醫(yī)療科技公司無菌檢驗操作規(guī)程

1、醫(yī)療科技公司無菌檢驗操作規(guī)程1 目的 為規(guī)范無菌檢驗操作，特制定本規(guī)程。2 適用范圍 本規(guī)程適用于本公司植入物滅菌產(chǎn)品生物性能的檢驗。3 職責3.1 質量管理部檢驗人員負責無菌檢驗。3.2 質量管理部負責人監(jiān)督執(zhí)行。4 操作規(guī)程4.1 儀器、設備及試劑4.1.1 專用類 超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、電熱干燥箱。4.1.2 通用類試管（30mL、50mL）、錐形瓶、量筒、培養(yǎng)皿（90mn）、 刻度吸管（1mL、5mL 10mL、玻璃注射器10mL、手術鑷、 手術剪、鉗子、試管架（至少 3X 10孔位）、酒精燈、酒精 棉球、火柴、洗耳球；無菌服、無菌帽、無菌口罩、一次性 無

2、菌橡膠手套。4.1.3 試劑類 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基，質量濃度為 9g/L 的無菌氯化鈉溶液。注意：O 以上器皿使用前應用清水沖洗 45次后純化水沖 洗3次，干燥箱內(nèi)50C烘干30min，用牛皮紙包扎 嚴密，滅菌備用。 滅菌器材、供試品等通過傳遞窗進入無菌室后， 拆除外包裝，送至超凈臺上，以避免污染。4.2 試驗環(huán)境要求無菌試驗應在超凈工作臺局部符合潔凈度 100 級單向流 空氣區(qū)域內(nèi)進行。超凈臺在消毒處理完畢后，應檢查空氣中 菌落數(shù)，方法如下：取直徑約 90mm勺培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20mL在30 C35 C條件下培養(yǎng) 48h 證明無菌后，取 3 只培養(yǎng)

3、皿在超凈臺平均位置打開上 蓋，暴露30min后蓋好置30 C35C條件下培養(yǎng)48h后取出 檢查， 3 個培養(yǎng)皿上生長的菌落數(shù)平均不超過 1 個。每次操作完畢后， 以消毒溶液擦拭工作臺面， 除去室內(nèi)濕 氣，紫外線燈殺菌不少于 30min。4.3 試驗前準備（1） 器具滅菌：與供試液接觸的所有器具使用前應滅菌，放置于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121 C 30min，或放置于電熱干燥箱內(nèi)160C 2h。其中移液管上口用約 2cm長棉花封口， 報紙或牛皮紙包裹；錐形瓶、試管等以牛皮紙或錫紙包裹， 內(nèi)有液體的以錫紙包裹；培養(yǎng)皿以報紙或牛皮紙包裹；未使 用過的 0.9%的無菌氯化鈉溶液， 用錫紙或牛皮紙包裹； 使用

4、 過的 0.9%的無菌氯化鈉溶液，插上一個針頭后用錫紙包裹； 凡有塞、蓋的器具均應使用硅橡膠塞，并帶塞、蓋一同進行 滅菌。2） 每次試驗前， 無菌室用雙氧水或 75%乙醇消毒液擦拭、紫外線燈照射不少于 30min 。超凈臺應保持干凈、無 雜物。試驗所需培養(yǎng)基、器具（帶包裝） 、供試品應在試驗 開始前放置于潔凈間內(nèi)，以紫外線燈照射進行表面滅菌。（ 3） 人員要求： 進入潔凈區(qū)域時， 人員應穿上潔凈鞋， 清水洗手后用酒精棉球擦拭雙手， 穿上無菌服， 戴上無菌帽、 無菌口罩和一次性無菌橡膠手套，手套口應包裹住無菌服袖 口，不得暴露手腕處皮膚。（ 4） 關閉超凈臺的紫外線燈，打開風機。（ 5） 供試品

