《細胞工程》考試大綱

1、細胞工程考試大綱第一章 緒論一、名詞高技術(shù)、生物技術(shù)、細胞工程、生化工程.二、知識點現(xiàn)代生物技術(shù)是一項高技術(shù)；生物技術(shù)的基本內(nèi)容； 細胞工程在整個生物工程中的地位； 細胞工程主要的技術(shù)領(lǐng)域；細胞工程的主要應(yīng)用。 第二章 細胞工程理論基礎(chǔ)一、名詞奢侈基因、管家基因.二、知識點細胞共性。第三章細胞工程基本技術(shù)一、名詞生物安全、p1級實驗室、濕熱滅菌、無菌操作技術(shù)、細胞貼壁率、細胞計數(shù)、MTT法、活體染色、成集落試驗、污染。二、知識點細胞工程實驗室主要的儀器設(shè)備；細胞培養(yǎng)室的基本要求；p1級實驗室的基本要求；細胞培養(yǎng)室常見的消毒方法；玻璃器皿的清洗方法；無菌操作的技術(shù)要領(lǐng)與要求；培養(yǎng)細胞的觀察技術(shù)；

2、培養(yǎng)細胞的主要污染與排除；細胞凍存與復(fù)蘇的技術(shù)要點及注意事項。第四章 細胞培養(yǎng)與代謝調(diào)控一、名詞分批式培養(yǎng)、流加式培養(yǎng)、半連續(xù)式培養(yǎng)、連續(xù)式培養(yǎng)、灌流式培養(yǎng)。 第五章 植物人工繁殖一、名詞植物細胞工程、植物組織培養(yǎng)、外植體、脫分化、再分化、愈傷組織、胚狀體、大量元素、微量元素、器官發(fā)生途徑、胚狀體發(fā)生途徑、植物快速無性繁殖、胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、人工種子、體細胞胚。二、知識點植物細胞工程的主要內(nèi)容；植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)；植物細胞工程的技術(shù)手段；植物組織再分化的兩條途徑；植物組織培養(yǎng)的主要步驟與技術(shù)要點；影響植物細胞脫分化和再分化因素；愈傷組織有的特點及其在細胞工程中的重要性；愈傷組織再生植株的途

3、徑；生長素、細胞分裂素的生理作用及其在組織培養(yǎng)中的意義。成熟胚培養(yǎng)與幼胚培養(yǎng)在技術(shù)上的異同；植物胚乳培養(yǎng)的類型；植物胚胎培養(yǎng)的意義及影響因素；愈傷組織的形成的三個階段及主要特征；人工種子的組成、構(gòu)建與應(yīng)用；體細胞胚胎發(fā)生的同步控制；植物快繁技術(shù)的主要步驟；微繁殖中芽的增殖方式。第六章 動物人工繁殖一、名詞胚胎工程、體外受精、 胚胎移植、 胚胎分割、胚胎融合、嵌合體、胚胎性別鑒定、 胚胎冷凍技術(shù)、試管嬰兒、超數(shù)排卵、同步發(fā)情、胚胎細胞克隆、同種體細胞克隆、異種體細胞克隆、核移植技術(shù)。二、知識點胚胎工程的主要技術(shù)領(lǐng)域；體外受精的基本過程、試管嬰兒的基本步驟、胚胎工程的意義；克隆研究的主要內(nèi)容；克隆

4、的理論與技術(shù)基礎(chǔ)；核移植的技術(shù)要點、應(yīng)用與發(fā)展前景；“多莉”的制備步驟；“多莉”引發(fā)的思考；你對克隆人的看法。第七章 細胞重組與細胞融合一、名詞細胞重組、胞質(zhì)體、核質(zhì)體、微細胞、細胞融合、HAT培養(yǎng)基、單克隆抗體、基因定位。二、知識點細胞重組的方式與意義；HAT選擇的原理；細胞融合的主要應(yīng)用；PEG誘導(dǎo)細胞融合的基本原理；融合體的基本類型及其篩選。第八章 新品種培育一、 名詞花藥培養(yǎng)、植物原生質(zhì)體融合、端體系統(tǒng)、三體植物系統(tǒng)、單體系統(tǒng)、孤雌生殖、染色體加倍、單體植物、缺體植物。1、花藥培養(yǎng)：方法是誘導(dǎo)和培養(yǎng)外植體花藥經(jīng)由胚狀體途徑,培育出再生幼苗。一般選取單核中期到單核后期發(fā)育階段的花藥, 經(jīng)

