儀器校驗(yàn)基礎(chǔ)知識鞏固培訓(xùn)

1、Quality 并且在適合操作的環(huán)境中安裝好。 安裝前或安裝時(shí) 對照運(yùn)送清單核對硬件與軟件 檢查是否有明顯的損壞 場地準(zhǔn)備檢查 健康與安全防備 檢驗(yàn)軟件與固定在硬件中軟件的版本 在儀器詳細(xì)目錄中加入系統(tǒng),安裝驗(yàn)證,計(jì)算機(jī)化系統(tǒng) 計(jì)算機(jī) 模塊 操作系統(tǒng) 配置 接口卡 軟件 版本 現(xiàn)行軟件包的位置 系統(tǒng)的安裝位置 數(shù)據(jù)與文檔的位置,安裝驗(yàn)證,安裝后 適當(dāng)?shù)南到y(tǒng)電力 需要的話，應(yīng)有不間斷供電電源 適當(dāng)?shù)某跏蓟c回歸位置 在模塊間適當(dāng)?shù)倪B接 如果需要的話，進(jìn)行模塊校準(zhǔn) 軟件(版本確認(rèn)) 開始適當(dāng)?shù)氖褂貌⒈３峙c硬件的兼容性 備份系統(tǒng)設(shè)置的關(guān)鍵文件 記錄并歸檔系統(tǒng)的配置與序列號 建立記錄簿 適當(dāng)?shù)臋z查并由

2、管理方簽字結(jié)束,硬件記錄,軟件記錄,安裝驗(yàn)證,參考文件的實(shí)用性 場地準(zhǔn)備指南 系統(tǒng)操作手冊 銷售與貨運(yùn)單據(jù) 因素試驗(yàn)記錄（如果可以的話） 符合性證書 軟件開發(fā),操作驗(yàn)證,設(shè)置程序，使儀器或系統(tǒng)模塊在適當(dāng)環(huán)境下的代表性范圍內(nèi)按照操作說明運(yùn)行 檢測系統(tǒng)模塊的功能 軟件功能運(yùn)用 系統(tǒng)安全、審查記錄以及數(shù)據(jù)文檔 觀測并記錄系統(tǒng)對特殊指令的回應(yīng) 運(yùn)行一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)設(shè)置進(jìn)行數(shù)據(jù)處理驗(yàn)證,HPLC典型OQ的試驗(yàn),泵: 流速精確度、梯度精確度 檢測器: 線性,噪音,偏差,波長準(zhǔn)確度 進(jìn)樣器: 重現(xiàn)性,線性與殘留 柱溫箱: 溫度準(zhǔn)確度 硬件與軟件控制 軟件運(yùn)用 程序標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)設(shè)置 A到D的轉(zhuǎn)換,驗(yàn)證試驗(yàn)/ 結(jié)果,性

3、能驗(yàn)證,程序證明儀器完全符合了設(shè)計(jì)要求 整體試驗(yàn)證明由不同模塊組成的系統(tǒng)運(yùn)行穩(wěn)定并在說明書的范圍內(nèi) 通過期望用途的需要所有的模塊組合成整個(gè)系統(tǒng)的典型應(yīng)用來進(jìn)行認(rèn)證,驗(yàn)證數(shù)據(jù)審查,通過協(xié)議中所有試驗(yàn)的結(jié)果 審查并批準(zhǔn)數(shù)據(jù) 建立儀器文件體系 沒有符合認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)果 調(diào)查產(chǎn)生失誤的原因并決定例外是否可以認(rèn) 可 需要的話進(jìn)行矯正 證明該調(diào)查 再測試失敗的模塊 驗(yàn)證概述報(bào)告 列出所有工作，試驗(yàn)結(jié)果與例外情況,生產(chǎn)使用,驗(yàn)證報(bào)告總結(jié)驗(yàn)證過程與支持性數(shù)據(jù) 結(jié)論:儀器符合期望用途的使用要求 操作SOP,維護(hù)SOP與性能驗(yàn)證SOP 對系統(tǒng)操作者提供培訓(xùn) 常規(guī)系統(tǒng)檢查 系統(tǒng)操作，維護(hù)，服務(wù)，校對 系統(tǒng)缺陷 超時(shí)間

4、累積的變更以及確認(rèn)狀態(tài)的影響 適合操作,變更控制,計(jì)劃的變更 硬件: 主要部件變更 軟件: 操作系統(tǒng)變更，升級 固定在硬件中的軟件:版本變更 影響評估 完成前的檢查與批準(zhǔn) 執(zhí)行變更 如果需要的話，進(jìn)行再驗(yàn)證 管理人員批準(zhǔn)完成變更程序,變更控制 (變更后,儀器類別,要求,維護(hù),預(yù)防性的維護(hù)能夠節(jié)約時(shí)間和金錢 使用與服務(wù)記錄 系統(tǒng)運(yùn)行記錄 簡易維修與預(yù)防性維護(hù) 使用跟蹤系統(tǒng): 校對相應(yīng)的日期提示 簡易的審核預(yù)備 運(yùn)行趨勢,儀器校對與性能驗(yàn)證(PV,c-GMP要求 “儀器、設(shè)備、測量儀器與記錄設(shè)備適當(dāng)時(shí)間周期的校準(zhǔn)與制定的書面程序（包括詳細(xì)指南、時(shí)間表、準(zhǔn)確度與精密度的限度、在超過精確度與/或精密度

