of traditional Chinese medicine,to master the methods and principles of wet granulation; to master the methods for the examination of the quality of the capsules and pharmacodynamic research methods; to master Thin layer chromatography technique and the use of Disintegration apparatus and Uv spect rophotometry.Methods Chinese medicine Jinyinhua、Lianqiao and Huangqing were extracted using the method of decocting.The capsules were prepared by wet granulating.and identified using the method of TLC identification.The disintegration time of the capsules was examed using Disintegration apparatus. The content of Huangqingan in compound Shuanghuanglian capsules was determined using the method of dual wavelength spectrophotometry. The research of pharmacodynamics of compound Shuanghuanglian capsules was conducted using the model of mouse ear inflammation. Results We got forty compound Shuanghuanglian capsules that conform to the quality criterion and have anti-inflammatory effect.Conclusion We can prepare compound Shuanghuanglian capsules that conform to the quality criterion with the methods above.These capsules have anti-inflammatory effect ,besides,the greater dose ,the better anti-inflammatory effect it has.Keywords：compound Shuanghuanglian capsules， the method of decocting , wet granulation , identification, examination , content determination , pharmacodynamics綜述黃芩別名山茶根、土金茶根。為唇形科植物黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi），以根入藥。有清熱燥濕，涼血安胎，解毒功效。主治溫熱病、上呼吸道感染、肺熱咳嗽、濕熱黃膽、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎動不安、高血壓、癰腫癤瘡等癥。黃芩的臨床應用抗菌比黃連還好，而且不產生抗藥性。我們借助廣譜抗菌作用強的特點，用在真菌培養(yǎng)雜菌感染特厲害，用黃芩提取液效果很好，它是農業(yè)病害防治最理想的一味藥。產于河北、遼寧、陜西、山東、內蒙古、黑龍江等地。連翹是歷史悠久、使用廣泛的一種中藥，有清熱解毒、消腫散結的功效。中華人民共和國 藥典1995年版收載的連翹為木犀科 Oleaceae 連翹屬植物連翹 Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl 的干燥果實。