血清酶類測(cè)定精要

1、 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 一、一、 最容易釋放入血的是胞質(zhì)中游離的酶，而在最容易釋放入血的是胞質(zhì)中游離的酶，而在 細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)中的酶則較難溢出細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)中的酶則較難溢出 酶的釋放速度大致與酶的分子量成反比酶的釋放速度大致與酶的分子量成反比 一般以血中酶的半壽期來(lái)代表酶從血中清除快慢一般以血中酶的半壽期來(lái)代表酶從血中清除快慢 （三）酶合成異常：（三）酶合成異常： 對(duì)于血漿特異酶，細(xì)胞內(nèi)酶合成下降對(duì)于血漿特異酶，細(xì)胞內(nèi)酶合成下降 是引起血中酶變化的重要因素是引起血中酶變化的重要因素 血清酶符號(hào)來(lái)源 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 肌酸激酶 乳酸脫氫酶 堿性磷酸酶 酸性磷酸酶 -谷氨酰轉(zhuǎn)

2、移酶 5-核苷酸酶 單胺氧化酶 -淀粉酶 脂肪酶 谷氨酸脫氫酶 異檸檬酸脫氫酶 膽堿酯酶 山梨醇脫氫酶 鳥(niǎo)氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶 卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶 alt ast ck ldh alp acp -gt 5-nt mao ams lps gldh icd che sdh oct lcat 肝、腎、心 心、肝、骨骼肌 骨骼肌、心、腦 心、腎、骨骼肌、肝、肺 小腸、胎盤(pán)、肝、腎 前列腺、紅細(xì)胞、血小板 肝、膽、腎、小腸 肝、膽道 肝、腎、腦 胰、唾液腺 胰 肝 肝、胎盤(pán)、心 肝 肝 肝 肝 反映肝細(xì)胞實(shí)質(zhì)病變：反映肝細(xì)胞實(shí)質(zhì)病變：alt、ast 反映肝細(xì)胞合成功能：反映肝細(xì)胞合成功能：che、lc

3、at 反映膽道阻塞病變：反映膽道阻塞病變：alp、ggt 反映肝纖維化病變：反映肝纖維化病變：mao ck-mb，ldh1，ast alp amy，lps ast，ck，ldh，ald 同工酶同工酶 acp 第二節(jié)第二節(jié) 臨床常用血清酶活性測(cè)定臨床常用血清酶活性測(cè)定 顯升高。如紅細(xì)胞顯升高。如紅細(xì)胞 內(nèi)的內(nèi)的ldld、astast和和altalt活性分別較血清中高活性分別較血清中高150150、1515和和7 7倍左倍左 右，故測(cè)定這些酶時(shí)，樣品應(yīng)避免溶血。右，故測(cè)定這些酶時(shí)，樣品應(yīng)避免溶血。 靜脈采血后，必須在靜脈采血后，必須在1-2h1-2h內(nèi)及時(shí)離心，將血清與血內(nèi)及時(shí)離心，將血清與血 細(xì)

4、胞、血凝塊分離，以免血細(xì)胞中的酶通過(guò)細(xì)胞膜細(xì)胞、血凝塊分離，以免血細(xì)胞中的酶通過(guò)細(xì)胞膜 進(jìn)入血清而引起誤差。進(jìn)入血清而引起誤差。 大多數(shù)抗凝劑都在一定程度上影響酶活性，大多數(shù)抗凝劑都在一定程度上影響酶活性，臨床上臨床上 除非測(cè)定與凝血或纖溶有關(guān)的酶，一般都應(yīng)以血清除非測(cè)定與凝血或纖溶有關(guān)的酶，一般都應(yīng)以血清 作為首選測(cè)定標(biāo)本。作為首選測(cè)定標(biāo)本。 為防止酶蛋白變性為防止酶蛋白變性 ，一般至少應(yīng)在血清分離后的，一般至少應(yīng)在血清分離后的 當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定，否則應(yīng)放冰箱冷藏當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定，否則應(yīng)放冰箱冷藏 有些酶如有些酶如ldld及其同工酶及其同工酶(ld4(ld4和和ld5)ld5)在低溫在低溫( (特別