5、限度時(shí)采取的預(yù)防補(bǔ)救措施）一致。不符合制定規(guī)范的儀器、設(shè)備、測量儀器與記錄設(shè)備將不能使用。” CFR 聯(lián)邦法規(guī)法案 附件I: 實(shí)驗(yàn)室管理, S211.160 (b)(4) 校對與PV之間是有區(qū)別的,性能驗(yàn)證程序,說明程序的作用與責(zé)任 詳細(xì)的文件以及有效力的文檔 跟蹤系統(tǒng)狀態(tài) 提供影響評估的信息 校準(zhǔn)情況 儀器狀態(tài) 工作人員 操作者與批準(zhǔn)者 校準(zhǔn)日期與下一次校準(zhǔn)的日期,性能驗(yàn)證的頻率,需要考慮的因素: 儀器的可靠性 使用軟件的型號 供應(yīng)商的介紹 好的運(yùn)行記錄可以減少驗(yàn)證的頻率,系統(tǒng)適應(yīng)性,系統(tǒng)適應(yīng)性證明在分析的時(shí)候，系統(tǒng)運(yùn)行符合特殊的要求 系統(tǒng)適應(yīng)性可能不能顯示邊際的性能 例如：波長準(zhǔn)確度, 低

6、燈強(qiáng)度 系統(tǒng)適應(yīng)性是方法特定的,系統(tǒng)淘汰,儀器書夾中或工作記錄中記錄淘汰原因和實(shí)施日期. 將所有相關(guān)記錄，例如儀器書夾或工作記錄、軟件與手冊（如果實(shí)驗(yàn)室不再需要的話）存檔. 確保所有的電子記錄都已經(jīng)存檔，并制定程序. 斷開所有與儀器建立的連接并安排轉(zhuǎn)移. 收回或修改所有受影響的SOPs. 更新校準(zhǔn)程序與詳細(xì)目錄表,儀器使用周期,系統(tǒng)性能測試,紫外-可見光 分光光度計(jì),紫外-可見光分光度計(jì),紫外-可見光分光度計(jì),紫外-可見光掃描分光光度計(jì)示意圖,紫外-可見光分光光度計(jì),二極管陣列紫外-可見光分光度計(jì)示意圖,性能參數(shù),波長準(zhǔn)確度,在吸收光譜或發(fā)射光譜中測得的波長與已知波長的偏離 影響到定性測定和定

7、量測定,波長準(zhǔn)確度(輻射譜線)氘燈和汞燈,氘燈的輻射譜線為486.0 nm, 656.1 nm 汞燈的輻射譜線為 253.65 nm 302.25 nm 313.16 nm 334.15 nm 365.01 nm 404.66 nm 435.84 nm 546.07 nm 576.96 nm 579.07 nm BP和EP要求 紫外光為 1 nm，可見光為 3 nm,波長準(zhǔn)確度(輻射譜線)氘燈,氘燈的輻射譜線 486.0 nm 656.1 nm 將燈放到入射狹縫前 以單束光模式或能量 模式測量 將十次測量結(jié)果的平 均值與已知的數(shù)值進(jìn) 行比較 銳線光譜 內(nèi)置光源,波長準(zhǔn)確度汞燈,汞燈的輻射譜線

8、253.65 nm 302.25 nm 313.16 nm 334.15 nm 365.01 nm 404.66 nm 435.84 nm 546.07 nm 576.96 nm 579.07 nm 將燈放在入射狹縫前 以單束光模式或能量 模式測量 將十次測量結(jié)果的平 均值與已知的數(shù)值進(jìn) 行比較 銳線光譜涉及到紫外,波長準(zhǔn)確度氧化鈥和銣鐠玻璃濾光鏡,氧化鈥 270 -640nm 銣鐠玻璃 400-760nm NIST SRMs可獲得 易使用 增寬光譜線 限制到可見光范圍,波長準(zhǔn)確度,氧化鈥(Ho2O3) 的10% v/v高氯酸溶液(HClO4) 活性形式是Ho3+ (H2O)n 當(dāng)濃度和溫度發(fā)

9、生變化時(shí)很少形成復(fù)合物 腐蝕性溶液！小心拿放! NIST SRM 2034 (240-640nm) 4% 氧化鈥溶于10% 高氯酸 儀器光譜寬度為3nm或更少 室溫條件穩(wěn)定8年 用10mm玻璃小管密封 max 依賴于光譜帶寬,波長準(zhǔn)確度NIST SRM 2034 (240-640nm,峰10是與光譜帶寬相關(guān)的,波長準(zhǔn)確度,雜散光,任何位于所選擇波長的帶寬外的波 長的檢測光由于散射或更高層次的 衍射產(chǎn)生。 雜散光在高吸收值時(shí)能導(dǎo)致嚴(yán)重的 誤差 吸收值降低 線性偏離 降低可用的范圍,雜散光標(biāo)準(zhǔn),光譜范圍 溶液 檢測波長 175 200 nm Aq. KCl (12g/l)* 200 nm (BP,