當果實初熟，尚帶綠色，未開 裂時采收的稱為青翹；當果實成熟開裂后采收的稱為老翹。主產于山西、河南、陜西。金沙金銀花，羅波湖南金銀花植物金銀花又名忍冬，為忍冬科多年生半常綠纏繞木質藤本植物?！敖疸y花”一名出自本草綱目，由于忍冬花初開為白色，后轉為黃色，因此得名金銀花。藥材金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬植物干燥花蕾或帶初開的花。金銀花自古被譽為清熱解毒的良藥。它性甘寒氣芳香，甘寒清熱而不傷胃，芳香透達又可祛邪。金銀花既能宣散風熱，還善清解血毒，用于各種熱性病，如身熱、發(fā)疹、發(fā)斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等癥，均效果顯著。雙黃連膠囊是日常感冒的常備藥，它的主要成分是黃芩、連翹、金銀花，它具有辛涼解表，清熱解毒功效，常用于外感風熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛。本次試驗選用水煎法、回流提取法、微博輔助提取法提取金銀花、連翹和黃芩，采用濕法制粒的工藝制備膠囊，采用薄層鑒別法進行膠囊劑鑒別，使用崩解儀測定膠囊的崩解時限，雙波長分光光度法測定雙黃連膠囊中黃芩苷含量，用小鼠耳腫脹模型進行雙黃連膠囊的藥效學研究。該實驗貫穿天然藥物化學、藥物分析、藥理學和藥劑學四大藥劑專業(yè)主干課程，通過本次實驗，能夠更加深刻地理解和鞏固在課堂中所學到理論知識，掌握各專業(yè)實驗的基本操作和基本技能，掌握藥物制劑過程中常用儀器設備的使用方法，具備一定的分析問題、解決問題和獨立工作的能力，熟悉新藥研發(fā)的基本思路，為將來從事藥物制劑及新劑型研究、開發(fā)與生產打下良好的基礎。1材料1.1 動物健康小白鼠4只，重量（2030）g1.2 藥物主藥：黃芩、連翹、金銀花藥用輔料：淀粉、微晶體纖維素、羧甲基淀粉鈉、0號膠囊殼1.3儀器及試劑1、儀器玻璃儀器氣體烘干儀、超聲波清洗器、恒溫水浴鍋、通風柜、蒸煮鍋、電熱爐、紫外可見分光光度計、粉碎機、崩解時限測試儀、布氏漏斗、漏斗、玻璃棒、蒸發(fā)皿、紗布、試管、研缽、容量瓶（100ml）、分液漏斗（250ml）、密度計、膠頭滴管、洗耳球、14目篩、16目篩、電子天平、小鋁盆、不銹鋼托盤、膠囊板、濾紙、展開缸、玻璃板、量筒（100ml、10ml）、燒杯（1000ml、500ml、200ml、100ml）、灌胃器、剪刀、打眼器、噴壺。2、試劑供試品溶液、芩苷對照品溶液、金銀花對照藥材溶液、綠原酸對照品溶液、連翹對照藥材溶液、連翹苷對照品溶液、氨制硝酸銀溶液、10%硫酸乙醇溶液、鹽酸酸化的5%FeCl3乙醇溶液、醋酸乙酯（分析純）、甲醇（分析純）、50%甲醇、正丁醇（分析純）、冰醋酸、三氯甲烷（分析純）、蒸餾水（分析純）、二甲苯、雙黃連水溶液、2mol/LHCl、75%乙醇、80%乙醇、無水乙醇、硅膠、羧甲基纖維素鈉2 方法2.2黃芩、連翹和金銀花的提取2.1.1.黃芩的提取稱取黃芩94g，放入蒸煮鍋內，加入適量水（沒過藥材1-2cm），用電熱爐小火加熱，保持微沸。水煎煮1.5小時后停止，濾過（2層紗布），取濾液于500ml燒杯中。藥渣繼續(xù)加適量水煎煮1小時濾過（2層紗布），合并兩次濾液。將蒸煮鍋刷洗干凈，并將所得的濾液倒入其中，于電熱爐上濃縮，濃縮成約100毫升左右的浸膏。用密度計測量其相對密度為1.03-1.08之間（未測相對密度，只是憑老師指導和實驗經驗），并在水浴鍋上保持80用2mol/LHCl調節(jié)PH至1.0-2.0之間，在水浴鍋上保溫1小時，然后再在室溫下靜置24小時，得到下層為土黃色的膏狀物質，上層為棕紅色液體。用膠頭滴管小心棄去上層液體，向盛有土黃色膏狀物質的燒杯中加入適量蒸餾水，用玻璃棒攪勻，倒入布氏漏斗中抽濾，用PH試紙測試溶液PH=3，取出濾餅，放入燒杯中再加入蒸餾水若干攪勻，再用布氏漏斗抽濾，取出濾餅，測試溶液的PH，重復以上步驟，抽濾處理共4次。