5、準備：待檢供試品在超凈臺外經(jīng)紫外線燈 表面滅菌后，以 75酒精擦拭外包裝后移入超凈臺。 （若為 單層無菌包裝，則酒精擦拭后移入超凈臺上脫包；若為雙層 無菌包裝，則凈化間脫去外包裝后在超凈臺上脫去內(nèi)包裝。 ）4.4 供試品抑菌性驗證試驗對未知或可疑的供試品，在無菌試驗前，應按照中國 藥典（二部） 附錄中“無菌檢查法”的規(guī)定進行方法驗證 試驗 、，以確認供試品在該試驗條件下無抑菌活性或其抑菌 活性可以忽略不計4.5 試驗方法（1）培養(yǎng)基CD培養(yǎng)基的制備不自行制備，購買中檢所提供的培養(yǎng)基。C2 培養(yǎng)基的要求在使用前，每批培養(yǎng)基隨機取不少于 5 支（瓶）培養(yǎng) 14 天，應無菌生長。在供試品接種前，培養(yǎng)

6、基指示劑氧化層的顏色不得超過培養(yǎng)基深度約 1/5 ，否則須經(jīng)水浴煮沸加熱， 只限加熱一次。C3 培養(yǎng)基靈敏度檢查向供方索要培養(yǎng)基靈敏度檢查報告。（ 2）供試品數(shù)量同一批號 3 個-11 個單位供試品（ 3）浸提介質質量濃度為 9g/L 的無菌氯化鈉溶液。（4）供試液制備優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。如供試品不適宜直接投放，可按下列方法制備供試液，應使浸提介質充分洗提供試品的浸提表面。供試液制備應按無菌操作法進行，應在制備后 2h 內(nèi)使用。 小型產(chǎn)品可直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)；大型產(chǎn)品按表面積每10cm2加入浸提介質1mL,振搖數(shù)次。注意： 制備供試液的過程應在酒精燈火焰

7、周圍10cm范圍內(nèi)操作（此范圍內(nèi)為無菌空間） ，打開、塞上瓶管類器具的橡膠塞前、后都應在酒精燈火焰上灼燒510秒。 直接投入培養(yǎng)基的產(chǎn)品應以滅菌后的鑷子夾取。 供試液制備過程中不要讓供試品掉落臺面或碰到 未經(jīng)滅菌的器具，若供試品掉落于臺面或碰到了未經(jīng)滅菌的 器具，應丟棄，重新取樣。 已使用過的滅菌器具只可對同一批次的供試品再次使用，再次使用前應在酒精燈火焰上反復灼燒滅菌。 供試液制備好后應標注記號，包括供試品、制備 時間等相關信息。（5）接種方式：選擇每批滅菌產(chǎn)品中合適的產(chǎn)品采用 直接接種法或浸提法進行無菌試驗。直接接種法： 將供試品或其有代表性的各部分或供試液分別接種于 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

8、 10 管，其中一管接種于質量濃度為 9g/L 的無菌氯化鈉溶液 1mL 作陰性對照；在將供試品或其 有代表性的各部分或供試液分別接種改良馬丁培養(yǎng)基 10 管， 其中一管接種于質量濃度為 9g/L 的無菌氯化鈉溶液 1mL 作 陰性對照。每個容器中培養(yǎng)基的用量應符合接種的供試品體 積不得大于培養(yǎng)基體積 10%，同時，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 每管裝量不少于15 mL,改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10mL。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基管置 30 C35 C恒溫培養(yǎng)箱、改 良馬丁培養(yǎng)基管置 20 C25 C生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 14d。培養(yǎng) 期間逐日觀察并記錄是否有菌生長。4.6 結果判定硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)及改良馬丁培養(yǎng)基管均為澄清應 判為供試品合格。如需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基及真菌培養(yǎng)基管中任何1 管顯渾濁并確認有菌生長，應重新取 2 倍量供試品，分別依法復 試，其他各管均不得有菌生長，否則應判為供試品不合格。4.7 試驗記錄 檢測器具滅菌記錄 每日觀