基因工程原理試題1

1、基因工程原理練習題及其答案一、填空題(1) 分子水平上的操作 ，1 基因工程是 70 年代發(fā)展起來的遺傳學的一個分支學科。 2 基因工程的兩個基本特點是： (2)細胞水平上的表達克隆基因的類型 ； 受體3 基因克隆中三個基本要點是： 的選擇；載體的選擇4 通過比較用不同組合的限制性內(nèi)切核酸酶處理某一特定 基因區(qū)域所得到的不同大小 的片段，可以構建顯示該區(qū) 域各限制性內(nèi)切核酸酶切點相互位置的 限制性酶切圖譜 。兩個5 限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結合的原則命名 的，第一個大寫字母取自 屬名的第一個字母 ，第二、 字母取自 _種名的前兩個字母 ，第四個字母則用 株名 表示 6部分酶切可采取的措

2、施有： (1)減少酶量； (2)縮短反應時 間； (3)增大反應體積等 。7第一個分離的限制性內(nèi)切核酸酶是EcoK ；而第一個用于構建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是 _ EcoRl 。&限制性內(nèi)切核酸酶 BsuRI和Haem的來源不同，但識別的 序列都是GGCC，它們屬于異源同工酶。9 DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用 _枯草桿菌蛋白酶 切 割 DNA 聚合酶 I 得到的分子量為 76kDa 的大片段，具有兩 種酶活性：(1) 5-3合成酶的活性 ； (2) 3-5外切核酸酶 的活性。10為了防止 DNA 的自身環(huán)化，可用 堿性磷酸酶 去雙鏈 DNA_ 5端的磷酸基團 。11. E

3、GTA是_Ca2+_離子螯合劑。12測序酶是修飾了的 T7 DNA 聚合酶，它只有 _ 5-3合成 酶的活性，而沒有 3-5外切酶的活性。13. 切口移位(nick translation)法標記 DNA的基本原理在于 利用 DNA 聚合酶 I 的_5一3外切核酸酶 和 5一3合成酶的 作用。14. 欲將某一具有突出單鏈末端的雙鏈DNA 分子轉變成平末端的雙鏈形式， 通常可采用 S1 核酸酶切割 或 DNA 聚合酶補平。核酸水解15. 反轉錄酶除了催化 DNA的合成外，還具有酶H的作用，可以將DNA-RNA雜種雙鏈中的_RNA_水解掉。16. 基因工程中有 3種主要類型的載體： 質粒DNA，病

4、毒 DNA，質粒和病毒 DNA雜合體。復制區(qū)：含有復制起點；選擇標記：便于外源DNA的插入。另17. 就克隆一個基因（DNA片段）來說，最簡單的質粒載體也 必需包括三個部分：主要是抗性基因；克隆位點：外，18.間后-個理想的質粒載體必須具有低分子量。一個帶有質粒的細菌在有EB的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時，一部分細胞中已測不出質粒，這種現(xiàn)象叫 質粒消除（或治愈）。19 . PBR322是一種改造型的質粒，它的復制子來源于 pMBI 一它的四環(huán)素抗性基 因來自于PSCI01，它的氨芐 霉素抗性基因來自于 PSF2124（R質粒）300kb 。20. YAC的最大容載能力是 1OOOkb , BAC載體的最

5、大容載 能力是21 . 粒。22.體是通過 PBR322和M13復制的質PUCI8質粒是目前使用較為廣泛的載體。pUC系列的載P SCl01是一種嚴緊兩種質粒改造而來。它的復制子來自 PMBI, Amp抗性基因則是來自 轉座子。DNA23. 噬菌體之所以被選為基因工程載體，主要有兩方面的原 因：一是它在細菌中能夠大量繁殖，這樣有利于外源的擴增；二是對某些噬菌體（如幾噬菌）的遺傳結構和功能研 究得比較清楚，其大腸桿菌宿主系統(tǒng)的遺傳也研究得比較詳 盡。24. 野生型的M13不適合用作基因工程載體，主要原因是 沒有合適的限制性內(nèi)切核酸酶識別位點 和選擇標記。25. 黏粒（cosmid）是質粒一噬菌體

6、雜合載體，它的復制子來自質粒、COS位點序列來自 克隆片段達到45 kb。野生型的A噬菌體DNA不宜作為基因工程載體，原因X噬菌體，最大的26.是:(1)分子量大，(2)酶的多切點，(3)無選擇標記27.噬菌粒是由質粒和噬菌體DNA共同構成的，其中來自質粒的主要結構是復制區(qū)，而來自噬菌體的主要結構是IG區(qū)O幾噬菌體載體由于受到包裝的限制，插入外源DNA片段總的長度應在噬菌體基因組的 _75%105%_的范圍內(nèi)。在分離DNA時要使用金屬離子螯合劑，如EDTA和28.后，29.檸檬酸鈉等，其目的是_螯合Mg2+離子，抑制核酸酶的活性30. 用乙醇沉淀DNA時，通常要在DNA溶液中加人單價 的陽離子