5、是特別是 2020冰凍冰凍) )可引起不可逆性失活，反而不如室溫穩(wěn)定可引起不可逆性失活，反而不如室溫穩(wěn)定 （“冷變性冷變性”）。）。 氨基轉(zhuǎn)移酶氨基轉(zhuǎn)移酶活性活性測(cè)定測(cè)定 氨基轉(zhuǎn)移酶又稱轉(zhuǎn)氨酶，在機(jī)體內(nèi)多達(dá)氨基轉(zhuǎn)移酶又稱轉(zhuǎn)氨酶，在機(jī)體內(nèi)多達(dá)6060余種，廣泛存在于肝余種，廣泛存在于肝 臟、心肌、骨骼肌、腎、腦、胰、肺、白細(xì)胞、紅細(xì)胞中。臟、心肌、骨骼肌、腎、腦、胰、肺、白細(xì)胞、紅細(xì)胞中。 其中以丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶其中以丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alt(alt或或gpt)gpt)和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (ast(ast或或got)got)兩種最為重要，它們催化機(jī)體內(nèi)氨基酸的轉(zhuǎn)氨基反兩

6、種最為重要，它們催化機(jī)體內(nèi)氨基酸的轉(zhuǎn)氨基反 應(yīng)：應(yīng)： alt l-丙氨酸丙氨酸 + -酮戊二酸酮戊二酸 丙酮酸丙酮酸 + l-谷氨酸谷氨酸 ast l-天門(mén)冬氨酸天門(mén)冬氨酸 + -酮戊二酸酮戊二酸 草酰乙酸草酰乙酸 + l-谷氨酸谷氨酸 a-nh2+b a+b-nh2 轉(zhuǎn)氨酶轉(zhuǎn)氨酶 測(cè)定方法測(cè)定方法 一、速率法（連續(xù)監(jiān)測(cè)法一、速率法（連續(xù)監(jiān)測(cè)法 ） n原理原理 nadh nadh在在340nm340nm處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測(cè)處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測(cè)nadhnadh消耗引起的消耗引起的 340nm340nm吸光度變化吸光度變化, ,根據(jù)根據(jù)340nm340nm處吸光度下降速率（處吸光度下降速率

7、（a/mina/min） 計(jì)算計(jì)算altalt活性活性 丙酮酸谷氨酸酮戊二酸丙氨酸 lll alt nadlhnadhl ld 乳酸丙酮酸 參考方法參考方法 血清血清丙氨酸丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶氨基轉(zhuǎn)移酶（altalt）活性）活性測(cè)定測(cè)定 1 1. 該該altalt測(cè)定法中存在兩個(gè)消耗測(cè)定法中存在兩個(gè)消耗nadhnadh的副反應(yīng)的副反應(yīng) n評(píng)價(jià)評(píng)價(jià) 雙試劑法雙試劑法：血清與缺少：血清與缺少-酮戊二酸的底物溶液混合，酮戊二酸的底物溶液混合，3737保溫保溫 5min5min，使樣品中所含內(nèi)源性，使樣品中所含內(nèi)源性-酮酸（如丙酮酸）引起的副反應(yīng)進(jìn)酮酸（如丙酮酸）引起的副反應(yīng)進(jìn) 行完畢。然后，加入行完畢。

8、然后，加入-酮戊二酸啟動(dòng)酮戊二酸啟動(dòng)altalt的催化反應(yīng)，在波長(zhǎng)的催化反應(yīng)，在波長(zhǎng) 340nm340nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)吸光度下降速率。根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度下降速處連續(xù)監(jiān)測(cè)吸光度下降速率。根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度下降速 率率(-(-a amin)min)，計(jì)算出，計(jì)算出altalt活力單位?；盍挝?。（altalt測(cè)定的首選方法）測(cè)定的首選方法） 血清中存在的游離血清中存在的游離- -酮酸（如丙酮酸）和增多的谷氨酸酮酸（如丙酮酸）和增多的谷氨酸 脫氫酶（脫氫酶（gldhgldh）能消耗）能消耗nadhnadh，使測(cè)定值偏高。，使測(cè)定值偏高。 2.2.在在ifccifcc推薦的試劑盒中含有推薦的試劑盒中

9、含有p5pp5p，這是轉(zhuǎn)氨酶的輔基，這是轉(zhuǎn)氨酶的輔基， 能使血清中能使血清中altalt發(fā)揮最大活性。發(fā)揮最大活性。 （二）（二）定時(shí)定時(shí)比色法比色法（兩點(diǎn)法）（兩點(diǎn)法） 賴氏賴氏比色法比色法 n原理：原理： u 選擇在選擇在500-520nm500-520nm處檢測(cè)，丙酮酸苯腙的顯色強(qiáng)度約為處檢測(cè)，丙酮酸苯腙的顯色強(qiáng)度約為- -酮戊二酸苯腙的酮戊二酸苯腙的3 3倍倍 底物底物-酮戊二酸酮戊二酸及及2,4-2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼的濃度的濃度altalt測(cè)定不是測(cè)定不是 在最佳條件下進(jìn)行，反應(yīng)中丙酮酸生成量與在最佳條件下進(jìn)行，反應(yīng)中丙酮酸生成量與altalt活性不能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系活性不

