餌料質(zhì)量檢測與分析

1、第一章 飼料質(zhì)量分析與檢驗(yàn)概論第一節(jié) 飼料質(zhì)量分析與檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展史1、簡史：18世紀(jì)，初步有了評價(jià)飼料營養(yǎng)價(jià)值的體系；19世紀(jì)初, 1864年，Henneberg、Stohmann 在德國的Weende試驗(yàn)站改進(jìn)并建立了飼料概略成分分析體系，沿用至今；20世紀(jì)后，飼料純養(yǎng)分分析與儀器分析的發(fā)展。2、飼料質(zhì)量分析方法方法：化學(xué)分析內(nèi)容：概略養(yǎng)分；純養(yǎng)分；養(yǎng)分的生物學(xué)效價(jià)第一章 飼料質(zhì)量分析與檢驗(yàn)概論物理分析分析內(nèi)容：飼料及原料的質(zhì)量和是否攙假第二節(jié)飼料樣品的采集與制備飼料原料和配合飼料的變異(1)自然變異 (2)加工 (3)攙假 (4)損壞和變質(zhì)樣品的采集目的 ：是通過對樣品的理化指標(biāo)的分析，客

2、觀地反映受檢飼料原料或產(chǎn)品的品質(zhì)。樣品的分析結(jié)果有不同的用途：(1)為飼料配方選擇原料 (2)選擇原料供應(yīng)商 (3)接收或拒絕某種飼料原料 ()判斷產(chǎn)品的質(zhì)量是否符合規(guī)格要求和保證值。以決定產(chǎn)品出廠與否或仲裁買賣雙方的爭議(5)判斷飼料加工程度和生產(chǎn)工藝控制質(zhì)量。(6)分析保管貯存條件對原料和產(chǎn)品質(zhì)量的影響程度。(7)保留每一批飼料原料或產(chǎn)品的樣品，以備急需時(shí)用。()分析測定方法的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)室或人員之間操作誤差的比較 。 結(jié)論：采樣比分析更為重要 采樣的要求 :(1)樣品必須具有代表性 (2)必須采用正確的采樣方法 采樣要做到隨機(jī)、客觀，不同代表性的區(qū)域取樣點(diǎn)，然后充分混合成為整個飼料的代表

3、樣品 。(3)樣品必須有一定的數(shù)量 注意點(diǎn):原料和飼料成品的水分、粒度和平行樣的多少采樣步驟:(1)采樣前紀(jì)錄 記錄與原料或產(chǎn)品的生產(chǎn)廠家、生產(chǎn)日期：批號，種類，總量、包裝堆積形式、運(yùn)輸情況、貯存條件和時(shí)間、破損、霉變等。(2)原始樣品初級樣品采集 原始樣品一般不得少2kg(3)次級樣品平均樣品采集 平均樣品一般不少于1 kg (4)分析樣品實(shí)驗(yàn)樣品 分析樣品的數(shù)量根據(jù)分析指標(biāo)和測定方法要求而定 采樣基本方法：(1)幾何法指把整個一堆物品看成一種具有規(guī)則的幾何立體，如立方體、圓柱體等取樣時(shí)首先把這個立體分成若干體積相等的部分，這些部分必須在全體中分布均勻，從這些部分中取出體積相等的樣品，這些部

4、分的樣品稱為支樣，再把這些支樣混合即得樣品。 幾何法常用于采集原始樣品和大批量的原料 2四分法 是指將樣品平鋪在一張平坦而光滑的一張方形紙或塑料布等上(大小視樣品的多少面定)，提起一角，使飼料流向?qū)?，隨即提起對角使其流回，如此法，將口角輪流反復(fù)提起，使飼料反復(fù)移動混合均勻，然后將飼料堆成等厚的正四方形體或圓錐，在飼料樣品方體上劃一十字，將樣品分成4等份，任竟棄去對角的2份，將剩余的2份混合，繼續(xù)按前述方法混合均勻，縮分，直至剩余樣品數(shù)量與測定所需要的用量相接近時(shí)為止。 不同飼料樣品的采集 :1散裝2裝袋 粉狀飼料取樣袋數(shù)不少于總袋數(shù)的3%，總袋數(shù)在100袋下，取樣不少于10袋，每增加100袋

5、需增加1袋，取樣袋數(shù)至少為總袋數(shù)的10% 。3倉裝 原始樣品在飼料進(jìn)入包裝車間或成品庫的流水線或傳送帶上，貯塔下、料斗下、秤上或工藝設(shè)備上采集 。 飼料庫中的散狀產(chǎn)品按高度分層采樣，即采樣前將層表面劃分分為6個等份，在每一部分的正方形對角線的四角和交叉點(diǎn)5個不同地方采樣。液體飼料 7桶以下，取樣桶數(shù)不少于5桶。 10桶以下，取樣桶數(shù)不少于7桶。 10一50桶取樣桶數(shù)不少于10桶。 51100桶，取樣桶數(shù)不少于)5桶。 101桶以上，按不少于總桶數(shù)的15取。固體油脂對在常溫下呈固體的動物性油脂的采樣，可參照固體飼料采樣方法，但加熱熔化棍勻后，才能采集次級樣品。 黏性液體黏性濃稠飼料如糖蜜，可在卸

6、料過程中采用抓取法 。 7塊餅類 大塊狀飼料從不同的堆積部位選取不少于5大塊，從每塊中切取對角的小三角形塊，捶碎混合后再用四分法取分析樣品200g左右。 小塊的餅粕，要選取具有代表性者數(shù)l0片，粉碎后充分混合用四分法取分析樣品約200g左右。8 副食及釀造加工副產(chǎn)品 取樣方法是：在貯藏池、木桶或貯堆中分上、中、下3層取樣，每層取5l0個點(diǎn)，在60一65恒溫干燥箱中干燥供制風(fēng)干樣品用 。9塊根、塊莖和瓜類10新鮮青綠飼料及水生飼料 第一章 飼料質(zhì)量分析與檢驗(yàn)概論11青貯飼料 原始樣品質(zhì)量為5001000g青貯壕和青貯窖的采樣點(diǎn)視青貯壕長度和青貯窖深度大小分為若于段，每段設(shè)采樣點(diǎn)分層取樣。 第一章