7、，女n NaCI和NaAc ,其目的是_中和DNA分子的負電荷，增加 DNA分 子間的凝聚力。31 .引物在基因工程中至少有 4個方面的用途：(1)合成探 針；(2)合成cDNA ; (3)用于PCR反應；(4)進行序列分析32. Clark發(fā)現(xiàn)用Taq DNA聚合酶得到的PCR反應產(chǎn)物不是 平末端，而是有一個突出堿基末端的雙鏈 DNA分子。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)設計了克 隆PCR產(chǎn)物的T 載體。33. 在cDNA的合成中要用到 S1核酸酶，其作用是切除在第二鏈合成時形成的發(fā)夾環(huán) 34. 乙醇沉淀 DNA的原理是 乙醇使DNA分子脫水。35. 假定克隆一個編碼某種蛋白質的基因，必須考慮其表 達的三個基本

8、條件：(2)能夠使其轉錄的啟動子 (3)具(1)保持正確的可讀框有翻譯的起始和終止信號36.受體細胞的感受態(tài)是 接受外源DNADNA重組連接的方法大致分為四種： 接；(2)平末端連接；(3)同聚物接尾連接；的生理狀態(tài)_。(1)黏性末端連(4)接頭連接法。37.36. 將含有外源基因組一個酶切片段的質粒稱之為含有一 個基因組DNA克隆_，各種此類質粒的集合體稱之為構建了 一個基因組DNA文庫。37. 將含有一個 mRNA的DNA拷貝的克隆稱作一個 _cDNA 克隆，源于同一批 RNA制備物的克隆群則構建了一個 _ cDNA文庫_。38. 只要知道基因組中某一特定區(qū)域的部分核苷酸組成，用_聚合酶鏈

9、式反應(PCR)可以將這段 DNA進行百萬倍的擴 增。39. 人工感受態(tài)的大腸桿菌細胞在溫度為OC時吸附DNA, 429 _時攝人DNA。40. 目前，在重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了許多構思巧妙、 具有極高準確性的篩選方法。大致可以分為：遺傳學方法；物理篩選法； 核酸雜交法；(4)表達產(chǎn)物分析法等41. PCR擴增篩選重組體是比較簡便的篩選方法，它適合于 _插入外源片段的種類較多，大小又極為相似的重組體的篩 選。42. 核酸雜交探針可分為兩大類： DNA探針和RNA探針 其中DNA探針又分為基因組DNA探針和cDNA 探針。43. 如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈 DNA產(chǎn)生5突出的 黏性末端，則

10、可以用_ Klenow酶填補的方法_進行3末端標 記。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割 DNA產(chǎn)生的是3突出的 黏性末端，可以用_ T4DNA聚合酶進行3末端標記。44. 單鏈DNA探針的標記可以采用下列方法：(1)用M13噬菌體載體合成單鏈 DNA探針；(2)從mRNA反轉錄合 成單鏈cDNA探針；(3)用不對稱PCR合成單鏈DNA 探針。45. 根據(jù)Northern雜交的結果可以說明：外源基因是否進行 了轉錄_。兩種不同 中能48 .差示雜交(differential hybridization)技術需要 _ 的細胞群體能夠表達不同的基因，即在一個群體 夠表達一些基因，而在另一個細胞群體中不能表

11、達這些基因。49. RNA分子經(jīng)凝膠電泳后按大小不同分開，然后被轉移到一張硝酸纖維素膜(尼龍膜):_ Northern 印跡 _。限制性片段經(jīng)凝膠電(或尼龍膜)上，然后上,同一放射DNA探針雜交的技術稱50 .在_ Southern 印跡 _技術中，DNA I 泳分離后，被轉移到硝酸纖維素膜 與放射性的DNA探針雜交。DNA標記，因為這5外切核酸酶的活51. 可用T4 DNA聚合酶進行平末端的 種酶具有 _5t 3合成酶_和_3 T 性。52. 根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三 種因素：克隆的是完整的基因；使用的是表達載體； 不含內(nèi)含子。53. Northern印跡和South

12、ern印跡有兩點根本的區(qū)別：(1) 印跡的對象不同：Northern 是 RNA , Southern 是 DNA ;(2)電泳條件不同，前者是變性條件，后者是非變性條 件。54. 放射免疫篩選的原理基于以下三點：(1)抗體能夠被吸附到固體支持物上；(2)同一個抗原可以同幾種抗體結合； (3)抗體能夠被標記二、選擇題(單選或多選)( )Berg1. 因研究重組DNA技術而獲得諾貝爾獎的科學家是(a) A . Kornberg (b)W . Gilbert (c)P .(d)B. McClintock第一個作為重組 DNA載體的質粒是()(a) PBR322 (b)ColEI (c) pSCIO

13、I (d) pUCI8關于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質，下列描述中只 )不太恰當。(a) 由作用于同一 DNA序列的兩種酶構成(b) 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是n類限制性內(nèi)切核酸酶(c) 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對 進行修飾(d) 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)3. 有(DNA2.4.n型限制性內(nèi)切核酸酶：()(a) 有內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性且經(jīng)常識別回文序列(b) 僅有內(nèi)切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供(d)有外切核(c) 限制性識別非甲基化的核苷酸序列 酸酶和甲基化酶活性供5(e)僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提面有關限制酶的敘述哪些是正確的 ?

