2014篩查實(shí)驗(yàn)室建設(shè)培訓(xùn)

艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化建設(shè)和質(zhì)量管理,廣州市疾病預(yù)防控制中心艾滋病防制科Tel：36545132,艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室工作依據(jù),全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 2009年修訂版全國艾滋病檢測(cè)工作管理辦法 2006年頒布,開展艾滋病檢測(cè)工作的實(shí)驗(yàn)室要經(jīng)過技術(shù)和條件驗(yàn)收，未經(jīng)驗(yàn)收或驗(yàn)收不合格的實(shí)驗(yàn)室不得開展艾滋病檢測(cè)工作。 -全國艾滋病檢測(cè)工作管理辦法,2010年廣州市衛(wèi)生局出臺(tái)文件，要求二級(jí)及以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)必須建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室。孕產(chǎn)婦HIV抗體免費(fèi)篩查醫(yī)療機(jī)構(gòu)必須建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室或檢測(cè)點(diǎn)。轄區(qū)病例超過一定數(shù)量的社區(qū)或鄉(xiāng)鎮(zhèn)醫(yī)院必須建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室或檢測(cè)點(diǎn)。,艾滋病檢測(cè)篩查實(shí)驗(yàn)室類別及管理,篩查實(shí)驗(yàn)室,檢測(cè)點(diǎn),醫(yī)療、采供血機(jī)構(gòu)等,12個(gè)區(qū)疾控中心,篩查中心實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室建設(shè)兩個(gè)基本條件,條件一： 人員要求、建筑要求、儀器設(shè)備要求條件二： 質(zhì)量管理體系構(gòu)建,艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的基本條件一,1人員條件 至少由3名醫(yī)技人員組成，具有中級(jí)衛(wèi)生技術(shù)職稱人員至少1名。負(fù)責(zé)篩查試驗(yàn)的技術(shù)人員需具有2年以上從事病毒性疾病血清學(xué)檢測(cè)工作經(jīng)驗(yàn)，接受過省級(jí)或省級(jí)以上艾滋病檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)，并獲得培訓(xùn)證書。2建筑條件 實(shí)驗(yàn)區(qū)域和辦公區(qū)域分置，實(shí)驗(yàn)室或檢測(cè)區(qū)域應(yīng)分為清潔區(qū)，半污染區(qū)和污染區(qū)，應(yīng)符合二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求。3儀器設(shè)備條件 配備艾滋病抗體篩查試驗(yàn)所需設(shè)備，至少包括酶標(biāo)讀數(shù)儀（或發(fā)光檢測(cè)儀）、洗板機(jī)、加樣器（儀）、普通冰箱、低溫冰箱、離心機(jī)、溫箱或水浴箱、消毒與污物處理設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室恒溫設(shè)備、安全防護(hù)用品和生物安全柜。,生物安全柜,實(shí)驗(yàn)污染區(qū),半污染區(qū),清潔區(qū),公共走廊,應(yīng)急門,實(shí)驗(yàn)室分區(qū)布局圖,緊急撤離路線,緊急撤離路線,清潔實(shí)驗(yàn)物品柜,水槽,污染白大衣掛放處,細(xì)菌室,生化實(shí)驗(yàn)區(qū)域,免疫實(shí)驗(yàn)區(qū)域,生物安全柜的選擇：內(nèi)循環(huán)類型（單人、雙人） 不需要安裝排風(fēng)管。30%外排類型（單人、雙人） 需要安裝排風(fēng)管。,1. 人員條件 至少由2名經(jīng)過艾滋病檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)并獲得培訓(xùn)證書的專業(yè)人員組成。2. 建筑條件 實(shí)驗(yàn)區(qū)域和辦公區(qū)域分置，需有艾滋病檢測(cè)區(qū)域或?qū)Ｓ脤?shí)驗(yàn)臺(tái)，能開展簡便、快速檢測(cè)。3. 設(shè)備條件 需配備快速試驗(yàn)所必須的物品，包括普通冰箱、消毒與污物處理設(shè)備、一次性消耗品、安全防護(hù)用品。,艾滋病檢測(cè)點(diǎn)的基本條件一,生化實(shí)驗(yàn)區(qū)域,實(shí)驗(yàn)操作區(qū),免疫實(shí)驗(yàn)區(qū)域,細(xì)菌室,檢測(cè)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室布局,門,應(yīng)急門,人員進(jìn)出,物品進(jìn)出,要求:1、實(shí)驗(yàn)區(qū)域與辦公區(qū)域分開2、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部環(huán)境要求：實(shí)驗(yàn)室清晰劃分生化、臨檢、細(xì)菌操作區(qū)；實(shí)驗(yàn)儀器擺放位置合理、安全；保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境整潔，避免雜物隨處堆放；不可放置生活物品，如水杯、茶葉、飲用水等等。,艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室、檢測(cè)點(diǎn)的基本條件二,質(zhì)量體系構(gòu)建：,綱領(lǐng)性文件,指導(dǎo)性文件,實(shí)施性文件,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系文件應(yīng)覆蓋檢測(cè)前、檢測(cè)、檢測(cè)后整個(gè)過程， 包括質(zhì)量手冊(cè)、程序文件、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）和記錄。,全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范,第一章 樣品的采集和處理 第二章 HIV抗體檢測(cè) 第三章 HIV核酸定性檢測(cè) 第四章 HIV RNA定量測(cè)定（病毒載量測(cè)定） 第五章 CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè) 第六章 HIV抗原檢測(cè) 第七章 艾滋病實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)和職業(yè)暴露預(yù)防 第八章 艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理 第九章 艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量考評(píng)辦法 第十章 HIV診斷試劑臨床質(zhì)量評(píng)估方案,質(zhì)量體系文件內(nèi)容,主要工作制度；主要技術(shù)規(guī)范（流程）；實(shí)驗(yàn)儀器和實(shí)驗(yàn)方法SOP文件；主要記錄表格；需上墻的規(guī)范。,主要工作制度,初篩實(shí)驗(yàn)室工作制度1.實(shí)驗(yàn)室人員要嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)規(guī)章制度，認(rèn)真執(zhí)行操作規(guī)程。2. HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室分清潔區(qū)、半污染區(qū)、污染區(qū)，三區(qū)的器械、物品不可交叉擺放。3. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不準(zhǔn)吸煙、進(jìn)食、喧嘩。4. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持清潔、整齊，各種器材、儀器需定位陳設(shè)，貴重儀器需專人保管。試劑和標(biāo)本要分類存放，試劑標(biāo)簽要清晰。5. 嚴(yán)格遵守毒品、菌毒種、易燃易爆物品的保管和安全使用制度。6. 實(shí)驗(yàn)室、無菌室、工作臺(tái)要隨時(shí)或定期消毒，凡沾有毒的器材應(yīng)浸泡消毒或高壓消毒方能洗滌或丟棄，使用過的器材、工作服要及時(shí)消毒和清潔，污物要及時(shí)處理。帶傳染性的物品不得隨意帶出實(shí)驗(yàn)室。7. 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿工作服或隔離衣，做好個(gè)人防護(hù)，離開實(shí)驗(yàn)室要脫去工作服或隔離衣，防止污染環(huán)境。 8. 實(shí)驗(yàn)室要做好原始記錄，保管好與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的各種數(shù)據(jù)、資料。9. 嚴(yán)格按儀器操作作業(yè)指導(dǎo)書使用儀器，貴重儀器設(shè)使用登記本，實(shí)驗(yàn)人員每次使用時(shí)要做好登記，儀器需定期維護(hù)，并作記錄。10. 檢驗(yàn)人員需要在實(shí)驗(yàn)室加班，應(yīng)經(jīng)科室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)。11. 各類實(shí)驗(yàn)室必須設(shè)明顯的標(biāo)記，非工作人員未經(jīng)許可不得隨意進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。12.實(shí)驗(yàn)室必須配備滅火器、滅火箱等消防工具，滅火器應(yīng)經(jīng)常檢查，任何人不得擅自挪動(dòng)位置，不得挪作他用。下半時(shí)注意關(guān)好水、電、門窗等。,主要工作制度,安全工作制度（“規(guī)范”第七章） 樣品、試劑管理制度（“規(guī)范”第一章） 事故處理制度（“規(guī)范”第七章）,主要工作制度,保密制度 1. 科室人員、新上崗人員、進(jìn)修人員、實(shí)習(xí)人員在上崗前必須接受艾滋病防治工作保密內(nèi)容的培訓(xùn)。2. 沒有本科室相關(guān)工作人員在場(chǎng)時(shí)，任何人不得進(jìn)入有保密信息的工作場(chǎng)所。3. 