7、 飼料質(zhì)量分析與檢驗(yàn)概論3.樣品的制備 樣品的制備指將原始樣品或次級樣品經(jīng)過一定的處理成為分析樣品的過程. 樣品制備方法:包括烘干、粉碎和混勻，制備成的樣品可分為半干樣品和風(fēng)干樣品。風(fēng)干樣品的制備風(fēng)干飼料是指自然含水量在15%以下的飼料。1原始樣品的采集 2次級樣品的采集 3分析樣品制備半干樣品的制備 新鮮的青飼料、青貯飼料等測定飼料的初水含量后制成半干樣品，以便保存，供其余指標(biāo)分析備用 注意：登記樣品名稱、種類、規(guī)格型號、批號、產(chǎn)地、貯存條件、采樣部位、采樣人、采樣日期、生產(chǎn)廠家、通訊地址等。4.樣品的保管 用不與其發(fā)生反應(yīng)的材料包裝，外加布袋或牛皮紙袋，貼上標(biāo)簽及封條，加蓋公章；為特殊目的

8、需長期保存的可用錫鋁紙軟包裝 經(jīng)抽真空充氮后密封，冷庫中保存第二章 飼料中一般成分的分析第一節(jié) 氨基酸的分析 氨基酸分析是指把以肽鍵結(jié)合的氨基酸殘基構(gòu)成的蛋白質(zhì)經(jīng)過加熱水解，生成游離的氨基酸，再通過液相色譜等進(jìn)行分析其氨基酸構(gòu)成比例的種簡單而有效的方法 .一.待測樣品的前處理方法酸水解法 一般使用重蒸5.7molL鹽酸(恒沸點(diǎn)鹽酸)，在密封的水解管中，于105115水解20h以上。用鹽酸水解后，得到的氨基酸不消旋，但色氨酸全部被破壞，絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸和半胱氨酸也有某種程度被破壞，對這些氨基酸的破壞率，需要用不同水解時(shí)間測定這些氨基酸的含量，然后外推到水解時(shí)間為0時(shí)，算得的氨基酸含量，即代

9、表了真正數(shù)值 ；堿水解法 堿水解法是鹽酸水解法的互補(bǔ)法，堿水解時(shí)，可使多數(shù)氨基酸遭到破壞，僅色氨酸是穩(wěn)定的，所以此法僅限于測定色氨酸的含量；磺酸水解法 為鹽酸水解法的改進(jìn)法，磺酸是非氧化性的強(qiáng)酸，此方法可以測定除半胱氨酸、胱氨酸和蛋氨酸以外的所有氨基酸； 酶水解法 是用一組混合的蛋白酶水解肽鏈，可以保持所有的組成氨基酸不被破壞，缺點(diǎn)是水解不完全，另外，因?yàn)槊副旧硪彩堑鞍踪|(zhì)，對樣品的測定結(jié)果會有干擾。 二.氨基酸的定性與定量 一般采用紙層析法、薄層層析法、離子交換柱層析法等進(jìn)行分析. 柱前衍生法、柱后衍生法 .三.高效液相色譜法(HPLC)的分析測定 反應(yīng)原理:經(jīng)過水解后的所有氨基酸，在室溫下與

10、6氨基喹啉N羥基琥珀酰亞胺基氨基甲酸酯(6aminoqulnolylnhydroxysuccinimidycMrbai21&tc，AQC)很快發(fā)生衍生反應(yīng)，生成穩(wěn)定的熒光衍生物AQc氨基酸，它可以經(jīng)WatcrsAccQTag分析柱分離氨基酸，用熒光檢測器測定。儀器設(shè)備(1)分析天平：精確至0.1mg (2)恒溫干燥箱。(3)濃縮器或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。(4)PH計(jì)。(5)超聲波水浴(6)渦旋發(fā)生器。(7)高效液相色譜儀。(8)AccQTag氨基酸分析柱。(9)微量移液管。(10)玻璃器皿：水解管、衍生試管、量筒、容量瓶刻度試管、移液管等。5流動相A溶液 稱19.04g分析純?nèi)宜徕c，加1L純水溶解，

11、用稀磷酸(1：1，：)調(diào)整pH至5.2，加1 m1 EDTA溶液(1 mgm1)。加0.1g疊氮化鈉，加2.37mL三乙胺，用磷酸緩沖液調(diào)整PH至4.95,用0.45um濾膜過濾。使用超聲脫氣。 6流動相B溶液 經(jīng)0.45um濾膜過濾的色譜純乙氰與超純水按3：2(V：V)比例配制。在超聲水浴中脫氣20秒。76mol鹽酸水解液 將優(yōu)級純的鹽酸與蒸餾水按照l：1；(V：V)比例混和均勻即可。8過甲酸溶液 88%甲酸與30%的過氧化氫按9:1(v:v)室溫下放置1h后移至0下保存。9氫溴酸(40，分析純)10從AQC試劑四。測定步驟1樣品的前處理(1)分析樣品的準(zhǔn)備：待測飼料樣品必須具有代表性。用于

12、氨基酸分析的試樣需經(jīng)磨碎，通過100目篩孔。由于氨基酸在氧及碳水化合物存在下易被破壞(Maillard反應(yīng)，賴氨酸碳水化物)，在粉碎樣品時(shí)其溫度應(yīng)低于50。樣品磨碎后，可增加其表面積。應(yīng)在室溫下放24小時(shí)，使其含水量恒定。樣品用量：通常是用樣品中氮的含量來計(jì)算適用于氨基酸分析的樣品用量，樣品中氮的含量決定分析樣品的用量。樣品用量(g)32mgN(CPXO.16X10) 。為使測定的各種氨基酸在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，應(yīng)使供分析的氨基酸溶液的濃度與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液的濃度相近。 一般用于氨基酸分析的樣品中應(yīng)含有約32mg的氮。同時(shí)要測定樣品的干物質(zhì)含量，可由分析天平(精確至0.1mg)稱量。 (2)過