5、過預(yù)處理和材料滅菌, 接種到適宜的培養(yǎng)基上進行誘導(dǎo), 34 周后就可以由裂開的花藥長出愈傷組織,再轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上分化出有正常根莖葉的再生植株，移栽于滅菌的土壤中。2、植物原生質(zhì)體融合：3、端體系統(tǒng)：4、三體植物系統(tǒng)：如果細胞中增加一條同種的染色體，則染色體數(shù)成為2n+1，稱為三體。如果增加兩條同種染色體（非同源），結(jié)果有兩對染色體都變成三條，則稱雙三體。5、單體系統(tǒng)：普通小麥有21對染色體，小麥的21種單體植物總稱為單體系統(tǒng)6、孤雌生殖：孤雌生殖是指雌雄配子未經(jīng)融合，而由雌配子單性發(fā)育成種子的一種無融合生殖。7、染色體加倍：通過雜交或其他方法將同種或異種、屬的染色體導(dǎo)入受體種的染色體組 中

6、的現(xiàn)象。8、單體植物：從細胞中去掉一條染色體，則染色體數(shù)成為2n-1，這樣的植物叫做單體植物。9、缺體植物：去掉兩條染色體(同源)，2n-2二、知識點1、花藥培養(yǎng)中外植體的選擇2、花藥培養(yǎng)與花粉培養(yǎng)的不同點3、花藥培養(yǎng)中再生植株的形成途徑與再生植株倍性的關(guān)系4、植物原生質(zhì)體制備的方法5原生質(zhì)體再生植株的技術(shù)路線6、植物遠緣雜交遇到的主要困難。兩大困難：（1）由于生殖隔離造成交配困難；（2）即使交配成功，但因染色體組受平衡作用而難以通過減數(shù)分裂使合并的異源染色體組在后代固定下來。第九章 植物細胞代謝產(chǎn)物制備一、名詞看護培養(yǎng)、飼養(yǎng)層培養(yǎng)、細胞固定化培養(yǎng)、冠癭組織、轉(zhuǎn)基因植物。1、 看護培養(yǎng)：用一塊

7、活躍生長的愈傷組織來看護單個細胞，使其持續(xù)分裂和增殖。這塊愈傷組織被稱為看護組織。2、 飼養(yǎng)層培養(yǎng)：用處理過的（如X射線處理）無分裂能力或分裂很慢的細胞來飼養(yǎng)所需培養(yǎng)的細胞，使其分裂和生長。3、 細胞固定化培養(yǎng)：是指將游離的細胞包埋在支持物內(nèi)部或表面進行培養(yǎng)的一門技術(shù)是在20世紀70年代的酶固定化催化技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。4、 冠癭組織：是由根癌農(nóng)桿菌感染引起的植物腫瘤組織，它能在無外加植物激素的培養(yǎng)基上生長。5、 轉(zhuǎn)基因植物：是指將外源基因轉(zhuǎn)入到植物的細胞或組織獲得了新的遺傳性狀的植物。 第十章 微藻培養(yǎng)及應(yīng)用一、名詞 微藻：一般是指那些在顯微鏡下才能辨別形態(tài)的微小的藻類二、 知識點 1、微

8、藻的特點及分類。特點：（1）利用太陽能和二氧化碳通過光合作用生產(chǎn)有機物，生長速度快、效率高、能耗低。（2）微藻提取有效成分不需要復(fù)雜的前處理。（3）種類多，許多微藻可產(chǎn)生有生物活性的化合物。（4）可以利用貧瘠土地、鹽堿地等極端環(huán)境。（5）微藻培養(yǎng)簡單，容易產(chǎn)業(yè)化。 分類：微藻有原核微藻和真核微藻兩大類，根據(jù)微藻生長環(huán)境可分為水生微藻、陸生微藻和氣生微藻3種生態(tài)類群、水生微藻又有淡水生和海水生之分，根據(jù)分布又可分為浮游微藻和底棲微藻。2、微藻的應(yīng)用。（課本202）1）微藻生物能源 （1）藻類生物柴油 （2）藻類生物制氫2）生物活性物質(zhì)制備3）水產(chǎn)餌料4）微藻基因工程5）微藻的多糖如紫球藻多糖可作