最終，PH調至5.0，然后再用70%的醇洗，按以上步驟，洗至PH接近7.0，醇洗2次，得到的沉淀用玻璃棒轉移至100ml燒杯，兩個蒸發(fā)皿中，放入烘箱中，恒溫60攝氏度，干燥研細備用。2.1.2.金銀花、連翹的提取 稱取金銀花94g，連翹188g，預留6.0g干藥材粉碎備用（金銀花2.0g，連翹4.0g）。將連翹和金銀花混合藥材放入蒸煮鍋內，加入適量水（沒過藥材1-2cm），用電熱爐小火加熱，保持微沸。水煎煮1.5h后停止，濾過（2層紗布），取濾液于500ml燒杯中。藥渣繼續(xù)加適量水煎煮1.5h，濾過（2層紗布），合并兩次濾液。將蒸煮鍋刷洗干凈，并將所得的濾液倒入其中，于電熱爐上濃縮，濃縮成約160mL的清膏，用密度計測量其相對密度為1.20-1.25（80）（未測相對密度，只是憑老師指導和實驗經驗）。室溫冷卻至40時，攪拌下緩緩加入乙醇480mL,使含醇量達75%。充分攪拌，靜置12小時，過濾，將殘渣中加入75%乙醇適量，攪拌，靜置5小時，過濾，合并兩次濾液，回收乙醇至無醇味。將其濃縮成相對密度為1.34-1.40（60測）的稠膏（未測相對密度，只是憑老師指導和實驗經驗）。2.2.雙黃連膠囊的制備1處方組成： 提取的黃芩粉末 所提取量金銀花、連翹粉碎粉末 所提取量金銀花、連翹稠膏 所提取量 微晶纖維素 5.0g 羧甲基淀粉鈉 5.0g 淀粉 適量 乙醇 適量 制備60粒 2. 制法：向上述制得的金銀花、連翹稠膏中加入預留的金銀花連翹粉末，并且迅速用玻璃棒攪拌均勻，然后再向其中加入提取的黃芩粉末，并迅速攪勻。加入微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉，淀粉，硬脂酸鎂適量，攪拌均勻，用噴霧法噴入無水乙醇適量，迅速用手攪拌均勻并制成軟材，過16目篩，濕粒在60溫度下烘干，干粒過14目篩整粒，最后用膠囊板裝入膠囊殼制備膠囊。2.3 復方雙黃連膠囊的鑒別、質量檢查和含量測定2.3.1 復方雙黃連膠囊的質量檢查1、裝量差異：取10粒膠囊，分別精密稱定重量后，傾出內容物（不得損失囊殼），囊殼用小刷拭凈，置通風處使溶劑自然揮盡，再分別精密稱定囊殼重量，求出每粒內容物的裝量與平均裝量。每粒的裝量與平均裝量相比較，超出裝量差異限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍。平均裝量 重量差異限度 0.3g以下 10 0.3g或0.3g以上 7.5 2、崩解時限：取供試品6粒，按中國藥典2010年版二部附錄XA進行崩解時限檢查。硬膠囊應在30min內全部崩解。如有1粒不能完全崩解，應另取6粒復試，均應符合規(guī)定。2.3.2 復方雙黃連膠囊的鑒別1 黃芩的鑒別供試液的制備：取雙黃連膠囊2g，甲醇15mL，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至近干，加甲醇2mL使溶解。黃芩對照藥材溶液的制備： 黃芩對照藥材1g，同上法，制成黃芩對照藥材溶液。黃芩對照品：精密稱定，加甲醇制成1mg/mL的溶液。TLC：點樣量各2L，硅膠薄層板（硅膠3g、羧甲基纖維素10mL）展開劑：正丁醇：冰醋酸：水（7:1:2）,展開，晾干，噴以鹽酸酸化的5%FeCl3乙醇溶液，供試品色譜中，在與黃芩對照藥材和黃芩對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。2 金銀花的鑒別供試品的制備：取雙黃連膠囊2g，加熱水20mL使溶解，加醋酸乙酯提取兩次，每次15mL，合并醋酸乙酯提取的水溶液，加0.3ml2M的鹽酸溶液調節(jié)pH至1.0，用醋酸乙酯提取二次，每次15mL，合并醋酸乙酯提取液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2mL，使溶解，濾過，濾液作供試品溶液。金銀花對照藥材溶液的制備：金銀花對照藥材5g，加水50mL，煎煮1h，濾過，濾液加鹽酸調節(jié)pH至1.0，同法制成金銀花對照藥材溶液。