10、能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系 ( (這是賴氏法的最大缺陷這是賴氏法的最大缺陷) )，其標(biāo)準(zhǔn)曲線不呈直線而，其標(biāo)準(zhǔn)曲線不呈直線而為拋物線。為拋物線。 2,4-2,4-二硝二硝 基苯肼基苯肼 丙酮酸苯腙丙酮酸苯腙 ( (在堿性條件下呈紅棕色在堿性條件下呈紅棕色) ) -酮戊二酸苯腙酮戊二酸苯腙 ( (在堿性條件下呈紅棕色在堿性條件下呈紅棕色) ) 丙氨酸丙氨酸 +-+-酮戊二酸酮戊二酸 丙酮酸丙酮酸 + + 谷氨酸谷氨酸 alt 37ph7.4 n活性單位活性單位 賴氏法以賴氏法以卡門(mén)單位卡門(mén)單位報(bào)告測(cè)定結(jié)果報(bào)告測(cè)定結(jié)果 卡門(mén)單位定義：血清卡門(mén)單位定義：血清1ml1ml，反應(yīng)液總體積，反應(yīng)液總體積3ml3

11、ml， 2525，波，波 長(zhǎng)長(zhǎng)340nm340nm，比色杯光徑，比色杯光徑1.0cm1.0cm，每分鐘吸光度下降，每分鐘吸光度下降0.001a0.001a為一為一 個(gè)單位（相當(dāng)于每升反應(yīng)體系中個(gè)單位（相當(dāng)于每升反應(yīng)體系中0.16080.1608mol nadhmol nadh被氧化）。被氧化）。 n方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià) 1.1. 操作簡(jiǎn)便，不需要紫外分光光度計(jì)，易于普及，操作簡(jiǎn)便，不需要紫外分光光度計(jì)，易于普及，所用的所用的 酶活性單位通過(guò)卡門(mén)氏分光光度速率法矯正酶活性單位通過(guò)卡門(mén)氏分光光度速率法矯正 故衛(wèi)生故衛(wèi)生 部臨檢中心建議國(guó)內(nèi)無(wú)條件使用連續(xù)監(jiān)測(cè)法的單位使用部臨檢中心建議國(guó)內(nèi)無(wú)條件使用連續(xù)監(jiān)

12、測(cè)法的單位使用 賴氏法。賴氏法。 底物底物-酮戊二酸酮戊二酸及及2 2，4-4- 二硝基苯肼二硝基苯肼的濃度，造成的濃度，造成altalt測(cè)定不是在最佳條件下進(jìn)行，測(cè)定不是在最佳條件下進(jìn)行， 反應(yīng)中丙酮酸生成量與反應(yīng)中丙酮酸生成量與altalt活性不能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，活性不能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系， 這是賴氏法的最大缺陷這是賴氏法的最大缺陷。 參考區(qū)間參考區(qū)間 賴氏比色法：賴氏比色法： 5 52525卡門(mén)單位（反應(yīng)溫度為卡門(mén)單位（反應(yīng)溫度為3737） 速率法：速率法： 男性：男性：5 540 u/l40 u/l（反應(yīng)溫度為（反應(yīng)溫度為3737，試劑不含，試劑不含p5pp5p） 女性：女性：5

13、535 u/l35 u/l（反應(yīng)溫度為（反應(yīng)溫度為3737，試劑不含，試劑不含p5pp5p） altalt廣泛分布于全身各組織器官，尤以廣泛分布于全身各組織器官，尤以肝細(xì)胞肝細(xì)胞中含量最中含量最 多，其次是腎臟多，其次是腎臟、心臟心臟及骨骼肌及骨骼肌，通常只有極少量釋放入，通常只有極少量釋放入 血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組織病變時(shí)，血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組織病變時(shí)， 細(xì)胞壞死或通透性增加，細(xì)胞內(nèi)酶大量釋放入血，使血清細(xì)胞壞死或通透性增加，細(xì)胞內(nèi)酶大量釋放入血，使血清 中該酶活力顯著增高中該酶活力顯著增高。 臨床意義臨床意義 (1)(1)肝膽疾病肝膽疾?。杭毙圆《拘愿?/p>

