醫(yī)療科技公司無菌檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、醫(yī)療科技公司無菌檢驗(yàn)操作規(guī)程1 目的 為規(guī)范無菌檢驗(yàn)操作，特制定本規(guī)程。2 適用范圍 本規(guī)程適用于本公司植入物滅菌產(chǎn)品生物性能的檢驗(yàn)。3 職責(zé)3.1 質(zhì)量管理部檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)無菌檢驗(yàn)。3.2 質(zhì)量管理部負(fù)責(zé)人監(jiān)督執(zhí)行。4 操作規(guī)程4.1 儀器、設(shè)備及試劑4.1.1 專用類 超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、電熱干燥箱。4.1.2 通用類試管（30mL、50mL）、錐形瓶、量筒、培養(yǎng)皿（90mn）、 刻度吸管（1mL、5mL 10mL、玻璃注射器10mL、手術(shù)鑷、 手術(shù)剪、鉗子、試管架（至少 3X 10孔位）、酒精燈、酒精 棉球、火柴、洗耳球；無菌服、無菌帽、無菌口罩、一次性 無

2、菌橡膠手套。4.1.3 試劑類 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基，質(zhì)量濃度為 9g/L 的無菌氯化鈉溶液。注意：O 以上器皿使用前應(yīng)用清水沖洗 45次后純化水沖 洗3次，干燥箱內(nèi)50C烘干30min，用牛皮紙包扎 嚴(yán)密，滅菌備用。 滅菌器材、供試品等通過傳遞窗進(jìn)入無菌室后， 拆除外包裝，送至超凈臺上，以避免污染。4.2 試驗(yàn)環(huán)境要求無菌試驗(yàn)應(yīng)在超凈工作臺局部符合潔凈度 100 級單向流 空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。超凈臺在消毒處理完畢后，應(yīng)檢查空氣中 菌落數(shù)，方法如下：取直徑約 90mm勺培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20mL在30 C35 C條件下培養(yǎng) 48h 證明無菌后，取 3 只培養(yǎng)

3、皿在超凈臺平均位置打開上 蓋，暴露30min后蓋好置30 C35C條件下培養(yǎng)48h后取出 檢查， 3 個培養(yǎng)皿上生長的菌落數(shù)平均不超過 1 個。每次操作完畢后， 以消毒溶液擦拭工作臺面， 除去室內(nèi)濕 氣，紫外線燈殺菌不少于 30min。4.3 試驗(yàn)前準(zhǔn)備（1） 器具滅菌：與供試液接觸的所有器具使用前應(yīng)滅菌，放置于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121 C 30min，或放置于電熱干燥箱內(nèi)160C 2h。其中移液管上口用約 2cm長棉花封口， 報(bào)紙或牛皮紙包裹；錐形瓶、試管等以牛皮紙或錫紙包裹， 內(nèi)有液體的以錫紙包裹；培養(yǎng)皿以報(bào)紙或牛皮紙包裹；未使 用過的 0.9%的無菌氯化鈉溶液， 用錫紙或牛皮紙包裹； 使用

4、 過的 0.9%的無菌氯化鈉溶液，插上一個針頭后用錫紙包裹； 凡有塞、蓋的器具均應(yīng)使用硅橡膠塞，并帶塞、蓋一同進(jìn)行 滅菌。2） 每次試驗(yàn)前， 無菌室用雙氧水或 75%乙醇消毒液擦拭、紫外線燈照射不少于 30min 。超凈臺應(yīng)保持干凈、無 雜物。試驗(yàn)所需培養(yǎng)基、器具（帶包裝） 、供試品應(yīng)在試驗(yàn) 開始前放置于潔凈間內(nèi)，以紫外線燈照射進(jìn)行表面滅菌。（ 3） 人員要求： 進(jìn)入潔凈區(qū)域時(shí)， 人員應(yīng)穿上潔凈鞋， 清水洗手后用酒精棉球擦拭雙手， 穿上無菌服， 戴上無菌帽、 無菌口罩和一次性無菌橡膠手套，手套口應(yīng)包裹住無菌服袖 口，不得暴露手腕處皮膚。（ 4） 關(guān)閉超凈臺的紫外線燈，打開風(fēng)機(jī)。（ 5） 供試品

