華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與課件

1、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與1 第三章 藥用動物活性成分類型與提取方法 1動物藥活性成分類型 2動物藥有效成分的提取,分離技術(shù) 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與2 第一節(jié)第一節(jié) 動物藥活性成分類型動物藥活性成分類型 1蛋白質(zhì)（酶）、多肽及氨基酸類 蚯蚓中蚓激酶能降解纖維蛋白原; 蛇毒蛋白酶、蛇毒酶等用于血栓治療； 動物尿液中的尿激酶、激肽釋放酶以及胰臟中提 取的彈性蛋白酶等用于治療心血管疾??； 哺乳類動物和鳥類的臟器及豚鼠血清中的天門冬 酰胺酶、精氨酸酶等臨床用于治療腫瘤 ; 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與3 糖蛋白，如圓蛤中蛤素 具

2、有抗腫瘤、抗病毒 活性； 中華大蟾蜍的糖蛋白具 有強(qiáng)心利尿作用； 。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與4 五谷蟲(大頭金蠅 Chrysomyis megacephala(Fab.) 胰蛋白酶、腸肽酶有 助消化作用； 蝮蛇毒中分出的以精 氨酸酶用于治療腦血 栓及血栓閉塞性動脈 炎有效。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與5 毒肽如眼鏡蛇毒主要 用于晚期轉(zhuǎn)移癌痛、 神經(jīng)痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 痛、偏頭痛等頑固性 疼痛； 蜂毒肽有強(qiáng)溶血作用 和表面活性，能阻礙 肌肉神經(jīng)間的傳導(dǎo)； 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與6 水蛭素具有抗凝血作 用和溶解血栓的作用；

3、 蚯蚓中分得一種分子 量為510.8Da的短肽具 有抗菌活性； 海綿動物、軟體動物、 昆蟲及兩棲動物皮膚 中的抗生肽也用于抗 細(xì)菌和病毒； 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與7 氨基酸 :地龍的解熱作 用與其氨基酸含量成 正比； 紫河車(人胎盤)的氨基 酸提取物對白細(xì)胞減 少癥有一定治療作用； 牛黃(牛膽囊結(jié)石)的牛 磺酸有刺激膽汁分泌 和降低眼壓作用 . 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與8 2生物堿類 蛤蚧及全蝎中的肉毒 堿，為氨基酸衍生物， 能防止室性心律不齊； 河豚卵巢中的河豚毒 素，屬胍類衍生物， 毒性極強(qiáng)，阻斷軸突 傳導(dǎo)作用比可卡因強(qiáng) 16萬倍，并有

4、松弛肌 肉痙攣、減輕晚期癌 痛的作用； 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與9 動物膽汁中得到的膽 紅素屬吡咯衍生物， 有促進(jìn)紅細(xì)胞新生、 血清抗炎、治療肝硬 變作用； 蟾蜍色胺屬吲哚類生 物堿；箭毒蛙所含的 哌啶類生物堿能麻痹 骨骼?。?華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與10 烏賊墨主要成分黑色 素有止血作用； 地龍的次黃嘌呤有抗 組胺、平喘、降壓作 用 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與11 3多糖類 動物各種組織中的肝素用于抗凝； 甲殼動物和昆蟲體壁外的甲殼素用于抗菌 抗輻射； 棘皮動物粘多糖具抗癌和抗凝血酶活性； 鯊魚及深海軟骨魚骨骼所含雜

5、多糖，具有 顯著的腫瘤抑制作用； 軟體動物中所含葡聚糖被證實(shí)具有較好的 抗腫瘤活性。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與12 4甾體類 甾體類化合物在藥用動物中廣泛分布，化 學(xué)結(jié)構(gòu)變化多，生物活性多樣，如性激素、 膽汁酸、蟾毒、蛻皮素及甾體皂苷等。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與13 性激素或性信息素的 有紫河車中的黃體酮、 鹿茸中的雌酮、海狗 腎中的雄甾酮等。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與14 動物膽汁中發(fā)現(xiàn)的膽汁酸有近百種，常見 的有膽酸、去氧膽酸、豬去氧膽酸、鵝去 氧膽酸等。去氧膽酸解痙作用明顯；熊去 氧膽酸、鵝去氧膽酸能溶解膽結(jié)