10、 EP) 210 259 nm Aq. NaI (10g/l) 220 nm 300 385 nm Aq. NaNO2 (50g/l) 340 nm 使用空氣作為參比 吸收值:大于2 透光率:小于0.01 * 檢測取決于KCl的純度，光譜的分辨率和,噪音,來源于光源和電子元件 影響到檢測限和準(zhǔn)確度 測試 在吸收度模式下掃描空氣 在500nm處記錄下峰到峰噪音(p-p) 評估RMS噪音 噪音(p-p) x 0.2 噪音 0. 0001 Abs,線性動(dòng)態(tài)范圍,可接受的偏離線性的吸收值范圍 在高吸收值時(shí)由于雜散光受限制 在低吸收值時(shí)由于噪音受限制 常規(guī)，大約有0.5%誤差，范圍從0.3到1AU,穩(wěn)定

11、性,在I0和I間的檢測，由于燈的強(qiáng)度和電路的變化產(chǎn)生漂移 導(dǎo)致檢測的系統(tǒng)誤差 每小時(shí)在340nm測量吸收值的變化 通常，低于每小時(shí)0.0003A,基線平直度,校正輸出的能力 在吸收度模式下掃描空氣 通常不低于0.001 AU,分辨率,影響分辨率的因素 光譜帶寬(SBW)和自然帶寬(NBW)的比率 SBW 是狹縫的寬度和光柵色散能力的函數(shù) 數(shù)字取樣 更小的取樣間隔能增加分辨率,分辨率,分辨率不夠降低在最大值的吸收度 使用0.02 % v/v甲苯環(huán)己烷溶液,光度測量準(zhǔn)確度,測量的吸收值和建立的標(biāo)準(zhǔn)值的差異 使用在確定波長下已知吸收度的濾鏡: NIST SRM 930 和SRM 1930 系列玻璃濾

12、光 鏡(440-635 nm): 10%T, 20%T, 30%T, 1%T, 3%T, 50%T NIST 2301含有金屬的石英濾光鏡(250-635 ) SRM 930e 吸收度 濾,光度測量準(zhǔn)確度,光度測量準(zhǔn)確度重鉻酸鉀溶液,BP和EP: 0.006% w/v 重鉻酸鉀的0.005M H2SO4溶液 (60.06 mg/L) NIST 重鉻酸鉀的0.001N HClO4溶液(0.06g/kg) 特定的吸收度A(l%, 1 cm) = Abs./cd c = % (w/v) d = 光程長度(cm) 典型準(zhǔn)確度為 0.01 AU,光度測量準(zhǔn)確度,0.006% w/v 重鉻酸鉀硫酸溶液的典

13、型 的特定吸收度 (0.06g/kg)重鉻酸鉀的0.001N高氯酸溶液的 典型的特定吸收度(NIST,波長 (nm) 吸收度 (AU) A (1%, 1cm) 允許值 (A) 235 0.748 124.5 122.9 - 126.2 257 0.865 144 142.4 - 145.7 313 0.292 48.6 47.0 - 50.3 350 0.640 106.6 104.9 - 108.2,波長 (nm) 吸收度 (AU) A (kg.g-1cm-1) 235 0.741 12.347 257 0.862 14.374 313 0.289 4.816 350 0.642 10.69

14、2,紅外分光光度計(jì),紅外光譜學(xué),在紅外區(qū)域的電磁輻射導(dǎo)致分子中振 動(dòng)能量的變化。 典型的波長范圍如下： 中紅外: 400-4000 cm-1 近紅外: 4000-12500 cm-1 反映主要的定性信息 官能團(tuán)，特性，ID,電磁光譜,紅外分光光度計(jì),FTIR分光光度計(jì)的示意圖,性能驗(yàn)證,適用于FTIR (美國材料與試驗(yàn)協(xié)會 （ASTM） E 1421) ASTM 零級和一級測試,波長準(zhǔn)確度,波長的偏差在峰的已知波長的吸收峰 處讀取 峰的波長數(shù)與相應(yīng)峰的標(biāo)準(zhǔn)波長數(shù)相 比較。偏差應(yīng)為 1.0到1.5 cm-1,波長準(zhǔn)確度IR參比標(biāo)準(zhǔn),光滑聚苯乙烯膜( 0.03 to 0.05 mm) 3500 t

15、o 500 cm-1 (NIST SRM 1921) 聚苯乙烯峰波長(cm-1) 548 842 906 1028 1069 1154 1583 1601 1943 2850 3001 3026 3060 3082 BP 和EP: 1.0 cm-1 1.5 cm-1 JP: 1944 cm-1 ( 1 cm-1), 2924 cm-1 ( 2 cm-1) 其他峰: ( 0 3 0 5 cm-1,聚苯乙烯波譜,波長重現(xiàn)性,儀器的性能包括在連續(xù)檢測中在特定波段 處產(chǎn)生相同波長 對掃描型儀器更加重要 日本藥典(JP) 1000 cm-1 ( 1 cm-1)處重復(fù)測量2次 3000 cm-1 ( 5

