食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測(cè)定

1、附件2食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測(cè)定bjs 2017061 范圍本方法規(guī)定了食品中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本方法適用于包裝飲用水、液體乳、大米、胡蘿卜、哈密瓜、豬肉、魚(yú)肉、茶葉、嬰幼兒配方乳粉（不包括特殊醫(yī)學(xué)用途的嬰幼兒配方乳粉）中氯酸鹽和高氯酸鹽的測(cè)定。2 原理試樣經(jīng)提取、離心后，上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。3 試劑和材料3.1 試劑3.1.1 乙腈（ch3cn）：色譜純。3.1.2 甲醇（ch3oh）：色譜純。3.1.3 甲酸（hcooh）：色譜純。3.1.4 甲酸銨（hcoonh4）：液質(zhì)聯(lián)用級(jí)。3.1.5 超純水（h2o）：電阻

2、率為18.2mcm。注：以上試劑在使用前均應(yīng)做本底測(cè)試。3.2 試劑配制3.2.1 含0.1%甲酸的水溶液：量取1.0ml甲酸（3.1.3）至1000ml容量瓶，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，混勻。3.2.2 20mmol/l甲酸銨溶液：稱取0.63g甲酸銨（3.1.4），用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至500ml，混勻。3.2.3 甲酸銨甲醇溶液：取100ml甲酸銨溶液（3.2.2），加入200ml甲醇（3.1.2），混勻。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品：采用具有證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)品或高純?cè)噭?，純?9%。中文名稱、英文名稱、cas登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量詳見(jiàn)表1。3.3.2 高氯鈉

3、鹽標(biāo)準(zhǔn)品：采用具有證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)品或高純?cè)噭?，純?9%。中文名稱、英文名稱、cas登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量詳見(jiàn)表1。表1氯酸鹽和高氯酸鹽的中文名稱、英文名稱、cas登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量中文名稱英文名稱cas登錄號(hào)分子式相對(duì)分子量氯酸鈉sodiumchlorate7775-09-9naclo3106.44高氯酸鈉sodiumperchlorate7601-89-0naclo4122.453.4 同位素內(nèi)標(biāo)3.4.1 氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)：氯酸鹽-18o3（200g/ml，以氯酸根-18o3離子計(jì)，北京振祥提供，eurl-srmlotno:024），4保存。3.4.2 高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)：高氯酸

4、鹽-18o4（100g/ml，以高氯酸根-18o4離子計(jì)，美國(guó)劍橋提供，cilolm-7310-1.2），4保存。3.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制3.5.1 氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1mg/ml，以氯酸根計(jì)）：精密稱取氯酸鈉0.128g（精確至0.0001g），置于100ml容量瓶中，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4保存。3.5.2 高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1mg/ml，以高氯酸根計(jì)）：精密稱取高氯酸鈉0.123g（精確至0.0001g），置于100ml容量瓶中，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4保存。3.5.3 混

5、合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別準(zhǔn)確量取0.2ml氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.5.1）、0.1ml高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.5.2），置于同一100ml容量瓶中，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽、高氯酸鹽濃度分別為2.0g/ml、1.0g/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，4保存。3.5.4 混合同位素內(nèi)標(biāo)液：分別準(zhǔn)確量取75l氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)（3.4.1）、20l高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)（3.4.2）置于同一10.0ml容量瓶中，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽-18o3、高氯酸鹽-18o4濃度分別為1500ng/ml、200ng/ml的混合同位素內(nèi)標(biāo)液，4保存。3.5.5 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分

6、別準(zhǔn)確量取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（3.5.3）0l、10l、25l、50l、75l、100l、250l、500l、750l、1000l，及混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4）100l，用甲酸銨甲醇溶液（3.2.3）稀釋并定容至10ml，作為混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液s0、s1s9。氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/ml、2.00ng/ml、5.00ng/ml、10.0ng/ml、15.0ng/ml、20.0ng/ml、50.0ng/ml、100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml，高氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/ml、1.00ng/ml、2.50ng/ml、5.00ng/ml、7.50ng/ml、10.0n

7、g/ml、25.0ng/ml、50.0ng/ml、75.0ng/ml、100ng/ml，混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸鹽-18o3、高氯酸鹽-18o4濃度分別為15.0ng/ml、2.0ng/ml，或依需要配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用新制。4 儀器和設(shè)備4.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（esi源）。4.2 渦旋振蕩器。4.3 組織搗碎機(jī)。4.4 均質(zhì)器。4.5 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速10000r/min。4.6 電子天平：感量分別為0.0001g和0.001g。4.7 超聲波恒溫水浴振蕩器。4.8 具塞離心管：50ml。4.9 primehlb固相萃取柱：3cc，150mm，或性能相當(dāng)者。注：

