初始污染菌檢查PPT演示文稿

1、1,生物學(xué)檢查,初始污染菌檢查 空氣中細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)方法 物體表明和生產(chǎn)人員手細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)方法,2,3,初始污染菌檢測(cè),指標(biāo)含義（,通過(guò)測(cè)定檢品細(xì)菌總數(shù)可用來(lái)判明檢品細(xì)菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生狀況，是對(duì)檢品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù),4,初始污染菌檢測(cè),目的：保證滅菌的效果，確定滅菌劑量，監(jiān)控滅菌過(guò)程的有效性。 引用標(biāo)準(zhǔn)： GB15980-1995 一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 中華人民共和國(guó)藥典2010版 附錄 微生物限度檢查法,5,GB15980-1995,規(guī)定了一次性使用醫(yī)療用品滅菌、消毒前、后的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)一次性使用醫(yī)療用品（包括滅菌和消毒的一

2、次性使用醫(yī)療用品）生產(chǎn)企業(yè)中生產(chǎn)、裝配、包裝車間（空氣中細(xì)菌總數(shù)檢查方法）等生產(chǎn)過(guò)程和生產(chǎn)工人手提出衛(wèi)生要求的質(zhì)量控制,6,檢測(cè)環(huán)境 和檢驗(yàn)量,在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。潔凈區(qū)設(shè)置可在微生物室操作 各類產(chǎn)品每批隨機(jī)抽樣10件樣品（10個(gè)包裝,7,方法主要步驟,采樣,供試液制備,培養(yǎng),菌落計(jì)數(shù),8,初始污染菌檢測(cè),采樣方法,供試液制備,供試品是敷料、可以破壞性類可用無(wú)菌手續(xù)稱取10g,放入100ml滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。 2.供試品是液體取10ml加至100ml滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。 3.對(duì)供試

3、品不能采用破壞性取樣可用浸有無(wú)菌生理鹽水拭子涂抹采樣，被采表面積為100cm2.加入滅菌生理鹽水100ml。作為供試液。 4.可用破壞性方法取樣供試品：（參照中華人民共和國(guó)藥典2010年規(guī)定進(jìn)行) 5. 對(duì)有內(nèi)腔的醫(yī)療用器:用定量洗脫液，無(wú)菌操作沖洗內(nèi)腔，反復(fù)沖洗，充分振落后 取樣。 6. 對(duì)一次性輸液（血）器的零配件及其他醫(yī)療器械:直接用定量洗脫液（1ml/10cm2）沖洗，將洗脫液置于無(wú)菌容器中，充分振蕩后取樣,9,初始污染菌檢測(cè),梯度稀釋,1ml,1ml,1ml,1ml,1ml,供試液,9mlNacl,9mlNacl,1:10,1:100,1:1000,10,檢驗(yàn)方法,將每樣取5份平行樣

4、（取一份樣品，根據(jù)限值制備好供試液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，,11,初始污染菌檢測(cè),結(jié)果計(jì)算公式： 平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)菌數(shù) 菌數(shù)/每件次（或g） = 件次或重量（g） 注意事項(xiàng)： 供試品的取樣必須在萬(wàn)級(jí)環(huán)境中100級(jí)凈化條件下，無(wú)菌操作，防止污染。 應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，同時(shí)消除抑菌成份的干擾,12,產(chǎn)品初始污染菌數(shù)限值,滅菌產(chǎn)品管道類內(nèi)腔10cfu/件次，外部100cfu/件次，非管道類100cfu/件次，敷料類100cfu/g；消毒產(chǎn)品1000cfu/件次或重量（g,13,初始污染菌檢測(cè),供試液制備,推薦的制備方法,樣 品 制 備,供試液制備,梯度稀釋,加 樣

5、,用滅菌剪刀將紗布剪成小塊，稱取10g，移入100ml滅菌生理鹽水中，不時(shí)振搖。作為1：10供試液,供試液10倍遞減稀釋。 盡量避免絲線等雜物的混入,1）每個(gè)稀釋級(jí)各吸取1ml至每個(gè)滅 菌平皿，每個(gè)稀釋級(jí)注5個(gè)平皿。 （2）經(jīng)滅菌完畢的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基冷卻至45-50 時(shí)，傾注上述各個(gè)平皿15ml，另傾注一個(gè)注入1ml稀釋液（滅菌生理鹽水）滅菌空平皿作陰性對(duì)照。按一個(gè)方向快速轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使供試液與培養(yǎng)基充分混勻,紗布模擬,培養(yǎng),瓊脂凝固后，倒置，37 培養(yǎng)48h,14,細(xì) 菌 計(jì) 數(shù),基本概念,細(xì)菌數(shù)測(cè)定是微生物的定量檢查，對(duì)非規(guī)定滅菌產(chǎn)品中污染的活菌數(shù)量進(jìn)行測(cè)定，通常以每克或每毫升供試品作為計(jì)量