綠原酸對照品溶液的制備：精密稱定，加甲醇制成1mg/mL的溶液TCL: 點樣量各2L,硅膠G薄層板（用前活化處理）展開劑：醋酸丁酯：甲酸：水（7：2.5：2.5）的上層溶液為展開劑，展開，晾干噴以氨制硝酸銀試液，立即檢視。供試品色譜中，在與金銀花對照藥材和綠原酸對照品溶液色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。3連翹的鑒別供試品溶液的制備：雙黃連顆粒2g，研細，加75%乙醇5ml，超聲處理10min，濾過，濾液作為供試品溶液連翹對照藥材溶液的制備：取連翹對照藥材0.5g，加甲醇10mL，置水浴上加熱回流20min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。TCL：吸取對照藥材溶液供試品各2L，分別點于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（5:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。2.3.3. 復方雙黃連膠囊含量測定對照品溶液的制備：精密稱取真空干燥至恒溫的黃芩苷對照品12.5mg置50mL容量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振搖，使溶解，放置至室溫，稀釋至刻度即得濃度為0.25mg/mL的溶液。（指導老師已經提前準備好了）供試品溶液的制備：取重量差異下雙黃連顆粒研細，用電子天平稱取供試品M=0.020.05g，置100ml容量瓶中加50%甲醇適量，超聲處理20min，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻。濾過，精密量取濾液2ml置100ml容量瓶中至刻度，搖勻，濾過，再精密量取續(xù)濾液2ml置100ml容量瓶中搖勻。濾過，精密量取濾液1ml置10ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻即得。標準曲線方程：y=A=75.78x-0.0245。供試品吸光度測定：取供試品溶液于277nm和377nm波長處分別測吸光度，分別為A、A，得A=AA，根據回歸方程計算樣品中黃芩苷的含量。2.4 復方雙黃連膠囊的藥效研究選用健康雄性小白鼠4只，稱重，并分別用苦味酸標記。隨機分成給藥組（1號，2號，3號）和對照組，并且標號。并且分別標上標簽1號，2號，3號。根據公式：(人用劑量/378.9)*小鼠體重、(0.10.3ml)/10g體重,人的劑量是0.4g/粒*4*3，依據上述給出的公式及數據計算小鼠給藥量。1號、2號、3號給藥量分別是：0.436ml、0.448ml、0.458ml。半個小時后，每鼠左耳兩面涂二甲苯約0.02mL，右耳做空白對照。對照組：給等量生理鹽水。1h后，將小鼠處死，剪下雙耳并在同一部位打圓耳片，電子天平稱重，以（左耳重-右耳重）/右耳重作為腫脹率，比較差異。3 結果與討論3.1黃芩、連翹和金銀花的提取【結果】提取得到少量黃芩粉末，一定量金銀花、連翹稠膏?！居懻摗?、水煎法提取出的連翹，金銀花，黃芩的量相對超聲提取法、回流提取法等其他溶劑提取法得到的量較多，并且設備簡單，操作簡單，是中藥提取的好方法。但同時要注意的是：提取出的藥量大，多糖、鞣質等雜質也較多，多糖等成分粘性很大，會造成后期制粒時軟材粘性過大，影響制粒。2、煎煮時要注意補充水分，保持藥液微沸即可，不要過大的火力加熱，并且在煎煮過程中經常用玻璃棒攪拌，防止藥材煎糊使藥物有效成分減少，產生毒副物質。3、黃芩提取過程中，采取80保溫一小時的措施，目的是便于黃芩苷的析出，凝集成較大的顆粒易于沉降和過濾，注意保溫盡量保持靜止穩(wěn)定，使之充分受熱沉降。3.2雙黃連膠囊的制備【討論】1、 制軟材和制濕粒的過程中出現較多問題：在制軟材時候，由于沒有預先查好資料，導致崩解劑羧甲基淀粉鈉過早的加入，潤滑劑硬脂酸鎂忘記添加，影響其崩解和潤滑效果，但這樣對膠囊的崩解時限影響不是太大。