中藥化學成分提取分離技術ppt課件

.,第2章中藥化學成分的提取技術,.,目的要求,了解中藥化學成分的類型及理化性質。掌握中藥有效成分的提取、分離方法。了解中藥有效成分結構鑒定的方法。,.,中藥中所含各類化學成分簡介,生物堿糖和苷醌類苯丙素類黃酮類強心苷皂苷萜類和揮發(fā)油其他成分,.,生物堿（alkaloids）,生物體內的含氮有機物，有似堿的性質（能與酸成鹽），有生理活性。,鹽酸小檗堿(Berberinehydrochloride),.,苷類（glycosides）,苷元與糖或糖的衍生物通過苷鍵（縮醛鍵）連接而成的化合物。苷易水解成苷元和糖。,.,糖類（saccharides）,單糖：無色晶體，味甜。易溶于水，難溶于有機溶劑。低聚糖：210個單糖縮合而成。味甜，溶于水，難溶于有機溶劑。多糖：10個以上單糖脫水縮合而成。無甜味，大多不溶于水。,D-葡萄糖L鼠李糖D葡萄糖醛酸(D-glucose)(L-rhamnose)(D-glucuronicacid),-D-Gal-(14)-D-Glc-D-Fru-(16)-(14)-D-Glc,.,醌類（quinones）,具有醌式結構化合物。分子中多有酚OH，有一定酸性。,大黃酚大黃酚-D-葡萄糖苷(chrysophanol)(chrysophanol-8-D-glucoside),.,苯丙素類（phenylpropanoids）,以苯丙基（C6-C3）為基本骨架的化合物。香豆素：具有苯駢-吡喃酮母核的一類天然化合物。木脂素：有兩分子苯丙素衍生物聚合而成的天然化合物。,七葉內酯五味子酯甲(aesculetin)(schisantherinA),.,黃酮類（flavonoids）,兩個苯環(huán)通過三碳鏈連接而成（C6-C3-C6）的化合物。多有酚OH，有一定酸性。,黃芩素黃芩苷(baicalein)(baicalin),.,萜類和揮發(fā)油（terpeonidsandvolatileoils）,萜類：由甲戊二羥酸衍生、分子式符合（C5H8）n的衍生物。揮發(fā)油（精油）：可隨水蒸氣蒸餾的與水不相混溶的無色或淡黃色透明油狀液體。,薄荷醇細辛醚(menthol)(asarone),.,強心苷（cardicaglycosides）,對心臟有顯著生理活性的甾體苷類。無色，有旋光性、對粘膜有刺激性。,洋地黃毒苷(digitoxin),.,皂苷（saponins）,由螺甾烷類或三萜類化合物與糖結合的低聚糖苷，前者為甾體皂苷，后者為三萜皂苷。無色，對粘膜有刺激性，有吸濕性、發(fā)泡性和溶血性。,薯蕷皂苷人參皂苷Rb1(dioscin)(ginsenosideRb1),.,其他成分,有機酸鞣質氨基酸、蛋白質和酶植物色素樹脂油脂和蠟無機成分微量元素,.,第1節(jié)中藥化學成分的經典提取技術-溶劑提取法,概述原理溶劑的種類溶解性的經驗規(guī)律溶劑提取的五種常用提取工藝提取液的濃縮,.,1.概述,中藥化學成分的構成特點同種植物含有多種結構類型的化學成分總成分含量少而種類多有效成分含量低,.,1.概述,不同的中藥材，成分不同，提取的方法也應不同。設計合理的提取方法、正確的操作不但能提取出有效成分，而且還有利于下一步的分離純化。中藥有效成分的提取方法主要有經典的溶劑提取法，其次還有水蒸氣蒸餾法、超臨界流體萃取法、超聲提取法、微波提取法等。,.,2.原理,規(guī)律：相似相溶。溶劑穿透入藥材粉末的細胞膜，溶解溶質，形成細胞內外溶質的濃度差，將溶質滲出，進行提取。范圍：所有化學成分。,.,2.原理,溶劑提取法是根據中草藥中各種成分在不同溶劑中的溶解度不同，選用對有效成分溶解度大，對雜質成分（不需要成分）溶解度小的溶劑，將有效成分從藥材組織內溶解出來的方法。