16、cm-1)處重復(fù)測量2次,分離度,使用聚苯乙烯膜 (0.05 mm) 2851cm-1處的最 大值(B)和2870 cm-1 處的最小值 (A)間的差異不得 小于18% T 1583 cm-1 處的 最大值(D)和 1589 cm-1 處的 最小值(C)間的差,雜散光,在低透射率時(shí)雜散光會產(chǎn)生誤差 對定性測量不重要 ASTM E932 茚/樟腦/環(huán)己酮混合物 特定條件特定波長下的透光率不得超過2,噪音,在透射率模式下掃描空氣 記錄生產(chǎn)廠商指定波長下（代表性的如 2000 cm-1）峰到峰(p-p)的噪音 評估RMS噪音 噪音(p-p) 噪音的RMS 0. 1 %透光率,光度測定重現(xiàn)性,儀器的性

17、能包括在連續(xù)檢測中得到相同 的光度測定值 同一樣品測量10次并且計(jì)算%RSD JP: 兩次測量的差異不得超過0.5,FTIR,ASTM 零級測試 快速測試找出故障或變動(dòng) 能量譜測試 100%基線測試 聚苯乙烯測試 將測試結(jié)果與以前的測試結(jié)果相比較 典型樣品的測試條件應(yīng)是相似的 選擇分辨率為4 cm-1 掃描時(shí)間為30秒,FTIRASTM 零級測試,參比波譜圖(先前收集) 空束波譜(R1) 聚苯乙烯的透過率波譜(R2) 測試波譜圖 空束波譜(S1) 在S1后立即收集的空束波譜(S2) 聚苯乙烯的透過率波譜(S3,FTIRASTM 零級測試,能量譜測試 S1/R1比值 描繪從95到105%透過率的

18、S1/R1值 報(bào)告如下的能量比值 R4000/2000 = E4000/E2000 R2000/1000 = E2000/E1000 能量的降低意味著干涉儀未校正，光源溫 度的降低或光路障礙,FTIRASTM 零級測試,100%基線測試 S2/S1比值 描繪從99到101%透過率的S2/S1值 報(bào)告分別以4000, 2000, 1000 和500 cm-1 為中心，范圍為100 cm-1 的噪音水平 過度的噪音可能是由于干涉儀未校正， 光源出現(xiàn)故障或檢測器出現(xiàn)故障,FTIRASTM 零級測試,系統(tǒng)性能測試,高效液相HPLC,性能測試,HPLC模塊: 泵: 流速準(zhǔn)確度，遞度準(zhǔn)確度 檢測器: 線性

19、，噪音，漂移，波長準(zhǔn)確度 進(jìn)樣器: 重現(xiàn)性，線性和殘留 柱溫箱: 溫度準(zhǔn)確性 硬件和軟件功能測試,泵,流速準(zhǔn)確度 影響保留時(shí)間的重現(xiàn)性 梯度準(zhǔn)確度和線性 影響分離度和保留時(shí)間 使用脫氣甲醇(或1:1的水/甲醇混合物） 測量1.0ml/min和2.0ml/min的流速準(zhǔn)確 度 典型認(rèn)可: 設(shè)定流速的 1.0,泵梯度準(zhǔn)確度,溶劑A: 甲醇 溶劑B: 含有示蹤劑的甲醇 例如. 0.1 % 丙酮或咖啡因(272nm) 梯度圖 100% A到100% B 逐步回到100% A 80%B時(shí): B1/H x 100% 80% 20%B時(shí): B4/H x 100% 20% 典型認(rèn)可:平均梯級高度的 1 0,泵

20、壓力測試,用于測試: 閥的功能 連接密閉性 使用甲醇做為流動(dòng) 相 設(shè)定上端壓力限度 設(shè)定流速為1 mL/min 堵住泵的出口 設(shè)定流速為0.1 mL/min 直到壓力,HPLC性能檢測咖啡因測試,典型的HPLC設(shè)置參數(shù): (i) 色譜柱: ODS 1, 5 (ii) 流動(dòng)相: 水/乙腈 (iii) 流速: 2.0 mL/分鐘 (iv) 進(jìn)樣體積: 10-20 L (v) 檢測波長: 272 nm (vi) 柱溫: 室溫,進(jìn)樣器的精密度,精密度 重復(fù)進(jìn)樣相同量的樣品來測試進(jìn)樣器的性能 與外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品定量模式相比較，峰面積或峰 高的精密度和準(zhǔn)確度是非常重要的 進(jìn)樣器精密度測試 咖啡因用流動(dòng)相溶解，重

21、復(fù)進(jìn)樣6次 記錄峰面積的%RSD 和保留時(shí)間 典型認(rèn)可: 1.0% RSD,進(jìn)樣器的線性,線性 以適當(dāng)比例不同量的樣品測試進(jìn)樣器的性能 進(jìn)樣器線性檢測 使用流動(dòng)相制備標(biāo)準(zhǔn)溶液 進(jìn)不同體積的樣品 通常為5到100 L 描繪響應(yīng)值對進(jìn)樣體積曲線 計(jì)算相關(guān)系數(shù)r 典型認(rèn)可: r 0.999,紫外-可見光檢測器線性(ASTM 方法: E685,流動(dòng)池中加入一系 列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn) 溶液 濃度范圍通常應(yīng)產(chǎn) 生響應(yīng)值到2AU 描繪響應(yīng)值（AU） /濃度對log濃度曲 線 線性范圍: 濃度應(yīng)在RC的5%范圍內(nèi),進(jìn)樣器殘留,殘留 清洗進(jìn)樣環(huán)和進(jìn)樣后樣品的液體通道檢測進(jìn) 樣器的性能 影響定量的準(zhǔn)確度 進(jìn)樣器殘留檢

