小鼠缺氧實驗實驗報告

精品文檔篇二：缺氧 缺氧動物模型復制及中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抑制和低溫對缺氧的影響 【摘要】目的：本實驗學習復制乏氧性缺氧和血液性缺氧的動物模型方法，觀察缺氧過程中呼吸的反應及血液色澤和全身一般情況的變化，并了解溫度和中樞神經(jīng)系統(tǒng)機能狀態(tài)對缺氧耐受的影響以及對照實驗和控制實驗條件重要性。方法：通過復制缺氧動物模型，觀察不同類型缺氧過程中呼吸、黏膜和血液色澤的變化。通過測定耗氧量和小鼠的存活時間來觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)機能抑制和低溫對缺氧的影響。結(jié)果：中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抑制和低溫對動物耐受缺氧的影響與對照組相比，存活時間和總耗氧率有顯著性差異；復制不同原因造成的不同缺氧類型小鼠都表現(xiàn)出了不同的呼吸頻率和存活時間的變化。結(jié)論：給小鼠注射氯丙嗪、冰浴降溫可顯著降低總耗氧率，延長其存活時間（p<0.01）。co中毒、亞硝酸鹽可顯著縮短小鼠存活時間，降低呼吸頻率。美蘭可以緩解亞硝酸鹽對小鼠的作用，已定程度延長小鼠存活時間，延緩呼吸頻率的下降。 【關(guān)鍵詞】缺氧 氯丙嗪 總耗氧率 co 亞硝酸鹽 美蘭 存活時間 當供應組織的氧不足，或組織利用氧障礙時，機體的機能和代謝可發(fā)生異常變化，這種病理過程稱為缺氧。根據(jù)缺氧的原因不同可將缺氧分為低張性缺氧、血液性缺氧、循環(huán)性缺氧和組織中毒性缺氧四種類型，不同類型的缺氧，機體的代償適應性反應和癥狀表現(xiàn)有所不同。 1.材料和方法 1.1實驗動物：小白鼠（雌性）。 1.2 藥品：氯丙嗪(chlorpromazine) 、鈉石灰（soda lime)，亞硝酸鈉（ sodium nitrite ) 、亞甲基藍(美藍）（methylene blue，mb）、 0.9nacl (physiological saline solution) 、co(carbon monoxide)。 1.3 器材：100、500ml廣口瓶和測耗氧裝置。 1.4 方法 1.4.1 中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抑制和低溫對缺氧的影響 取2只性別相同體重相近的小鼠，準確稱取體重，并隨機分為生理鹽水組和氯丙嗪組。氯丙嗪組按0.1ml/10g體重腹腔注射0.25氯丙嗪，隨即安放在冰浴的紗布上 1015min，使呼吸頻率降至7080次/min；生理鹽水組按0.1ml/10g體重腹腔注射生理鹽水，室溫放置1015min，作為對照。之后將2只小鼠分別放入100ml的廣口瓶內(nèi)，連接好測耗氧裝置。如右圖。 1.4.2 不同原因造成的缺氧 取2只性別相同體重相近的小鼠隨機分為乏氧性缺氧組和一氧化碳中毒組。乏氧性缺氧組小鼠放入含有5g鈉石灰的100ml密閉瓶中；一氧化碳中毒組小鼠放入500ml密閉瓶，注入10ml co氣體。 另取2只性別相同體重相近的小鼠隨機分為亞硝酸納組和亞硝酸納治療組。亞硝酸納組小鼠腹腔注射50g/l亞硝酸納0.2ml，并隨即腹腔注射生理鹽水0.2ml；亞硝酸納治療組小鼠腹腔注射50g/l亞硝酸納0.2ml后即刻腹腔注射10g/l亞甲基藍0.2ml 。 2.觀察項目 2.1 中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抑制和低溫對缺氧的影響 記錄下小鼠的體重w（g）。從密閉測耗氧裝置開始記時到小鼠死亡，分別觀察氯丙嗪組和生理鹽水組小鼠的存活時間t（min）、總耗氧量a（ml）。