微生物的無菌操作及接種技術(shù).ppt

一、微生物無菌操作技術(shù),無菌操作目的：保證待檢物品不被環(huán)境中微生物污染；防止被檢微生物在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。,無菌操作技術(shù)：指在微生物實(shí)驗(yàn)工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施。,1接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀,一、微生物無菌操作技術(shù),無菌操作材料：接種工具,一、微生物無菌操作技術(shù),無菌操作材料：材料器械和用品：酒精燈、記號筆、標(biāo)簽、火柴、滅菌培養(yǎng)皿、無菌水、試管架菌種培養(yǎng)基：,二、原理：無菌技術(shù)：指在微生物實(shí)驗(yàn)工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施。接種：將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程。,微生物無菌操作技術(shù)與接種技術(shù),接種的準(zhǔn)備工作無菌環(huán)境的要求與保持進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備無菌操作的要求接種的操作方法,二、微生物接種技術(shù),無菌環(huán)境,無菌室超凈工作臺,無菌環(huán)境的要求與保持,（一）接種的準(zhǔn)備工作,（1）無菌室的結(jié)構(gòu)：應(yīng)有更衣間、緩沖間、操作間應(yīng)有良好的通風(fēng)條件，安裝空調(diào)設(shè)備及過濾設(shè)備,無菌環(huán)境的要求與保持,1、無菌室,無菌室的結(jié)構(gòu),（2）無菌室的消毒和防污染無菌室內(nèi)空氣測試應(yīng)基本達(dá)到無菌。每日（使用前）紫外線照射（12小時）.每周用甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時）.每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒。定期作實(shí)驗(yàn)室沉降菌計數(shù)，以檢查無菌室微生物生長繁殖動態(tài)。,無菌環(huán)境的要求與保持,2、超凈工作臺,超凈工作臺是為實(shí)驗(yàn)室工作提供無菌操作環(huán)境的設(shè)施，以保護(hù)實(shí)驗(yàn)免受外部環(huán)境的影響，同時為外部環(huán)境提供某些程度的保護(hù)以防污染并保護(hù)操作者。,原理：超凈工作臺的潔凈環(huán)境是在特定的空間內(nèi)，潔凈空氣(進(jìn)濾空氣)按設(shè)定的方向流動而形成的。以氣流方向來分，現(xiàn)有的超凈工作臺可分為垂直式，由內(nèi)向外式以及側(cè)向式。,無菌環(huán)境的要求與保持,垂直流超凈工作臺,水平流超凈工作臺,垂直流超凈工作臺,超凈臺的使用與維護(hù),風(fēng)速保持在0.32-0.48米/秒使用前打開紫外燈照射4060min開啟超凈工作臺工作電源，關(guān)閉紫外燈，并用75%的酒精或0.5%過氧乙酸噴灑擦拭消毒工作臺面。使用中，有機(jī)玻璃罩受到污染，嚴(yán)禁用酒精棉球擦拭，請用含水棉布檫拭；請保持超凈臺整潔、干燥，不要堆積雜物；使用完畢，關(guān)閉煤氣開關(guān)或酒精燈；使用完畢后，用消毒液擦拭工作臺面，關(guān)閉工作電源，重新開啟紫外燈照射15min.定期做無菌試驗(yàn)，以測定凈化臺是否符合無菌要求。,無菌環(huán)境的要求與保持,3、無菌器材準(zhǔn)備,滅菌器材：玻璃器皿、培養(yǎng)基、無菌衣等.消毒器材：接種試管、無菌室內(nèi)的凳子、試管架、天平、工作臺等,無菌環(huán)境的要求與保持,（1）定期檢查無菌環(huán)境的空氣是否符合規(guī)定；（2）用紫外線滅菌處理3060min；（3）檢查無菌器材是否完備；（4）實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入無菌室前先用肥皂洗手，然后用75酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟＃?）緩沖室內(nèi)換上洗凈并經(jīng)紫外線燈照射過的工作衣、帽、鞋。,進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備,（1）在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動作；（2）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放。（3）在火焰上方操作；（4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；（5）在接種培養(yǎng)物時，協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn)。（6）不能用嘴直接吸吹吸管。（7）帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時置于盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒。,無菌操作要求,無菌操作要求,無菌操作要求,接種的基本程序常用接種方法斜面接種劃線接種液體接種穿刺接種,（二）接種的操作方法,1、接種的基本程序,（二）接種的操作方法,2、常用的接種方法,斜面接種劃線接種液體接種穿刺接種,（二）接種的操作方法,斜面接種：從已生長好的菌種斜面上挑取少量菌種移植至另一新鮮斜面培養(yǎng)基上的接種方法。用于好氣性微生物的接種。,2、常用的接種方法,標(biāo)記：接種前在試管上注明菌名、接種日期、接種人姓名點(diǎn)燃酒精燈。接種：（1）手持試管將菌種管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中，中指位于兩管之間。斜面向上，盡量放平。（2）旋松管塞（3）接種環(huán)灼燒滅菌,斜面接種,斜面接種,（4）拔管塞：用右手的無名指、小指和手掌邊先后取下菌種管和待接試管的管塞，讓試管口緩緩過火滅菌(切勿燒得過燙),斜面接種,（5）取菌:接種環(huán)冷卻，輕沾取少量菌體或胞子，然后將接種環(huán)移出菌種管，注意不要使接種環(huán)碰到管壁，取出后帶菌接種環(huán)不可通過火焰。,斜面接種,（6）接種:在火焰旁迅速將沾有菌種的接種環(huán)伸入待接斜面管。從斜面培養(yǎng)基底部向上作“Z”形來回密集劃線，勿劃破培養(yǎng)基。有時也可用接種針僅在斜面培養(yǎng)基的中央拉一條直線作斜面接種，直線接種可觀察不同菌種的生長特點(diǎn)。,斜面接種,(7)塞管塞：取出接種環(huán)，灼燒試管口，并在火焰旁將管塞旋上。不要用試管去迎棉塞，以免試管在移動時納入不潔空氣。(8)將接種環(huán)灼燒滅菌。放下接種環(huán)，再將棉花塞旋緊。,斜面接種示意圖,由斜面菌接種到液體培養(yǎng)基（如試管或三角瓶等）中的方法。操作方法：與斜面法基本一致，只是在將接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基時使環(huán)在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散，塞上棉塞再輕輕搖勻。如果菌種是培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基中時，一般用移液管或滴管接種,2、常用的接種方法,液體接種,2、常用的接種方法,劃線接種,目的：使混合的細(xì)菌呈單個分散生長，形成單個菌落，以便獲得純菌、活菌計數(shù)。方法：分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本,2、常用的接種方法,劃線接種,分區(qū)劃線法,第一區(qū)劃線,滅菌接種環(huán),第二區(qū)劃線,滅菌接種環(huán),第三區(qū)劃線,滅菌接種環(huán),2、常用的接種方法,劃線接種,連續(xù)劃線法,2、常用的接種方法,劃線接種,用接種針從菌種斜面上挑取少量菌體并把它穿刺到固體或半固體的深層培養(yǎng)基中的接種方法。用于厭氣性細(xì)菌培養(yǎng)、檢查細(xì)菌的運(yùn)動能力、保藏菌種。只適宜于細(xì)菌和酵母的接種培養(yǎng),2、常用的接種方法,穿刺接種,穿刺接種方法：1)標(biāo)記2)點(diǎn)燃酒精燈3）接種（1）手持試管（2）旋松棉塞（3）接種針灼燒滅菌，把在穿刺中可能伸入試管的其