外單位人員進(jìn)入檢驗(yàn)室工作區(qū)須經(jīng)科長同意，并有人陪同。有外單位人員在場(chǎng)時(shí)，本科室員工不得談?wù)撋婕安∪诵畔⒌膬?nèi)容，不得翻閱病人信息資料。4. 咨詢、流調(diào)、隨訪工作正在進(jìn)行時(shí)，無關(guān)人員不得隨意進(jìn)出工作場(chǎng)所。5. 艾滋病檢測(cè)確證實(shí)驗(yàn)室出具的艾滋病病毒抗體確證報(bào)告應(yīng)以保密方式發(fā)送，不得以書信、電郵、傳真等方式發(fā)送。艾滋病病毒抗體確證試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)當(dāng)告知本人；本人為無行為能力人或者限制行為能力人的，應(yīng)當(dāng)告知其監(jiān)護(hù)人。不可對(duì)無關(guān)人員透露檢測(cè)結(jié)果。6. 不可有意或無意向外透露病人相關(guān)信息。7.艾滋病相關(guān)材料，包括檢測(cè)、流調(diào)、隨訪、治療等資料須定期分類歸檔，設(shè)專人妥善保存，保存期不少于十年。材料不得隨意擺放，不得隨意借出，不得擅自修改和銷毀。作廢材料須用碎紙機(jī)粉碎后方可丟棄。8. 單位之間人工傳送病人資料，包裝材料須密封。9.電腦內(nèi)相關(guān)檢測(cè)、流調(diào)、隨訪、治療等資料必須加密，專用電腦由專人保管，不得隨意拷貝電腦資料，不得隨意將電腦資料以電子郵件形式發(fā)送。10. 本科室人員發(fā)表的論文、學(xué)術(shù)報(bào)告不得含有泄露病人信息的內(nèi)容。11. 保密工作執(zhí)行情況納入人員年度考核，一旦發(fā)生泄密事件，論情節(jié)嚴(yán)重性追究有關(guān)人員責(zé)任。,主要工作制度,儀器使用維護(hù)和校準(zhǔn)制度1. 儀器設(shè)備管理1.1 每臺(tái)儀器設(shè)備設(shè)專人管理，保管人員需對(duì)所轄設(shè)備性能狀況清楚了解，對(duì)所轄儀器設(shè)備的相關(guān)資料、零部件等妥善保管，對(duì)儀器設(shè)備定期運(yùn)行狀況及使用情況進(jìn)行定期檢查，對(duì)陳舊設(shè)備報(bào)廢。1.2 檢測(cè)人員借閱資料需登記。1.3 外科室人員或外單位人員借閱資料或借用儀器設(shè)備需征求保管人員同意，且作登記。2. 儀器設(shè)備使用2.1 操作人員在使用前需熟悉儀器的操作規(guī)程，大型儀器設(shè)備操作人員需取得儀器使用授權(quán)書后方可上機(jī)操作。2.2 操作人員嚴(yán)格按照儀器設(shè)備說明書及作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行操作。2.3 儀器一旦出現(xiàn)故障，應(yīng)立即停止使用，同時(shí)報(bào)告保管人或科室負(fù)責(zé)人，檢查原因，或請(qǐng)廠家前來修理，做好儀器使用情況、故障情況及維修情況登記。2.4 儀器使用完畢后，操作人員須作好儀器使用登記。3. 儀器設(shè)備維護(hù)3.1 保管人員或檢測(cè)人員需按照儀器設(shè)備說明或作業(yè)指導(dǎo)書對(duì)儀器設(shè)備定期進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)。3.2 對(duì)維護(hù)操作作登記。4. 儀器設(shè)備校準(zhǔn)4.1 酶標(biāo)儀、天平、定量移液器、生物安全柜、全自動(dòng)蛋白免疫印跡儀等設(shè)備每年需定期校準(zhǔn)，由后勤管理科負(fù)責(zé)請(qǐng)計(jì)量局專業(yè)人員進(jìn)行校準(zhǔn)；長期不使用時(shí)，儀器保管人要定期開機(jī)檢查儀器運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常。4.2 常用儀器設(shè)備在兩次檢定/校準(zhǔn)周期之間進(jìn)行期間核查，方法采用同等精度的計(jì)量儀器設(shè)備進(jìn)行比對(duì)。,主要工作制度,檢測(cè)數(shù)據(jù)的記錄和保存制度1. 數(shù)據(jù)記錄和保存操作1.1科室設(shè)計(jì)相關(guān)記錄格式，包括手寫版和電子版。1.2 艾滋病咨詢門診負(fù)責(zé)檢測(cè)標(biāo)本的采集接收，將標(biāo)本資料錄入手寫版和電子版表格。1.3 艾滋病咨詢門診將電子版表格通過局域網(wǎng)傳輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。1.4實(shí)驗(yàn)人員按照表格內(nèi)需要檢測(cè)的項(xiàng)目，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)做原始記錄，完成實(shí)驗(yàn)后將檢測(cè)數(shù)據(jù)填入表格內(nèi)，保存數(shù)據(jù)和打印報(bào)告。1.5 實(shí)驗(yàn)室人員用移動(dòng)硬盤每月對(duì)電子版檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行備份拷貝，年終將整年數(shù)據(jù)刻錄到光盤內(nèi)保存。手寫版表格和檢測(cè)原始記錄分類歸檔保存。 2.記錄的保存要求 2.1 所有記錄應(yīng)按分類編目保存，便于存取和檢索。