13、甲酸水解處理：在蛋白質(zhì)酸水解過程中，常伴有(半)胱氨酸及蛋氨酸的損失，為避免這種損失，通?？捎眠^甲酸氧化反應(yīng)使(半)胱氨酸及蛋氨酸分別轉(zhuǎn)變成半胱磺酸及甲硫氧砜，這兩種化合物在酸水解中是穩(wěn)定的，且易與其他氨基酸分離。待過氧化反應(yīng)結(jié)束后，要去除過量的甲酸，可以將加入HBr時(shí)應(yīng)在冰浴中，邊攪動邊小心加入，每隔5min加數(shù)滴。加幾滴丁醇去除氣泡，如樣品很快澄清即可 樣品的酸水解法在氧化與未氧化兩種樣品中分別加入一定量的鹽酸煮沸回流水解小時(shí)未氧化的樣品水解時(shí)要充氮?dú)庾詈笏馔瓿珊笠诙嗫撞Ａ魃线^濾得到分析液水解工作液的制備分析掖濃縮至干后加入氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液 貯存?zhèn)溆醚苌磻?yīng)生成各種氨基酸衍生物5色

14、譜條件及分離(梯度洗脫)(1)柱溫：對于一般缸基酸分析為37，含硫氨基酸一般為47 。 (2)檢測器：熒光檢測器(激發(fā)波長245nm，發(fā)射波長39anm)或紫外檢測器(波長254nm)。(3)通過不同的梯度洗脫進(jìn)行氨基酸的分離：HP系統(tǒng)配置不同，所 用梯度表不同 五氨基酸的自動分析經(jīng)典的氨基酸分析方法是采用離子交換層析來分離各種氨基酸，分離后的氨基酸與茚三酮進(jìn)行柱后反應(yīng)，然后定量測定，但茚三酮法靈敏度差、檢測限較低，樣品中氨基酸含量在 200 5pmol 時(shí)，即僅能在納克（ ng ）水平上進(jìn)行檢測，當(dāng)樣品中氨基酸含量低于 00pmol 時(shí)，與柱前衍生法相比，分析的準(zhǔn)確性要降低一個數(shù)量級，而且此

15、法受到流動相速度低這一限制，分析速度相對較慢。.分離測定原理其強(qiáng)弱順序?yàn)椋簤A性氨基酸芳香族氨基酸中性氨基酸酸性氨基酸及羥基氨基酸。測定步驟采樣除了純蛋白等本身均勻的樣品外，一般樣品特別是均勻度差的樣品，應(yīng)有幾毫克原始風(fēng)干樣品，使樣品具有代表性。粉碎原始風(fēng)干樣品要先進(jìn)行粗粉碎，棍勻后用四分法縮分取出約 5g, 再用高速離心磨細(xì)磨，使其顆粒全部能通過 80 日篩孔，應(yīng)避免磨溫過高對某些氨基酸的損失。磨好的樣品混勻，裝人樣品瓶中，保存于干燥陰涼處。脂肪含量 高的樣品脫脂。為便于換算和對比，在樣品水解的同時(shí)，應(yīng)測定樣品的含水量和蛋白質(zhì)含量。樣品的水解處理鹽酸水解法除色氨酸和胱氨酸以外的氨基酸測定樣品的

16、水解用此法。 原理：常規(guī)水解法是使飼料蛋白在 110 、濃度 （ HCL ) 為 6mol / l 鹽酸溶液作用下，水解成單一氨基酸，再經(jīng)離子交換色譜法分離，并以荀三酮做為個 柱后衍生測定。水解過程中色氨酸全部壞不能測定。胱氨酸和蛋氨酸部分被氧化，使測定結(jié)果偏低堿水解法分析色氨酸樣品的水解用此法。 原理：由于酸水解對色氨酸有破壞作用，因此需采用堿水解法來測定色氨酸，但堿水解會破壞精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸及半胱氨酸等，故本法只限于測定色氨酸，色氨酸在堿性條件下很穩(wěn)定。過甲酸氧化處理一鹽酸水解結(jié)合法含硫氨基酸 （半）胱氨酸、蛋氨酸樣品的水解用此法。 原理：由于在蛋白質(zhì)酸水解過程中，常伴有（半

17、）胱氨酸和蛋氨酸的損失，不易得到準(zhǔn)確的結(jié)果。通?？捎谩斑^甲酸”氧化法預(yù)處理，使胱氨酸及蛋氨酸分別轉(zhuǎn)變成半胱磺酸及甲硫氧砜，這兩種化合物在水解過程中是穩(wěn)定的，且易于與其他氨基酸分離。然后氰溴酸或偏重業(yè)硫酸鈉終止反應(yīng)，再進(jìn)行普通的酸水解后，以荀三酮做柱后衍生劑，經(jīng)離子交換色譜法分離測定。酶水解法對酸不穩(wěn)定的樣品，如天門冬酰胺、谷氨酰胺及色氨酸的水解用 此法。 原理與特點(diǎn)：天門冬酰胺、谷氨酰胺在酸水解時(shí)會分別生成天門冬氨酸、谷氨酸，測定的天門冬氨酸、谷氨酸應(yīng)當(dāng)是分別含有天門冬酰胺、谷氨酰胺的部分。要想了解天門冬酰胺、谷氨酰胺的數(shù)量時(shí)，通過酶水解法可以實(shí)現(xiàn)。催化蛋白質(zhì)水解的效率高，極少的酶可以催化較多

18、底物；水解蛋自質(zhì)的酶有木瓜蛋白酶、脯氨酸膚酶、氨基膚酶、竣基膚酶、胰糜蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶等酸提取法賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸等游離氨基酸的測定用此法。 測定原理：飼料中添加的游離氨基酸可以用稀鹽酸溶液直接進(jìn)行提取處理，然后經(jīng)離子交換色譜分離，進(jìn)行測定。分離洗脫經(jīng)水解獲得的氨基酸的洗脫是用不同 pH 的緩沖液來進(jìn)行的，一般標(biāo)準(zhǔn)分析（蛋白質(zhì)水解物）采用檸檬酸鈉鹽作緩沖溶液，如果分析生理體液（尿、血漿、（乳汁、腦脊髓液及植物組織提取液），則采用檸檬酸鋰鹽作緩沖溶液，因?yàn)樘扉T冬酞胺及谷氨酞胺于鈉鹽緩沖液中，在圖譜上不能與天門冬氨酸和谷氨酸分開，兩者重疊成一個峰，不能得出各自的結(jié)果。標(biāo)準(zhǔn)分析