5、準(zhǔn)備：待檢供試品在超凈臺外經(jīng)紫外線燈 表面滅菌后，以 75酒精擦拭外包裝后移入超凈臺。 （若為 單層無菌包裝，則酒精擦拭后移入超凈臺上脫包；若為雙層 無菌包裝，則凈化間脫去外包裝后在超凈臺上脫去內(nèi)包裝。 ）4.4 供試品抑菌性驗(yàn)證試驗(yàn)對未知或可疑的供試品，在無菌試驗(yàn)前，應(yīng)按照中國 藥典（二部） 附錄中“無菌檢查法”的規(guī)定進(jìn)行方法驗(yàn)證 試驗(yàn) 、，以確認(rèn)供試品在該試驗(yàn)條件下無抑菌活性或其抑菌 活性可以忽略不計(jì)4.5 試驗(yàn)方法（1）培養(yǎng)基CD培養(yǎng)基的制備不自行制備，購買中檢所提供的培養(yǎng)基。C2 培養(yǎng)基的要求在使用前，每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于 5 支（瓶）培養(yǎng) 14 天，應(yīng)無菌生長。在供試品接種前，培養(yǎng)

6、基指示劑氧化層的顏色不得超過培養(yǎng)基深度約 1/5 ，否則須經(jīng)水浴煮沸加熱， 只限加熱一次。C3 培養(yǎng)基靈敏度檢查向供方索要培養(yǎng)基靈敏度檢查報(bào)告。（ 2）供試品數(shù)量同一批號 3 個-11 個單位供試品（ 3）浸提介質(zhì)質(zhì)量濃度為 9g/L 的無菌氯化鈉溶液。（4）供試液制備優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。如供試品不適宜直接投放，可按下列方法制備供試液，應(yīng)使浸提介質(zhì)充分洗提供試品的浸提表面。供試液制備應(yīng)按無菌操作法進(jìn)行，應(yīng)在制備后 2h 內(nèi)使用。 小型產(chǎn)品可直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)；大型產(chǎn)品按表面積每10cm2加入浸提介質(zhì)1mL,振搖數(shù)次。注意： 制備供試液的過程應(yīng)在酒精燈火焰

7、周圍10cm范圍內(nèi)操作（此范圍內(nèi)為無菌空間） ，打開、塞上瓶管類器具的橡膠塞前、后都應(yīng)在酒精燈火焰上灼燒510秒。 直接投入培養(yǎng)基的產(chǎn)品應(yīng)以滅菌后的鑷子夾取。 供試液制備過程中不要讓供試品掉落臺面或碰到 未經(jīng)滅菌的器具，若供試品掉落于臺面或碰到了未經(jīng)滅菌的 器具，應(yīng)丟棄，重新取樣。 已使用過的滅菌器具只可對同一批次的供試品再次使用，再次使用前應(yīng)在酒精燈火焰上反復(fù)灼燒滅菌。 供試液制備好后應(yīng)標(biāo)注記號，包括供試品、制備 時(shí)間等相關(guān)信息。（5）接種方式：選擇每批滅菌產(chǎn)品中合適的產(chǎn)品采用 直接接種法或浸提法進(jìn)行無菌試驗(yàn)。直接接種法： 將供試品或其有代表性的各部分或供試液分別接種于 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

8、 10 管，其中一管接種于質(zhì)量濃度為 9g/L 的無菌氯化鈉溶液 1mL 作陰性對照；在將供試品或其 有代表性的各部分或供試液分別接種改良馬丁培養(yǎng)基 10 管， 其中一管接種于質(zhì)量濃度為 9g/L 的無菌氯化鈉溶液 1mL 作 陰性對照。每個容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體 積不得大于培養(yǎng)基體積 10%，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 每管裝量不少于15 mL,改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10mL。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基管置 30 C35 C恒溫培養(yǎng)箱、改 良馬丁培養(yǎng)基管置 20 C25 C生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 14d。培養(yǎng) 期間逐日觀察并記錄是否有菌生長。4.6 結(jié)果判定硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)及改良馬丁培養(yǎng)基管均為澄清應(yīng) 判為供試品合格。如需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基及真菌培養(yǎng)基管中任何1 管顯渾濁并確認(rèn)有菌生長，應(yīng)重新取 2 倍量供試品，分別依法復(fù) 試，其他各管均不得有菌生長，否則應(yīng)判為供試品不合格。4.7 試驗(yàn)記錄 檢測器具滅菌記錄 每日觀