8、4.8、4.9的耗材在使用前均應(yīng)做本底測(cè)試。5 試樣制備與保存5.1 包裝飲用水充分混勻，直接取用。5.2 液體乳：充分搖勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于4避光保存。5.3 豬肉、魚(yú)肉：取適量有代表性的可食部分試樣，切成小塊，組織搗碎機(jī)搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于-18避光保存。5.4 胡蘿卜、哈密瓜：取適量有代表性的試樣，去皮去籽，切成小塊，組織搗碎機(jī)搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于-18避光保存。5.5 嬰兒配方乳粉：充分混勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份

9、，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于常溫避光保存。5.6 大米、茶葉：取適量有代表性的試樣，粉碎機(jī)粉碎后過(guò)40目篩，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于常溫避光保存。6 測(cè)定步驟6.1 提取6.1.1 包裝飲用水：準(zhǔn)確移取1.0ml試樣，加入10.0l混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），渦旋震蕩10s，經(jīng)0.22m再生纖維素濾膜過(guò)濾后，取續(xù)濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。6.1.2 胡蘿卜、哈密瓜、茶葉：準(zhǔn)確稱取1g（精確至0.001g）試樣置于50ml具塞離心管（4.8）中，加入200l混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），準(zhǔn)確加入7.0ml超純水（3.1.5

10、），渦旋振蕩5min，再準(zhǔn)確加入13.0ml甲醇（3.1.2），混勻，振蕩超聲提取30min，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.1.3 大米：準(zhǔn)確稱取2g（精確至0.001g）試樣置于50ml具塞離心管（4.8）中，加入200l混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），準(zhǔn)確加入7.0ml超純水（3.1.5），渦旋振蕩5min，再準(zhǔn)確加入13.0ml甲醇（3.1.2），混勻，振蕩超聲提取30min，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.1.4 嬰兒配方乳粉：準(zhǔn)確稱取2g（精確至0.001g）試樣置于50ml具塞離心管（4.8）中，加入150l混合同位素內(nèi)標(biāo)液

11、（3.5.4），準(zhǔn)確加入5.0ml0.1%甲酸水溶液（3.2.1），迅速混勻，置于45水浴超聲20min，渦旋振蕩5min，再準(zhǔn)確加入10.0ml甲醇（3.1.2），混勻，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.1.5 液體乳：準(zhǔn)確稱取5g（精確至0.001g）試樣置于50ml具塞離心管（4.8）中，加入150l混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），加入1.0ml0.1%甲酸水溶液（3.2.1），9.0ml甲醇（3.1.2），渦旋振蕩5min，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.1.6 豬肉、魚(yú)肉：準(zhǔn)確稱取2g（精確至0.001g）試樣置于50ml具塞離心

12、管（4.8）中，加入200l混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4），準(zhǔn)確加入7.0ml超純水（3.1.5），13.0ml甲醇（3.1.2），10000r/min均質(zhì)30s，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。6.2 凈化吸取約3.0ml上述上清液（6.1.26.1.6），按附錄a中的圖a.1方式過(guò)固相萃取柱（4.9）及0.22m再生纖維素濾膜，棄去約1ml流出液，收集續(xù)濾液，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。6.3 色譜測(cè)定6.3.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)6.3.1.1 參考液相色譜條件a)色譜柱：acclaimtrinityp1復(fù)合離子交換柱（50mm2.1mm，3m；100mm2.

13、1mm，3m），或性能相當(dāng)者。b)流動(dòng)相：a為乙腈，b為20mmol/l甲酸銨溶液。梯度洗脫程序見(jiàn)表2。c)樣品系列運(yùn)行完后，按表3的色譜柱清洗梯度程序?qū)ιV柱進(jìn)行清洗。d)流速：0.5ml/min。e)柱溫：35。f)進(jìn)樣量：3l。表2梯度洗脫程序50mm2.1mm，3m規(guī)格色譜柱100mm2.1mm，3m規(guī)格色譜柱時(shí)間(min)流動(dòng)相a(%)流動(dòng)相b(%)時(shí)間(min)流動(dòng)相a(%)流動(dòng)相b(%)initial3565initial70300.535650.270304.065353.090105.090107.090107.090108.070308.0356510.07030表3色譜柱