,.,三、溶劑的選擇1、常見的溶劑可以分為三大類：水；親水性有機溶劑；親脂性有機溶劑。2、中草藥的化學成分（包括被溶解的成分）也有親水性和親脂性的不同。親水性、親脂性及其大小與化合物的分子結構有關。,.,植物中的親水性成分有蛋白質、單糖、及低聚糖、氨基酸、水溶性有機酸、水溶性色素、生物堿等；親脂性成分有游離生物堿、非水溶性有機酸、樹脂、脂溶性色素、油脂、蠟等。,.,3、溶劑的選擇選擇適當溶劑是溶劑提取法的關鍵。要做到最大限度的將有效成分從藥材中提取出來，首先需遵循“相似相溶”的原理。另外還要注意：溶劑對有效成分溶解度大，對雜質溶解度小。溶劑不能與中藥成分起化學變化。溶劑要經濟、易得、使用安全、易于回收等。,.,石油醚苯氯仿乙醚乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水,常用溶劑的性質,.,23,常用提取溶劑性能特點,提取溶劑性能特點適宜提取成分提取方法強極性溶劑溶解范圍廣生物堿鹽水穿透能力強苷類煎煮法安全、經濟糅質藥廠提取糖類滲漉法最常用氨基酸蛋白質,.,24,易酶解苷類成分有些脂溶性成分溶解不完全提取液易發(fā)霉變質，不易保存提取液中水溶性雜質多，過濾困難沸點高，濃縮困難,缺點：,.,25,親水性有機溶劑（和水可任意混溶）優(yōu)點：1.溶解范圍廣，提取較全面除多糖、滲濾法2.對植物細胞壁穿透力強蛋白質外浸漬法3.可抑制酶的活性大多數回流法4.提取出的蛋白質、多糖化學成分連續(xù)回流法等水溶性雜質少均可溶解5.價廉毒小，回收方便6.有防腐蝕和保護成分的作用缺點：但有揮發(fā)性、易燃燒、比水貴,.,26,乙醇最常用的有機溶劑甲醇溶解特點與乙醇相似，但有毒丙酮溶解性能同乙醇，但沸點低、易揮發(fā)，不常于提取溶劑；對色素溶解性好，常用于分離、精制。,.,27,親脂性有機溶劑優(yōu)點：1.對化合物溶解選擇性較強2.水溶性雜質少、易純化揮發(fā)油連續(xù)回流法3.沸點低，濃縮回收方便油脂回流法缺點：1.多易燃燒樹脂2.揮發(fā)性大，有毒、價格昂貴，葉綠素對提取設備要求高生物堿3.穿透力較弱，提取時間長苷元等作為提取溶劑不常用,.,28,乙醚bp.35，極易燃氯仿bp.61，不易燃，毒性大對生物堿溶解性好苯bp.80.1，毒性大石油醚沸程3060、6090、90120脫脂、脫色,.,3.溶解性的經驗規(guī)律,原理：相似相溶。親水性成分易溶于親水性有機溶劑和水中親脂性成分易溶于有機溶劑中,注：表示不溶，表示溶,.,中藥各類成分的極性與提取溶劑的關系,.,4.五種常用提取工藝,常用提取工藝：,浸漬法滲漉法煎煮法回流提取法連續(xù)回流提取法,.,（1）浸漬法,（1）、浸漬法此法適用于有效成分遇熱易揮發(fā)和易破壞的中草藥的提取。按溶劑的溫度分為熱浸、溫浸、冷浸等。,.,操作：現將中草藥粉或碎片裝入適當的容器中，然后加入適宜的溶劑，浸漬藥材以溶出其中有效成分。特點：簡單易行，但提出率較低。最好采用二次、三次浸漬，以減少損失，提高提取率。如果溶劑為水的話，需加入適當的防腐劑。,.,滲漉法,（2）、滲漉法操作：將中草藥粉末裝在滲漉器中使藥材浸漬2448小時膨脹，然后不斷添加新溶劑，使其自上而下滲過藥粉，從滲漉筒下端出口流出、收集浸出液。,.,當溶劑滲進藥粉溶出成分比重加大而向下移動時，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴散能較好地進行，故浸出效率較高，當浸出液很淺時提取基本完全。但溶劑消耗量大、費時長。