農(nóng)產(chǎn)品中苯并咪唑類農(nóng)藥殘留量的測(cè)定高效液相色譜法

1、ics67.040c53db33浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)db33/t 7052008農(nóng)產(chǎn)品中苯并咪唑類農(nóng)藥殘留量的測(cè)定高效液相色譜法determination of benzimidazole in agricultural products -high performance liquid chromatography2008-09-18 發(fā)布2008-10-18 實(shí)施浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布db33/t 705 2008前言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄a 為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部稻米及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心提出。本標(biāo)準(zhǔn)由并浙江省農(nóng)業(yè)廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位： 農(nóng)業(yè)部稻米及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心、 中國(guó)水稻研究

2、所、 浙江大地農(nóng)作物產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：牟仁祥、陳銘學(xué)、閔捷、應(yīng)興華、吳俐、許萍、曹趙云。idb33/t 705 2008農(nóng)產(chǎn)品中苯并咪唑類農(nóng)藥殘留量的測(cè)定高效液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用反相離子對(duì)高效液相色譜法測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈和2氨基苯并咪唑殘留量的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于農(nóng)產(chǎn)品中多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈苯并咪唑類農(nóng)藥及代謝物殘留量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)檢出限：本方法最小檢出量多菌靈為1.4 10-9 g ，噻菌靈為 1.0 10-9 g，甲基硫菌靈為 1.8 10-9 g， 2氨基苯并咪唑?yàn)?2 10-9g。若稱取 25 g 試樣，進(jìn)樣量為 40 l，本標(biāo)

3、準(zhǔn)的最低檢出濃度多菌靈為 0.07 mg kg ，甲基硫菌靈為0.09 mg kg ，噻菌靈為 0.05 mg kg ， 2氨基苯并咪唑?yàn)?0.10 mg kg 。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。gb/t 6379.1測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度( 正確度與精密度 )第 1部分 : 總則與定義gb/t 6379.2測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度( 正確度與精密度 )第2部

4、分 : 確定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法gb/t 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（neq iso 3936 ）3原理樣品中的苯并咪唑類農(nóng)藥用乙腈提取，硫酸鎂鹽析，沉淀法凈化，經(jīng)反相離子對(duì)色譜分離，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。4試劑除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑，水為gb/t 6682 二級(jí)。4.1乙腈：色譜純。4.2甲醇：色譜純。4.3丙酮：色譜純。4.4三乙胺：色譜純。4.5磷酸。4.6硫酸鎂： 140 烘烤 4h，在干燥器內(nèi)冷卻至室溫，貯于密封瓶中備用。4.7乙二胺基 n 丙基（ psa ）：40 m，60?。1db33/t 705 20084.8 癸烷磺酸

5、鈉：純度 98。4.9離子對(duì)試劑（ 4.1 mmol/l ）：吸取 7.0 ml 磷酸于 200 ml 水中，加入1.0 g 癸烷磺酸鈉，溶解，再加入 10.0 ml 三乙胺，稀釋至 1 000 ml 。4.10流動(dòng)相： 量取 600ml離子對(duì)試劑，加入 400ml甲醇，攪拌后超聲波震蕩脫氣， 此溶液 ph 值應(yīng)約為2.4 。4.11多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈和2氨基苯并咪唑標(biāo)準(zhǔn)品：純度98。4.12標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（ 100 mg/l ）：分別準(zhǔn)確稱取 0.0100 g 多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈和2氨基苯并咪唑標(biāo)準(zhǔn)品 ,用丙酮溶解定容至 100ml ，0 4避光保存。4.13混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：

6、準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，在30 40 下用氮?dú)饩従彺蹈?，用流?dòng)相配制成濃度系列為 0.5 mg/ l， 1.0mg/ l ， 2.0 mg/l ， 5.0mg/l 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，0 4避光保存。5 儀器5.1高效液相色譜儀（附可編程紫外檢測(cè)器） 。5.2高速分散機(jī)。5.3離心機(jī)。5.4天平（感量 0.001g）。5.5天平（感量 0.0001g）。5.6組織搗碎機(jī)。6 試樣的制備取不少于1000g 樣品，去除雜物， 取可食部分， 將樣品縮分至250g，勻漿后密封， 于 4冷藏保存。7 分析步驟7.1樣品處理7.1.1提取稱取 25 g 試樣（精確到0.01 g ）于 100ml具塞離