14、炎、慢性活動(dòng)型肝炎、脂肪肝、肝癌、急性病毒性肝炎、慢性活動(dòng)型肝炎、脂肪肝、肝癌、 肝硬變活動(dòng)期、中毒性肝炎、膽結(jié)石、膽管炎和膽囊炎等。肝硬變活動(dòng)期、中毒性肝炎、膽結(jié)石、膽管炎和膽囊炎等。 (2)(2)心血管疾病心血管疾?。杭毙孕募」Ｋ?、急性心肌炎、急性心力衰竭、腦急性心肌梗死、急性心肌炎、急性心力衰竭、腦 出血等。出血等。 (3)(3)骨骼肌疾病骨骼肌疾病：多發(fā)性肌炎、進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良等。多發(fā)性肌炎、進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良等。 （4 4）一些藥物和毒物可引起一些藥物和毒物可引起altalt活性升高活性升高：如氯丙嗪、異菸肼、如氯丙嗪、異菸肼、 苯巴比妥、奎寧、水楊酸制劑及酒精、鉛、汞、四氯化碳或有機(jī)

15、磷等苯巴比妥、奎寧、水楊酸制劑及酒精、鉛、汞、四氯化碳或有機(jī)磷等 altalt在肝臟疾病中的應(yīng)用價(jià)值在肝臟疾病中的應(yīng)用價(jià)值 altalt急性明顯升高，常達(dá)急性明顯升高，常達(dá)200u200u以上，病情較重者可達(dá)以上，病情較重者可達(dá)400-600u400-600u以上，甚至以上，甚至 更高，個(gè)別重型病人甚至可超過(guò)更高，個(gè)別重型病人甚至可超過(guò)1000u1000u。altalt越高，肝臟細(xì)胞損害越嚴(yán)重。越高，肝臟細(xì)胞損害越嚴(yán)重。 慢性活動(dòng)性肝炎：慢性活動(dòng)性肝炎：altalt持續(xù)輕度升高幾十或持續(xù)輕度升高幾十或100u100u以上（以上（100100200u200u） u慢性肝炎慢性肝炎 u 急性肝炎急

16、性肝炎 u重型肝炎重型肝炎 由于肝細(xì)胞發(fā)生大量變性，壞死，使由于肝細(xì)胞發(fā)生大量變性，壞死，使altalt大量進(jìn)入血液，因此，大量進(jìn)入血液，因此，altalt迅迅 速升高，高達(dá)數(shù)百速升高，高達(dá)數(shù)百1000u1000u以上，如果以上，如果altalt含量越高，上升越快，說(shuō)明含量越高，上升越快，說(shuō)明 肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重，病情進(jìn)展也越快。肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重，病情進(jìn)展也越快。 當(dāng)病情發(fā)展到一定的嚴(yán)重程度，肝細(xì)胞大量壞死，肝臟生產(chǎn)當(dāng)病情發(fā)展到一定的嚴(yán)重程度，肝細(xì)胞大量壞死，肝臟生產(chǎn)altalt的能力的能力 喪失，這時(shí)血液中的喪失，這時(shí)血液中的altalt降低，但是黃疸卻持續(xù)升高（膽紅素上升），降低，但是黃疸卻持續(xù)

17、升高（膽紅素上升）， 這種現(xiàn)象即所謂這種現(xiàn)象即所謂“酶膽分離酶膽分離”，往往提示病情正在惡化，常是肝壞死征，往往提示病情正在惡化，常是肝壞死征 兆。兆。 altalt增高程度與肝硬化的活動(dòng)度和肝組織炎癥改變及肝細(xì)胞損害程增高程度與肝硬化的活動(dòng)度和肝組織炎癥改變及肝細(xì)胞損害程 度相一致。對(duì)度相一致。對(duì)altalt進(jìn)行監(jiān)測(cè)有助于對(duì)肝硬化病情的判斷。若是靜止進(jìn)行監(jiān)測(cè)有助于對(duì)肝硬化病情的判斷。若是靜止 性肝硬化，則性肝硬化，則altalt維持正常維持正常 ；肝硬化病人的轉(zhuǎn)氨酶出現(xiàn)較大幅度；肝硬化病人的轉(zhuǎn)氨酶出現(xiàn)較大幅度 的升高，提示病情可能發(fā)展成活動(dòng)性，須引起警惕。的升高，提示病情可能發(fā)展成活動(dòng)性，須