2.2 記錄在適宜的環(huán)境中妥善保管，防潮、防火、防蟲蛀鼠咬，防止損壞、變質(zhì)和丟失。電子媒體記錄的存儲(chǔ)取用應(yīng)適應(yīng)電子媒體存儲(chǔ)取用的特點(diǎn)。對(duì)損壞或變質(zhì)的記錄、檔案資料應(yīng)及時(shí)修復(fù)或復(fù)制。設(shè)專人負(fù)責(zé)妥善保存檢測(cè)記錄，不得擅自修改和銷毀。記錄保存期不少于十年。2.3 受理記錄和檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告書由質(zhì)量控制科保存。檢驗(yàn)過程的記錄（檢驗(yàn)的原始記錄）由科室保存。3.記錄的安全保密3.1 所有記錄應(yīng)予安全保護(hù)和保密，設(shè)專人保管，不允許隨意查借閱。3.2 檢測(cè)數(shù)據(jù)存儲(chǔ)電腦設(shè)專人保管，數(shù)據(jù)表格加密，不得隨意拷貝、刪除，防止原始數(shù)據(jù)的丟失和未經(jīng)授權(quán)的侵入或修改。3.3 本中心內(nèi)部人員查閱有關(guān)記錄(檔案)須經(jīng)科室負(fù)責(zé)人同意。3.4 外部人員查閱記錄，須經(jīng)中心領(lǐng)導(dǎo)同意。3.5 所有記錄只可就地查閱，不予外借。,主要工作制度,疫情報(bào)告制度（提綱） 疫情報(bào)告責(zé)任科室、責(zé)任人 疫情報(bào)告流程 人員承擔(dān)的責(zé)任,主要技術(shù)規(guī)范（流程）,檢測(cè)及結(jié)果報(bào)告操作程序1. 篩查試驗(yàn)報(bào)告：對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，出具“HIV抗體陰性”報(bào)告；對(duì)呈陽性反應(yīng)者出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告或不出具報(bào)告，須進(jìn)行復(fù)檢。2. 復(fù)檢試驗(yàn)報(bào)告： 篩查中心實(shí)驗(yàn)室或確證實(shí)驗(yàn)室對(duì)初篩呈陽性反應(yīng)的上送樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測(cè)。如兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告“HIV抗體陰性”；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，不出具報(bào)告，做進(jìn)一步確證。3. 檢測(cè)結(jié)果的解釋3.1 篩查陰性結(jié)果：核實(shí)最后一次高危行為已過三個(gè)月的“窗口期”，可以認(rèn)為沒有感染HIV；如果沒有渡過三個(gè)月的“窗口期”，不能排除HIV感染的可能，應(yīng)在“窗口期”過后再進(jìn)行復(fù)查。 3.2 篩查陽性結(jié)果：篩查陽性結(jié)果不能判定對(duì)方已被HIV感染，解釋為可能是 感染HIV引起的陽性反應(yīng)； 生物假陽性，體內(nèi)存在與HIV蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其它蛋白引起； 技術(shù)假陽性，由于試劑質(zhì)量或人為操作不當(dāng)引起。標(biāo)本須進(jìn)一步做確證試驗(yàn)方能下最終判斷。 3.3 確證陰性結(jié)果：核實(shí)最后一次高危行為已過三個(gè)月的“窗口期”，可以認(rèn)為沒有感染HIV；如果沒有渡過三個(gè)月的“窗口期”，不能排除HIV感染的可能，應(yīng)在“窗口期”過后再進(jìn)行復(fù)查。 3.4 確證不確定結(jié)果：不能判定對(duì)方是否被HIV感染，解釋為可能是 HIV早期或晚期感染； 非特異性反應(yīng)，是由各人體質(zhì)差異或試劑制作技術(shù)等引起。結(jié)合流行病學(xué)史對(duì)其進(jìn)行評(píng)估，并建議其每3個(gè)月隨訪復(fù)檢1次，連續(xù)2次，共6個(gè)月。如果檢測(cè)時(shí)暴露時(shí)間已超過3個(gè)月，則在3個(gè)月后隨訪1次即可。3.5 確證陽性結(jié)果：表示已感染HIV，具有傳染性。結(jié)果告知同時(shí)，必須詢問受檢者是否有過高危行為。對(duì)于小于18M的嬰兒，抗體可能來自于母親，建議其十八個(gè)月后再進(jìn)行檢測(cè)。,主要技術(shù)規(guī)范（流程）,質(zhì)量管理操作程序（“規(guī)范”第八章）1. 常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控1.1 實(shí)驗(yàn)前質(zhì)量控制1.1.1采集標(biāo)本前病人的準(zhǔn)備。1.1.2正確的標(biāo)本采集方法。1.1.3準(zhǔn)確及時(shí)的運(yùn)送標(biāo)本。1.1.4實(shí)驗(yàn)前，按照不同檢測(cè)項(xiàng)目正確地處理和保存標(biāo)本。2.實(shí)驗(yàn)中質(zhì)量控制2.1應(yīng)用酶聯(lián)方法進(jìn)行抗體實(shí)驗(yàn)時(shí)，在每次實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)置一個(gè)單一濃度水平的質(zhì)控品即弱陽性對(duì)照，每次實(shí)驗(yàn)均加入1孔質(zhì)控品。