19、（蛋白質(zhì)水解分析）一般采用 4 種緩沖液：緩沖液 l 的 pH 為 3 . 3 ，可以沖洗出酸性氨基酸；緩沖液 2 的 pH 為 3 . 3 ，主要用于沖洗出中性氨基酸，緩沖液 3 的 pH 為 4 . 3 ，主要用于沖洗異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸；緩沖液 4 的 pH 為 4 . 9 , 主要用于堿性氨基酸的洗脫。.分析結(jié)果洗脫出來的氨基酸，與另一通路的茚三酮溶液結(jié)合，在一定溫度條件下，便呈顏色反應(yīng)，一般氨基酸Ruheman 紫色，但脯氨酸呈黃色，所以氨基酸自動分析儀一般都設(shè)有兩個頻道：一個頻道是 570 nm 波長，另一個頻道為 440 nm 波一長。第二節(jié)脂肪酸的測定 測定飼料脂

20、肪中的脂肪酸主要有兩種情況：一種是總酸度的測定，可作為衡量飼料脂肪酸敗程度的標(biāo)志另一種情況是對個別重要脂肪酸的測定。例如，油酸、亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸等具有重要生理作用，常作為重要營養(yǎng)物質(zhì)加以測定，而芥酸等則作為有害物質(zhì)加以測定。第二章 飼料中一般成分的分析(一)總酸度的測定1原理 用中性乙醇和乙醚混合溶劑溶解試樣，以酚酞為指示劑，用氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，最后以lOOg樣品消耗.1molL氫氧化鉀毫克數(shù)表示。2儀器設(shè)備(1)實(shí)驗(yàn)室用植物樣品粉碎機(jī)成研缽。（2)分樣篩：40目。（3)滴定管：25ml。（4)三角瓶：250m1。（5)天平：感量O.0001g（6)帶玻璃塞錐形瓶。(7)容量瓶、

21、移液瓶、稱量瓶、試劑瓶3試劑(1)0.O1molL氫氧化鈉95乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液(2)0.1酚酞乙醇溶液。(3)苯。4操作步驟(1)稱重：準(zhǔn)確稱取10一20g樣本(準(zhǔn)確至0.001g)放入錐形瓶中，準(zhǔn)確加入50mL苯，加塞振蕩幾秒鐘后，松開瓶塞放出產(chǎn)生的苯蒸氣再加振蕩30分鐘。 (2)滴定：待溶液靜止澄清后，準(zhǔn)確吸取20ml溶液轉(zhuǎn)入250mL三角瓶中，加2滴酚酞指示劑，立即用0.Olmo1L。氫氧化鈉乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，直至溶濃呈粉紅色并在0.5分鐘內(nèi)不褪色為終點(diǎn)。記錄消耗的氫氧化鈉乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液體積。同時(shí)作空白試驗(yàn)C: 堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的摩爾濃度v1: 樣品溶液總體積(mL) 2: 滴定時(shí)所取樣品溶液體積(

22、mL) W: 樣品質(zhì)量(g)56.1: 氫氧化鉀的摩爾質(zhì)量。 說明：取樣后應(yīng)即時(shí)進(jìn)行測定，不宜久放，否則脂肪分解會使酸度上升提取脂肪酸所用的溶劑有水、乙醇乙醚(1：1)混合液、苯等青綠飼料中含低級脂肪酸(如蘋果酸、檸檬酸、草酸、酒石酸、琥珀酸等)較多，可用煮沸冷卻后的蒸餾水提取 但高級脂肪酸不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑，故谷物、油餅、動物性飼料的酸度測定則選擇有機(jī)溶劑作提取劑而有機(jī)溶劑中乙醚揮發(fā)性較強(qiáng)且溶解能力稍差通常用苯較多。(二)脂肪酸的測定原理 脂肪酸具有一定揮發(fā)性，可用氣相色諧法直接測定。但高級脂肪酸的沸點(diǎn)較高，高溫氣化不僅測定速度慢，而且一些不飽和脂肪酸易發(fā)生分解，故通常采用甲酯化，使之

23、轉(zhuǎn)變?yōu)榈头悬c(diǎn)衍生物后進(jìn)行測定。常用的甲酯化方法有兩種：一種是在甲醇溶液中，以B3為催化劑，使脂肪酸的羧基生成甲酯；另一種是在濃硫酸作用下，與甲醇反應(yīng)生成甲酯 2儀器設(shè)備(1)實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽(2)分樣篩:40日(3)分析天平：感量0.0018(4)氣相色譜儀，具雙氫焰檢測器(5)色譜柱：直徑0.4cm、 長2m的不銹鋼管柱；硅烷化擔(dān)體為chrmosorbW80100目，經(jīng)酸洗和二氯二甲基硅烷處理；固定液為20一30聚乙二醇丁二酸酯(DEGS)或1015阿皮松(6)索式肪提取器及回流冷凝裝置(7)KD濃縮器(8)恒溫水浴(9)分液漏斗 3試劑 （）三氯化硼甲醇溶液：將10g三氧化硼乙醚溶

24、液與100g無水甲醇混合而成。（）1碳酸鈉溶液（）0.5molL氫氧化鉀乙醇溶液（）石油醚：沸程30一60。（）乙醚。（）無水硅酸鈉：200下烘1h，放干燥器中冷卻，備用。（）脂肪酸甲酯或標(biāo)樣4操作步驟(1)色譜柱的制備：稱取l00g左右的硅烷化擔(dān)體，放入溶于丙酮或氯仿的20一30聚乙二醇丁二酸酯(DEGS)或lo15阿皮松L溶液中，攪拌使固定液均勻地涂于擔(dān)體表面，倒出多余的溶液。擔(dān)體放瓷盤中，置于通風(fēng)櫥中晾干。將色譜柱先用10氫氧化鈉溶液、甲醇和苯分別清洗后，烘干。在色譜柱一端用玻璃棉塞住，抽氣減壓，小心裝入涂好固定液的擔(dān)體，并不時(shí)輕輕敲擊柱子，使填充的擔(dān)體均勻而緊密，裝滿后用玻璃棉塞住另一

25、端柱口。將色譜柱接于儀器裝置，于200柱溫下，用測試時(shí)載氣流量的一半老化36h。(2)樣品溶液的制備：準(zhǔn)確稱取10g左右樣品(準(zhǔn)確至0.001g)。用脫脂濾紙包好，置于100150恒溫箱中烘3h，取出放入索氏脂肪提取器中，用石油醚提取816h。提取完畢后，將提取液濃縮至10m左右，全部轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加10m1碳酸鈉溶液，振動，游離脂肪酸即以鈉鹽形式進(jìn)入水層，靜置分層，分出水層于另一分液漏斗中，石油醚再用10ml碳酸鈉溶液提取1次，合并兩次提取液，用2mol。鹽酸酸化至pH3(此時(shí)脂肪酸又游離而出)再用石油醚提取23次，每次用5m，合并石油醚于另一分液漏斗中，用水洗滌至 中性(pH試紙檢查)分