18、引起警惕。 u肝硬化肝硬化 u肝癌肝癌 80%80%90%90%肝細(xì)胞都是在肝硬化基礎(chǔ)上發(fā)生的，因此，在早期，肝細(xì)胞都是在肝硬化基礎(chǔ)上發(fā)生的，因此，在早期，altalt是否增高是否增高 主要決定于肝硬化的活動(dòng)程度。若是靜止性肝硬化，則主要決定于肝硬化的活動(dòng)程度。若是靜止性肝硬化，則altalt維持正常，因?yàn)榫S持正常，因?yàn)?肝細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，細(xì)胞并沒(méi)有壞死破壞，肝細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，細(xì)胞并沒(méi)有壞死破壞，altalt沒(méi)有釋放出來(lái)，因此，沒(méi)有釋放出來(lái)，因此，altalt 沒(méi)有升高，或沒(méi)有升高，或altalt有輕度或中度增高。有輕度或中度增高。 血清血清天冬氨酸天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶氨基轉(zhuǎn)移酶（astast）

19、活性）活性測(cè)定測(cè)定 測(cè)定方法測(cè)定方法 一、速率法（連續(xù)監(jiān)測(cè)法一、速率法（連續(xù)監(jiān)測(cè)法 ） 草酰乙酸谷氨酸酮戊二酸門(mén)冬氨酸 lll ast nadlhnadhl md 蘋(píng)果酸草酰乙酸 nadh nadh在在340nm340nm處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測(cè)處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測(cè)nadhnadh消耗引起的消耗引起的 340nm340nm吸光度變化吸光度變化, ,根據(jù)根據(jù)340nm340nm處吸光度下降速率（處吸光度下降速率（a/mina/min） 計(jì)算計(jì)算astast活性活性 參考方法參考方法 ast ast l-l-天門(mén)冬氨酸天門(mén)冬氨酸 + -+ -酮戊二酸酮戊二酸 草酰乙酸草酰乙酸 + l-+ l-

20、谷氨酸谷氨酸 自發(fā)自發(fā)脫羧脫羧 丙酮酸丙酮酸 （二）（二）賴氏賴氏比色法比色法 參考區(qū)間參考區(qū)間 賴氏比色法：賴氏比色法： 8 82828卡門(mén)單位（反應(yīng)溫度為卡門(mén)單位（反應(yīng)溫度為3737） 速率法：速率法：8 840 u/l40 u/l（反應(yīng)溫度為（反應(yīng)溫度為3737，試劑不含，試劑不含p5pp5p） 臨床意義臨床意義 1.ast1.ast廣泛分布于全身各組織器官，在心肌細(xì)廣泛分布于全身各組織器官，在心肌細(xì) 胞內(nèi)含量最多，當(dāng)心肌梗死時(shí)，血清中胞內(nèi)含量最多，當(dāng)心肌梗死時(shí)，血清中astast活力活力 增高，在發(fā)病后增高，在發(fā)病后6 612h12h之內(nèi)顯著增高，在之內(nèi)顯著增高，在48h48h達(dá)達(dá) 到

21、高峰，約在到高峰，約在3 35d5d恢復(fù)正常?；謴?fù)正常。 2.2.血清中的血清中的astast也可來(lái)源于肝細(xì)胞，各種肝病也可來(lái)源于肝細(xì)胞，各種肝病 可引起血清可引起血清astast的升高，有時(shí)可達(dá)的升高，有時(shí)可達(dá)12001200卡門(mén)單位，卡門(mén)單位， 中毒性肝炎還可更高。中毒性肝炎還可更高。 3.3.肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎等也可引起血肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎等也可引起血 清清astast的輕度增高。的輕度增高。 ast/altast/alt比值大小有助于臨床判斷肝病嚴(yán)重程度比值大小有助于臨床判斷肝病嚴(yán)重程度 急性肝炎的急性肝炎的ast/altast/alt均值為均值為0.56:10.56:1