2.2 根據(jù)質(zhì)控品OD值，作Levey-Jennings 質(zhì)控圖質(zhì)控或做“即刻法”質(zhì)控。2. 3 操作者在測(cè)定質(zhì)控品時(shí)，發(fā)現(xiàn)質(zhì)控品數(shù)據(jù)違背了控制規(guī)則，應(yīng)填寫失控報(bào)告單，上交室負(fù)責(zé)人，分析失控原因，由室負(fù)責(zé)人決定是否要發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告。2.4 每月(月末)定期召開質(zhì)量控制會(huì)，討論本月檢測(cè)的質(zhì)量控制情況。3.實(shí)驗(yàn)后質(zhì)量控制3.1 實(shí)驗(yàn)后準(zhǔn)確填寫檢驗(yàn)結(jié)果。3.2.及時(shí)發(fā)出報(bào)告。3.3正確地解釋檢驗(yàn)結(jié)果的臨床意義,主要技術(shù)規(guī)范（流程）,實(shí)驗(yàn)室安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序(“規(guī)范”第七章31頁) 樣品采集、處理和上送操作程序 （“規(guī)范”第一、二章）廢棄物處理和消毒操作程序（“規(guī)范”第七章33頁）職業(yè)暴露處理流程（“規(guī)范”第七章34頁）,實(shí)驗(yàn)儀器和實(shí)驗(yàn)方法SOP文件,酶標(biāo)讀數(shù)儀操作細(xì)則發(fā)光檢測(cè)儀操作細(xì)則生物安全柜操作細(xì)則 高壓滅菌器操作細(xì)則 酶聯(lián)方法檢測(cè)細(xì)則 快速方法檢測(cè)細(xì)則,儀器操作說明書試劑盒說明書,主要記錄表格,ELISA質(zhì)量控制圖表抗-HIV檢測(cè)登記表初篩試驗(yàn)原始記錄 實(shí)驗(yàn)差錯(cuò)登記表 酶標(biāo)儀使用和維護(hù)記錄 生物安全柜使用和維護(hù)記錄 高壓滅菌器使用和維護(hù)記錄 事故登記表環(huán)境溫濕度登記表 冰溫箱登記表人員健康監(jiān)護(hù)記錄職業(yè)暴露個(gè)案登記表廢棄物登記表,“已統(tǒng)一制定”,需上墻的規(guī)范,篩查實(shí)驗(yàn)室工作制度安全工作守則或制度 初篩試驗(yàn)流程圖 （“規(guī)范”第二章）職業(yè)暴露處理流程圖（“規(guī)范”第七章）,操作程序文件（SOP 編寫格式）,封面（1）標(biāo)題（2）編寫、審核、批準(zhǔn)人及相應(yīng)日期（3）修改內(nèi)容、修改日期、修改批準(zhǔn)人正文（1）標(biāo)題和編號(hào)（2）目的、應(yīng)用范圍和方法或程序（3）支持性文件（4）相應(yīng)記錄（5）附錄，包括相關(guān)的附加文件如記錄表格、設(shè)備和試劑盒說明書 等。,SOP,SOP,SOP,SOP,作 業(yè) 指 導(dǎo) 書 目 錄 編號(hào) 標(biāo)題GZCDC/WDAD01 艾滋病病毒抗體酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)細(xì)則GZCDC/WDAD02 艾滋病病毒抗體明膠凝集法（PA）檢測(cè)細(xì)則GZCDC/WDAD03 梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)細(xì)則GZCDC/WDAD04 艾滋病類樣品的管理制度GZCDC/WDAD05 DENLEY-DRAGON (MK-2)全自動(dòng)酶標(biāo)儀操作規(guī)程GZCDC/WDAD06 艾滋病類樣品采集、收檢程序GZCDC/WDAD07 科室安全防護(hù)和內(nèi)務(wù)管理程序GZCDC/WDAD08 艾滋病實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)GZCDC/WDAD09 HIV職業(yè)暴露后預(yù)防GZCDC/WDAD10 艾滋病病毒抗體酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)細(xì)則 （國產(chǎn)）GZCDC/WDAD11 艾滋病病毒1+2型抗體免疫印跡試驗(yàn)(HIV1+2 Western Blot)GZCDC/WDAD12 Forma class B2生物安全柜操作規(guī)程,廣州市疾病預(yù)防控制中心（廣州市衛(wèi)生檢驗(yàn)中心）作業(yè)指導(dǎo)書 標(biāo)題：艾滋病病毒操作危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,修改記錄,廣州市疾病預(yù)防控制中心作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：GZCDC/WDAD29標(biāo)題：艾滋病病毒操作危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 版號(hào)：第 1 頁 共 2 頁1.目的明確艾滋病病毒操作危害風(fēng)險(xiǎn)，避免發(fā)生生物安全事故。2.使用范圍本操作規(guī)程適用于本實(shí)驗(yàn)室危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及事故處理。3.職責(zé)操作人員：按照相關(guān)危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及事故處理進(jìn)行正確實(shí)驗(yàn)操作。