14、清洗梯度程序50mm2.1mm，3m規(guī)格色譜柱100mm2.1mm，3m規(guī)格色譜柱時(shí)間(min)流速(ml/min)流動(dòng)相a(%)流動(dòng)相b(%)時(shí)間(min)流速(ml/min)流動(dòng)相a(%)流動(dòng)相b(%)initial0.53565initial0.5703010.00.15901015.00.159010100.00.159010150.00.159010注：色譜柱按該程序清洗后保存，有助于延長(zhǎng)色譜柱壽命。6.3.1.2 參考質(zhì)譜條件a)離子源：電噴霧離子源（esi源）。b)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（mrm）。c)掃描方式：負(fù)離子模式掃描。d)毛細(xì)管電壓：200v。e)錐孔電壓：60v。f)脫

15、溶劑溫度：500。g)脫溶劑氣流量：1000l/h。h)錐孔氣流量：150l/h。i)采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（mrm）模式采集數(shù)據(jù)，質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表4。表4氯酸鹽和高氯酸鹽定性、定量離子對(duì)和質(zhì)譜分析參數(shù)化合物母離子（m/z）子離子（m/z）錐孔電壓（v）碰撞能量（ev）氯酸根83.067.0*601585.069.06015高氯酸根99.083.0*6018101.085.06018氯酸根內(nèi)標(biāo)89.071.0*6016高氯酸根內(nèi)標(biāo)107.089.0*6018*定量離子對(duì)。注：6.3.1.2的質(zhì)譜條件僅供參考，當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。6.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

16、制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.5.5）按儀器參考條件（6.3.1）進(jìn)行測(cè)定。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以內(nèi)標(biāo)校正后的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。6.3.3 定性測(cè)定在相同試驗(yàn)條件下測(cè)定試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸鹽、高氯酸鹽的色譜保留時(shí)間，以相對(duì)于最強(qiáng)離子豐度的百分比作為定性離子的相對(duì)離子豐度。若試樣中檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.5.5）中氯酸鹽、高氯酸鹽保留時(shí)間一致的色譜峰，且其定性離子與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的定性離子的相對(duì)豐度相比，偏差不超過(guò)表5規(guī)定的范圍，則可以確定試樣中檢出相應(yīng)的氯酸鹽、高氯酸鹽。表5定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度

17、（%）502050102010允許的相對(duì)偏差（%）202530506.3.4 定量測(cè)定若試樣檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.5.5）一致的氯酸鹽、高氯酸鹽，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線按內(nèi)標(biāo)法以內(nèi)標(biāo)校正后的響應(yīng)值計(jì)算得到其含量?？瞻讟悠芳訕?biāo)試樣參考色譜圖見(jiàn)附錄b中的圖b.1、b.2。6.4 空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按試樣同法操作。7 結(jié)果計(jì)算結(jié)果按式（1）計(jì)算：x=cvfm.(1)式中：x試樣中各待測(cè)組分的含量，包裝飲用水單位為微克每升（g/l)，其他樣品單位為微克每千克（g/kg)；c從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測(cè)組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/ml）；v試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（ml）

18、；f試樣制備過(guò)程中的稀釋倍數(shù)；m稱樣量，包裝飲用水單位為毫升（ml），其他樣品單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8 檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度8.1 靈敏度當(dāng)試樣量為1.0ml時(shí)，包裝飲用水中氯酸鹽的檢出限為0.6g/l、定量限為2.0g/l；高氯酸鹽的檢出限為0.4g/l、定量限為1.0g/l。當(dāng)試樣量為1g（精確至0.001g）、定容體積為20.0ml時(shí)，胡蘿卜、哈密瓜、茶葉中氯酸鹽的檢出限為12.0g/kg、定量限為40.0g/kg；高氯酸鹽的檢出限為8.0g/kg、定量限為20.0g/kg。當(dāng)試樣量為2g（精確至0

19、.001g）、定容體積為20.0ml時(shí)，豬肉、魚(yú)肉、大米中氯酸鹽的檢出限為6.0g/kg、定量限為20.0g/kg；高氯酸鹽的檢出限為4.0g/kg、定量限為10.0g/kg。當(dāng)試樣量為5g（精確至0.001g）、定容體積為15.0ml時(shí)，液體乳中氯酸鹽的檢出限為1.8g/kg、定量限為6.0g/kg；高氯酸鹽的檢出限為1.2g/kg、定量限為3.0g/kg。當(dāng)試樣量為2g（精確至0.001g）、定容體積為15.0ml時(shí)，嬰兒配方乳粉中氯酸鹽的檢出限為4.5g/kg、定量限為15.0g/kg；高氯酸鹽的檢出限為3.0g/kg、定量限為7.5g/kg。8.2 準(zhǔn)確度本方法在5800g/kg添加濃度范圍內(nèi)，回收率為80%110%。8.3 精密度在重復(fù)性條件下