14、()(a) 限制酶是外切酶而不是內(nèi)切酶(b) 限制酶在特異序列(識別位點)對DNA進行切割(C)同一種限制酶切割 DNA時留下的末端序列總是相同(d) 一些限制酶在識別位點內(nèi)稍有不同的點切割雙鏈DNA ，產(chǎn)生黏末端(e) 些限制酶在識別位點內(nèi)相同的位置切割雙鏈DNA，產(chǎn)生平末端6.第一個被分離的n類酶是：()(a) EcoK (b)Hind m (c)Hind n (d)EcoB7在下列進行DNA 部分酶切的條件中，控制那一項最好?()(c)反應體積(d)酶反應(a) 反應時間(b)酶量Ca2+離子?(d)EGTA 抑制活性 ?()(c) 堿性磷酸酶的溫度8在下列試劑中， 那一種可以螯合(c)

15、SDSEGTA(a) EDTA(b)檸檬酸鈉9在下列工具酶中，那一種可以被(a) S1單鏈核酸酶 (b)末端轉移酶(d)Bal 31 核酸酶 10限制性內(nèi)切核酸酶可以特異性地識別：(a) 雙鏈DNA的特定堿基對(b)雙鏈DNA的特定堿基序列(c)特定的三聯(lián)密碼(d)以上都正確11下列關于限制性內(nèi)切核酸酶的表示方法中，正確一項的是()。(a) Sau3A I (b)EcoRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性是指：()(a) 在非常規(guī)條件下，識別和切割序列發(fā)生變化的活性。(b) 活性大大提高(d)識別序列與原來的完全不(c) 切割速度大大加快同 13下

16、面哪一種不是產(chǎn)生星號活性的主要原因?()(a) 甘油含量過高(b)反應體系中含有有機溶劑(c) 含有非Mg2+的二價陽離子(d)酶切反應時酶濃度過低 14關于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質，下列描述中只有 ()不太恰當(a) 由作用于同一 DNA序列的兩種酶構成(b) 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是n類限制性內(nèi)切核酸酶DNA(c) 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對 進行修飾(d) 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)15在長模板鏈的指導下引物延伸合成長的DNA 互補鏈時應選用 ()(a) T4DNA 聚合酶 (b)Klenow 酶(c)大腸桿菌 DNA聚合酶I (d)T7DNA聚合酶 16末端

17、轉移酶是合成酶類， ()(a) 作用時不需要模板3，末端延長 DNA(b) 在Ca2+的存在下，可以在突出的 鏈(c)在Ca2+的存在下，可以在隱蔽的3，末端延長 DNA17在基因工程中(a)防止DNA的自身環(huán)化 行 DNA 的 5，末端標記(c)制備突出的3,末端(d) 上述說法都正確(d) 上述說法有兩種是正確的，可用堿性磷酸酶 (b) 同多核苷酸激酶一起進18.下列酶中，除()外都具有磷酸酶的活性(a)入核酸外切酶(b)外切酶rn(d)堿性磷酸酶下列哪一種酶作用時需要引物？(a)限制酶(b)末端轉移酶(d)DNA連接酶20. S1核酸酶的功能是()(a)切割雙鏈的 DNA(b)切割單鏈的

18、夾環(huán)(d)以上有兩項是正確的19.(c)單核苷酸激酶)(c)反轉錄酶RNA(c)切割發(fā)21. Klenow酶與DNA聚合酶相比，前者喪失了 性。(a)5, -3,合成酶， 外切酶(d)轉移酶(b)3, -5 ,外切酶()的活(c)5, -3 ,22. 下面關于松弛型質粒(relaxed plasmid)性質的描述中，()是不正確的(a) 質粒的復制只受本身的遺傳結構的控制，而不受染色體復制機制的制約，因而有較多的拷貝數(shù)(b) 可以在氯霉素作用下進行擴增 性標記(c)通常帶有抗藥(d)同嚴緊型質粒融合后，雜合質粒優(yōu)先使用松弛型質粒的復制子23. 基因工程中所用的質粒載體大多是改造過的，真正的 天

19、然質粒載體很少，體中只有( 體(a)p BR322(d) pUCI824.在下列載)被視為用作基因工程載體的天然質粒載(b)p SCI01(c) pUBIIOF列哪種克隆載體對外源DNA的容載量最大？()(b)黏粒 (C)酵母人工染色體(YAC) (d) (e) cDNA表達載體( )(a)質粒 k噬菌體25. 松弛型質粒：(a)在寄主細胞中拷貝數(shù)較多(b)可用氯霉素擴增(d)上述(a)、(b)兩項正(c) 一般沒有選擇標記確26Col El 是惟一用作基因工程載體的自然質粒， 這種質粒： ( )(a) 是松弛復制型(b)具有，四環(huán)素抗性(c) 能被氯霉素擴增(d)能產(chǎn)生腸桿菌素27同一種質粒

20、 DNA ，以三種不同的形式存在，電泳時，它 們的遷移速率是： ()(a)OCDNASCDNALDNA(b) SCDNALDNAOCDNA(c) LDNAOCDNASCDNA(d) SCDNAOCDNALDNA28 pBR322 是一種改造型的質粒，含有兩個抗性基因，其 中四環(huán)素抗性基因來自：(a)ColEl (b)Ri 質粒 (c)pSCl01 (d)pUCl8 29關于穿梭質粒載體，下面哪一種說法最正確?()(a) 在不同的宿主中具有不同的復制機制(b) 在不同的宿主細胞中使用不同的復制起點(c) 在不同的宿主細胞中使用不同的復制酶(d)phagemid)(d)pUCl8(d) 在不同的宿