質(zhì)量監(jiān)督員：負(fù)責(zé)監(jiān)督實(shí)驗(yàn)是否按危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及事故處理原則進(jìn)行?？剖邑?fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)綜合管理。4.危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估按照實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求（GB 194892004），艾滋病病毒屬于危害等級(jí)病原微生物，艾滋病病毒主要通過血液傳播、性接觸傳播、母嬰傳播三種途徑傳播，一般不通過氣溶膠傳播。根據(jù)標(biāo)本中艾滋病病毒含量和操作危險(xiǎn)性評(píng)估本實(shí)驗(yàn)室危害風(fēng)險(xiǎn)。4.1 艾滋病血清學(xué)檢測(cè)：艾滋病病毒含量較低、操作危險(xiǎn)性較低，在BSL2級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，在普通操作臺(tái)或生物安全柜內(nèi)操作，實(shí)驗(yàn)人員做好個(gè)人防護(hù)。4.2 HIV感染者淋巴細(xì)胞分離：艾滋病病毒含量較高、操作危險(xiǎn)性較高，在BSL2級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，在生物安全柜內(nèi)操作，實(shí)驗(yàn)人員做好個(gè)人防護(hù)。4.3 HIV感染者CD4T淋巴細(xì)胞檢測(cè)：艾滋病病毒含量較高、操作危險(xiǎn)性較高，在BSL2級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，標(biāo)本前處理部分須在生物安全柜內(nèi)操作，實(shí)驗(yàn)人員做好個(gè)人防護(hù)。4.4 艾滋病病毒核酸提?。喊滩〔《竞枯^高、操作危險(xiǎn)性較高，在BSL2級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，標(biāo)本前處理部分須在生物安全柜內(nèi)操作，實(shí)驗(yàn)人員做好個(gè)人防護(hù)。4.5 艾滋病病毒分離：艾滋病病毒含量較高、操作危險(xiǎn)性較高，在BSL3級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作，實(shí)驗(yàn)人員做好個(gè)人防護(hù)。4.6 根據(jù)危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估制定相應(yīng)實(shí)驗(yàn)的操作規(guī)程。4.7 實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格按相應(yīng)操作規(guī)程進(jìn)行操作。4.8 制定緊急事故處理辦法。,廣州市疾病預(yù)防控制中心作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：GZCDC/WDAD29標(biāo)題：艾滋病病毒操作危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 版號(hào)：第 2 頁 共 2 頁5.事故處理51 建立標(biāo)本種丟失、破壞或?qū)嶒?yàn)室偶發(fā)事故應(yīng)急處理辦法，制定相應(yīng)記錄。52 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)備有75%酒精、高效氯等消毒劑。53 制定事故登記表及事故上報(bào)程序。6.支持性文件6.1 科室安全防護(hù)和內(nèi)務(wù)管理程序 （文件編號(hào)：GZCDC/WDAD07）6.2 中華人民共和國傳染病防治法實(shí)施辦法6.3 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求（GB 194892004）6.4 全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范7.附錄71 艾滋病防制科生物危害評(píng)估表,GZCDC/WDAD29-01,篩查實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收程序,申報(bào)單位填寫艾滋病檢測(cè)篩查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)與條件驗(yàn)收申請(qǐng)表,申報(bào)單位將區(qū)、縣級(jí)市衛(wèi)生行政部門已蓋章的艾滋病檢測(cè)篩查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)與條件驗(yàn)收申請(qǐng)表報(bào)廣州市疾病預(yù)防控制中心,申報(bào)單位將艾滋病檢測(cè)篩查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)與條件驗(yàn)收申請(qǐng)表報(bào)所在區(qū)、縣級(jí)市衛(wèi)生行政部門初審，蓋章。