,.,.,3、煎煮法此法是我國最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。,.,操作：將中藥粗粉加水加熱（加熱時最好時常攪拌，以免局部藥材受熱容易焦糊）煮沸，將中藥成分提取出來。一般藥材易煎2次。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。,.,（4）回流提取法,如用易揮發(fā)的有機溶劑加熱提取中藥成分時，則需采用回流提取法以減少溶劑消耗，提高浸出效率。但受熱易破壞的成分不宜用此法，且溶劑消耗量仍大，操作亦麻煩。此法提取效率較冷浸法高，但是由于操作的局限性，大量生產中多采用連續(xù)提取法。,.,回流提取裝置,索氏提取裝置,.,為了彌補回流提取法中需要溶劑量大、操作較煩的不足，可采用連續(xù)提取法。實驗室常用索氏提取器。此法需要溶劑量較少，提取成分也比較完全，但一般需數小時（提取液受熱時間長）才能完成，因此對熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜用此法。盡管如此，在應用揮發(fā)性有機溶劑提取時，不論小型實驗或大型生產均以連續(xù)提取法為好,（5）連續(xù)提取法,.,優(yōu)劣對比：浸漬：簡便，但效率低，用水時易發(fā)霉。滲漉：效率高，效果好（較澄清）；但溶劑消耗大，費時。煎煮：簡便，但雜質溶出多，難過濾?；亓魈崛。盒矢撸軇┫拇?，操作煩瑣。連續(xù)回流提?。盒矢?溶劑消耗少,但操作煩瑣。*后三種不適宜加熱易分解成分的提取。,.,影響提取效率的因素思考：溶劑提取法的關鍵是選擇合適的溶劑和提取方法，但在操作過程中，還受其他因素的影響嗎？,.,1、原料的粒度粉碎是中藥前處理過程中的一個必要環(huán)節(jié)，通過粉碎可增加藥物的表面積，促進藥物的溶解與吸收，加速藥材中有效成分的浸出。但粉碎過細，藥粉比表面積太大，吸附作用增強，反而影響擴散速度，尤其是含蛋白、多糖類較多的中藥，粉碎過細，用水提取時容易產生粘稠現象，影響提取率。,.,原料的粉碎度應考慮選用的溶劑和藥用部位。如果用水提取，最好采用粗粉，用有機溶劑時可略細；原料為根莖類最好采用粗粉，全草類、葉類、花類等可用細粉。,.,2、提取的溫度溫度增高可以提高提取效率，但是雜質的提出也相應增加。過高的溫度會使有些有效成分氧化分解而遭到破壞。一般加熱到60為宜，最高不宜超過100。,.,3、提取的時間在藥材細胞內外有效成分的濃度達到平衡以前，隨著提取時間的延長，提取的量也隨著增加。因此，提取的時間沒必要無限延長，只要合適、提取完全就行。4、提取設備,.,5.提取液的濃縮,.,蒸發(fā),.,.,.,第2節(jié)中藥化學成分的其他提取技術,水蒸氣蒸餾法超臨界流體萃取法超提取法微波提取法,.,（1）水蒸氣蒸餾法,原理：與水蒸氣產生共沸點。范圍：適用于具有揮發(fā)性的，能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞，與水不發(fā)生反應，且難溶或不溶于水的成分的提取。如揮發(fā)油、小分子量的生物堿等。,.,.,超臨界流體（SCF）：,溫度、壓力略超過或靠近超臨界溫度(Tc)和臨界壓力(Pc)、介于氣體和液體之間的流體。,（2）超臨界流體提取法,超臨界萃?。⊿FE）：,SCF為萃取劑，萃取固體或液體中高沸點或熱敏性成分，達到分離、純化目的,.,56,物理性質,特點：氣液兩重性，高滲透能力、低粘度密度與液體相近、優(yōu)良的溶解能力,.,原理：用處于超臨界條件下的特殊流體（介于氣體和液體之間）為溶劑，具有更低的黏度和更高的擴散速度，對許多物質有很強的溶解能力。