6、石; 昆蟲蛻皮激素有促進(jìn)人體蛋白質(zhì)合成，排 除體內(nèi)膽甾醇，降低血脂和抑制血糖上升 等作用; 蟾毒甾體有強(qiáng)心作用; 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與15 棘皮動物的海參綱及 海星綱均含皂苷，如 梅花參中的梅花參素A、 B，刺參中的刺參素A、 B、C以及多棘海盤車 中的海星皂苷等，這 些皂苷一般能抑制癌 細(xì)胞的生長，并有抗 真菌、抗輻射、增強(qiáng) 白細(xì)胞吞噬的功能。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與16 5萜類 斑蝥素為芫菁科昆蟲 分泌的單萜類防御物 質(zhì)，具抗癌、抗病毒、 抗真菌作用； 腔腸動物海鞭的 pseudopterosins，為 二萜糖苷類化合物， 具有很強(qiáng)

7、的消炎止痛 作用. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與17 鯊魚肝所含鯊烯是殺 菌劑，并具有抗癌活 性； 海綿屬動物含有的環(huán) 烯醚萜類成分有抗白 色粘球菌作用等 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與18 6酚、酮、酸類 海綿所含酚類成分 siphonodictyal-A及 siphonodictyal-B具有 抗菌活性； 麝香中的麝香酮有強(qiáng) 心、抗炎、興奮呼吸 和中樞神經(jīng)的作用； 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與19 地龍中的花生四烯酸有解熱作用； 膽汁酸有利膽、溶解膽結(jié)石、鎮(zhèn)咳祛痰、 解熱、抗菌抑癌等多種功用； 蜂王漿中的王漿酸有抗菌、抗腫瘤作

8、用。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與20 第二節(jié)第二節(jié) 動物藥有效成分的提取動物藥有效成分的提取 一、溶劑提取法 原理： 1相似相溶 2擴(kuò)散作用 技術(shù)要求: 粉碎 防霉 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與21 溶劑的選擇 選擇溶劑要注意以下三點(diǎn)： 溶劑對有效成分溶解度大，對雜質(zhì)溶解度 小； 溶劑不能與中藥的成分起化學(xué)變化； 溶劑要經(jīng)濟(jì)、易得、使用安全等。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與22 常見的提取溶劑 1）水： 水是一種強(qiáng)的極性溶劑。 中草藥中親水性的成分，如無機(jī)鹽、糖類、分 子不太大的多糖類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有 機(jī)酸鹽、生物堿

9、鹽及甙類等都能被水溶出。 為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水 及堿水作為提取溶劑。酸水提取，可使生物堿與 酸生成鹽類而溶出，堿水提取可使有機(jī)酸、黃酮、 蒽醌、內(nèi)酯、香豆素以及酚類成分溶出。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與23 問題: 易霉壞變質(zhì) ; 沸水提取時，中草藥中的淀粉可被糊化， 而增加過濾的困難 ; 提取液中含有皂甙及粘液質(zhì)類成分，在 減壓濃縮時，還會產(chǎn)生大量泡沫，造成濃 縮的困難。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與24 2)親水性的有機(jī)溶劑： 如乙醇、甲醇、丙酮等， 以乙醇最常用。 對中草藥細(xì)胞的穿透能力較強(qiáng)。親水性 的成分除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、

10、果膠、淀粉和 部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。 甲醇的性質(zhì)和乙醇相似，沸點(diǎn)較低 （64），但有毒性，使用時應(yīng)注意。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與25 親脂溶劑 石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷 等。 這些溶劑的選擇性能強(qiáng)，不能或不容易提取親 水性雜質(zhì)。但這類溶劑揮發(fā)性大，多易燃（氯仿 除外），一般有毒，價格較貴，設(shè)備要求較高， 且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長時 間反復(fù)提取才能提取完全。 如果藥材中含有較多的水分，用這類溶劑就很 難浸出其有效成分. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與26 提取方法 常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提 取

11、法及連續(xù)回流提取法等 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與27 1）浸漬法： 將中草藥粉末或碎塊裝人適當(dāng)?shù)娜萜髦校?加入適宜的溶劑（如乙醇、稀醇或水）， 浸漬藥材以溶出其中成分的方法。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與28 2）滲漉法： 將中草藥粉末裝在滲漉器中，不斷添加 新溶劑，使其滲透過藥材，自上而下從滲 漉器下部流出浸出液的一種浸出方法，當(dāng) 溶劑滲進(jìn)藥粉溶出成分比重加大而向下移 動時，上層的溶液或稀浸液便置換其位置， 造成良好的濃度差，使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行， 故浸出效果優(yōu)于浸漬法。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與29 滲漉器 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)