,現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收，加具意見。,上報(bào)市衛(wèi)生行政部門審核,市衛(wèi)生行政部門審核通過后下發(fā)批準(zhǔn)文件,報(bào)所在區(qū)、縣級(jí)市疾病預(yù)防控制中心,現(xiàn)場(chǎng)初評(píng)，加具意見。,艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理,設(shè)備校準(zhǔn)與維護(hù),必須經(jīng)國家法定部門定期（每年至少1次）校準(zhǔn)的儀器至少包括：酶標(biāo)儀/洗板機(jī)，加樣器，溫度計(jì)，高壓滅菌器 。加樣器、溫濕度計(jì)須經(jīng)計(jì)量部門校準(zhǔn)。其他儀器，如生物安全柜，離心機(jī)等也必須定期（每年1次）校準(zhǔn)，可請(qǐng)生產(chǎn)廠家校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀與洗板機(jī)定期維護(hù)、清洗。,主要記錄表格,抗-HIV檢測(cè)登記表：包括受檢者姓名或編號(hào)、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、感染途徑、地址和戶口、收樣日期、收樣人、檢驗(yàn)結(jié)果、備注等。 ELISA質(zhì)量控制圖表 初篩試驗(yàn)原始記錄：包括檢測(cè)項(xiàng)目、標(biāo)本性質(zhì)和狀態(tài)、測(cè)定方法、試劑盒廠家、批號(hào)、效期、環(huán)境條件等，標(biāo)明空白對(duì)照、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、外部對(duì)照以及待檢樣品的位置，操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測(cè)日期。 實(shí)驗(yàn)差錯(cuò)登記表 酶標(biāo)儀使用和維護(hù)記錄 生物安全柜使用和維護(hù)記錄 高壓滅菌器使用和維護(hù)記錄 事故登記表環(huán)境溫濕度登記表 冰溫箱登記表人員健康監(jiān)護(hù)記錄職業(yè)暴露個(gè)案登記表廢棄物登記表,1.實(shí)驗(yàn)原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、檢測(cè)記錄表、標(biāo)本登記、標(biāo)本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄等存檔保存一般應(yīng)為10年期限。最好同時(shí)使用計(jì)算機(jī)保存各種文件和記錄。內(nèi)含病人姓名的所有工作記錄一定要保密。 2. 存檔的資料不應(yīng)隨便堆放，應(yīng)按一定方式編號(hào)，便于查詢。 3. 資料的存檔制度、查詢制度、借閱制度、保密制度應(yīng)健全。 4. 資料是實(shí)驗(yàn)室的公有財(cái)產(chǎn)，不可以任意將資料帶走、借走、丟失、不歸還或更改。 5. 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有人專職或兼職任資料保管員，以便查詢。,存檔,質(zhì)量控制（QC ）,定義 質(zhì)量控制是指為確保實(shí)驗(yàn)工作正常進(jìn)行而在每一次實(shí)驗(yàn)過程中必須采取的各種措施。,實(shí)驗(yàn)前質(zhì)量控制 采集標(biāo)本前病人的準(zhǔn)備；正確的標(biāo)本采集方法；準(zhǔn)確及時(shí)的運(yùn)送標(biāo)本；實(shí)驗(yàn)前正確地處理和保存標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)中質(zhì)量控制 質(zhì)控品的準(zhǔn)備；試劑盒的評(píng)價(jià)；開展Levey-Jennings 質(zhì)控圖質(zhì)控（或“即刻法”質(zhì)控）。實(shí)驗(yàn)后質(zhì)量控制 實(shí)驗(yàn)后準(zhǔn)確填寫檢驗(yàn)結(jié)果；及時(shí)發(fā)出報(bào)告；正確地解釋檢驗(yàn)結(jié)果的臨床意義。,試劑盒內(nèi)部對(duì)照 試劑盒內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對(duì)照血清。試劑盒內(nèi)部對(duì)照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，但不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每一次檢測(cè)臨床樣品時(shí)，必須有試劑盒內(nèi)部對(duì)照，而且只能在同批號(hào)的試劑盒中使用。內(nèi)部對(duì)照結(jié)果無效，必須重新試驗(yàn)。,室內(nèi)質(zhì)控品,為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性而設(shè)置的，包括強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性質(zhì)控血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽性質(zhì)控，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的23倍為宜。