26、出水層，用2g無水硅酸鈉燥，將石油醚轉(zhuǎn)入50mL燒瓶中，在水浴上濃縮，即得游離脂肪酸。 (3)提取混合脂肪酸(游離肪酸和結(jié)合脂肪酸)：準(zhǔn)確稱取2g樣品，按前述步驟用脂肪提取器提出脂類，然后在提取液中加入0.5molL氫氧化鈉乙醇溶液20 m1，加熱回流1h(8090)，蒸出大部分乙醇后，加水30mL稀釋。用乙醚振搖提取2次，每次用量10m，以除去不皂化物。用稀酸酸化(pH3)，用乙醚提取脂肪23次，每次用量10m。合并乙醚層，用水洗滌至中性，加無水硅酸鈉干燥。轉(zhuǎn)入50m燒瓶中，在水浴上濃縮，即得混合脂肪酸。(4)甲酯化：在上述燒瓶中加入35m三氟化硼甲醇溶液，裝上回流冷凝管，在80水浴上加熱1

27、0min，取下冷卻，轉(zhuǎn)入100m分液漏斗中。燒瓶分別用15m飽和食鹽水和10m石油醚沖洗，沖洗液并入分液漏斗中。振搖5min，棄去水層，再用10m飽和食鹽水洗滌1次，棄去水層。將石油醚用無水硅酸鈉干燥后，放入KD濃縮器中，分液漏斗用5ml石油醚沖洗2次，洗后的石油醚也放入濃縮器中，減壓濃縮至一定體積。測定時(shí)的色譜條件為柱溫從150開始，以68min程序升溫至180200 檢測器溫度為250 ，氣化室溫度為250 氮?dú)饬魉?0mlmin，氫氣流速40mLmin，空氣流速40mLmin。(5)樣品測定：用微量注射器準(zhǔn)確吸取210ul(含各種脂肪酸10一50ug)樣品溶液，注入基線穩(wěn)定的氣相色譜儀中

28、，按上述色譜條件測得各組分色譜圖和保留時(shí)間，再準(zhǔn)確吸取一定體積的標(biāo)樣溶液或混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。測定測量標(biāo)祥和樣品溶液各組分的峰面積并求得質(zhì)量校正因子X-肪酸含量(R)； Ai -被測組分的峰面積；As-內(nèi)標(biāo)組分的峰面積； s-內(nèi)標(biāo)溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量Wm-樣品質(zhì)量(e)；F被測組分的校正值各組分的質(zhì)量校正因子：乳酸16，草酸605富馬酸26。丁二酸106，戊二酸軟脂酸257油酸2亞油酸6 72，亞麻酸709。 各種脂肪酸在色譜圖中的出峰順序按碳原子數(shù)的增加順序排列，當(dāng)破原了數(shù)相等時(shí)則隨不飽和度的增加而推延。第三章 飼料中礦物質(zhì)微量元素分析第一節(jié) 有機(jī)物的破壞方法(樣品的預(yù)處理)一.干灰化法（Dry as

29、hing）簡稱灰化法或灼燒法，是一種常用的有機(jī)物質(zhì)破壞法，適用于除汞、砷以外的各種金屬類金屬元素。1.直接灰化法：將樣品放在坩堝中，在高溫灼燒下，使樣品脫水、焦化，在空氣中氧的作用下，使樣品中的有機(jī)物氧化分解成二氧化碳、水和其它氣體而揮發(fā)，剩下無機(jī)物（鹽類或氧化物），用適當(dāng)溶劑溶解定容，供測定用。 加助灰化劑灰化法：常用的助灰化劑有氧化鎂、硝酸鎂、氫氧化鈉、氫氧化鈣等。加入助灰化劑，可使樣品呈疏松狀態(tài)，加速灰化過程，并使灰化完全。 助灰化劑還可和被測物質(zhì)結(jié)合成難揮發(fā)的鹽類，防止灰化過程中被測物質(zhì)的損失，如氧化鎂或硝酸鎂能使砷變成難揮發(fā)的焦砷酸鎂（Mg2As2O7），氫氧化鈣則轉(zhuǎn)變成難揮發(fā)的Ca

30、F2等。干式灰化法的優(yōu)點(diǎn) 其它試劑少，減少了操作過程污染的可能性，因而空白值低；樣品分解徹底，操作簡便，儀器設(shè)備簡單，一次可以處理大的樣品。缺點(diǎn)： 干灰費(fèi)時(shí)，一般500550需4 hr，600需1hr2hr； 長時(shí)間的高溫加熱易使一些被測物質(zhì)揮發(fā)； 瓷坩堝能吸附金屬，可造成結(jié)果偏低。干灰化法操作的注意事項(xiàng) 灰化前應(yīng)進(jìn)行樣品的預(yù)炭化，預(yù)炭化系指將坩堝內(nèi)的樣品先放在文火上加熱，直至樣品變黑，然后轉(zhuǎn)入控溫茂福爐內(nèi)550灰化，預(yù)炭化的目的在于防止樣品因急劇灼燒引起的殘灰飛散。 瓷坩堝對金屬有吸附作用，特別是新的瓷坩堝，因此在使用時(shí)應(yīng)選用用過的坩堝。 如果樣品在灰化后仍不變白，可在冷卻后沿坩堝邊緣加入少

31、量蒸餾水濕潤，再使其充分干燥后繼續(xù)灰化。加水的目的是有助于灰分溶解，解除低熔點(diǎn)灰分對炭粒的包裹。 2、濕灰化法（Wet digestions）簡稱消化法，也是常用的樣品無機(jī)化方法之一。系利用氧化性強(qiáng)酸，結(jié)合加熱將有機(jī)物質(zhì)破壞使待測的無機(jī)物分解釋放出來并形成難揮發(fā)的無機(jī)化合物供測定用。它適用于易揮發(fā)散失的礦物質(zhì)，除汞外，大多數(shù)金屬均有良好效果。（1）常用的氧化性強(qiáng)酸在消化過程中常用的氧化性強(qiáng)酸有濃硝酸、濃硫酸和高氯酸三種。 濃硝酸 通常使用的濃硝酸，其濃度為6568%（ml/ml），有較強(qiáng)的氧化性，濃HNO3在溫?zé)釛l件下分解成O2、NO2和H2O，NO2進(jìn)一步分解成O2及NO。沸點(diǎn)較低，硝酸易揮