21、主細胞中具有不同的復制速率 30能夠用來克隆 32kb 以下大小的外源片段的質粒載體是 ( )(a)charomid (b)plasmid (C)cosmid 31第一個作為重組 DNA 載體的質粒是 (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl0132. Ti 質粒：( )(b)作為雙鏈DNA被(a)可從農(nóng)桿菌轉到植物細胞中 轉移(c)在植物中導致腫瘤(d)介導冠癭堿的合成，作為細菌的營養(yǎng)物和植物的生長激素(e) 需要細菌的vir基因幫助轉移在植物細胞中作為染色體外質粒 33黏粒 (cosmid) 是一種人工建造的載體，()(b)(a)它具有COS位點，因而可進行體外包裝它具有質粒

22、DNA 的復制特性(d)進入受(c)進入受體細胞后，可引起裂解反應 體細胞后，可引起溶源化反應 34有兩種確定核酸中核苷酸序列的方法：化學序列分析法(Maxam-GIbert)和酶學序列分析法(Sanger)。酶學測序法的基本原理優(yōu)點是： ()(a) 堿基與特殊染料間不同的相互作用(b) 一個合成引物的延伸和DNA修復合成的可靠終(c) 限制性位點與DNA末端標記的相關性(d) 可同時對DNA雙螺旋的兩條鏈進行測序35關于 cDNA 的最正確的說法是： (a)同mRNA互補的單鏈DNA 補的雙鏈 DNA(c)以mRNA為模板合成的雙鏈 上都正確(e) 反應是DNA特異的，RNA不會帶來干擾。這

23、樣 既減少純化步驟， 也節(jié)約了開支。)DNA(d)以(b) 同 mRNA 互36用堿法分離質粒 DNA 時，染色體 DNA 之所以可以被除 去，是因為： ()(b)染色體DNA分子量染色體DNA斷成了碎片 大，而不能釋放(d)染色體未同蛋白質(c) 染色體變性后來不及復性 分開而沉淀面哪一種說法不正37. 關于堿解法分離質粒 DNA ，確?()(b)溶液n的作用是使(a)溶液I的作用是懸浮菌體DNA 變性(c) 溶液rn的作用是使 DNA復性(d) 質粒DNA分子小，所以沒有變性，染色體變性后不 能復性38. CIark 做了一個有趣的實驗， 發(fā)現(xiàn) TaqDNA 聚合酶可以不 需要模板，在雙鏈

24、 DNA 的末端加一個堿基，主要是加 () cDNA(a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP 39根據(jù)構建方法的不同， 基因文庫分為基因組文庫、 文庫等。在下列文庫中，()屬 cDNA 文庫(a) YAC 文庫 (b) MAC 文庫 (c) 扣減文庫(d) BAC 文庫 40下面關于多克隆位點 (multiple clone site,MCS) 的描述， 不正確的句是 ()(b)具有多種酶的識別序列(d) 一般是人工合(c)不同酶的識別序列可以有重疊 成后添加到載體中 41在 cDNA 技術中，所形成的發(fā)夾環(huán)可用 ()(a)限制性內(nèi)切核酸酶切除(b)用31外切核酸酶切除(

25、c)用S1核酸酶切除 (d)用51外切核酸酶切除 42在 DNA 的酶切反應系統(tǒng)中， 通常：()(a)用SSC緩沖液 (b)加入Mg2+作輔助因子(c)加入BSA等保護劑(d)上述說法中，有兩項是正確的 43(a)僅位于質粒載體中黏性末端連接法，不僅操作方便，而且 ()(c)載體不易(a)產(chǎn)生新切點(b)易于回收外源片段環(huán)化44在下列表型(a)r+m+rec* 45關于 DNA 項不正確 ?(d) 影響外源基因的表達中， ()是基因工程上理想的受體菌表型(b) r-m-rec-(C)r-m-rec+(d)r+m+rec-接頭在基因工程中的作用，下列說法中哪一)(b)人工構建載體(d)增加調控元

26、件)(b)所有蛋白質的結構基(a)給外源DNA添加適當?shù)那悬c(c) 調整外源基因的可讀框46cDNA 文庫包括該種生物的 (a)某些蛋白質的結構基因 因(c)所有結構基因(d)內(nèi)含子和調控區(qū)47下列關于建立cDNA 文庫的敘述中，哪一項是錯誤的?()DNA 或 RNA(a) 從特定組織或細胞中提取(b) 用反轉錄酶合成 mRNA的對應單鏈 DNA(c) 以新合成的單鏈 DNA為模板合成雙鏈 DNA(d) 新合成的雙鏈DNA甲基化 48下列對黏性末端連接法的評價中，哪一項是不正確的( )(a )操作方便(b)易于回收片段(c)易于定向重組(d)載體易于自身環(huán)化，降低重組率49關于感受態(tài)細胞性質的

27、描述，下面哪一種說法不正確 ?( )(功具有可誘導性(b)具有可轉移性(d)不同細菌出(c)細菌生長的任何時期都可以出現(xiàn) 現(xiàn)感受態(tài)的比例是不同的50下面關于用 T4 多核苷酸激酶標記 5 端制備探針的描述 中()是不正確的。(b)既能標記(a)既能標記 DNA，又能標記 RNA 雙鏈 DNA 又能標記單鏈 DNA(c) 只能標記突出的5端不能標記其他類型末端) 雜交。(b)可與任何含有相同(d) DNA 或 RNA 必須有 5-OH 的存在 51 Southem 印跡的 DNA 探針 (a)只與完全相同的片段 序列的 DNA 片段DNA 片段DNA 片段(c) 可與任何含有互補序列的(d) 可