如CO2：Tc31.4，Pc7.37Mpa范圍：適用于對熱及化學不穩(wěn)定的成分、低極性的成分的提取。,.,特點：接近室溫工作，適用對熱不穩(wěn)定的成分，無有機溶劑殘留，對環(huán)境無公害，提取效率高，節(jié)約能耗等。但對設備要求高。,.,（3）超聲提取法,.,.,.,第三章中藥化學成分的分離技術,第一節(jié)中藥化學成分的經典分離技術兩相溶劑萃取法沉淀法結晶法第二節(jié)中藥化學成分的其他分離技術第三節(jié)色譜法,.,天然藥物粗粉,提取,溶劑提取法水蒸氣蒸餾法超臨界流體萃取法,混合物,分離,兩相溶劑萃取法,有效成分,鑒定,沉淀法,透析法,分餾法,鹽析法,色譜法,（重）結晶法,【新課導入】,.,一、兩相溶劑萃取法,是指在提取液（被萃取溶液）中加入一種與其不相混溶的溶劑（萃取劑），充分振搖增加兩相接觸的面積，使原提取液中的某種成分轉溶至萃取劑中，而其他成分仍保留在原提取液中，待兩相完全分層后，分離兩相,又稱液-液萃取法。,.,基本原理,兩相溶劑萃取法的理論依據是分配定律。,K=CA/CB,(K表示分配系數，CA表示化學成分在上相溶劑中的濃度，CB表示化學成分在下相溶劑中的濃度。),.,分配系數越大，表示成分主要在上層。分配系數越小，表示成分主要在下層。萃取時，混合物中各成分的分配系數相差越大，越易分離，萃取效率高，分離效果越好。K與萃取次數的關系：,K值與萃取次數成反比。即K值越大，萃取次數越少，反之越多。,.,不相混溶較好分層,萃取劑的選擇原則,K相差越大越好,根據分離物質的極性選擇萃取劑,.,可進行兩相溶劑萃取的組合,水石油醚水苯水乙醚水己烷水氯仿水乙酸乙酯水正丁醇不可進行萃取的溶劑組合水乙醇水甲醇水丙酮乙醇氯仿甲醇乙酸乙酯,.,方法,分次萃取法,逆流連續(xù)萃取法,萃取方法,.,分次萃取法（又稱簡單萃取法）,梨形分液漏斗,操作注意事項,.,簡單萃取法,.,檢漏,注意檢漏、排氣、振搖、靜置。,視具體情況而定,第一次為水提取液的1/2至1/3,遵循“少量多次”的原則，一般3-4次,.,乳化現象,預防乳化（避免猛烈振搖、改用混合溶劑等）,乳化已形成需及時破壞（7種方法）,嚴重時可選用逆流連續(xù)萃取法,.,萃取操作注意問題,必須是互不相容的兩相溶劑注意溫度濃度對K值的影響注意事項防止乳化破乳方法抽濾，加熱，冷凍長時間放置加入破乳劑,.,逆流連續(xù)萃取法,.,二、沉淀法,（一）酸堿沉淀法,.,酸提堿沉法提取生物堿堿提酸沉法提取酚酸性成分：黃酮、蒽醌等原理離子態(tài)溶解，分子態(tài)難溶而沉淀析出,.,（二）溶劑沉淀法,原理改變混合溶劑極性使一部分成分沉淀。分類:1.水提醇沉法去除多糖、蛋白質等水溶性雜質2.醇提水沉法除去樹脂、葉綠素等親脂性雜質3.醇提醚（丙酮）沉淀法可沉淀皂苷,.,（三）鉛鹽沉淀法,中性Pb(AC)2可沉淀COOH，鄰二酚羥基堿性Pb(OH)AC(除以上可沉淀外)再加使單酚羥基或多元醇沉淀,.,.,脫鉛處理,.,脫鉛處理,.,（四）專用試劑沉淀法,酸性物可用Ca+Ba+Pb+等沉淀堿性物苦味酸鹽沉淀、雷氏銨鹽沉淀,.,（五）鹽析法,.,三、結晶法,原理利用溫度不同引起溶解度的改變進行分離,.,結晶溶劑的選擇,1溶解度：對純化成分熱溶，冷不溶對雜質冷熱都不溶或冷熱都溶2與被結晶的成分不發(fā)生化學反應。3沸點溶劑的沸點適中，若沸點過高，則附著于晶體表面不易除去，過低又不利于晶體析出。,.,常用于結晶的溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、醋酸、吡啶等。