DNA的提取和電泳實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、基因組DNA的提取和電泳（實(shí)驗(yàn)五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私釪NA提取的方法，以及瓊脂糖凝膠電泳分析DNA技術(shù)。二、器材和試劑1. 器材水平瓊脂糖電泳儀，離心機(jī)，水浴鍋，研缽，離心管、移液槍、水稻幼苗等2. 試劑1. 1mol/L Tris.Cl(pH8.0) 的配制：稱取12.11g 的Tris，置于80 mL的ddH20,加入濃鹽酸（約4.2 mL）,調(diào)節(jié)pH值至8.0，定容至100 mL。2. 0.5 mol/L EDTA(pH8.0)的配制：18.61g Na2EDTA2H2O，加入80 mL的ddH2O,用NaOH顆粒調(diào)pH值至8.0（約需2 g），定容至100 mL。3. 提取緩沖液

2、的配制： 100 mmol/L Tris.Cl(pH8.0), 20 mmol/LEDTA, 500 mmol/L NaCl, 1.5%SDS4. 80/4/16氯仿：異戊醇：乙醇5. 6Loading buffer：0.15溴酚藍(lán)，0.15二甲苯青FF，5 mmol/L EDTA，50甘油6. 5Tris-硼酸（TBE）緩沖液 成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris堿 445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補(bǔ)足1L 三、實(shí)驗(yàn)步驟1. 在15mL的離心管

3、中加入5mL的提取緩沖液，60水浴預(yù)熱。2. 植物葉1-2g，剪碎，在缽體中加入石英砂，加入預(yù)熱的提取緩沖液，磨成粉末狀，60水浴保溫20 min，其間不時(shí)緩慢搖動(dòng)。3. 5000 rpm離心5分鐘，仔細(xì)吸取上清液至另一離心管中，4. 加入5 mL 氯仿/戊醇/乙醇溶液，顛倒混勻（需帶手套，防止皮膚損傷），室溫下靜置5-10分鐘，使水相和有機(jī)相混勻。5. 室溫下離心5000 rpm離心5分鐘。6. 仔細(xì)吸取上清液至另一離心管中，加入一倍體積異丙醇，混勻，室溫下放置片刻即出現(xiàn)絮狀沉淀。7. 離心5000 rpm，離心5 min，棄去異丙醇，室溫晾干。8. 視沉淀多少，加入1mL左右ddH2O溶解，可在60水浴中放置15分鐘以上助溶。9. 取DNA樣品5 L，加入1 L6Loading buffer，混勻，加入0.7%的瓊脂糖凝膠加樣孔中，電泳，檢測(cè)DNA的分子大小。4、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論 實(shí)驗(yàn)分析：本次實(shí)驗(yàn)由于種種原因我是和植保102班的同學(xué)一起做的，我們組3人，實(shí)驗(yàn)過程比較嚴(yán)謹(jǐn)，受到了老師的表?yè)P(yáng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也很令人滿意。下面是實(shí)驗(yàn)過程中的注意點(diǎn)：1、研磨不能太久太用力，會(huì)導(dǎo)致DNA片段斷掉。2、實(shí)驗(yàn)室的某些試劑，如氯仿，有毒性，應(yīng)帶手套進(jìn)行。電泳的時(shí)候不知是時(shí)間的原因還是都做得不錯(cuò)，結(jié)果相差不是很遠(yuǎn)