12、萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與30 注意事項(xiàng) 但應(yīng)控制流速，在滲渡過程中隨時自藥 面上補(bǔ)充新溶劑，使藥材中有效成分充分 浸出為止。或當(dāng)滲滴液顏色極淺或滲液的 體積相當(dāng)于原藥材重的10倍時，便可認(rèn)為 基本上已提取完全。在大量生產(chǎn)中常將收 集的稀滲液作為另一批新原料的溶劑之用。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與31 3）煎煮法 是我國最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。所 用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器 皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加 熱時最好時常攪拌，以免局部藥材受熱太 高，容易焦糊。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與32 煎煮器 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青

13、藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與33 4）回流提取法： 應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取，需采用回流加 熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時， 可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶內(nèi)裝 藥材約為容量，溶劑浸過藥材表面約1 2cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰一 定的時間，放冷過濾，再在藥渣中加溶劑， 作第二、三次加熱回流分別約半小時，或 至基本提盡有效成分為止。此法提取效率 較冷浸法高，大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取 法。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與34 回流提取裝置 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與35 5）連續(xù)提取法 應(yīng)用揮發(fā)性有機(jī)溶劑提取中草藥有效成 分，不論小型實(shí)

14、驗(yàn)或大型生產(chǎn)，均以連續(xù) 提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取 成分也較完全。實(shí)驗(yàn)室常用脂肪提取器或 稱索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數(shù)小 時才能提取完全。提取成分受熱時間較長， 遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與36 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與37 二、 水蒸氣蒸餾法 適用于能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞的中 藥成分的提取。此類成分的沸點(diǎn)多在100 以上，與水不相混溶或僅微溶，且在約 100時存一定的蒸氣壓。當(dāng)與水在一起加 熱時，其蒸氣壓和水的蒸氣壓總和為一個 大氣壓時，液體就開始沸騰，水蒸氣將揮 發(fā)性物質(zhì)一并帶出。 華南

15、農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與38 水蒸氣蒸餾裝置 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與39 中草藥中的揮發(fā)油，某些小分子生物堿 一麻黃堿、檳榔堿，以及某些小分子的酚 性物質(zhì)。牡丹酚等，都可應(yīng)用本法提取。 有些揮發(fā)性成分在水中的溶解度稍大些， 常將蒸餾液重新蒸餾，在最先蒸餾出的部 分，分出揮發(fā)油層，或在蒸餾液水層經(jīng)鹽 析法并用低沸點(diǎn)溶劑將成分提取出來。例 如玫瑰油、原白頭翁素等的制備多采用此 法。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與40 三、升華法 固體物質(zhì)受熱直接氣化，遇冷后又凝固為固體 化合物，稱為升華。 中草藥中有一些成分具有升華的性質(zhì)，故可

16、利 用升華法直接自中草藥中提取出來。 例如樟木中升華的樟腦（camphor）。 茶葉中的咖啡堿在178以上就能升華而不被 分解。 游離羥基蒽醌類成分，一些香豆素類，有機(jī)酸 類成分，有些也具有升華的性質(zhì)。例如七葉內(nèi)酯 及苯甲酸等。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與41 升華裝置 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與42 四、分離和純化 可采用的方法: 溶劑分離法 兩相溶劑萃取法 沉淀法 鹽析法 透析法 結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法 層析法 超臨界CO2流體萃取技術(shù) 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與43 1溶劑分離法(萃取) 原理: 總提取物中各組成成

17、分，依其在不同極性 溶劑中溶解度的差異而得到分離 要求: 選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性 到高極性分步進(jìn)行提取分離 . 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與44 例如: 防己乙醇浸膏，堿化后可利用乙醚溶出 脂溶性生物堿，再以冷苯處理溶出防己堿， 與其結(jié)構(gòu)類似的防己諾林堿比前者少一甲 基而有一酚羥基，不溶于冷苯而得以分離. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與45 水浸膏或乙醇浸膏常常為膠狀物，難以均 勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全， 可拌于適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維 粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再 以選用溶劑依次提取 . 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物

