植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量的測(cè)定.doc

二、植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量的測(cè)定 硝態(tài)氮是植物最主要的氮源。植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量往往能反映土壤中硝態(tài)氮供應(yīng)情況，因此可作為土壤肥氮肥的指標(biāo)。測(cè)定植物體內(nèi)的硝態(tài)氮含量，不僅能夠反映出植物的氮素營(yíng)養(yǎng)情況，而且對(duì)鑒定蔬菜和植物為原料的加工制品的品質(zhì)也有重要的意義。（一）原理在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應(yīng)，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH12）呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可直接比色測(cè)定。（二）儀器與用具（1）722型分子光光度計(jì)1臺(tái)；（2）電子頂載天平1臺(tái)（感量1/萬）；（3）刻度試管20cm326支；（4）刻度吸管0.1cm3. 0.5cm3. 5cm3. 10cm3各1支；（5）容量瓶50cm38個(gè)；（6）容量瓶25cm33個(gè)；（7）小漏斗（5cm）3個(gè)；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1個(gè)；（10）電爐1個(gè)；（11）鋁鍋1個(gè)；（12）玻璃塞；（13）定量濾紙7cm。試劑：500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液精確稱取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于無離水中，定容至200cm3。5%水楊酸一硫酸溶液 稱取5克水楊酸溶于100cm3,濃硫酸中（密度為1. 84），攪拌溶解后，貯于棕色瓶中。置冰箱保存一周有效。8%氫氧化納溶液 稱取10克氫氧化納溶于1dm3無離子水中即可。（三）實(shí)驗(yàn)步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作（1）吸取500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液1cm3. 2cm3. 3cm3. 4cm3. 6cm3. 8cm3. 10cm3. 12cm3分別放入501cm3容量瓶中，用無離子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。（2）吸收上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0.11cm3，分別放入刻度試管中，以0.11cm3無離子水代替標(biāo)準(zhǔn)溶液作空白，再分別加入0.4cm3水楊酸一硫酸溶液，搖勻，在室溫下放置20分鐘后再加入8%NaOH溶液9. 51cm3搖勻冷卻至室溫，顯色液總體積為101cm3。（3）以空白作參比，在410nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。以NO3-N濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2. 樣品中硝酸鹽的測(cè)定（1）樣品液的制備，取一定量的植物材料剪碎混勻后，精確稱取2-3克分別放入三支刻度試管中，加入10cm3無離子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分鐘，到時(shí)間后取出，用自來水冷卻，將是取液過濾到25cm3容量瓶中，并反復(fù)沖洗殘?jiān)?，最的定容至刻度。?）樣口液的測(cè)定 吸取樣品0.1 cm3分別于三支刻度試管中，然后加入5%水楊酸一硫酸溶液0.4 cm3，混勻后置室溫下20分鐘，再慢慢加入9. 5 cm3 8%NaOH溶液，待冷卻至室溫后，以空白作參比，在410nm波長(zhǎng)下測(cè)期吸光度。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得或用回歸方程計(jì)算出NO3-N濃度，再用下公式計(jì)算其含量。 旱作物組織中硝態(tài)氮的測(cè)定硝酸試粉比色法1. 目的作物根系從土壤吸收的硝態(tài)氮，一部分很快參加蛋白質(zhì)的合成但仍有相當(dāng)數(shù)量的硝態(tài)氮是在向地上部分轉(zhuǎn)運(yùn)途中逐步轉(zhuǎn)化的。特別是某些旱作物葉柄硝態(tài)氮的水平，在一定范圍內(nèi)反映了當(dāng)時(shí)體內(nèi)的氮素營(yíng)養(yǎng)水平和土壤供氮狀況。定期檢測(cè)作物適當(dāng)部位的硝態(tài)氮含量的水平，可以為作物的施肥和促控措施等提供一些依據(jù)。本方法是基二鋅在酸性條件下產(chǎn)生氫氣，將硝酸根還原成亞硝酸根，亞硝酸根對(duì)氨基苯磺酸和a-萘胺作用，形成紅色偶氮染料，在一定范圍內(nèi)可按顏色（玫瑰紅）深淺估測(cè)NO3-N含量。靈敏度范圍為0.5-20ppm，其反應(yīng)一定要在PH5左右條件下進(jìn)行，在堿性條件下不顯色或顯色不明顯。2. 材料和試劑（1）硝酸試粉稱硫酸鋇50g，分成數(shù)份，分別與硫酸錳（Mnso4?H2o）5g，鋅粉1g，對(duì)氨基苯磺酸2g，a-萘1g，在研缽中研細(xì)混勻，最后與37. 5g檸檬酸一起研磨均勻，貯于暗色瓶中，防潮避光。此試粉灰白色，若變?yōu)榉奂t色，則不能使用。（2）PH5檸檬酸緩沖液 稱取化學(xué)純檸檬4. 31g，檸檬酸鈉6. 86g，溶于500ml蒸餾水中（溶液必須新鮮酸置）。（3）硝態(tài)氨標(biāo)準(zhǔn)溶液 稱取7. 22g分析純硝酸鉀加水定容到1000ml，即為1000ppmNo2-N。3. 方法與步驟（1）取樣 清晨在待測(cè)田塊中，選取有代表性的植株10-20株的敏感部位，用濕布擦凈，剪碎，榨汁備用。（2）測(cè)定 于15ml刻度試管中，加入5mlPH5. 0的檸檬酸緩沖液，滴入一滴組織汁液，搖勻加入0.2g硝酸試粉，塞緊，縱向搖動(dòng)試