免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)四酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2_第1頁
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文檔簡介

1、實(shí)驗(yàn)五 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?以檢測(cè)豬O型口蹄疫病毒抗體為例，掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的原理、操作方法及結(jié)果的判定。,二、實(shí)驗(yàn)原理,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是應(yīng)用酶標(biāo)記的抗體（或抗原）在固相支持物表面檢測(cè)未知抗原（或抗體）的方法。酶與抗體（或抗原）交聯(lián)后，再與集合結(jié)合在固相支持物表面的相應(yīng)抗原或抗體反應(yīng)，形成酶標(biāo)記抗體-抗原復(fù)合物，此時(shí)加入酶底物和顯色劑，在酶催化底物液體后呈現(xiàn)顯色反應(yīng)，液體顯色的強(qiáng)弱和酶標(biāo)記抗體-抗原復(fù)合物的量成正比，借此反映出待檢測(cè)的抗原或抗體量。,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。,三、實(shí)驗(yàn)材料

2、,1.辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體； 2.滅活豬O型口蹄疫病毒抗原、豬O型口蹄疫病毒陽性血清和正常豬血清； 3.待檢豬血清； 4.包被緩沖液，即0.05mol/L pH9.6碳酸鹽緩沖液； 5.洗滌緩沖液，即pH7.4 PBST； 6.稀釋液，即0.1g牛血清白蛋白（BSA）加洗滌緩沖液（PBST）； 7.底物緩沖液，即pH5.0 磷酸鹽-檸檬酸； 8.TMB（四甲基聯(lián)苯胺）溶液； 9.終止液，即2mol/L H2SO4； 10.96孔酶標(biāo)反應(yīng)板、ELISA檢測(cè)儀、移液器、槍頭、吸管、37溫箱等。,四、操作方法,五. 觀察判定：,結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果,反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。 酶標(biāo)檢測(cè)儀上，于630nm處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值。 以P/N比值表示：樣品的OD值與一組陰性樣本OD

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