9、為黏合劑、增稠劑和乳化劑第十一章 動物細胞培養(yǎng)一、名詞動物細胞工程、細胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、原代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、細胞系、克隆、接觸抑制、密度抑制、天然培養(yǎng)液、合成培養(yǎng)液、“一代”細胞、組織塊培養(yǎng)法、單層細胞培養(yǎng)法。1、動物細胞工程：模擬體內(nèi)生理環(huán)境使分離的動物細胞在體外生存、增殖的一門技術(shù)。2、細胞培養(yǎng)：是指從體內(nèi)組織分離細胞，模擬體內(nèi)環(huán)境，在無菌、適當(dāng)條件下使其生長繁殖一種技術(shù)。細胞培養(yǎng)的對象是單個細胞或細胞群。3、組織培養(yǎng)：4、器官培養(yǎng)：5、原代培養(yǎng)：直接從生物體內(nèi)獲取細胞進行首次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。6、繼代（傳代）培養(yǎng)：當(dāng)培養(yǎng)的細胞增殖達一定密度后，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細胞分散

10、后，從一個容器以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個容器中擴大培養(yǎng)，為繼代（傳代）培養(yǎng)7、細胞系：是由原代培養(yǎng)經(jīng)傳代培養(yǎng)純化，獲得的能在體外生存的細胞群體。8、克隆：是指從一個細胞得到的兩個以上的生物體、細胞群或細胞，甚至是一段DNA的拷貝片段。9、接觸抑制：當(dāng)培養(yǎng)細胞分裂增殖相互間密切接觸時，細胞停止活動的現(xiàn)象為接觸抑制。（非正常細胞如癌細胞除外）。10:、密度抑制：細胞密度過大，代謝物增多，營養(yǎng)物質(zhì)耗盡導(dǎo)致分裂停止。11、天然培養(yǎng)液：指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基 。包括生物性液體（如血清）、組織浸液（如胚胎浸液）、凝固劑（如血漿凝塊）等。12、合成培養(yǎng)液：13、“一代”細胞：是指從

11、細胞接種培養(yǎng)到分離再培養(yǎng)期間的一段時間。14、組織塊培養(yǎng)法：把組織切割成0.51mm3的小塊后，由于組織塊體積很小，在不加任何粘著劑的情況下，它們也能直接貼附于瓶壁上，然后細胞自組織塊邊緣向外長出生長暈，最后連接成片形成單層細胞。此方法程序比較簡單，所以是當(dāng)前各培養(yǎng)室常用的方法。15:、單層細胞培養(yǎng)法：所有組織中都含有一定量的細胞間質(zhì)(纖維、基質(zhì)等)，妨礙細胞生長用酶消化后，能除去間質(zhì)，使組織松散，容易分離成單個細胞或較小的細胞團，接種后細胞易于生長。二、知識點1、 體外培養(yǎng)細胞的主要類型及其生長特點體外培養(yǎng)細胞的分型 1）貼附生長型細胞：上皮樣細胞、成纖維樣細胞、游走型細胞、多形型細胞2）非

12、貼附型細胞（懸浮生長型細胞）生長特點：貼附、接觸抑制、密度抑制（依賴性）2、 細胞系的生長過程的主要階段及其特征1）原代（初代）培養(yǎng)期 從接種到第一次傳代，一般持續(xù)14周，此期有細胞分裂，但不旺盛。 2）傳代期 細胞增殖旺盛，約傳代1050次。 3）衰退期 細胞增殖很慢或不增殖，開始逐漸衰退凋亡。3、血清的主要用途及注意事項用途： 注意事項：血清使用前必須經(jīng)過分析檢測，只有無菌、無內(nèi)毒素、無溶血或低溶血、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)素達一定標(biāo)準以上的血清才能使用。4、 細胞培養(yǎng)液配置的技術(shù)要點5、 原代細胞培養(yǎng)的方法、主要步驟、技術(shù)要點以及各自的適用范圍方法：組織塊培養(yǎng)法(explant culture)和組