22、測 一個(gè)樣品進(jìn)樣幾次后進(jìn)一次空白樣品（只是 溶劑） 定量檢測空白樣品中分析物的量評估殘留 典型認(rèn)可:樣品峰面積的 1.0,UV-Vis 檢測器的性能,波長準(zhǔn)確度 影響靈敏度和選擇性 影響雜質(zhì)分析 線性 影響標(biāo)準(zhǔn)品和樣品間的峰面積和峰高的準(zhǔn) 確度 噪音和漂移 檢測限和定量限 影響基線檢測和峰積分,UV-Vis 檢測器波長準(zhǔn)確度,內(nèi)置濾波器或光譜線Built-in filter or spectral line 重鉻酸鉀的0.001N高氯酸溶液 氧化鈥的0.001N高氯酸溶液 高氯酸鉺溶液（2g溶于25ml水中） max 為255 nm 咖啡因溶液 max 為205nm, 272 nm和min 為

23、244 nm 典型認(rèn)可: 2 nm,UV-Vis 檢測器線性,流動(dòng)池中加入一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶 液。 對壓力波動(dòng)的敏感度 通常濃度范圍產(chǎn)生的響應(yīng)值達(dá)到1.5AU 描繪響應(yīng)值對溶液濃度的曲線 計(jì)算樣品濃度和響應(yīng)值的相關(guān)系數(shù) 典型認(rèn)可: r 0.999,UV-Vis 檢測器噪音,噪音 電子噪音，泵噪音和突起 燈亮度偏低，流動(dòng)池污染嚴(yán)重，溫度不穩(wěn)定 短期噪音 每分鐘大于1個(gè)循環(huán) 長期噪音 每小時(shí)6到60個(gè)循環(huán) 漂移 噪音基線的平均斜率 以AU/h來表示（一個(gè)小時(shí)內(nèi)的測量結(jié)果） 典型認(rèn)可: 5 10-4 AU/hr,UV-Vis 檢測器噪音,檢測的方法(ASTM 方法E685) 在測試前系統(tǒng)預(yù)熱24

24、小時(shí) 甲醇脫氣，流速為1mL/min 如果可行的話，背壓維持在至少500psi 防止系統(tǒng)溫度波動(dòng) 使用空氣或氮?dú)庾鰹閰⒈?靜態(tài)測試: 無流速(水, 254nm) 停止流動(dòng)使系統(tǒng)穩(wěn)定(1 h) 測量短期噪音和長期噪音以及漂移 動(dòng)態(tài)測試: 溶劑通過流動(dòng)池 設(shè)定流速為1 mL/min,使系統(tǒng)穩(wěn)定 測量短期噪音和長期噪音以及漂移,UV-Vis 檢測器,短期噪音和長期噪音,短期噪音= Yn / n (1min 間隔) 長期噪音= Z1 (Z1 Z2)n,UV-Vis 檢測器漂移,漂移 測量1個(gè)小時(shí)內(nèi)檢測器的輸出 噪音基線的斜率（以AU/h表示,柱溫箱,柱子的溫度影響化合物的保留時(shí)間 溫度增加會降低容量因

25、子k 保留時(shí)間縮短 柱溫箱的精密度和準(zhǔn)確度應(yīng)進(jìn)行校正。校 正通過流動(dòng)相流動(dòng)條件下用校正的溫度計(jì) 進(jìn)行。 柱溫應(yīng)在設(shè)定溫度的 3度之間,系統(tǒng)的死體積,系統(tǒng)的死體積可以通過觀察峰的擴(kuò)展情況 來評估。 死體積越大導(dǎo)致峰的擴(kuò)展越大 典型的測試條件: 流動(dòng)相: 85:15 水/乙腈 流速: 0.5 mL/min 檢測波長: 272 nm 進(jìn)樣量: 12.5 g/mL咖啡因溶液10 L 峰的擴(kuò)展(L) = 流速(L/min) x 5%的峰寬(min,模數(shù)轉(zhuǎn)換,色譜工作站(CDS servers)的模數(shù)轉(zhuǎn)換 線性，干擾， 精確度和準(zhǔn)確度 分辨率 使用峰發(fā)生器進(jìn)行測試,常規(guī)認(rèn)可,學(xué)習(xí)概述,陳述URS，F(xiàn)RS和

26、DQ的IQ，OQ，PQ的 關(guān)系。 對于UV，F(xiàn)RS中應(yīng)記錄下什么? 校準(zhǔn)和PV之間有什么不同? 為什么SST不能代替定期的PV? 為什么波長的準(zhǔn)確度是重要的? 為什么雜散光會影響線性? 分辨率如何影響到紫外-可見光的檢測? 為什么LC檢測器的線性檢測是必需的,參考文獻(xiàn),USP General Chpater , 2006 Chapter 9: Analytcial Method Validation and Instrument Performance verification; Chung Chow Chan, Y.C. Lee, Herman Lam and Xue Ming Zhang,