28、與用某些限制性內(nèi)切核酸酶切成的)說明外源基印跡雜交(e) 以上都是 52 用下列方法進行重組體的篩選，只有(因進行了表達。(a)Southem 印跡雜交(b)Northem(c)Western印跡(d)原位菌落雜交53下列哪一個不是 Southern 印跡法的步驟 ?()(a)用限制酶消化 DNADNA與載體的連接(c)用凝膠電泳分離DNA片段(d)DNA片段轉移至硝酸纖維素膜上54(e) 用一個標記的探針與膜雜交 報告基因 ()(a)以其易于分析的編碼序列代替感興趣基因的編碼序列(b) 以其易于分析的啟動子區(qū)代替感興趣基因的啟動子區(qū)(c)能用于檢測啟動子的活性(d)能用于確定啟動子何時何處有

29、活性55 在利用 lacZ 失活的顯色反應篩選法中， IPTG 的作用是 ( )(b)誘導宿主的3肽(a)誘導宿主的a肽的合成 的合成(d) 作為顯色反應的指示(c) 作為酶的作用底物劑) 作用下，使 () 帶上放射性標56. 切口移位是指在 ( 記。(a)DNA 聚合酶 I，(c)DNA聚合酶rn,RNA(b)DNA 聚合酶 I， DNARNA(d)DNA 聚合酶m, DNA57用于核酸分子雜交的探針可以是放射性標記的()(a)DNA (b)RNA (c)抗體(d)抗原探針檢測 DNA58Southern 印跡是用 DNA 印跡則是： ( )用RNA探針檢測檢測 RNA 片段(c)用DNA探

30、針檢測 檢測蛋白質片段DNA 片段RNA 片段片段，而 Northern(b)用RNA探針(d)用DNA探針)(b)根據(jù)載體基因59用免疫化學法篩選重組體的原理是(a)根據(jù)外源基因的表達的表達(d)根據(jù)DNA同(c) 根據(jù) mRNA 同DNA 的雜交DNA 的雜交60 隨機引物標記探針，下列各項中哪一項是不正確)雙鏈 DNA、單鏈 DNA、RNA都是可以標記的(b)不需要用 Dnase I預處理Klenow 酶(c)反應時可用 聚合酶 1 61在切口移位標記(a)Klenow 酶 聚合酶n(d)DNA(d)反應時可用 DNADNA 探針時只能使用 (b)DNA 聚合酶 I聚合酶rn)(c)DN

31、A62要對一雙鏈的 DNA 分子進行 31末端標記，(b)DNA 聚合酶(a)Klenow 酶(c)T4DNA 聚合酶 (d)T7DNA可用 (聚合酶答案1c；2c； 8d；9d； 15 d； 16 22C； 23 29b；30a；31c； 35c；36c； b， c； 4349c；50 56b；57b，C，d，e； 6c； 7 12a； 13d； 14b a；19c；20d；21c； 24C；25d；26a，C，d；27b；28 32a,c,d,e， 33a，b，c；34 37d； 38b；39c；40a；41c； 42 44 b； 45 d； 46 a；47 a； 48 51c； 52 c

32、； 53b； 54a,c,d；55 b； 58c； 59 a； 60 d ； 61 b； 623b； 4b510B； 11d； c；17a，b；18 b；b； b； a，b；c； b； a， c； a； c；三、簡答題1說明 Sanger DNA 測序法的原理。Sanger DNA 測序法是建立在兩個基本原理之上： (1)核酸 是依賴于模板在聚合酶的作用下由 5端向 3端聚合 (DNA 聚合酶參與了細菌修復 DNA 合成過程 )；(2)可延伸的引物必須能提供游離的3羥基末端，雙脫氧核苷酸由于缺少游離的 3羥基末4 種雙脫端，因此會終止聚合反應的進行。如果分別用氧核苷酸終止反應，則會獲得 4 組

33、長度不同的 DNA 片段。通過比較所有 DNA 片段 的長度可以得知核苷酸的序列。2某學生在用 EcoRI 切割外源 DNA 片段時， 出現(xiàn)了星號活 性，請分析可能的原因 ?鹽離子濃度不對， 溫度不對， 甘油濃度過高。3 .在序列5-CGAACATATGGAGT-3中含有一個 6bp的n類 限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列，該位點的序列可能是什 么?回文序列是： 5-CATATG-3 ，4. 下面幾種序列中你認為哪一個 (哪些)最有可能是n類酶的 識別序列：GAATCG ， AAATTT ， GATATC ， ACGGCA? 為什 么?GATATC；AAATTT ，因為它們是回文序列。5. 當兩種限

34、制性內(nèi)切核酸酶的作用條件不同時，若要進行 雙酶切，應采取什么措施 ?為什么 ? 注意星活性，先低鹽，后高鹽；先低溫酶，后高溫酶； 并且可以直接在換酶前將第一種酶失活，再加第二種酶，否則，易產(chǎn)生星活性。或使 用通用緩沖液。6. 為什么反轉錄酶在聚合反應中會出錯 ? 由于反轉錄酶缺少在 E. coli DNA 聚合酶中起校正作用的 3-5外切核酸酶活性，所以聚合反應往往會出錯，在高濃 度的dNTP和Mg2+下，每500個堿基中可能有一個錯配。7. 什么是測序酶 (sequenaseTM)?所謂測序酶即是修飾了的 T7 DNA 聚合酶，是采用缺失的 方法，從外切核酸酶結構域中除去 28 個氨基酸，這