18、動物學(xué)藥用動物活性成分類型與46 水提液中常含有樹膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)、糊化淀 粉等，可以加入一定量的乙醇，使這些不溶于乙 醇的成分自溶液中沉淀析出，而達(dá)到與其它成分 分離的目的 . 水提取液中獲得白及膠，可采用加乙醇沉淀法； 括樓根汁中制取天花粉素，可滴入丙酮使分次沉 淀析出; 提取多糖及多肽類化合物，多采用水溶解、濃縮、 加乙醇或丙酮析出的辦法。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與47 利用某些成分能在酸或堿中溶解，又在加 堿或加酸變更溶液的pH后，成不溶物而析 出以達(dá)到分離目的. 內(nèi)酯類化合物不溶于水，但遇堿開環(huán)生成 羧酸鹽溶于水，再加酸酸化，又重新形成 內(nèi)酯環(huán)從溶液中析出

19、，從而與其它雜質(zhì)分 離 . 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與48 中草藥總提取物用酸水、堿水先后處理，可以 分為三部分：溶于酸水的為堿性成分（如生物 堿），溶于堿水的為酸性成分（如有機(jī)酸），酸、 堿均不溶的為中性成分（如甾醇）。 例如: 長春花生物堿、石蒜生物堿的分離; 紫董定堿（corydine）; 蝙蝠葛堿（dauricins）; 四氫掌葉防己堿 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與49 2 兩相溶劑萃取法 原理: 利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中 分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法。 萃取時如果各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)相差 越大，則分離效率越高、如果

20、在水提取液中的有 效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機(jī)溶 劑，如苯、氯仿或乙醚進(jìn)行兩相萃取，如果有效 成分是偏于親水性的物質(zhì)，在親脂性溶劑中難溶 解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、 丁醇等。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與50 分液漏斗 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與51 注意以下幾點(diǎn)和處理： (1)出現(xiàn)乳化 現(xiàn)象 (2)水提取液的濃度最好比重 (3)溶劑與水溶液應(yīng)保持一定量的比例 (4)一般萃取多次. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與52 2 沉淀法 是在中藥提取液中加入某些試劑使產(chǎn)生 沉淀，以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方

21、法。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與53 (1) 鉛鹽沉淀法 分離某些中草藥成分的經(jīng)典方法之一。 由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中， 能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡(luò) 鹽沉淀，故可利用這種性質(zhì)使有效成分與 雜質(zhì)分離。 常用以沉淀有機(jī)酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、 粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、酸性皂甙、部分黃 酮等。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與54 脫鉛方法 : 硫化氫脫鉛 用硫酸、磷酸、硫酸鈉、磷酸鈉等除鉛 例如: 在黃芩水煎液中加入明礬溶液，黃芩甙就 與鋁鹽絡(luò)合生成難溶于水的絡(luò)化物而與雜 質(zhì)分離，這種絡(luò)化物經(jīng)用水洗凈就可直接 供藥用。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物

22、動物學(xué)藥用動物活性成分類型與55 (2)試劑沉淀法 在生物堿鹽的溶液中，加入某些生物堿沉淀試 劑，則生物堿生成不溶性復(fù)鹽而析出。水溶性生 物堿難以用萃取法提取分出，常加入雷氏銨鹽使 生成生物堿雷氏鹽沉淀析出。 橙皮甙、蘆丁、黃芩甙、甘草皂甙均易溶于 堿性溶液，當(dāng)加入酸后可使之沉淀析出。 某些蛋白質(zhì)溶液，可以變更溶液的pH值利用 其在等電點(diǎn)時溶解度最小的性質(zhì)而使之沉淀析出。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與56 3 鹽析法 是在中草藥的水提液中、加入無機(jī)鹽至一定濃 度，或達(dá)到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶 解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離. 鹽析的無機(jī)鹽: 氯化鈉、硫

23、酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。 例如: 三七的水提取液中加硫酸鎂至飽和狀態(tài)，三七 皂甙乙即可沉淀析出: 黃藤中提取掌葉防己堿，三顆針中提取小 檗堿在生產(chǎn)上都是用氯化鈉或硫酸胺鹽析制備。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與57 4 透析法 利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物 質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。 透析膜: 動物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜（硫酸紙膜）、蛋白 質(zhì)膠膜、玻璃紙膜等。常用市售的玻璃紙或動物性半透膜 扎成袋狀，外面用尼龍網(wǎng)袋加以保護(hù)，小心加入欲透析的 樣品溶液，懸掛在清水容器中。 例如: 分離和純化皂甙、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等物質(zhì)時，可 用透析法以除去