27、 Wiley InterScience, 2004. ISO/IEC 17025: General requirements for the compliance of testing and calibration laboratories, 1999 Validation and Qualification in Analytical Laboratories Ludwig Huber, Interpharm Press Inc. 1999 Quality assurance and instrumentation, L. Huber, Accreditation and Quality

28、Assurance, Vol. 1, p24, 1998 Equipment qualification in practice, L. Huber, LC-GC, Feb.,1998 Position paper on the qualification of analytical equipment, M. Freeman et. al. Pharmaceutical Technology Europe, 40, 1995 Validation of Computerized Analytical Systems,紫外-可見光分光光度計(jì)的參考文獻(xiàn),Chapter 10: Analytcia

29、l Method Validation and Instrument Performance verification; Chung Chow Chan, Y.C. Lee, Herman Lam and Xue Ming Zhang, Wiley InterScience, 2004. Certification and use of acidic potassium dichromate solution as an ultraviolet absorbance standard - SRM 935, NIST Special publication 260-54 Holmium oxid

30、e solution wavelength standard from 240-640nm - SRM 2034, NIST Special publication 260-102, 1986 Glass filters as a standard reference material for spectrophotometry - selection, preparation, certification and use of SRM 930 and 1930, NIST Special publication 260-116, 1994 Fundamentals of Modern UV-

31、Vis Spectroscopy. T. Owen, Hewlett Packard, 1996 Standard practice for describing and measuring performance of ultraviolet, visible, and near-infrared spectrophotometers, Annual book of ASTM standards, Vol. 03.06, E257, 1997 Window Chem: ISO900/GLP/UV/Vis/NIR Validation,HPLC的參考文獻(xiàn),Chapter 9: Analytci

32、al Method Validation and Instrument Performance verification; Chung Chow Chan, Y.C. Lee, Herman Lam and Xue Ming Zhang, Wiley InterScience, 2004. United State Pharmacopoeia 24 High Pressure Liquid Chromatography Performance verification testing of high performance liquid chromatography equipment, Do

33、nald Parroitt, LC-GC, Vol. 12, No. 2, 1994, p. 135 Operation and performance qualification, V.Grisanti and E Zachowski, LC-GC, Vol. 20, No. 4, 2002. p. 355 Performance qualification of LC systems, J.W. Dolan, LC-GC, Vol. 20, No. 9, 2002. p. 842 Standard practice for testing fixed wavelength photomet

34、ric detectors used in liquid chromatograpgy, Annual book of ASTM standards, Vol. 03.06, E685, 1997 Standard practice for testing variable wavelength photometric detectors used in liquid chromatograpgy Annual book of ASTM,HPLC參考文獻(xiàn),Performance Verification-A regulatory burden or an analytical tool?: M

35、. Zooubair El Fallah, LC-GC, Vol. 17, No. 5, 1999. p. 343 A practical guide to HPLC detection, Donald Parriott, Academic Press Inc.,1993 Validation of computerized liquid chromatographic systems, W. Furman, T, Layoff and R Tetzlaff, J. of AOAC International, Vol. 77, No. 5, 1994, p.1314 Column tempe

36、rature effects in gradient elution, R.G. Wolcott and J.W. Dolan, LC-GC, Vol. 16, No. 12, 1998, p. 1080 Introduction to modern liquid chromatography, 2 Ed., L.R. Snyder and J.J. Kirkland, John Wiley and Sons, 1979 The important of temperature, J.W. Dolan, LC-GC, Vol. 20, No. 6, 2002. p. 524 UV detect

37、or noise, M.D. Nelson and J.W. Dolan, LC-GC, Vol. 17, No. 1, 1999. p. 12,參考文獻(xiàn),Standard practice for describing and measuring performance of dispersive infrared spectrometers, Annual book of ASTM standards, Vol. 03.06., E932, 1997 Standard practice for describing and measuring performance of Fourier

38、Transform infrared (FTIR) spectrometers, Annual book of ASTM standards, Vol. 03.06., E1421, 1997 Polystyrene films for calibrating the wavelength scale of infrared spectrophotomenters - SRM 1921, NIST Special publication 260-122, 1995 Brian Smith Fundamental of Fourier Transform,有用的網(wǎng)站,實(shí)驗(yàn)室順應(yīng)性: 21 CFR

39、 Part 11: FDA: NIST: /ts/htdocs/230/232/232.htm 校準(zhǔn)和驗(yàn)證工作組: www.cvg.ca,方法驗(yàn)證,Herman Lam, 博士 首席研究員 分析技術(shù) 加拿大葛蘭素史克,2006年7月,方法驗(yàn)證,為何需要驗(yàn)證方法? 提供證據(jù)保證該方法是準(zhǔn)確、可靠和可行 的。 建立該方法的性能范圍 c-GMP 要求: CFR 聯(lián)邦條例法典 S211.165 (e) “公司采用的測試方法的精確度、靈敏度、特異性和重復(fù)性需要確定并備有相關(guān)證明文件,性能特征,方法的驗(yàn)證是其性能特征的系統(tǒng)性評價(jià) 的論證。性能特征通

