高效液相色譜法定性定量分析ppt精選課件

.,高效液相色譜法（HPLC）及定性定量分析,提綱,一HPLC系統(tǒng)簡(jiǎn)介二HPLC中的固定相和流動(dòng)相三應(yīng)用范圍四定量定性分析,一、HPLC系統(tǒng),HPLC系統(tǒng),輸液泵,進(jìn)樣器,色譜柱,檢測(cè)器,數(shù)據(jù)記錄及處理,HPLC示意圖,輸液泵：輸液泵是HPLC系統(tǒng)中的重要部件之一，泵的性能好壞直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可靠性。泵應(yīng)具有的性質(zhì)：流量穩(wěn)定；流量范圍寬；輸出壓力高；液缸容積??；密封性能好，耐腐蝕。,輸液泵,操作時(shí)的注意事項(xiàng)：防止任何固體微粒進(jìn)入泵；流動(dòng)相不含有任何腐蝕性物質(zhì)；工作時(shí)要注意溶劑瓶中的溶劑用完；泵的工作壓力不能大于規(guī)定的最大壓力；流動(dòng)相要先進(jìn)行脫氣，防止產(chǎn)生氣泡。,進(jìn)樣器：目前采用較多的是六通進(jìn)樣閥和自動(dòng)進(jìn)樣器。對(duì)進(jìn)樣裝置的要求：密封性好，死體積小，重復(fù)性好，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。進(jìn)樣方式可分為：隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。目前應(yīng)用做多的是閥進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣。,進(jìn)樣器,色譜柱,色譜柱的要求：柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等，其粒度一般為3，5，7，10m等，柱效理論值可達(dá)516萬(wàn)/米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對(duì)于同系物分析，只要500即可;對(duì)于較難的分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬(wàn)的柱子，因此一般1030CM左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。,檢測(cè)器,檢測(cè)器是HPLC系統(tǒng)的三大關(guān)鍵部件之一，作用是把洗脫液中的組分的量轉(zhuǎn)化為電信號(hào)。HPLC的檢測(cè)器要求是靈敏度高，噪音低，線性范圍寬，重復(fù)性好，適用范圍廣等特點(diǎn)。,數(shù)據(jù)記錄及處理,目前對(duì)于數(shù)據(jù)記錄及處理所采用的是計(jì)算機(jī)，計(jì)算機(jī)的廣泛應(yīng)用使得HPLC操作更加迅速，簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，精密和自動(dòng)化，現(xiàn)在已經(jīng)可以在互聯(lián)網(wǎng)上遠(yuǎn)程處理數(shù)據(jù)，目前計(jì)算機(jī)在HPLC上的用途主要由：采集處理和分析數(shù)據(jù)；控制儀器；色譜系統(tǒng)優(yōu)化和專家系統(tǒng)。,HPLC的固定相和流動(dòng)相,固定相：即所說(shuō)的基質(zhì)或者單體，可以是陶瓷的無(wú)機(jī)物基質(zhì)，也可以是有機(jī)聚合物基質(zhì)。無(wú)機(jī)物基質(zhì)主要是硅膠和氧化鋁，在溶劑中不容易膨脹，有機(jī)聚合物基質(zhì)主要是交聯(lián)苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有機(jī)聚合物剛性小、易被壓縮，溶劑或溶質(zhì)容易滲入有機(jī)基質(zhì)中，導(dǎo)致填料顆粒膨脹，結(jié)果減少傳質(zhì)，最終使柱效降低。,固定相的種類：硅膠氧化鋁聚合物固定相的選擇：（+表示好，+表示一般，+表示差）,流動(dòng)相：一個(gè)理想的流動(dòng)相溶劑應(yīng)具有低粘度、與檢測(cè)其兼容性好、易于得到純品和低毒性的特征。選擇流動(dòng)相要考慮的因素：1.流動(dòng)相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)；2.純度；3.必須與檢測(cè)其匹配；4.粘度要低；5.對(duì)樣品的溶解度要適宜；6.樣品易于回收。,應(yīng)用范圍,高效液相色譜法適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定易分解的、分子量大、不同極性的有機(jī)化合物；生物活性物質(zhì)和多種天然產(chǎn)物；合成的和天然的高分子化合物等。它們涉及石油化工產(chǎn)品、食品、合成藥物、生物化工產(chǎn)品及環(huán)境污染物等，約占全部有機(jī)化合物的80。其余20的有機(jī)化合物，包括永久性氣體，易揮發(fā)低沸點(diǎn)及中等分子量的化合物，只能用氣相色譜法進(jìn)行分析。,定性分析,常用的液相色譜定性方法有：1.利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性利用標(biāo)淮樣品對(duì)未知化合物定性是最常用的液相色譜定性方法。由于每一種化合物在特定的色譜條件下（流動(dòng)相組成、色譜柱、桂溫等相同），其保留值具有特征性，因此可以利用保留值進(jìn)行定性。,2利用檢測(cè)器的選擇性定性同一種檢測(cè)器對(duì)不同種類的化合物的響應(yīng)值是不同的，而不同的檢測(cè)器對(duì)同一種化合物的響應(yīng)也是不同的。所以當(dāng)某一被測(cè)化合物同時(shí)被兩種或兩種以上檢測(cè)器檢測(cè)時(shí)，兩個(gè)或幾個(gè)檢測(cè)器對(duì)被測(cè)化合物的檢測(cè)靈敏度比值是與被測(cè)化合物的性質(zhì)密切相關(guān)的，可以用來(lái)對(duì)被測(cè)化合物進(jìn)行定性分析，這就是雙檢測(cè)器定件體系的基本原理。,3利用紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能定性紫外檢測(cè)器是液相色譜中使用最廣泛的一種檢測(cè)器。全波長(zhǎng)掃描紫外檢測(cè)器可以根據(jù)被檢測(cè)化合物的紫外光譜圖提供一些有價(jià)值的定性信息。傳統(tǒng)的方法是在色譜圖上某組分的色譜出現(xiàn)極大值即最高濃度時(shí)，通過停泵等手段，使組分在檢測(cè)池中滯留，然后對(duì)檢測(cè)池中的組分進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，得到該組分的紫外可見光譜圖；再取可能的標(biāo)準(zhǔn)樣品按同樣方法處理。對(duì)比兩者光譜圖即能鑒別出該組分與標(biāo)準(zhǔn)樣品是否相同。對(duì)于某些有特殊紫外譜圖的化合物，也可以通過對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)譜圖的方法來(lái)識(shí)別化合物。,定量分析,1.歸一化法歸一化法要求所有組分都能分離并有響應(yīng)。由于液相色譜所用檢測(cè)器為選擇性檢測(cè)器，對(duì)很多組分沒有響應(yīng)，因此液相色譜法較少使則歸一化法。2.外標(biāo)法外標(biāo)法是以待測(cè)組分純品配制標(biāo)準(zhǔn)試樣和待測(cè)試樣同時(shí)作色譜分析來(lái)進(jìn)行比較而定量的，可分為標(biāo)準(zhǔn)曲線法和直接比較法。,3.內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法是比較精確的一種定量方法。它是將已知量的參比物（