13、織消化培養(yǎng)（單層細胞培養(yǎng)法)主要步驟：1）組織塊培養(yǎng)法 取材、剪碎、漂洗、貼瓶、翻瓶加培養(yǎng)液、干涸、培養(yǎng) 2）組織消化培養(yǎng)（單層細胞培養(yǎng)法) 取材、消化與分散組織塊、離心和計數(shù)、接種培養(yǎng)、觀察技術(shù)要點適應(yīng)范圍6、貼壁細胞傳代的主要方法及技術(shù)要點7、懸浮細胞傳代的主要方法及技術(shù)要點8、細胞模型的建立與應(yīng)用9、細胞培養(yǎng)的作用意義。第十二章 轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器一、名詞 轉(zhuǎn)基因動物、基因治療、基因打靶、動物生物反應(yīng)器。1、轉(zhuǎn)基因動物：以實驗方法導(dǎo)入的外源基因在其染色體基因組內(nèi)穩(wěn)定整合并能遺傳給后代的一類動物。2、基因治療：3、基因打靶：4、（轉(zhuǎn)基因）動物生物反應(yīng)器：利用轉(zhuǎn)基因活體動物的某種能夠高效表達外

14、源蛋白的器官或組織來生產(chǎn)活性蛋白的技術(shù)，這些蛋白一般是藥用蛋白或營養(yǎng)保健蛋白。用于表達的場所包括動物乳腺、血液、泌尿系統(tǒng)、精囊腺等，還包括蛋禽和昆蟲個體等。二、知識點1、遺傳物質(zhì)導(dǎo)入受體細胞的方法 （1） 物理法 ；包括電穿孔法、顯微注射法和裸露DNA直接注射法。 （2） 化學(xué)法：DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣DNA沉淀法和脂質(zhì)體載體包埋法。 （3） 生物學(xué)方法：指病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移。常用DNA病毒載體和反轉(zhuǎn)錄病毒載體。2、動物生物反應(yīng)器的類型與特點。類型：動物乳腺生物反應(yīng)器和動物血液生物反應(yīng)器。 特點：第十三章 干細胞與組織工程一、名詞干細胞、胚胎干細胞、成體干細胞、ES細胞、EC細胞、EG細胞

15、、組織工程。1、 干細胞：即起源細胞，是一類未分化的細胞或原始細胞，具有自我更新和分化潛能的細 胞。2、 胚胎干細胞：從早期胚胎中分離出來的干細胞，具有全能性?？梢苑只扇魏谓M織類型的細胞。3、 成體干細胞：是成體組織內(nèi)具有自我更新及分化產(chǎn)生1種或1種以上子代組織細胞的未成熟細胞。4、 ES細胞：是從著床前胚胎內(nèi)細胞團或原始生殖細胞經(jīng)體外分化抑制培養(yǎng)分離的一種全能性細胞，是可以分化成任何一種組織類型的細胞。5、 EC細胞：分離自胚胎瘤細胞的干細胞稱為EC細胞。6、 EG細胞：從原始生殖細胞分離的干細胞稱為胚胎生殖細胞，簡稱EG細胞7、 組織工程：利用細胞生物學(xué)和工程學(xué)原理，將人體某部分的組織細胞種植和吸附在一種生物材料的支架上進行人工培養(yǎng)繁殖、擴增，然后移植到人體內(nèi)所需要的部位，從而達到器官修復(fù)或再造的治療目的的一種技術(shù)。二、知識點1、干細胞的分類與特點分類：按其分化潛能可分為三類全能干細胞、多能干細胞、專能干細胞 按干細胞來源分為兩類胚胎干細胞、成體干細胞特性：（1） 通常呈圓形、體積小、核質(zhì)比例大。 （2） 具有較高的端粒酶活性，因此分裂能力極強。 （3） 增殖速度較慢，只有當(dāng)機體需要時，進入分化狀態(tài)并開始逐漸加快。 （4） 具有自穩(wěn)性。會自我更新維持自身數(shù)目的恒定。2、目前已分離的胚胎細胞、成體干細胞的種類胚胎干細