35、樣使 T7 DNA 聚合酶完全失去了 3-5的外切核酸酶活性，只有 5-3聚合酶的活性，而且聚合能力提高了39倍，測序時常用此酶。& 什么是S1核酸酶作圖(S1 nuclease mapping)?S1核酸酶作圖是一種對RNA轉錄產(chǎn)物的末端和剪接位點進行作圖的方法DNA序列？為什么在克9 YAC載體具有什么樣的功能性 隆大片段時，YAC具有優(yōu)越性？YAC帶有天然染色體所有的功能元件，包括一個著絲粒， 一個DNA復制起點，兩個端粒。 YAC能夠容納長達幾百 kb的外源DNA，這是質粒和黏粒辦不到的。大片段的插 入更有可能包含完整的基因，在染色體步移中每次允許更 大的步移距離，同時能夠減少完整基因

36、組文庫所需的克隆 數(shù)目。4個基本特性。(3)有獨特的酶切位10. 列舉質粒載體必須具備的(1) 獨立復制；(2)有選擇標記；點；(4)能轉化但不擴散。11. 什么叫穿梭載體？含有細菌質粒和克隆的真核生物DNA片段的雜種質粒，有兩個復制起點和既能在細菌又能在真核細胞中進行選擇的選擇標記，所以，很容易從一宿主轉到另一個宿主(來回穿梭)。12. 如何將野生型的幾噬菌體改造成為一個理想的載體？(1) 削減分子量(除去非必需區(qū)和整合區(qū))；(2)削減酶切 位點；(3)添加選擇標記；(4)引入終止突變13. PCR的基本原理是什么?用 PCR擴增某一基因，必須 預先得到什么樣的信息？(1)DNA半保留復制的

37、原理，在體外進行DNA的變性、 復性和引物延伸。DNA序列。(2) 至少要預先知道足夠合成一對引物的靶14. cDNA克隆與基因組克隆有何不同出現(xiàn)的內(nèi)含子?；蚪M克隆包含所有不在cDNA中15. 怎樣將一個平末端 DNA片段插入到EcoR I限制位點 中去？化學合成一些長為1Obp含有EcoRI識別位點的短的DNA片 段，然后與待克隆片段兩端連接起來，如果用EcoRI切割這種連接片段，就會產(chǎn)生 EcoRI的單鏈末端。這種片段就可以 插入到任何EcoRI的限制性內(nèi)切酶位點中O可以利用COS位點16. 簡述以黏粒為載體構建基因文庫的原理(1)COS位點可以自身環(huán)化； 包裝A噬菌體顆粒；(4)利用質

38、粒復制子復制，(3) 可以感染寄主細胞；不整合、不裂解。17. 酵母人工染色體要在酵母細胞中穩(wěn)定存在，必須有哪 些基本的結構？(3)ARS 序列。(1)著絲粒；(2)端粒；18. 何謂YAC?主要特性是什么？(1)含有來自其他生物DNA的酵母人工染色體，叫YAC ；(2) 主要特性是可以克隆較大的外源片段。DNA復制有哪19. Muller的PCR反應同大腸桿菌體內(nèi)的些不同？你認為根本的差別在哪里？PCR用雙引物，體內(nèi)復制用單引物。20. 欲將一真核生物的結構基因克隆后轉移到原核生物E. coli)中進行表達，克隆時應 注意哪些問題？ 應注意的問題有：啟動子、密碼子、剪接、分泌。21. 假定你

39、分離到一個 E. coli的Thy-突變體，并推測有可 能是ThyA基因突變。請設計一個方案用PCR從染色體DNA擴增突變的ThyA基因， 測定突變的序列。(注：E. coli野生型的ThyA基因的序列是已知的)為了擴增突變體的thyA基因，先設計一對引物，其中一 個引物的序列與thyA基因的5端相同，另一個引物同該基 因的3端互補。在引物的5端加上合適n類限制性內(nèi)切核酸 酶的識別序列，以便于后來的克隆。將染色體DNA同引物混合后，進行PCR擴增。然后進行瓊脂糖凝膠電泳，純化擴增片段，可以直接測序或克隆到合適的載體再測序。止 步。22. 你在做Southern印跡分析，并且剛完成了凝膠電泳這

40、根據(jù)方案，下面一步驟是用NaOH溶液浸泡凝膠，使 DNA變性為單鏈。為了 節(jié)省時間，你略過了這一步，直接將DNA從凝膠轉至硝酸纖維素膜上。然后用標記探針雜交，最后發(fā)現(xiàn)放射自顯影片是空白。錯在哪里 ？如果你的雜交探針是雙鏈的，可能因為在加人雜交混合物 之前忘記將探針變性而得到空白的放射自顯影結果。23. 切口移位(nick translation)標記探針的主要步驟有哪些？(1) DNasel 造成切口；(2) DNA聚合酶III的5 3外切核酸酶進行切割；(3) DNA聚合酶川的5 3合成酶進行修補；(4) 在修補過程中，隨著切口 (nick)的移動，將放射性的底 物摻人到雙鏈DNA中。24.