當用單一溶劑不能達到結晶時，可用兩種或兩種以上溶劑組成的混合溶劑進行結晶操作。常用的混合溶劑有：水-乙醇、水-丙酮、乙醇-乙醚、乙醇-氯仿、乙醇-醋酸乙酯-乙醚等。,.,.,結晶方法,去雜制備過飽和溶液析晶操作關鍵：溶解趁熱抽濾沉淀（熱不溶型雜質）濾液放冷析晶（冷熱都不溶雜質）母液結晶,.,結晶純度的檢查,1、外觀：顏色、晶型結晶性純凈物質，一般具有一定的晶形和均勻的色澤。化合物結晶的形狀往往因所用溶劑不同而有差異。2、mp檢查溶點、溶距3、TLC三種不同溶劑系統(tǒng)均為一個斑點4、HPLC基線穩(wěn)定的單峰,.,過濾技術,.,第二節(jié)中藥化學成分的其他分離技術,一、分餾法,.,.,二、透析法,.,.,三、升華法,適于有升華性的成分的分離，如游離蒽醌、小分子游離香豆素、某些生物堿如咖啡因等。在加熱升華的過程中，往往伴有熱分解現象，產品不純，產率較低，故少用于提取而常用于升華性成分的預實驗。,.,第三節(jié)色譜法,定義利用混合物中各成分對固定相和移動相的親和力的差異使之相互分離的方法，又稱層析法或色層法。這是一種物理化學分離、分析技術。作用可用于混合物的分離，又可用于化合物的定性檢識和定量分析。,.,二、色譜法的分類,按兩相狀態(tài)不同分類按操作方法不同分類按色譜分離過程的原理不同分類,.,按兩相狀態(tài)不同分類,色譜其中的一相固定不動，稱為固定相;另一相是攜帶試樣混合物流過此固定相的流體（氣體或液體），稱為流動相。,兩相狀態(tài),流動相的物態(tài),液相色譜（LC）氣相色譜（GC）,.,二、色譜法的分類,按兩相狀態(tài)不同分類按操作方法不同分類按色譜分離過程的原理不同分類,.,按操作方法不同分類,柱色譜,紙色譜,薄層色譜,.,二、色譜法的分類,按兩相狀態(tài)不同分類按操作方法不同分類按色譜分離過程的原理不同分類,.,按色譜分離過程的原理不同分類,（1）吸附色譜（2）分配色譜（3）離子交換色譜（4）凝膠過濾色譜法,.,.,三、色譜過程,.,四、色譜曲線相關術語,W：峰寬,Wh/2：半峰寬,tR：保留時間,t0：死時間,tR，：調整保留時間,色譜峰,基線,.,一、吸附色譜法,.,（一）原理,利用吸附劑對不同成分吸附力的大小及展開劑解吸附作用的差異進行分離。吸附牢的組分隨展開劑移動慢，吸附弱的組分隨展開劑移動快，一段時后，組分被分離。,.,.,（二）吸附色譜的三要素,1、吸附劑,常用的吸附劑：硅膠、氧化鋁、聚酰胺、活性炭和大孔吸附樹脂等。,.,（1）硅膠：極性吸附劑，應用范圍廣物理吸附為主，氫鍵吸附為輔微酸性，不直接用于堿性成分的分離機械強度好，適用于薄層色譜吸附容量大，與羥基數目有關常用硅膠的規(guī)格：硅膠H，硅膠G，硅膠GF254等,.,（2）氧化鋁：a.極性吸附劑，較硅膠強。b.物理吸附為主，氫鍵吸附為輔c.微堿性，不直接用于酸類成分的分離,堿性氧化鋁：適用于碳氫化合物、生物堿以及其它堿性化合物的分離。中性氧化鋁：應用最廣，適用于醛、酮、醌以及酯類化合物的分離。酸性氧化鋁：適用于有機酸類的分離。,.,（3）活性炭,.,2、移動相,.,展開劑（流動相）的選擇,硅膠、氧化鋁薄層：展開劑的極性越大，其展開能力越強，化合物在色譜中移動的速度就越快，表現為Rf增大。,常用溶劑極性大小,石油醚環(huán)已烷四氯化碳苯甲苯乙醚三氯甲烷（氯仿）乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水,選擇原則：被分離成分極性大展開劑極性大被分離成分極性小展開劑極性小,.,3、被分離成分,硅膠、氧化鋁薄層：被分離物質極性越大，越易被吸附。