40、過如下的參數(shù)來表 示: 專屬性 線性 準(zhǔn)確度 精密度 范圍 檢測限 定量限 耐用性,專屬性,對那些可能存在的成份（雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、基 質(zhì)）能夠進(jìn)行準(zhǔn)確分析的能力。 所有的相關(guān)物質(zhì)和藥物活性成份應(yīng)能相互分 辨出來 （穩(wěn)定性指示方法） 不受輔料的干擾（或輔料的降解產(chǎn)物） 不受系統(tǒng)峰的干擾（例如離子對試劑） 分離度最小 1.2 正交試驗(yàn)確證專屬性(如果需要的話） LC-MS,專屬性,分析樣品/ 空白對照（含有可能干擾測定的顯 著水平）。 加入可獲得的雜質(zhì) 加速降解或老化的樣品 使用二極管陣列建立光譜純度 正交試驗(yàn)確證專屬性（如果需要的話） LC-MS,光譜峰純度,特異性和專屬性,能夠在一組信號中選出

41、 相要的信號 例如：接有紫外-可見光檢測 器的HPLC,只對一個(gè)特別成份響應(yīng) 例如：接有質(zhì)譜檢測器的,線性,是樣品成比例濃度的分析中獲得測試結(jié)果 的能力（在給定范圍內(nèi)） 考慮到單點(diǎn)校對 濃度范圍至少等于準(zhǔn)確度測量的范圍（最 少5個(gè)點(diǎn)）。 測試：測試濃度的80% 到120% CU: 測試濃度的70% 到130% （除非其他是 合理的） 溶出度：指定范圍的+/- 20% 雜質(zhì): 標(biāo)準(zhǔn)的50到120,線性,不同的方法 可靠樣品的直接稱量 對于低濃度樣品不適合 引入稱量誤差 可以檢查出溶解性問題 由貯備液進(jìn)行系列稀釋 適合低濃度樣品 清除稱量誤差 不能檢查出溶解性問題,線性,畫出分析濃度或柱上樣量與響

42、應(yīng)值的函數(shù) 對圖譜進(jìn)樣研究 不要強(qiáng)制直線通過零點(diǎn) (使用截距=0的y =mx) 報(bào)告回歸直線的相關(guān)系數(shù)、斜率、y軸截距 和平方的殘數(shù)和 認(rèn)可的檢測相關(guān)系數(shù) 活性成份R 0.999 雜質(zhì)R 0.990 截距為初始值的2%以內(nèi) + 偏差:干擾 - 偏差: 分析物遺失,簡化的線性作圖,線性色譜圖50 -150,注:150%時(shí)高度為935 mV (必須小于1000mV). 100%的活性成份最適宜的高度是650 mV左右,線性圖,精密度和準(zhǔn)確度,準(zhǔn)確度,相對真實(shí)值的接近程度 以回收率表示 方法比較 可以由精密度,線性和專屬性（只是藥物物質(zhì)）推 斷出來。 準(zhǔn)確度試驗(yàn)受如下條件影響 是否所有的分析物已經(jīng)溶

43、解了 可提取的和吸收損失 正確的檢測 檢測器對樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng) 被分析物的相對響應(yīng)值,準(zhǔn)確度,回收率:在方法的范圍內(nèi)將已知量的被分析物 加到空白對照或樣品中 最小9個(gè)檢測樣品， 3 x 3水平，覆蓋到范圍（通常 為正常的80，100和120%） 檢測結(jié)果與理論值比較確定回收率 通常主峰在98.0到102.0 % 內(nèi) 對于雜質(zhì)，通常如下： 0.2%以下+/- 0.05% 0.2 -1.0% 相應(yīng)的+/- 20% 1.0%以上相應(yīng)的+/- 10,準(zhǔn)確度,方法比較 不需要參比標(biāo)準(zhǔn)品 最小9個(gè)測量值，3 x 3的水平，覆蓋在范圍內(nèi) 驗(yàn)證方法的結(jié)果和參比的已驗(yàn)證的方法的結(jié)果做比較 通常主峰在98%和1

44、02% 之內(nèi) 通常雜質(zhì)在90% 和110%之內(nèi) 計(jì)算相關(guān)系數(shù) 數(shù)據(jù)不可比？參比方法可能不是最好的方法! LCGC North America Vol. 23, No.1, Jan 2005. p46,精密度: 測量一致性,在指定條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng) 多次取樣進(jìn)行一系列檢測所得結(jié)果之間 的接近程度。 重復(fù)性: 在較短的時(shí)間間隔內(nèi)在相同操作條 件下的精密度(也稱為分析內(nèi)精密度). 中間精密度:表達(dá)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)條件變動(dòng)：不同 的日期，不同分析者，不同儀器設(shè)備等測定 結(jié)果的精密度。 重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室之間的精密度(通常使 用方法學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化合作研究,精密度,重復(fù)性: 9 個(gè)測定結(jié)果， 3 x 3個(gè)濃

45、度 或100%的濃度水平，最少6個(gè)測定結(jié)果 通常主峰的2 % RSD 中間精密度: 不同的日期，分析者和儀器設(shè)備 重現(xiàn)性: 實(shí)驗(yàn)室間試驗(yàn),范圍,檢測能夠達(dá)到一定水平的精密度，準(zhǔn)確 度和線性，樣品中的被分析高低限水平 的間隔,范圍,ICH 推薦值 含量測定 檢測濃度的80到120 % CU 檢測濃度的70到130%的最小值 溶出度在指定范圍的+/- 20% 例如：第一個(gè)小時(shí)20%, 10個(gè)小時(shí)后90%, 范 圍為0到110% 雜質(zhì) 來自質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的120%的報(bào)告水平,檢測限度(LOD,被分析物能夠被檢測到但是不需要定量 測定的最低濃度。 依賴于檢測器的響應(yīng)值 信噪比為3:1 尖峰信號，漂移，色譜條