41、 用EcoRI和Hind m分別切割同一來源的染色體DNA , 并進行克隆，在前者的克隆中禾篩選到 A基因，中篩選到A基因，但在后者的克隆 請說明原因。原因是：Hind m的切點在 A基因內(nèi)。25. 什么是 Western印跡？它與Southern印跡有什么不同？Western印跡是將蛋白質經(jīng)電泳分離后從凝膠中轉移到固 相支持物上，然后用特異性的抗體進行檢測。它與Southern的不同在于探針的性質不同，在Western印跡中使用的探針是抗體(蛋白質)。26. 用一限制性內(nèi)切核酸酶切割Lac+ Tet+的質粒載體，已知 該酶識別的是4個堿基序列，并產(chǎn)生有兩個堿基突出的單鏈末端，該酶在lac基因

42、內(nèi)有切割位點，并在第二個氨基酸密碼子內(nèi)，該位點可以被任何氨基酸所取代而不影響 酶活性。用該酶切割后，用 DNA聚合酶將單鏈末端補齊為雙鏈的平末端，然后重新連接成環(huán)，轉化Lac- Tets 受體菌，篩選Tetr轉化子，問：Lac的基因型是什么？并說 明原因?；蛐褪莑ac-.原因是在該密碼子中插入了兩個堿基，造 成了移碼突變，所以 Lac的基因是缺陷的。27.在基因工程中，為了在細菌細胞中表達真核生物的基因 產(chǎn)物，為什么通常要用 cDNA而不用基因組DNA？為什么要在cDNA前加上細菌的啟動 子？這是因為細菌沒有內(nèi)含子剪接系統(tǒng)，并且不能識別真 核生物的啟動子之故問答題：說明限制性內(nèi)切核酸酶的命名

43、原則要點。什么是限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性？受哪些因素影向？影響DNA連接酶催化連接反應的因素有哪些？什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作四、1.2.3.2. 用？?在5 .細菌堿性磷酸酯酶和小牛腸堿性磷酸酯酶有什么不同 基因工程中有什么用途？6. 入外切核酸酶(lambda exonuclease)基本活性是什么 ？在基 因工程中有什么應用？7. Mn2+、Mg2+ 對 Dnase (deoxyribonuclease ?)的活性有什么影響？Dnase I在基因工程中有什么作用 ？&質粒如何維持在細胞中的穩(wěn)定？9. 由于基因工程是人為改變遺傳信息的操作，因此必須注 意被操作

44、基因的安全，進行嚴格的監(jiān)控，質粒載體的安全性是十分重要的。請 問質粒載體的安全條件包括哪幾個方面？10. 為什么野生型的 幾噬菌體DNA不宜作為基因工程載體 ？11. 什么是藍白斑篩選法？12. 藍白斑篩選法為什么也會有假陽性？13. M13系列載體具有哪些優(yōu)缺點 ？14黏粒載體具有哪些特點與不足?15輔助噬菌體 DNA 和相應的噬菌粒是如何協(xié)同工作的 ? 16 如果知道某一基因的功能及其相應的蛋白質的氨基酸 序列組成，可以通過何種方法克隆該基因 ?17 什么是基因文庫 ?18 什么是基因組文庫 (genomic library)? 構建基因組文庫， 涉及哪些基本過程 ?它同遺傳學上的基因庫有

45、什么不同 ?19 什么是 cDNA 文庫 (complementDNAlibrary)? 同基因組 文庫有何差別 ?20 黏性末端連接法是最常用的連接方法，具有許多優(yōu)點， 但是也有一些不足，請指出這些不足之處。21什么是同聚物加尾連接法 (homopolymer tails joining)? 用 何種方法加尾 ?具有哪些優(yōu)缺點?22何謂接頭連接法 (1inker ligation)?23什么是同裂酶 ?為什么說用同裂酶進行體外重組效率最高 24為了大量獲得許多用于生化鑒定的產(chǎn)物，你想將擬南芥 中的一個序列已知、編碼單體酶蛋白的基因在單細胞微生物中表達，你如何確保最 終能得到產(chǎn)物 ?25. 某

46、一質粒載體具有 Tef和Kanr的表型，在Kan抗性基因 內(nèi)有一 Bgl I 的切點。現(xiàn)用Bgl I 切割該載體進行基因克隆，問：(1)轉化后涂皿時應加什么樣的抗生素 ?(2)培養(yǎng)后長出的菌落具有什么樣的抗性基因型?(3)如何利用抗性變化篩選到含有插入片段的重組體 ?26. 以 pBR322 DNA 作為載體，從四環(huán)素抗性基因區(qū)克隆 外源 DNA 時，可采用環(huán)絲氨酸富集法篩選重組體，說明其基本原理和基本操作過程。27 放射性抗體檢測法 (radioactive antibody test) 的基本原理 是什么?28 什么是隨機引物 (random primer)? 如何標記 DNA? 29什么

47、是印跡 (blotting) 雜交 ?30什么是原位菌落雜交 (colony hybridization)? 31說明 Southern 雜交的原理和方法。32 Northern 印跡與 Southern 印跡有什么不同 ? 33建立了一個基因文庫后，如何鑒定一個攜帶目的基因的 克隆?答案：+種名3-4 首字母： 取種1 答： 限制性內(nèi)切核酸酶采用三字母的命名原則，即屬名號。第三字母：(2) 若種名有詞頭，且已命名過限制酶，則取詞頭后的第 一字母代替。第四字母： 若有株名，株名則作為第四字母，是否大 小寫，根據(jù)原來的情況而定，但用正體。+株名的各一個首字母， 再加上序號。 基本原則： 個字母組