32、發(fā)，因而需要經(jīng)常放冷補(bǔ)充，消化完成后消化液中常含有較多氮氧化物，必要時(shí)需加熱或加水加熱除去。 高氯酸 冷的高氯酸無氧化能力，但熱的高氯酸卻是一種極強(qiáng)的氧化劑，氧化能力強(qiáng)于硝酸和硫酸。這是由于高氯酸在加熱條件下能產(chǎn)生氧和氯的緣故。4HClO4 7O2+2Cl2+H2O應(yīng)予注意的是，HClO4在高溫下直接接觸還原性較強(qiáng)的物質(zhì)如酒精、脂肪、糖類、甘油等有發(fā)生爆炸的可能，故一般不單獨(dú)使用，并且勿使消化液燒干，以免發(fā)生危險(xiǎn)。 硫酸 熱的濃硫酸具有一定的氧化作用。受熱分解時(shí)，放出氧、二氧化硫和水。H2SO4 O2+SO2+H2O硫酸較硝酸、高氯酸弱得多，但硫酸沸點(diǎn)高，不易揮發(fā)。（2）常用的消化方法在實(shí)際工

33、作中，除了單獨(dú)使用濃硫酸的消化法外，經(jīng)常采取兩或兩種以上氧化性強(qiáng)酸配合使用，利用各種酸的特點(diǎn)，取長補(bǔ)短，以達(dá)到安全快速、完全破壞有機(jī)物的目的。 硝酸-硫酸濕消化法將5g樣品置于100ml的凱氏燒瓶中，隨之加入與濃硝酸等體積的蒸餾水，緩緩加熱至沸騰，繼續(xù)加熱至容積減半。冷卻后逐漸加入10ml硫酸，再加熱，待內(nèi)容物變黑，既加入少量濃硝酸，為防止過度炭化，加熱必須適度，整個消化過程必須存在少量的硝酸，加熱至發(fā)煙而不再變黑，最后至溶液無色，冷卻、用蒸餾水稀釋至一定體積備用。本法可縮短炭化過程，減少消化時(shí)間，反應(yīng)速度適中。但因消化過程中使用硫酸，而堿土金屬的硫酸鹽溶解度較小，故本法不宜作堿土金屬的分析。

34、 硝酸-高氯酸濕消化法 將含有不超過2g干物質(zhì)的樣品至于200ml的凱氏燒瓶中，加入25ml硝酸（相對密度為1.42）緩慢蒸煮沸30min，冷卻、加15ml高氯酸（60%w/w）。緩慢煮沸至無色或近乎無色，繼續(xù)沸騰1hr（注意防止瓶中內(nèi)容物蒸干）。冷卻，用蒸餾水稀釋至適當(dāng)體積備用。 本法氧化能力強(qiáng)，反映速度快，炭化過程不明顯；消化溫度較低，揮發(fā)損失少。但由于硝酸和高氯酸加熱后均容易揮發(fā)，故如溫度過高、加熱時(shí)間過長，容易燒干，并可能引起殘余物燃燒或爆炸。本法對某些還原性較強(qiáng)的樣品，如酒精、甘油、油脂和大量磷酸鹽存在時(shí)，不宜采用。 濕消化法的特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)：所用時(shí)間短，溫度較低，因而揮發(fā)損失較少，同時(shí)

35、應(yīng)用玻璃儀器（凱氏燒瓶），吸附損失也較少。 缺點(diǎn)：使用試劑較多，易造成高的試劑空白值，操作較復(fù)雜，危險(xiǎn)性大，不便于大量樣品的處理。為此，美國分析化學(xué)家協(xié)會（AOAC）推薦一種濕消化法和干灰化法相結(jié)合的消化方法，其過程如下： 1g樣品置于上釉的高形陶瓷坩堝內(nèi)，500灰化2hr，冷卻，用10滴蒸餾水濕潤，然后小心加入34ml硝酸（1:1），100200下蒸發(fā)除去多余的硝酸，將坩堝轉(zhuǎn)至馬福爐內(nèi)，500灰化1hr，冷卻、用100ml鹽酸（1:1）溶解并定量轉(zhuǎn)至 50ml的容量瓶中定容。 濕消化法的注意事項(xiàng) 消化所用試劑要純，同時(shí)必須做空白試驗(yàn)，以扣除消化試劑對測定數(shù)據(jù)的影響。 樣品中加入硫酸、硝酸后應(yīng)

36、先用文火加熱，以防反應(yīng)過于劇烈而產(chǎn)生大量泡沫，待反應(yīng)平穩(wěn)后方可加大火力，但整個消化過程的溫度仍應(yīng)嚴(yán)格控制，以防溶液濺出或消化不完全。 消化過程中一定要保證瓶中有少量的液體，以防發(fā)生危險(xiǎn)。在補(bǔ)充氧化劑時(shí)要先停止加熱，并稍微放冷后，然后沿瓶壁緩緩加入，以防反應(yīng)過于劇烈而造成噴濺。第二節(jié) 原子吸收光譜分析一.原子吸收光譜分析法，簡稱 AAS ，是基于光源（空心陰極燈）輻射出具有待測元素特征譜線的光波，當(dāng)通過試樣所產(chǎn)生的原子蒸汽時(shí)，被蒸汽中待測元素的基態(tài)原子所吸收，根據(jù)輻射光強(qiáng)度減弱的程度，即可求出試樣中待測元素的含量。在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，試樣的吸光度與其中待測元素的含星之間服從朗伯一比爾定律。因此，