46、件比如梯度洗脫 可能影響雜音的檢測。 尖峰比S/N更高,檢測限(LOD,以響應(yīng)值和斜率的標(biāo)準(zhǔn)偏差為基礎(chǔ): LOD = 3.3 / S S = 校正曲線的斜率 = 標(biāo)準(zhǔn)偏差點(diǎn) 3 倍 在空白信號以上 1型和2型誤差,檢測限(LOD,標(biāo)準(zhǔn)偏差表示 空白響應(yīng)值 (接近關(guān)注的峰的10倍峰寬區(qū)域的1/5 峰 對峰噪音) 回歸直線的殘數(shù),C = x值的和, D 是x的殘數(shù) 檢測LOD和LOQ, LCGC North America Vol. 16, No.10, October 1998. p922,定量限,LOQ 能夠在認(rèn)可的精密度和準(zhǔn)確度條 件下定量測量的被分析物的最低濃度 信噪比為10:1 以響應(yīng)值

47、的標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率的比值為基 礎(chǔ)： QL = 10 / S S = 校正曲線的斜率 = 標(biāo)準(zhǔn)偏差 空白響應(yīng)值或回歸直線的殘數(shù)或回歸直線的y軸截距 靈敏度：與校正曲線的斜率有關(guān) 響應(yīng)值/濃度或被分析物的量,耐用性,耐用性是一種方法參數(shù)預(yù)設(shè)的微小變化 時(shí)，不受影響的能力，保證了正常使用 時(shí)方法的可靠性。 建立了實(shí)際的操作限度,耐用性,溶液穩(wěn)定性（最后稀釋） 標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液 相關(guān)情況的+/- 1.5% 樣品提取時(shí)間,色譜參數(shù): (LC) 標(biāo)準(zhǔn)的范圍 檢測波長 +/- 4nm 流動(dòng)相的pH值 +/- 0.2 單位 流動(dòng)相的組成 +/- 5% 前混合與在泵內(nèi)混合 色譜柱的不同供應(yīng)商 +/- 三家 溫度

48、 +/- 5 C 流速 +/- 2,耐用性,耐用性,駐留體積= 駐留時(shí)間x 流速 混合器和色譜柱柱頭間的體積 儀器和儀器間存在差異(0.5 mL to 3 mL) 調(diào)整初始等度保留的時(shí)間長度抵償駐留體 積的差異,試驗(yàn)程序,一些試驗(yàn)可以一起進(jìn)行 例如：精密度和準(zhǔn)確度 標(biāo)準(zhǔn)的程序: 專屬性 檢測限和定量限 線性 準(zhǔn)確度 精密度 耐用性(可以做為開發(fā)試驗(yàn)的一部分來完成) 在驗(yàn)證試驗(yàn)開始前進(jìn)行系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn),驗(yàn)證計(jì)劃,確定耐用性的重要試驗(yàn)參數(shù) 方法驗(yàn)證的材料: 已知相關(guān)物質(zhì)的可靠樣品 重要的藥品(用于精密度和專屬性) 重要的空白對照（用于專屬性） 用于準(zhǔn)確度的空白對照(用于加樣試驗(yàn),方法驗(yàn)證SOPs

49、和方案,SOP列出關(guān)于驗(yàn)證需要的最小量的高水平信息和常規(guī) 認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)。 方案列出了進(jìn)行驗(yàn)證的方法進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)的詳細(xì)要求 目的和驗(yàn)證范圍(預(yù)期要求) 驗(yàn)證參數(shù) 認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)（有理由的限度） 偏差和修正,驗(yàn)證方案 藥品 活性成份,驗(yàn)證方案 藥品 活性成份續(xù),驗(yàn)證方案 藥品 活性物質(zhì)續(xù),方法驗(yàn)證報(bào)告,驗(yàn)證報(bào)告應(yīng)包括： 驗(yàn)證的目的和范圍（期望的用途） 方法的說明 驗(yàn)證認(rèn)真試難程 試驗(yàn)結(jié)果:圖表，圖譜，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)和認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn) 偏差和修正的概述 結(jié)論 附錄中參考文獻(xiàn),ICH (國際協(xié)調(diào)會議)分析驗(yàn)證需要的數(shù)據(jù)元素,USP和TPD分析驗(yàn)證需要的數(shù)據(jù)元素,FDA-分析驗(yàn)證需要數(shù)據(jù)元素,方法的再驗(yàn)證,需要不需要? 以逐個(gè)事例為基礎(chǔ)進(jìn)行評估 在耐用性的范圍內(nèi)變更? 對數(shù)據(jù)的質(zhì)量的影響如何? 決定必須以科學(xué)原理為基礎(chǔ),方法再驗(yàn)證: 方法的變更,方法再驗(yàn)證,藥品物質(zhì), 處方和工藝的變更,法定程序的確證,USP 通論法定程序的確證。藥 學(xué)論壇31 (2), 555