48、成， 方式是：屬名 +種名 +株名 +序號； 取屬名的第一個字母，且斜體大寫；第二字母： 名的第一個字母，斜體小寫；順序號：若在同一菌株中分離了幾種I、口、rn、等，用正(1) 取種名的第二個字母， 斜體小寫；限制酶，則按先后順序冠以 體。2 答：n類限制酶雖然識別和切割的序列都具有特異性，但是 這種特異性受特定條件的限 制，即在一定環(huán)境條件下表現(xiàn)出來的特異性。條件的改 變，限制酶的特異性就會松 動，識別的序列和切割都有一些改變，改變后的活性通 常稱第二活性，而將這種因條件的改變會出現(xiàn)第二活性的酶的右上角加一個星號表 示，因此第二活性又稱為星活性。(1)高甘油含概括起來，誘發(fā)星活性的因素有如下

49、幾種：量(5 % , v/ V); (2)限制性； (3) 低離子強度內(nèi)切核酸酶用量過高 (100U ugDNA) (25 mmol L) ； (4)高 pH(80乙醇等； (6) 有非以上 )； (5)含有有機溶劑，如 DMSO，Mg2+ 的二價陽離子存在 (如Mn2+ , Cu2+ , C02+ , Zn2+ 等)。3 答：連接時高 10-100 倍。 DNA 中DNA 連接酶的活性，但是，如果 150mmol / L ,則對連接反應有強的抑制作用。另外反應體系中有 NH4+ 離子的存在， 對 Ecoli DNA 連 接酶具有激活作用。 Ecoli DNA連接酶需要 NAD+ 作輔助因子，

50、而 T4 DNA 連接酶需要影響 DNA 連接酶催化連接反應的因素有很多， 但溫度對 連接反應的影響較大。 黏性末端鏈通常以 12C 一 15 C 最好，這種溫度有利于末端退火和連接酶的活性穩(wěn)定。 溫度高了難以進行末端退火，低于上述溫度會降低連接 酶的活性。平末端連接以室溫為宜，因為平末端連接不 存在DNA的退火問題，但是溫度高于 30C，連接酶特 別不夠穩(wěn)定。平末端連接時連接酶的濃度要比黏性末端 有殘存的 tRNA 不會抑制 NaCl 的濃度高于ATP。4 答：Klenow 酶是 1974年 Klenow 用枯草桿菌蛋白酶水解 DNA 聚合酶I，得到兩個片段，其中大片段的分子量為75kDa

51、,它具有 5-3聚合酶和 3-5外切核酸酶的活性，小片段具 有 5-3外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA 聚合酶 I 中會降解 5引物的 5-3外切核酸酶的活性，所以在 基因工程中更有用。Klenow 酶主要有下列用途：(1) 修復反應，制備平末端 可用 Klenow 酶修復限制性內(nèi)切核酸酶或其他方法產(chǎn)生的5或 3突出末端，制備平末端，這樣可以使原來具有不 相容的黏性末端的 DNA 片段通過平末端重組。如在反 應系統(tǒng)中加入放射性同位素標記的脫氧核苷酸，用這種 末端填補的方法可以制備 3 末端標記的探針。3用 Klenow 酶 修 復 5突 出末 端 的 反 應 主要 是 利 用 了 Kle

52、now 酶的 DNA 聚合酶活性，是填補反應；而修復 突出末端則是用 Klenow 酶的 3-5外切核酸酶的活性，是切割反應。用 Klenow 酶的切割反應來修復 3突出末 端是不理想的，改用 T4DNA 聚合酶或其他的酶是更好 的選擇。3( -32p-dNTP) 存在下， 使降解 (3-5) 作用與聚合 (5-3) 作用 達到平衡。這種反應也叫交換或取代反應(exchangereplacement reaction) 。不過這一反應用 T4DNA 聚合酶 的效果更好， 因它的 3-5 外切核酸酶活性較強。(3)其他的一些用途： 包括用雙脫氧末端終止法進行DNA(2) 標記 DNA3 突出末端

53、 (protruding end) 該反應分兩步進行：先用 3-5的外切核酸酶活性除去 突出末端，產(chǎn)生 3隱含末端，然后在高濃度的標記底物序列分析、用于 cDNA 第二鏈的合成、在定點突變中用 于合成第二鏈、 用引物延伸法 (primer extension) 制備單鏈 DNA 探針等。5答：主要差別是：CIP68 C時失活，而BAP68 C穩(wěn)定，且 耐酚抽提。應用：(1) dsDNA 的 5端脫磷酸，防止 DNA 的自身連接。但是 用 CIP 處理后，最好將 CIP 除去后，再進行連接反應。(2) DNA 和 RNA 脫磷酸，然后用于多核苷酸激酶進行末 端標記。6答：外切核酸酶是從 噬菌體感染的 E coli 中分離純化的， 能夠從雙鏈 DNA 上依次切下 5單核苷酸，作用底物是雙鏈 DNA 的 5磷酸末端，不能切割羥基化5端。該酶雖然能切割單鏈 DNA, 但效率較低 (下降 200 倍 )。不能切 割帶切口或缺口的 dsDNA 。該酶作用時是行進性的， 一 步進行的。在基因工程中主要用于除去雙鏈 DNA 突出的 5 末端，以便讓末端轉移酶加尾。7答：DNase IMn2+ 代替DNase I 是一種內(nèi)切核酸酶，在Mg2+ 存在下，隨機切割 DNA 兩條鏈中的任意一條鏈；當Mg2+時，DNase I幾乎是在