按以下公式計算出總耗氧率rml/（gmin）： rml/（gmin）= a（ml）w（g）t（min） 2.2 不同原因造成的缺氧 乏氧性缺氧組和一氧化碳中毒組：處理前分別測出兩鼠的正常呼吸頻率（次/min）。待塞緊瓶塞開始記時后，每隔5min測一次呼吸頻率（次/min），并觀察兩鼠的行為以及耳、尾、口唇等的顏色變化，直至小鼠死亡。記錄死亡時間。 亞硝酸納組和亞硝酸納治療組：處理前分別測出兩鼠的正常呼吸頻率（次/min）。待注射藥品后，每隔5min測一次呼吸頻率（次/min），并觀察兩鼠的行為以及耳、尾、口唇等的顏色變化，直至小鼠死亡。記錄死亡時間。 將4只鼠分別解剖取出小塊肝臟組織置于濾紙上觀察顏色的不同。 3.實驗結(jié)果 3.1中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抑制和低溫對缺氧的影響 氯丙嗪組小鼠體重與生理鹽水組小鼠體重無顯著性差異（p>0.05）；氯丙嗪組小鼠的耗氧量為12.75.02 ml，生理鹽水組小鼠的耗氧量為16.03.01 ml，兩者無明顯差異（p>0.05）；氯丙嗪組小鼠耐缺氧存活時間為44.717.21 min，生理鹽水組小鼠耐缺氧時間為21.03.61，兩者相比有高度顯著性差異 （p<0.01）；氯丙嗪組小鼠的耗氧率為0.0130.005 (ml/g/min)，生理鹽水組小鼠的耗氧率0.030.002 (ml/g/min)，兩者相比有高度顯著性差異（p<0.01）。見表1。 表1. 氯丙嗪、冰浴對小鼠缺氧耐受性的影響實驗結(jié)果統(tǒng)計表 小鼠體重（g） 樣本 1 2 3 4 5 6 7 8 9 對照 23 19 實驗 22 25 22 25 24 22 23 22 22 23.01.32& 總耗氧量（ml） 對照 19.5 14.0 16.0 14.0 17.4 17.0 11.5 21.0 13.5 16.0 3.01 實驗 存活時間（min） 總耗氧率（ml/g/min) 對照 實驗 47 52 35 23 24 59 31 60 71 44.717.21* 對照 0.034 0.035 0.033 0.035 0.033 0.034 0.031 0.037 0.029 0.03 0.002 實驗 0.01 0.011 0.013 0.014 0.016 0.015 0.024 0.005 0.012 0.0130.005# 10.5 25 14.3 21 10.0 8.0 9.5 19.9 17.0 6.0 19.0 12.75.02$ 22 16 21 22 15 26 21 21.0 3.61 22 25 25 23 25 22 22 22.9 x?s 1.96 注：*p<0.01 vs對照組 ；p<0.01 vs對照組；&p>0.05 vs對照組,$p>0.05 vs 對照組 3.2不同原因造成的缺氧 由表2可知，亞硝酸鈉中毒小鼠的存活時間最短，其次為co中毒組。存活時間最長的是亞硝酸鈉美蘭組，可見美蘭具有抗亞硝酸鈉中毒的作用。 表2. 乏氧、co中毒、亞硝酸鈉中毒小鼠的呼吸頻率(次/10秒） 缺氧類型 乏氧 co中毒 亞硝酸鈉 亞硝酸鈉 美蘭 0min 29.74.90 29.75.90 29.73.54 29.7 5.68 5min 31.26.96 24.78.72 26.17.13 25.9 4.99 10min 30.47.52 26.89.31 28.7 8.38 15min 25.08.97 28.5 6.02 20min 30.16.83 25min 29.56.07 30min 28.96.24 3.3亞硝酸鈉中毒與亞硝酸鈉+美蘭的兩組小鼠的存活時間有顯著性差異，美蘭組存活時間顯著延長(p<0.01)。見表3。 表3. 亞硝酸鹽中毒及其美蘭的治療效果 缺氧類型 亞硝酸鹽中毒性缺氧 亞硝酸鹽中毒性+美蘭 存活時間 9.561.59 48.6714.23* 注：p<0.01 3.4 分別觀察乏氧性缺氧組、一氧化碳中毒組、亞硝酸納組和亞硝酸納治療組的小鼠肝臟組織顏色，如表3。 