22、肝硬化的肝硬化的ast/altast/alt均值為均值為1.131.13：1 1 肝癌組肝癌組ast/altast/alt均值為均值為2.412.41：1 1 急性肝壞死組急性肝壞死組ast/altast/alt均值為均值為3.613.61：1 1 肝細(xì)胞中的總含量：肝細(xì)胞中的總含量： astast（主要存在于肝細(xì)胞線粒體內(nèi)）（主要存在于肝細(xì)胞線粒體內(nèi)）altalt（主要存在于肝細(xì)胞胞漿內(nèi)）（主要存在于肝細(xì)胞胞漿內(nèi)） 肝細(xì)胞輕度損傷時(shí)主要是胞漿酶釋放出來(lái)，血清中肝細(xì)胞輕度損傷時(shí)主要是胞漿酶釋放出來(lái)，血清中altaltastast；而肝細(xì)；而肝細(xì) 胞重度損傷時(shí)胞漿酶、線粒體酶均釋放出來(lái)，血清中胞

23、重度損傷時(shí)胞漿酶、線粒體酶均釋放出來(lái)，血清中astastaltalt；隨著；隨著 肝病由輕變重，肝病由輕變重，ast/altast/alt的比值就由的比值就由1 1變?yōu)樽優(yōu)? 1 血清血清堿性磷酸堿性磷酸酶酶（alpalp）活性）活性測(cè)定測(cè)定 n 堿性磷酸酶堿性磷酸酶(alp(alp或或akp)akp)是一組底物特異性較低是一組底物特異性較低, ,在堿性條件在堿性條件 下（最適下（最適phph為為1010左右）能水解很多磷酸單酯化合物的酶。左右）能水解很多磷酸單酯化合物的酶。 n alpalp廣泛分布定位于細(xì)胞膜表面，其含量依次為肝、腎、廣泛分布定位于細(xì)胞膜表面，其含量依次為肝、腎、 胎盤(pán)、小

24、腸、骨骼等。胎盤(pán)、小腸、骨骼等。 n 血清中的血清中的alpalp主要來(lái)自肝臟和骨骼，主要用于診斷肝膽和骨主要來(lái)自肝臟和骨骼，主要用于診斷肝膽和骨 骼疾病骼疾病 測(cè)定方法測(cè)定方法 一、速率法一、速率法 n原理原理 以以對(duì)對(duì)- -硝基苯酚磷酸鈉（硝基苯酚磷酸鈉（pnpppnpp）為底物，為底物， amp amp或二乙或二乙 醇胺（醇胺（deadea）為磷酸?；氖荏w。在堿性條件下，）為磷酸酰基的受體。在堿性條件下，alpalp催催 化化pnpppnpp水解釋放出磷酸基團(tuán)，生成游離水解釋放出磷酸基團(tuán)，生成游離對(duì)對(duì)- -硝基酚（硝基酚（p-p- nitrophenolnitrophenol, pnp

25、, pnp），），pnppnp在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)， 呈現(xiàn)較深的黃色。根據(jù)呈現(xiàn)較深的黃色。根據(jù)405nm405nm處吸光度增加的速率處吸光度增加的速率 （a/mina/min）推算出）推算出血血清清alpalp活性單位。活性單位。 piamppnpamppnpp alp 1 1測(cè)定測(cè)定alpalp活性受緩沖液種類的影響活性受緩沖液種類的影響 2.2.血清標(biāo)本應(yīng)新鮮，置室溫血清標(biāo)本應(yīng)新鮮，置室溫(25)6h(25)6h測(cè)定，測(cè)定，alpalp活性約增活性約增 高高1 1；置室溫；置室溫1 14d4d，alpalp活性增高活性增高3 36 6；若冰凍保存，；若冰凍

26、保存， 血清復(fù)溶后血清復(fù)溶后alpalp活性升高可達(dá)活性升高可達(dá)3030。 3 3血清稀釋度對(duì)血清稀釋度對(duì)alpalp活性測(cè)定有影響。血清與底物緩沖液活性測(cè)定有影響。血清與底物緩沖液 之比一般在之比一般在1 1：50501 1：100100之間。稀釋度低于之間。稀釋度低于1 1：5050時(shí)，酶活時(shí)，酶活 力降低。力降低。 4 4一般用血清與肝素抗凝血漿測(cè)定一般用血清與肝素抗凝血漿測(cè)定alpalp活性?？鼓齽┤缁钚??？鼓齽┤?edta-na2edta-na2、草酸鹽、檸檬酸鹽等因能絡(luò)合、草酸鹽、檸檬酸鹽等因能絡(luò)合mg2+mg2+而抑制而抑制alpalp活活 性，故不能使用這類抗凝劑的血漿做于性，