24、無機(jī)鹽、單糖、雙糖等雜質(zhì) . 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與58 5結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法 結(jié)晶的意義: 鑒定中草藥化學(xué)成分，研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)，必 須首先將中藥成分制備成單體純品。 一般來說，中草藥化學(xué)成分在常溫下多半是 固體的物質(zhì)，都具有結(jié)晶的通性，可以根據(jù)溶解 度的不同用結(jié)晶法來達(dá)到分離精制的目的。 一旦獲得結(jié)晶，就能有效地進(jìn)一步精制成為 單體純品。純化合物的結(jié)晶有一定的熔點(diǎn)和結(jié)晶 學(xué)的特征，有利于鑒定 . 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與59 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與60 制備結(jié)晶 1選擇合宜的溶劑和應(yīng)用適量的溶劑 一般常用

25、甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙醋 作制備結(jié) 晶 的溶劑 有些化合物在某些溶劑中則易于形成結(jié)晶。 例如: 葛根素、逆沒食子酸在冰醋酸中易形成結(jié)晶; 大黃素在吡啶中易于結(jié)晶; 萱草毒素在N，N一二甲基甲酰胺（DMF）中易得到結(jié)晶; 穿心蓮亞硫酸氫鈉加成物在丙酮一水中較易得到結(jié)晶; 蝙蝠葛堿通常為無定形粉未，但能和氯仿或乙醚形成為 加成物結(jié)晶。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與61 結(jié)晶溶液的制備 制備結(jié)晶的溶液，需要成為過飽和的溶液。一 般是應(yīng)用適量的溶劑在加溫的情況下，將化合物 溶解再放置冷處。如果在室溫中可以析出結(jié)晶， 就不一定放置于冰箱中，以免伴隨結(jié)晶析出更多 的雜質(zhì)。 如

26、果溶液濃度適當(dāng)，溫度慢慢降低，可析出 結(jié)晶較大而純度較高的結(jié)晶。 有的化合物其結(jié)晶的形成需要較長的時間，例 如鈴蘭毒甙等，有時需放置數(shù)天或更長的時間。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與62 制備結(jié)晶操作 1放置過程中，最好先塞緊瓶塞，避免液面先出現(xiàn)結(jié)晶，而 致結(jié)晶純度較低。 2放置一段時間后沒有結(jié)晶析出，可以加入極微量的種晶， 即同種化合物結(jié)晶的微小顆粒。加種晶是誘導(dǎo)晶核形成常 用而有效的手段。 3沒有種晶時，可用玻璃棒蘸過飽和溶液一滴，在空氣中任 溶劑揮散，再用以磨擦容器內(nèi)壁溶液邊緣處，以誘導(dǎo)結(jié)晶 的形成。 4如仍無結(jié)晶析出，可打開瓶塞任溶液逐步揮散，慢慢析晶。 5或另選適

27、當(dāng)溶劑處理，或再精制一次，盡可能除盡雜質(zhì)后 進(jìn)行結(jié)晶操作。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與63 重結(jié)晶及分步結(jié)晶 在制備結(jié)晶時，最好在形成一批結(jié)晶后， 立即傾出上層溶液，然后再放置以得到第 二批結(jié)晶。晶態(tài)物質(zhì)可以用溶劑溶解再次 結(jié)晶精制。這種方法稱為重結(jié)晶法。 結(jié)晶經(jīng)重結(jié)晶后所得各部分母液，再經(jīng) 處理又可分別得到第二批、第三批結(jié)晶。 這種方法則稱為分步結(jié)晶法或分級結(jié)晶法。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與64 結(jié)晶純度的判定 化合物的結(jié)晶都有一定的結(jié)晶形狀、色 澤、熔點(diǎn)和熔距可以作為鑒定的初步依據(jù). 高壓液譜、氣相層析、紫外光譜等，均 有助于檢識結(jié)晶樣品的

28、純度。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與65 6層析法 基本原理： 層析過程是基于樣品組分在互不相溶的 兩“相”溶劑之間的分配系數(shù)之差（分配 層析），組分對吸附劑吸附能力不同（吸 附層析），和離子交換，分子的大?。ㄅ?阻層析）而分離。通常又將一般的以流動 相為氣體的稱為氣相層析，流動相為液體 的稱為液相層析。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與66 柱層析裝置 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與67 吸附層析法（AdsorptionChromatography） 特別適用于很多中等分子量的樣品（分 子量小于1，000的低揮發(fā)性樣品）的分離， 尤