由于采用水煎法提取的金銀花和連翹，因此含多糖、鞣質等雜質比較多，而多糖等的粘性本身就很大，并且加入輔料的次序及用量不太恰當，金銀花連翹稠膏過于黏稠，其中的水分太少，導致在制備軟材的過程中，加入黃芩、金銀花連翹藥材粉末和各種輔料的時候，越攪拌粘性越大，最后又添加了一些金銀花及連翹粉末還添加了微晶纖維素并噴灑了少許乙醇制濕粒時，經過反復過篩、加輔料、用手混合的過程才勉強制成的。由于沒有掌握好制備軟材和濕粒的技巧，導致在此過程中浪費了大量的藥材和輔料。由于提取的金銀花和連翹稠膏本身粘性就很大，所以在選擇輔料的時候就要選擇粘性不大的輔料，如微晶纖維素，和稀釋劑淀粉。我認為要想得到比較理想的軟材和濕粒除了要掌握相應的理論知識以外，更重要的是需要一定的制備軟材的經驗。有時候，輔料多一點或者是少一點都會導致軟材的制備失敗，因此，我們就需要多加練習，積累制備經驗。2、 處方分析：金銀花+黃芩+連翹粉 主藥 微晶纖維素 填充劑和粘合劑 羧甲基淀粉鈉 崩解劑 乙醇 潤濕劑 淀粉 填充劑和稀釋劑3.3 復方雙黃連膠囊的鑒別、質量檢查和含量測定結果3.3.1.復方雙黃連膠囊的質量檢查結果1、裝量差異結果膠囊總重量：4.2429g 膠囊平均重量：0.43167g 膠囊殼重量：0.9471g 囊殼平均重量：0.09478g 內容物裝量總重：3.3689內容物平均裝量：0.329612345678910膠囊重量(g)043080427704152041930.42020.43140.42190.43240.43010.4136囊殼重量（g）0.09900.09720.09160.09380.09690.09470.09570.09360.09140.0939內容物裝量（g）0.33180.33050.32360.32550.32330.33670.32620.33880.33870.3197裝量差異（%）0.66740.2730-1.820-1,244-1.9112.154-1.0322.7912.761-3.003【討論】由以上數據可得：本組膠囊的平均裝量均0.3g，裝量差異均在7.5%范圍內，因此本組中膠囊裝量差異符合要求。2、崩解時限結果6粒膠囊崩解時限：13min內全部崩解【討論】由以上數據可得：本組膠囊均在30min之內崩解完全，因此崩解時限符合規(guī)定。3.3.2 復方雙黃連膠囊的鑒別結果連翹薄層鑒別結果如下： 金銀花波層鑒別結果如下：黃芩薄層鑒別結果如下：【討論】1、 連翹：如以上薄層層析結果所示，供試品與連翹對照藥材和連翹苷對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色（紫黑色）的斑點，即制備的復方雙黃連膠囊中含有連翹。2、 金銀花：如以上薄層層析結果所示，供試品的薄層結果為3個斑點(棕黃色)，而金銀花對照藥材只出現3個斑點，綠原酸對照品出現一個斑點。這樣的結果說明制備的復方雙黃連膠囊中含有金銀花。3、 黃芩：如以上薄層層析結果所示，供試品與對照藥材各出現3、2個斑點（綠色），黃芩苷對照品出現一個斑點，且這三種溶液都幾乎在同一位置出現一個斑點，這樣也能夠得出制備的復方雙黃連膠囊中含有黃芩。4、 在展開前，應該將展開缸用展開劑進行預飽和，防止在展開的過程中出現邊緣效應。并且，在展開前，應該振搖展開劑，否則展開劑會出現分層現象，影響展開效果。3.3.3. 復方雙黃連膠囊含量測定結果1、 標準曲線方程：y=A=75.78x-0.0245 ，r=0.9994表3-3-3 供試品吸光度測定結果波長（nm）277377吸光度A(質量m=0.264g)1.0460.28A(AA)0.7664 2、黃芩苷的含量%計算5 代入標準曲線計算公式得黃芩苷濃度：x=0.01043mg/ml6 稀釋倍數為：50倍7 黃芩苷的重量計算：8 m=x50=0.0104350=0.5216mg,即0.005216g9 黃芩苷的含量計算：黃芩苷的含量%=m/M100%=0.005216/0.264100%=1.976%【討論】1、 一般情況下，每粒膠囊中黃芩苷的量為50mg，含量約為11.6%,可見制備的復方雙黃連膠囊黃芩苷的含量偏低。之所以偏低是因為，在制軟材的時候，加的輔料量太；提取的黃芩量太少。2、 含量測定的時候，本來制備的黃芩苷溶液稀釋倍數為50倍，但是由于所測得的吸光度A值為0.832，而正常