7、心管中，加入25.0 ml 乙腈，高速勻漿2 min ，加入 15 g 無(wú)水硫酸鎂，加蓋后，劇烈振搖1min，靜置 30 min ， 2 500 r/min 離心 5 min ，使乙腈和水相分層。7.1.2凈化移取 1.0 ml上清液于 2ml 離心管中，加入200 mg 無(wú)水硫酸鎂和 50 mg psa(4.7) ， 2 500 r/min 離心5 min 。準(zhǔn)確吸取 0.5 ml 上清液，然后加入離子對(duì)試劑0.5 ml，振蕩后過(guò) 0.45 m濾膜，待測(cè)。7.2 測(cè)定7.2.1色譜參考條件7.2.1.1色譜柱： c18 柱， 250 mm 4.6 mm, 5m。7.2.1.2檢測(cè)波長(zhǎng)：多菌靈

8、275 nm，甲基硫菌靈 265 nm，噻菌靈 300 nm， 2氨基苯并咪唑 275 nm。7.2.1.3柱溫： 45 。7.2.1.4進(jìn)樣量： 50 l。7.2.1.5流速： 1.25 ml/min。2db33/t 705 20087.2.2 品 定按 器參考條件， 準(zhǔn)工作液和 溶液等體 交替 ，根據(jù)保留 定性，外 法定量。8 果 算 品中被 含量以 量分?jǐn)?shù)w ，數(shù) 以毫克每千克（mg/kg）表示，按式 (1) 算：c v1000f (1)wm 1000式中：w 品中被 的 量 度， 位 毫克每千克（mg/kg ）；c 中被 量 度， 位 毫克每升（mg/l）；v加入乙 體 ， 位 毫升（

9、ml）；m 的 量的數(shù) ， 位 克（g）。f 稀 倍數(shù)（f=2， 品中加入了離子 ， 好稀 了一倍）。 算 果表示到二位有效數(shù)字。 品含量超1 mg/kg 表示到三位有效數(shù)字。9 精密度本 準(zhǔn)的精密度數(shù)據(jù)是按照 gb/t 6379.1 和 gb/t 6379.2 的 定確定的。重復(fù)性和再 性的 以95%的可信度來(lái) 算。9.1重復(fù)性在重復(fù)性條件下 得的兩次獨(dú)立 果的 差 不超 重復(fù)性限程 表 1、表 2 和表 3。表 1 添加水平及重復(fù)性和再 性方程（基 大米）化合物名稱含量范圍（ mg/kg）重復(fù)性限 r多菌靈0.50-2.00r = 0.0063+0.0880甲基硫菌靈0.50-2.00r

10、= 0.0077+0.0822噻菌靈0.50-2.00r = -0.0062+0.09762- 氨基苯并咪唑0.50-2.00r = -0.0196+0.0975注 :m 為兩次測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值r ，被 物的含量及重復(fù)性方再現(xiàn)性 rm r = 0.0024+0.0978 mm r = 0.0076+0.0840 mm r = -0.0072+0.1006 m m r = -0.0208+0.1006 m表 2 添加水平及重復(fù)性和再 性方程（基 辣椒）化合物名稱含量范圍（ mg/kg）重復(fù)性限 r多菌靈0.50-2.00r = 0.0208+0.0613甲基硫菌靈0.50-2.00r = 0

11、.0047+0.0884噻菌靈0.50-2.00r = -0.0234+0.10512- 氨基苯并咪唑0.50-2.00r = 0.0161+0.0690注 :m 為兩次測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值再現(xiàn)性 rm r = 0.0328+0.0568 mm r = 0.0052+0.0911 mm r = -0.0277+0.1206 m m r = 0.0164+0.0861 m表 3 添加水平及重復(fù)性和再 性方程（基 葡萄）化合物名稱含量范圍（ mg/kg）重復(fù)性限 r再現(xiàn)性 r多菌靈0.50-2.00r = 0.0009+0.0959mr = 0.0035+0.1072m甲基硫菌靈0.50-2.00

12、r = 0.0023+0.0895mr = 0.0022+0.0992m3db33/t 705 2008噻菌靈0.50-2.00r = -0.0135+0.0853mr = -0.0130+0.0859m2- 氨基苯并咪唑0.50-2.00r = 0.0176+0.0601mr = 0.0287+0.0556m注 :m 為兩次測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值如果差值超過(guò)重復(fù)性限，應(yīng)舍棄試驗(yàn)結(jié)果并重新完成兩次單個(gè)試驗(yàn)的測(cè)定。 9.2 再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不超過(guò)再現(xiàn)性限程見(jiàn)表 1、表 2 和表 3。10 準(zhǔn)確度本方法在0.5mg/kg2.0mg/kg 添加濃度的回收率在70%110%。附錄 a（資料性附錄）四種苯并咪唑類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)色譜圖和空白蘋果樣品標(biāo)準(zhǔn)添加色譜圖mau60ello50zyahdtnmemeibze40ataidahnntea-30bhrp3ao9ci5h.-1t1207-891.399.01010024681012mau圖