37、只需測定試樣溶液的吸光度和相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，即可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度計(jì)算出試樣中待測元素的含量。這就是原子吸收光譜分析法定量測定的基本原理。二. 儀器的組成及其主要作用 原子吸收光譜分析儀主要由光源、原子化系統(tǒng)、分光系統(tǒng)、測光系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)和顯示系統(tǒng)五大部分組成( l ）光源。包括元素?zé)簦招年帢O燈）和燈電源兩個部分，其作用是為儀器的光學(xué)系統(tǒng)提供一個輸出穩(wěn)定、發(fā)射強(qiáng)度大、具有特定波長和譜線寬度窄的銳線光潛。 ( 2 ）原子化系統(tǒng)。使待測試樣在儀器中變?yōu)榛鶓B(tài)原子的裝置，其作用是保證空心陰極燈發(fā)射的待測元素特征譜線，能被試樣中相應(yīng)元素的基態(tài)原子充分而有效地吸收。包括火焰原子化器和無火焰原子化

38、器兩種.( 3 ）分光系統(tǒng)。由衍射光柵（或色散棱鏡）和反射鏡等組成。其主要作用是將透過原子化系統(tǒng)的復(fù)合光，經(jīng)過衍射光柵的色散作用，展開成按照波長順序排列的單色光，并通過掃描機(jī)構(gòu)把待測元素的原子吸收信號送人光電倍增管進(jìn)行檢測。 ( 4 ）測光系統(tǒng)。包括光電倍增管、負(fù)高壓電源和放大器等部件，其作用是將從分光系統(tǒng)傳送過來的原子吸收信號接收下來，轉(zhuǎn)換成光電流并經(jīng)過放大器放大后輸出。 ( 5 ）顯示系統(tǒng)。主要包括數(shù)據(jù)處理、顯示器和打印機(jī)，其作用是將測光系統(tǒng)輸出的電信號顯示或記錄下來，也可以根據(jù)特定的數(shù)學(xué)公式進(jìn)行計(jì)算和處理，并把處理結(jié)果用一定的方式顯示和打印出來。三. 定量測定方法 原子吸收光譜法的常用測

39、定方法包括標(biāo)準(zhǔn)曲線法、直接比較法、緊密內(nèi)插法和標(biāo)準(zhǔn)加人法等，其從本原理都是利用朗伯一比爾定律，由已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液求得待測試樣溶液的濃度。 1.標(biāo)準(zhǔn)曲線法 儀器工作條件。測定波長： 357 . 9 nm ；燈電流： 3 mA ；電壓： 370 - 38oV ；燃燒器高度： 0 . 7 cm ；空氣流量： 320L h 一1；乙炔流量： 60L h -1；提升量： 8 mL min-1。 實(shí)驗(yàn)步驟 a 試樣分解液的制備：準(zhǔn)確稱取飼料或糞樣約 1g，精確至 0.0001g ，置于 30ml ，瓷柑禍中，在電爐上小火加熱炭化，待無煙后移至高溫爐中，在 550 一 600 下灰化 3h ；或稱取試樣約

40、 5g，置于 100 mL 硬質(zhì)、高型燒杯中進(jìn)行濕式消化。待冷卻后，加入5mL 濃硝酸和 l-2mL 濃鹽酸，蓋上坩堝蓋或表面皿，在電砂盤上加熱消化，至殘?jiān)優(yōu)闊o黑色炭粒為止，再加熱至溶液約為 1 ml ，。冷卻后，加人 3-5 ml蒸餾水，加熱至近沸，過濾于 25 ml ，容從瓶中，重復(fù)淋洗殘?jiān)?3 一 5 次，濾液一并回收人容量瓶中，再用蒸餾水定容至刻度。取上清液在原子吸收光譜儀上測定鉻的含量。第三節(jié) 汞的測定 冷原子吸收分光光度法 1.原理 樣品經(jīng)硫酸硝酸消化，使汞轉(zhuǎn)變成離子狀態(tài)，在強(qiáng)酸性溶液中以氯化亞錫（SnCl2）將汞離子還原成元素汞，以氮?dú)饣蚋稍锴鍧嵖諝庾鬏d體將汞吹出，于253.7

41、nm波長處進(jìn)行原子吸收測定，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。2.特點(diǎn) 具有較高的靈敏度，干擾少和操作簡便等特點(diǎn)，是國家標(biāo)準(zhǔn)法，適合于汞含量低于1mg/kg的飼料樣品測定。 雙硫腙比色法雙硫腙比色法是經(jīng)典法，干擾因素多，需分離或掩蔽干擾離子，操作較繁，需嚴(yán)格操作才能得到滿意結(jié)果，適用于測定含汞量高于1mg/kg的飼料樣品。1、原理 樣品經(jīng)消化后，汞離子在酸性溶液中與雙硫腙作用生成橙色色絡(luò)合物，經(jīng)氯仿萃取后，于490nm波長下與標(biāo)準(zhǔn)系列比色定量。3、試劑 硝酸。 硫酸。 氨水。 三氯甲烷：不應(yīng)含有氧化物。 1N硫酸 量取5ml硫酸，緩緩倒入150ml水中，冷后加水至180ml. 5%liusuan 量取5ml

42、硫酸，緩緩倒入90ml水中，冷后加水至98ml。 麝香草酚藍(lán)指示劑 0.1%乙醇溶液。 20%鹽酸羥胺溶液 0.05%三氯甲烷溶液為雙硫腙溶液：保存于冰箱中。 雙硫腙使用液：吸取1.0ml0.05%雙硫腙三氯甲烷溶液，加三氯甲烷至10ml，混勻。用1cm比色皿，以三氯甲烷作參比，于波長510nm下測吸光度，用下式算出配制100ml雙硫腙使用液（透光率）所需0.05%雙硫腙三氯甲烷溶液的ml數(shù)（）。然后取ml0.05%雙硫腙三氯甲烷溶液用三氯甲烷稀釋至100ml。 汞標(biāo)準(zhǔn)溶液 精確稱取0.1354g經(jīng)干燥過的二氯化汞，加1N硫酸溶解后，移入100ml容量瓶中，并水稀釋至刻度。此溶液每1ml相當(dāng)于

43、1mg汞。 汞標(biāo)準(zhǔn)使用液 吸取1.0ml汞標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于100ml容量瓶中,加1N硫酸稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于10mg。再吸取此液5.0ml于50ml容量瓶中,加1N硫酸稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于1mg。、操作方法 將消化液在電爐上煮沸10min，除去二氧化氮等，放冷。向消化液及試劑空白加5%高錳酸鉀溶液至溶液呈紫色，然后再加、1ml20%鹽酸羥胺溶液使紫色褪去，加2滴麝香草酚藍(lán)指示劑，用氨水調(diào)節(jié)pH，使橙紅色變?yōu)槌赛S色（pH1-2）。定量移入分液漏斗中。 吸取汞標(biāo)準(zhǔn)使用液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml（相當(dāng)于0、0.5、1.0、2.0、3.0、4