一般規(guī)律：（1）官能團極性越大，整個分子極性越大，越易被吸附；（2）形成分子內H鍵時，被吸附力減弱；（3）同系物中，分子量越大，極性越小，被吸附力越弱。常見官能團極性順序：烷烴烯烴醚類硝基化合物酯類酮類醛類硫醇胺類醇類酚類羧酸類,.,硅膠薄層色譜規(guī)律總結,.,薄層色譜是在平面上進行分離的一種方法，又叫平面色譜法。通常將固定相(吸附劑)均勻地涂鋪在表面潔凈的玻璃、塑料或金屬板形成薄層，制成薄板，進行樣品分離。,特點：快速、靈敏（用量小）、高選擇性（如同分異構體）簡便、顯色方便應用廣泛：化合物的鑒別和少量化合物的分離用于檢測藥品含量藥物合成中用于鑒別反應程度和監(jiān)控反應歷程用于摸索高效液相的色譜條件,（二）吸附色譜的操作技術,1、吸附薄層色譜法,.,（1）制板,軟板：直接將吸附劑鋪在玻璃板上制成，不加粘合劑,要求：厚度隨分離要求而定，一般0.250.5mm玻璃棒推動速度不宜過快、也不應停頓影響厚度均一性優(yōu)點：方法簡便、隨用隨鋪、展開速度快。缺點：吸附劑易脫落、只能用近水平展開，效果差。,.,（2）硬板的制備,硬板：吸附劑加粘合劑制成的板,常用的粘合劑：煅石膏（）機械強度差，易脫落，但不易腐蝕羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）機械強度好，不易脫落，但易腐蝕,a、傾注法：硅膠G或氧化鋁G，直接加水調成糊狀硅膠或氧化鋁，加羧甲基纖維素鈉水溶液調成糊狀,倒在玻璃板上,均勻鋪開、振蕩、晾干、活化、置干燥器中備用。,.,注意事項,調制時慢慢攪拌，勿使產生氣泡。均勻涂布在玻璃板上，搖動攤平，晾干。使用前放入烘箱內，在105-115左右烘干40-50min。冷卻后使用。,.,b、平鋪法：,1.吸附劑薄層2.涂布器3.玻璃夾板4.玻璃板5.玻璃夾板,過程：制板振蕩晾干活化備用優(yōu)點：一次鋪多塊薄層板，簡單易行。,.,c、機械涂布法：,優(yōu)點：簡單方便、薄板厚度均勻、分離效果好。,手動涂布器全自動涂布器,.,常用的薄層板：軟板：硅膠H板、氧化鋁H板硬板：常用的有硅膠G板、氧化鋁G板、硅膠CMC-Na板、氧化鋁CMC-Na板、硅膠GF、硅膠GF,.,2、點樣,（1）樣品溶液的制備：怎樣選擇溶劑？水可以用嗎？,樣品的濃度應在510左右。溶解樣品的溶劑要盡量避免用水，因為水溶液斑點容易擴散，且不易揮發(fā)。,.,2、點樣,（2）點樣量：與薄層板的關系太多太少的影響,點樣基線：距底邊1-1.5cm樣點直徑：2-3mm點間距離：1.5-2.0cm,.,2、點樣,（3）點樣方法：劃線、樣品記號點、點樣注：動作要輕，毛細管或點樣器不能混用，斑點大小適當，可多次點樣。,平頭50ul微量點樣器,全自動點樣儀,.,3、展開,展開缸（色譜缸）,.,3、展開,展開缸（色譜缸）,.,3、展開,（1）展開方式：,a、近水平展開,特點：速度快、適用于軟板的展開。,.,3、展開,（1）展開方式：,b、上行展開,過程：預飽和（濾紙貼于展開槽內側）、展開、標記溶劑前沿,.,c、單向二次展開d、雙向二次展開,3、展開,（1）展開方式：,.,3、展開,（2）注意事項：,a、色譜槽需密閉良好脂溶性展開劑：甘油淀粉糊水溶性展開劑：凡士林b、注意防止邊緣效應,.,4、顯色和定位,一般規(guī)律：日光下觀察、紫外燈下觀察、加顯色劑加顯色劑：多噴霧，軟板使用浸漬顯色法,紫外燈觀察,噴顯色劑觀察,.,比移值（Rf）,組分二,組分一,被分離混合物,Rf的范圍：0Rf1Rf=0.20.8（常用）Rf=0.30.5（最佳）,.,影響Rf值的因素：（1）展開溫度：室溫對分離影響不明顯。其他