27、故不能使用這類抗凝劑的血漿做于alpalp活性測(cè)定?；钚詼y(cè)定。 5 5alpalp測(cè)定受年齡與性別、飲食、運(yùn)動(dòng)和妊娠等因素的影測(cè)定受年齡與性別、飲食、運(yùn)動(dòng)和妊娠等因素的影 響。響。 n注意事注意事 項(xiàng)項(xiàng) 靈敏度高、線性范圍寬（靈敏度高、線性范圍寬（500u/l500u/l以上）和精密度高以上）和精密度高， 是是我國(guó)及我國(guó)及ifccifcc的推薦方法的推薦方法 n方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià) 二、金氏比色法二、金氏比色法 n原理原理 在在phl0phl0的堿性條件下，的堿性條件下，alpalp催化磷酸苯二鈉底物水解，催化磷酸苯二鈉底物水解， 生成游離的酚和磷酸氫二鈉。酚在堿性溶液中與生成游離的酚和磷酸氫二鈉

28、。酚在堿性溶液中與4-4-氨氨 基安替比林結(jié)合，并經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色的醌類基安替比林結(jié)合，并經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色的醌類 衍生物，根據(jù)紅色深淺計(jì)算出衍生物，根據(jù)紅色深淺計(jì)算出alpalp活力的大小?；盍Φ拇笮?。 磷酸苯二鈉比色法與更早的磷酸苯二鈉比色法與更早的布氏法布氏法相比具有較大的優(yōu)點(diǎn)，如相比具有較大的優(yōu)點(diǎn)，如 水解速度快，保溫時(shí)間較短、靈敏度較高、顯色穩(wěn)定、不需去水解速度快，保溫時(shí)間較短、靈敏度較高、顯色穩(wěn)定、不需去 蛋白、操作簡(jiǎn)單、快速。但與蛋白、操作簡(jiǎn)單、快速。但與磷酸對(duì)硝基酚速率法磷酸對(duì)硝基酚速率法相比，準(zhǔn)確相比，準(zhǔn)確 度、精密度較低；操作比較繁瑣度、精密度較低；操作比較繁瑣,

29、 ,，靈敏度低。，靈敏度低。 n方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià) n活性單位活性單位 alpalp金氏單位定義是金氏單位定義是100ml100ml血清，血清，3737與底物保溫與底物保溫1515分鐘，產(chǎn)生分鐘，產(chǎn)生 1mg1mg酚為酚為1 1個(gè)金氏單位。個(gè)金氏單位。 參考區(qū)間參考區(qū)間 金氏比色法：金氏比色法： 成人：成人：3 313 13 金氏單位金氏單位 ，兒童：，兒童：5 52828金氏單位金氏單位 速率法：速率法： 女性：女性：1 11212歲歲 500u/l 1515歲歲 40 40 150u/l150u/l 男性：男性：1 11212歲歲 500u/l500u/l 12 121515歲歲 750u/

30、l25 25歲歲 4040150u/l150u/l。 alpalp檢測(cè)主要用于診斷肝膽和骨骼疾病檢測(cè)主要用于診斷肝膽和骨骼疾病 臨床意義臨床意義 (1)(1)肝膽系統(tǒng)疾?。焊文懴到y(tǒng)疾?。?各種肝內(nèi)、外膽管阻塞引起的膽汁淤積性疾病：各種肝內(nèi)、外膽管阻塞引起的膽汁淤積性疾?。篴lpalp明顯升高，且明顯升高，且 alpalp升高與血清膽紅素升高相平行，升高與血清膽紅素升高相平行， 肝內(nèi)局限性膽道阻塞（如肝癌、肝膿腫）：肝內(nèi)局限性膽道阻塞（如肝癌、肝膿腫）：alpalp明顯增高，血清膽紅素明顯增高，血清膽紅素 大多正常。大多正常。 累及肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的肝膽疾?。ǜ窝?、肝硬化）：累及肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的肝膽疾?。?/p>

31、肝炎、肝硬化）：alpalp輕度升高。輕度升高。 (2)(2)骨骼疾?。汗趋兰膊。?（3 3）妊娠后期及兒童生長(zhǎng)期）妊娠后期及兒童生長(zhǎng)期alpalp生理性增高生理性增高 由于骨的損傷或疾病使成骨細(xì)胞內(nèi)所含高濃度的由于骨的損傷或疾病使成骨細(xì)胞內(nèi)所含高濃度的alpalp釋釋 放入血液中，引起血清放入血液中，引起血清alpalp活力的增高。如纖維性骨炎、活力的增高。如纖維性骨炎、 成骨不全癥、佝僂病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修成骨不全癥、佝僂病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修 復(fù)愈合期等。復(fù)愈合期等。 血清血清酸性磷酸酸性磷酸酶酶（acpacp）活性）活性測(cè)定測(cè)定 n 酸性磷酸酶是一組對(duì)底物專一性不強(qiáng)、