44、.0、5.0、6.0mg鉛），分別置于125ml分液漏斗中，各加10 ml5%硫酸，加水至40ml，混勻。再各加1ml20%鹽酸羥胺，放置20min。%硝酸溶液至20ml。于樣品、試劑空白和標(biāo)準(zhǔn)液的分液漏斗中加5.0ml雙硫腙使用液，劇烈振搖2分鐘，靜置分層后，三氯甲烷層經(jīng)脫脂棉濾入1cm比色杯中，以三氯甲烷作參比，于波長490nm測吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去零管吸光度，繪制工作曲線。根據(jù)樣品和試劑空白的吸光度，在工作曲線上求出其含量。5、結(jié)果計(jì)算M汞（mg/Kg） =式中：A1樣品消化液中汞的含量，ug； A0試劑空白液中汞的含量，mg； m樣品質(zhì)量，g；第四章 飼料中維生素的測定第一節(jié) 脂

45、溶性維生素的分析測定 目前，已被確定的維生素有 14 種，按其溶解性將其分為脂溶性維生素和水溶性維生索兩大類。脂溶性維生素包括維生素 A 、維生素 D 、維生素 E 、維生素 K ，水溶性維生素包括維生素 Bl 、維生素 B ：、維生素餞、維生素 Bl ：、煙酸、泛酸、葉酸、維生素 C 、生物素、膽堿。同一種維生素可能有多種不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)，他們在動物體內(nèi)表現(xiàn)出不同的生物活性，有些維生素作為飼料添加劑使用的維生素制劑，由于其主要維生素形式不穩(wěn)定，常用其穩(wěn)定的化合物形式，如維生素 A 的商品制劑就有維生素 A 乙酸酯和維生素 A 棕櫚酸酯。 一.目前測定維生素的方法主要有： 物理化學(xué)法； 微生物法

46、； 生物化學(xué)法。其中，以物理化學(xué)分析法應(yīng)用最廣，它包括分光光度法、熒光分析法、薄層層析法、電化學(xué)分析法、氣相色譜法、液相色譜法。 二.維生素的采樣與制樣 維生素在一般飼料樣品中含雖較低，且分布不均勻，故采樣量較大。對于一些個體較大的樣品，如紅薯、蘿卜、胡蘿卜以及一些瓜類飼料，更應(yīng)重視其采樣方法。這些樣品的向陽和背陰部位的維生素含量有較大差異，可將其縱向切成 8 等份，然后從各份中縱向切取 l 片混合，或從中心軸線成 450 橫切面上切取 1 片混合，然后切碎縮分。對于葉片較大的牧草、野菜、藻類等，采樣時(shí)一定應(yīng)注意其光照方向及葉叢明暗，使之有代表性。三、飼料添加劑維生素 A 的測定 1.適用范圍

47、本方法適用于合成維生素 A 乙酸酯，加人適量抗氧化劑，采用明膠為主要輔料制成的微粒。 2.原理維生素 A 乙酸酯經(jīng)皂化轉(zhuǎn)化為游離的維生素 A ，用有機(jī)溶劑提取后進(jìn)行 HPLC 分離，外標(biāo)法測定維生素 A 含最。 3.儀器設(shè)備 超聲波恒溫水浴。 高速離心機(jī)。 高效液相色譜儀。 4.試劑和溶液 無水乙醇。 全反式維生素 A 乙酸酯對照品。 堿性蛋白酶（酶活力每克大于 40 000 單位）。0.1 %氨水溶液。 乙氰：色譜純。重蒸餾水（液相色譜專用）。5.測定方法 ( l ）對照品溶液的制備：稱取約 85 一 90mg （準(zhǔn)確至 0.0001g ）全反式維生素 A 乙酸醋對照品，置于 50ml 棕色

48、容量瓶中，加人 30 一 40ml 無水乙醇，置于超聲波水浴中處理 2min 使之完全溶解，用無水乙醇稀釋到刻度，搖勻。精密吸取此溶液 10.00ml 于 100ml 棕色容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻待測。第四章 飼料中維生素的測定( 2 ）試樣溶液的制備：精確稱取試樣約 0.29 （準(zhǔn)確至 0 . 0001g) ，置于 200ml棕色容量瓶中，加人 200mg 的堿性蛋白酶，0.1 氨水溶液 10ml ；將容量瓶置于 45 超聲波水浴中處理 10min ，加人 l00ml 無水乙醇后猛烈振搖，然后用無水乙醇稀釋到刻度，搖勻。將混合液離心后，取上清液，經(jīng)。0.2um 微孔濾膜過濾后用于

49、高效液相色譜的測定。 ( 3 ）高效液相色譜儀條件：色譜柱：不銹鋼色譜柱， 長 250mm ，內(nèi)徑 4.6mm ; 固定相： ODS 一 2 , 5 um ; 流動相：乙睛:異丙醉，水= 1 500:250:25 。流速： 1.0ml / min ; 進(jìn)樣量： 10ul ; 檢測波長： 326nm 。一、飼料添加劑維生素 B 1的測定 1.適用范圍 本方法適用于化學(xué)合成法制得的維生索 B1 , （鹽酸硫胺或硝酸硫胺），在飼料工業(yè)，作為維生素類飼料添加劑。 2.原理 鹽酸硫胺（硝酸硫胺）在酸性條件下與硅鎢酸形成鹽酸硫胺硅鎢酸鹽（硝酸硫胺硅鎢酸鹽）沉淀，由生成的沉淀量計(jì)算維生素 Bl 含量。 3.儀器設(shè)備 一般實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備。4.試劑與溶液 鹽酸。 硅鎢酸： 10溶液。鹽酸：取鹽酸 5ml ，加水稀釋至 100ml 。丙酮。第五章 飼料中有毒有害物質(zhì)的分析第一節(jié) 農(nóng)藥的分析測定 自20世紀(jì)40年代以來，隨著科技的進(jìn)步和生產(chǎn)的不斷發(fā)展，人工合