29、其是脂溶性成分，一般不適用于高分子 量樣品如蛋白質(zhì)、多糖或離子型親水性化 合物等的分離 . 吸附層析的分離效果，決定于吸附劑、 溶劑和被分離化合物的性質(zhì). 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與68 吸附劑： 常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、活性炭、硅酸 鎂、聚酰胺、硅藻土等。 溶劑： 在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑） 習(xí)慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開 劑。 洗脫劑的選擇: 須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩 者結(jié)合起來加以考慮. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與69 被分離物質(zhì)的性質(zhì)： 被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu) 成吸附層析中的三個要

30、素，彼此緊密相連。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與70 薄層層析 薄層層析是一種簡便、快速、微量的層 析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到 平面如玻璃片上，形成一薄層進(jìn)行層析時 一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相 似。 主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支 持劑）的粒度更細(xì)，一般應(yīng)小于250目，并 要求粒度均勻 . 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與71 薄層層析 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與72 8超臨界CO2流體萃取技術(shù) 利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響 而進(jìn)行的萃取技術(shù)。 在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的物 質(zhì)接觸，

31、使其有選擇性地把極性大小、沸點(diǎn)高低 和分子量大小的成分依次萃取出來。 超臨界CO2流體萃取過程是由萃取和分離過程 組合而成的。 超臨界超臨界流體萃取是70年代末發(fā)展起來的一種新 型物質(zhì)分離、精制技術(shù)。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與73 超臨界CO2流體萃取儀 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與74 超臨界流體定義 任何一種物質(zhì)都存在三種相態(tài)-氣相、液相、固相。三 相成平衡態(tài)共存的點(diǎn)叫三相點(diǎn)。液、氣兩相成平衡狀態(tài)的 點(diǎn)叫臨界點(diǎn)。在臨界點(diǎn)時的溫度和壓力稱為臨界壓力。不 同的物質(zhì)其臨界點(diǎn)所要求的壓力和溫度各不相同。 超臨界流體(Supercritical flu

32、id，SCF)技術(shù) 指溫度和壓力均高于臨界點(diǎn)的流體,如二氧化碳臨界 溫度Tc=31.26、臨界壓力Pc=7.2MPa 。 高于臨界溫度和臨界壓力而接近臨界點(diǎn)的狀態(tài)稱為超 臨界狀態(tài)。處于超臨界狀態(tài)時，氣液兩相性質(zhì)非常相近， 以至無法分別，所以稱之為SCF。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與75 處于臨界點(diǎn)以上溫度和壓力區(qū)域下的流 體，在臨界點(diǎn)附近，會出現(xiàn)流體的密度、 粘度、溶解度、熱容量、介電常數(shù)等所有 流體的物性發(fā)生急劇變化。 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與76 超臨界流體萃取分離原理 利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關(guān)系， 即利用壓力和溫度對超臨界流體

33、溶解能力的影響 而進(jìn)行的。當(dāng)氣體處于超臨界狀態(tài)時, 成為性質(zhì) 介于液體和氣體之間的單一相態(tài), 具有和液體相 近的密度, 粘度雖高于氣體但明顯低于液體, 擴(kuò) 散系數(shù)為液體的10100倍; 因此對物料有較好的滲透性和較強(qiáng)的溶解能力, 能夠?qū)⑽锪现心承┏煞痔崛〕鰜怼?華南農(nóng)業(yè)大學(xué)萬樹青藥物動物學(xué)藥用動物活性成分類型與77 在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的 物質(zhì)接觸，使其有選擇性地依次把極性大小、沸 點(diǎn)高低和分子量大小的成分萃取出來。并且超臨 界流體的密度和介電常數(shù)隨著密閉體系壓力的增 加而增加, 極性增大, 利用程序升壓可將不同極 性的成分進(jìn)行分步提取。當(dāng)然，對應(yīng)各壓力范圍 所得到的萃取物不可能是單一的，但可以通過控 制條件得到最佳比例的混合成分，然后借助減壓、 升溫的方法使超臨界流體變成普通氣體，被萃取 物質(zhì)則自動完全或基本 析出，從而達(dá)到分離提 純的目的，