外部質(zhì)控品的作用是，判斷該批臨床樣品檢測(cè)的有效性，因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無效，必須重新試驗(yàn)。,室內(nèi)質(zhì)控品的來源和選擇,1）通過向有關(guān)機(jī)構(gòu)購買獲得2）通過實(shí)驗(yàn)室制備獲得 ( 比較經(jīng)濟(jì)的方法 ) 混合試劑盒內(nèi)部對(duì)照血清，等量分裝。 混合HIV 抗體陽性或陰性人血清，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，用0.2m 生物濾膜過濾除菌后再進(jìn)行56 30分鐘加熱滅活處理。弱陽性對(duì)照可以通過使用HIV抗體陰性的正常人血清梯度稀釋HIV抗體強(qiáng)陽性血清并經(jīng)標(biāo)定后得到。,室內(nèi)質(zhì)控品的保存,1）外部對(duì)照血清或血漿的一次制備量應(yīng)該足夠本實(shí)驗(yàn)室 一年使用。2）外部對(duì)照血清應(yīng)該均一、無菌。3）外部對(duì)照血清標(biāo)定后應(yīng)該等量分裝，每個(gè)分裝的量應(yīng) 足夠一周使用。4）外部對(duì)照應(yīng)該分類作好標(biāo)記，使用不同顏色的標(biāo)簽。5）外部對(duì)照血清應(yīng)該存放在70 ，如無條件則存放 在非自動(dòng)除霜的20 冰箱。6）外部對(duì)照血清一旦融解以后應(yīng)該存放在 28 ，一 周后必須棄去，不能重新凍存。,室內(nèi)質(zhì)控品的使用,原則上每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對(duì)照質(zhì)控血清，建立質(zhì)控圖，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)操作的一致性和結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)可以了解各批試劑盒之間的誤差(批間差異)。,建立質(zhì)控圖參數(shù)（ELISA）,對(duì)HIV抗體檢測(cè)(ELISA)外部對(duì)照質(zhì)控血清的評(píng)價(jià)采用多次測(cè)定的OD值的均值上下各兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的范圍，即外部對(duì)照OD值的95可信限為 x 2s。各個(gè)外部對(duì)照的標(biāo)定即確定外部對(duì)照的均值和可信限，可用幾個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)參數(shù)如均值( x )、標(biāo)準(zhǔn)差(s)以及變異系數(shù)(cv)來確定可信限。 算術(shù)平均值( x )代表一組OD值數(shù)的平均值 標(biāo)準(zhǔn)差(s) 變異系數(shù)(cv),范例：參考鄭懷競(jìng)主編免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)與室內(nèi)質(zhì)控，1997年出版。,x 計(jì)算公式為： x x = N s 計(jì)算公式為： ( xn - x )2 s = N cv 計(jì)算公式為： s cv = x 100 % x,通過上表，計(jì)算S/CO值的均值（x），標(biāo)準(zhǔn)差（s）和變異系數(shù)（cv） x =1.72 s =0.29 cv =16.9%根據(jù)以上數(shù)據(jù)繪制室內(nèi)質(zhì)控框架圖, 開始質(zhì)量控制,質(zhì)控圖(Levey-Jennings控制圖),質(zhì)控圖的判定和分析,如果檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)時(shí)，質(zhì)控對(duì)照值超出 2s，則本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受( 失控 )。 位移：如果幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值 (3-5次) 都落在均值(中心線)的一邊則稱之為位移，通常表示存在大的變化 ( 失控 )。 引起位移的原因有使用新批號(hào)的試劑盒、使用新試劑、實(shí)驗(yàn)員的更換、孵育溫度的改變、儀器 ( 移液器 ) 故障等。 趨勢(shì)：當(dāng)幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值(5-7個(gè))幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱之為趨勢(shì)(失控)，通常由參數(shù)的緩慢改變引起，如試劑失效和移液器逐漸不準(zhǔn)確等。 發(fā)生漂移和趨勢(shì)的最常見的原因是試劑(如酶標(biāo)記物)或?qū)φ盏氖А?質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點(diǎn),a可以先進(jìn)行最佳條件下的變異測(cè)定。b采用S/CO比值制圖要比單用OD或A值制圖的方法給出更為精確的評(píng)估，因?yàn)樗鼘⒚看?