6、單位,限制條件,平板菌落計(jì)數(shù)法的特點(diǎn)是先使細(xì)胞分散、定位，增生可見(jiàn)菌落后計(jì)數(shù)。它是一種有條件的計(jì)數(shù)法，其限制條件大致如下： 以菌落數(shù)為基礎(chǔ)。 CFU(colony forming units):一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌形成單位，它 可以由一個(gè)也可以由多個(gè)菌細(xì)胞形成。 受特定培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件限制。 有繁殖能力的菌細(xì)胞才能認(rèn)定“活菌,15,細(xì)菌計(jì)數(shù),先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5-10倍的放大鏡檢查，以投射光襯以暗色背景，以防遺漏（可輔助菌落計(jì)數(shù)器）記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)（每個(gè)稀釋度的5個(gè)平板值，相加后除以5）。 若平皿中有連成片狀的菌落或花點(diǎn)樣菌落蔓延生

7、長(zhǎng)時(shí)，該平皿不宜計(jì)數(shù)，若片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個(gè)平皿菌落計(jì)數(shù)后乘2，以代表全皿菌落數(shù),16,菌落特征,形態(tài)特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、 淡黃色（如果培養(yǎng)基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑試劑)，菌落為紅色） 邊緣整齊或不整齊，表面有光滑、粗糙，皺褶、突起或扁平。 大小差異很大,17,18,1、選取平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋級(jí)作為報(bào)告菌落數(shù)測(cè)定范圍。 如只有1個(gè)稀釋級(jí)平均菌落數(shù)在30300之間，則將稀釋級(jí)的菌落數(shù)乘以稀 釋倍數(shù)報(bào)告。 2、如有兩個(gè)相鄰稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)在30300之間，則先計(jì)算兩稀釋級(jí)菌落數(shù)的比值。 高稀釋級(jí)

8、的平均平板菌落數(shù)稀釋倍數(shù) 比值= 低稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)稀釋倍數(shù) 當(dāng)比值2時(shí)，則以2個(gè)稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)均值報(bào)告。 當(dāng)比值2時(shí)，則以低稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。 補(bǔ)充：如有3個(gè)稀釋級(jí)，平均菌落數(shù)均在30300之間，則以后2級(jí)計(jì)算級(jí)間比值報(bào)告。（增加解釋2,菌落計(jì)數(shù)基本規(guī)則,19,3、如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均在300以上，則按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均在30以下，則按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。 4、如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均不在30300之間，則以最接近30或300的稀釋級(jí)平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。 5、如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均無(wú)菌落生長(zhǎng)或

9、最低稀釋級(jí)平均菌落數(shù)小于1時(shí)，應(yīng)報(bào)告菌數(shù)為10個(gè)/g或ml。 6、菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)值報(bào)告。大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)值后面，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。在報(bào)告菌落數(shù)為“不可計(jì)”時(shí)，應(yīng)表明樣品的稀釋度,菌落計(jì)數(shù)基本規(guī)則,20,細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果及報(bào)告方法,21,空氣中細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)方法,測(cè)定空氣中動(dòng)態(tài)下細(xì)菌總數(shù)。 采用平板暴露法：車間在30m2以上者，于東、西、南、北（距墻1m處）、中五點(diǎn)；小于30m2者，于一條對(duì)角線里、中、外三點(diǎn)，高度均在1.5m處采樣，將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（9cm直徑）按上述采樣點(diǎn)和高度布放，暴露15min后立即關(guān)蓋，于37溫箱培養(yǎng)24h后觀察后

10、果，求出5個(gè)或3個(gè)采樣點(diǎn)的平均菌數(shù),22,計(jì)算公式,菌數(shù)/m3= 式中： A平板面積，cm2； T平板暴露時(shí)間，min； N平均菌落數(shù)。 標(biāo)準(zhǔn)限值：滅菌和消毒產(chǎn)品分別500和2000cfu/m3,23,物體表面和生產(chǎn)人員手細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)方法,采樣方法: 將內(nèi)徑為5cm5cm的滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，根據(jù)物體表面積大小，采平行樣14個(gè)，用浸有滅菌生理鹽水的棉拭子，在規(guī)格板內(nèi)涂抹10次（往返計(jì)為1次），將棉拭子放入10ml滅菌生理鹽水的采樣管中。 對(duì)生產(chǎn)人員手采樣：被檢人五指并攏，將浸有滅菌生理鹽水的棉拭子在右手指曲面，從指尖、甲溝至指根處往返涂抹10次后，將棉拭子放入10ml滅菌生理鹽水的試管中,24