表4. 乏氧、co中毒、亞硝酸鈉中毒的小鼠存活時間和肝血、耳尾唇顏色比較 類別 乏氧 體重(g) 19 存活時間(min) 18 肝血顏色 暗紅色 耳尾唇顏色 青紫色（紫紺） co nano2 nano2+mb 22 18 18.5 7 12 30 櫻桃紅色 深咖啡色 淺咖啡色 櫻桃紅色 青石板色 青石板色，稍淺 4. 討論 4.1 實驗結(jié)果顯示氯丙嗪組的存活時間顯著長于生理鹽水組，耗氧率也顯著低于生理鹽水組。氯丙嗪為吩噻嗪類抗精神病藥物，主要阻斷腦內(nèi)多巴胺受體和腎上腺素受體和m膽堿受體，具有神經(jīng)安定作用，它對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有較強的抑制作用。小鼠注射氯丙嗪后，置于低溫使其進入假冬眠狀態(tài)。小鼠外界活動停止，新陳代謝率降至最低，因此能量利用減少，單位時間的耗氧量減少，即耗氧率減小。在氧總量相等的情況下，存活時間就比生理鹽水組長。 4.2 乏氧性缺氧，主要表現(xiàn)為動脈血氧分壓降低，氧含量減少，組織供養(yǎng)不足。正常毛細血管的血液中氧離血紅蛋白濃度約為26g/l。乏氧性缺氧時，動靜脈血中的氧離血紅蛋白濃度增高。當毛細血管血液中氧離血紅蛋白濃度達到或超過50 g/l時，可使皮膚和粘膜呈青紫色。 co與hb的親和力比o2大210倍，hb與co結(jié)合形成碳氫hb，從而失去運氧功能。co同時還能抑制紅細胞內(nèi)糖酵解，使其2,3-dpg生成減少，氧離曲線左移，妨礙hbo2中的氧解離，從而造成組織嚴重缺氧。此時外呼吸功能正常，故動脈血氧分壓及血氧飽和度正常，但hb數(shù)量減少或性質(zhì)改變，使血氧容量降低。組織中hbco增多，故皮膚、粘膜呈櫻桃紅色。 亞硝酸鹽可使hb中二價鐵氧化成三價鐵，形成高鐵hb（hbfe3+oh），三價鐵因與羥基牢固結(jié)合而喪失攜氧能力，加上hb四個二價鐵中有一部分氧化為三價鐵后使剩余的fe2+與氧親和力增高，導致氧離曲線左移，使組織缺氧。高鐵hb呈咖啡色或青石板色，因而使皮膚和粘膜呈現(xiàn)相同顏色2。低濃度美蘭為還原劑，抑制了氧化劑（亞硝酸鈉）的中毒反應，中毒后即刻肌注可有效使小鼠存活時間延長2倍以上。本實驗結(jié)果也顯示，亞硝酸鈉+美蘭組小鼠的存活時間明顯長于亞硝酸鈉中毒小鼠的存活時間（表3），說明美蘭具有較好的拮抗作用。 4.3 鈉石灰的作用：鈉石灰在兩個實驗中的用途也有很大區(qū)別：實驗一中缺氧瓶內(nèi)鈉石灰吸收小鼠呼吸產(chǎn)生的co2造成負壓，利于正確地測出耗氧量；實驗二中加入鈉石灰是為了排除高碳酸血癥對缺氧實驗的影響。 參考資料： 1. 陸源,夏強. 生理科學實驗教程. 杭州：浙江大學出版社,2004：240. 2. 陳季強.基礎醫(yī)學各論（上冊）.北京：科學出版社，2004：492，495496.篇三：小鼠缺氧模型及其分析 缺氧的類型及影響缺氧耐受性的因素 高偉飛 （浙江中醫(yī)藥大學濱江學院 10級 臨床專業(yè)臨濱1班4組 20102090114） 一、實驗目的： 1.觀察原因和條件在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用 2.復制幾種類型缺氧的模型，觀察血液顏色的特點，分析其機制 根據(jù)大綱要求： 掌握概念：缺氧、低張性缺氧、血液性缺氧、循環(huán)性缺氧和組織性缺氧，紫紺、腸源性紫紺。 熟悉并理解原因和條件在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。 熟悉反映血氧情況的一些指標(氧分壓、氧含量、氧容量、氧飽和度，動靜脈血氧含量差)。 掌握各型缺氧發(fā)生的原因及主要發(fā)病機制，掌握各型缺氧的特征（血氧變化的特點和皮膚黏膜顏色變化）。 二、實驗原理： 當組織供應組織的氧不足，或組織利用氧障礙時，機體的機能和代謝可發(fā)生異常變化，這種病理過程稱為缺氧。不同類型的缺氧，其機體的代償適應性反應和癥狀也不同。根據(jù)缺氧原因不同可將缺氧分為乏氧性缺氧、血液性缺氧、循環(huán)性缺氧和組織中毒性缺氧四種類型。 影響機體對缺氧耐受性的因素很多，如年齡、機體的代謝、功能狀況以及鍛煉適應等。本實驗才缺氧的不同環(huán)節(jié)入手觀察呼吸變化及皮膚黏膜的顏色改變。實驗通過動物的不同代謝狀況、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能和動物所處環(huán)境溫度，觀察動物的缺氧耐受性。 三、實驗對象：小鼠 四、實驗材料：電子秤、注射器、鈉石灰、廣口瓶、測耗氧量裝置、剪刀、鑷子、濾紙；生理鹽水、美蘭亞硝酸鈉、氯丙嗪、冰塊、量筒等 五、實驗方法： 1、 取2只小鼠，注射及處理： 1號：亞硝酸鈉及美蘭0.2ml ，左下腹注射 2號：亞硝酸鈉及生理鹽水各0.2ml ，左下腹注射 注射完，觀察，2號小鼠立即死亡，1號小鼠仍存活；然后處死解剖，剪下一片肝臟組 織放于濾紙上，觀察肝的顏色。 2、 取2只小鼠稱重，編號3、4 注射及處理： 3號：氯丙嗪 0.2ml，左下腹注射 4號：生理鹽水 0.2ml 左下腹注射 將3、4號小鼠分別分別放入鈉石灰的廣口瓶，塞上塞子，記錄下量筒的液面，連通耗氧裝置，開始計時，直至小鼠死亡，記錄下時間和量筒下降的液面刻度 計算兩只小鼠的耗氧量 小鼠耗氧率r（ml/min/g) =a/（w*t.） 六、實驗結(jié)果： 1、幾種類型的缺氧 序號 1 注射及處理 nano2+美蘭 0.2ml 2 nano2+生理鹽 水0.2ml 2、不同條件下小鼠缺氧耐受性 序體重注射及處理 存活時 間 氯丙嗪0.2ml （冰?。?4 20.6 生理鹽水（常 溫） 27分 18 0.032 27分 總耗氧量(ml) 8 耗氧率(ml/min/g) 0.016 血液性缺氧 青石板色 缺氧類型 血液性缺氧 肝臟顏色 暗紅色 號 （g） 3 18.8 七、實驗分析： 1、血液性缺氧：由于血紅蛋白的質(zhì)或量的改變引起的缺氧。 亞硝酸鹽可使血紅素中二價鐵氧化成三價鐵，形成高鐵血紅蛋白，導致高鐵血紅蛋白血癥。美蘭為還原劑，可抑制氧化劑的中毒反應。因此1號小鼠存活，2號小鼠死亡。 2、不同條件下小鼠缺氧耐受性 氯丙嗪是中樞多巴胺受體的阻斷劑，具有鎮(zhèn)靜、抗精神病、鎮(zhèn)吐、降低體溫及基礎代謝、-腎上腺素能受體及m-膽堿能受體阻斷、抗組織胺、影響內(nèi)分泌等作用，再加上冰浴，制造低溫環(huán)境，使得3號小鼠的基礎代謝率將為最低，可延長其死亡時間。 八、實驗結(jié)論： 1、缺氧是這2小鼠死亡的共同原因，不同的藥物是小鼠死亡的條件，氯丙嗪加上低溫可延長小鼠的死亡時間。 2、高鐵蛋白血癥（亞硝酸鹽中毒）屬于血液性缺氧，原因：二價鐵離子被氧化為三價鐵離子，肝臟呈青石板色。篇四：抗缺氧實驗 中藥藥理學 實驗教學大綱 （供四年制中藥學、五年制中醫(yī)學類本科學生使用） 前言 本大綱適用于四年制中藥學、五年制中醫(yī)學類本科學生使用。編寫本大綱的目的是要求學生在學習中藥藥理學基礎課的過程中，通過實驗課的學習使學生掌握必要的中藥藥理實驗原理、方法和技能，能正確、合理地使用儀器，為學習中醫(yī)學基礎課、中藥學專業(yè)課打下牢固的基礎；培養(yǎng)學生嚴肅認真的工作作風、實事求是的科學態(tài)度和獨立分析問題、解決問題的能力；培養(yǎng)學生觀察和分析實驗現(xiàn)象的能力，鞏固和加深對中藥藥理現(xiàn)象和規(guī)律的理解?，F(xiàn)將大綱使用中有關(guān)問題說明如下： 一 為了使教師和學生更好地掌握教材，大綱每一章節(jié)均由教學目的、教學要求和教學內(nèi)容三部分組成。教學目的注明教學目標，教學要求分掌握、熟悉和了解三個級別，教學內(nèi)容與