32、在酸性條件下水酸性磷酸酶是一組對(duì)底物專一性不強(qiáng)、在酸性條件下水 解各種正磷酸單酯的酶。解各種正磷酸單酯的酶。 n acpacp主要分布于前列腺、肝、脾、紅細(xì)胞等，但以主要分布于前列腺、肝、脾、紅細(xì)胞等，但以前列腺前列腺 含量最為豐富含量最為豐富，可為其它組織中酶活力的，可為其它組織中酶活力的10001000倍。倍。血清中血清中acpacp 主要來(lái)源于前列腺，稱為前列腺主要來(lái)源于前列腺，稱為前列腺acpacp（pappap），它可被酒石酸），它可被酒石酸 抑制；非前列腺抑制；非前列腺acpacp，不被酒石酸抑制。，不被酒石酸抑制。 n 正常男性血清中的正常男性血清中的acpacp約有約有1/31

33、/31/21/2來(lái)自前列腺，其余則與來(lái)自前列腺，其余則與 女性血中的女性血中的acpacp一樣可能來(lái)自血小板或破骨細(xì)胞。一樣可能來(lái)自血小板或破骨細(xì)胞。 測(cè)定方法測(cè)定方法 臨床意義臨床意義 前列腺疾病前列腺疾病 血清血清pappap測(cè)定是診斷前列腺癌最重要的指標(biāo)測(cè)定是診斷前列腺癌最重要的指標(biāo) 之一。在前列腺肥大、前列腺炎、急性尿潴留時(shí)亦可升之一。在前列腺肥大、前列腺炎、急性尿潴留時(shí)亦可升 高。酒石酸抑制試驗(yàn)可區(qū)別高。酒石酸抑制試驗(yàn)可區(qū)別pappap與非與非pappap。 骨病骨病 惡性骨腫瘤、變形性骨炎、多發(fā)性骨髓瘤、骨質(zhì)疏惡性骨腫瘤、變形性骨炎、多發(fā)性骨髓瘤、骨質(zhì)疏 松、代謝性骨病等輕度增高。

34、松、代謝性骨病等輕度增高。 肝病肝病 肝癌、肝硬化肝炎時(shí)肝癌、肝硬化肝炎時(shí)acpacp增高。增高。 血液病血液病 溶血性疾病、白血肉、血小板疾病等，溶血性疾病、白血肉、血小板疾病等，acpacp均有均有 不同程度的升高。不同程度的升高。 血清血清 - -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（ggtggt）活性）活性測(cè)定測(cè)定 n ggtggt是催化是催化 - -谷氨酰基移換反應(yīng)的一種酶谷氨?；茡Q反應(yīng)的一種酶 n ggtggt分布于腎、胰、肺、肝、腸和前列腺等多種組織中，其分布于腎、胰、肺、肝、腸和前列腺等多種組織中，其 中以腎臟含量最多。中以腎臟含量最多。 n 血清中血清中g(shù)gtggt主要來(lái)源于肝膽系統(tǒng)

35、。主要來(lái)源于肝膽系統(tǒng)。 ggtggt在肝臟中廣泛分布于在肝臟中廣泛分布于 肝細(xì)胞的毛細(xì)膽管一側(cè)和整個(gè)膽管系統(tǒng)，因此當(dāng)肝內(nèi)合成亢肝細(xì)胞的毛細(xì)膽管一側(cè)和整個(gè)膽管系統(tǒng)，因此當(dāng)肝內(nèi)合成亢 進(jìn)或膽汁排出受阻時(shí)，血清中進(jìn)或膽汁排出受阻時(shí)，血清中g(shù)gtggt增高。增高。 測(cè)定方法測(cè)定方法 一、速率法一、速率法 以以l-l-谷氨酰谷氨酰-3-3-羧基羧基-4-4-硝基苯胺硝基苯胺為底物，雙甘肽為谷氨為底物，雙甘肽為谷氨 ?；氖荏w，在?；氖荏w，在ggtggt的催化下，谷氨?；D(zhuǎn)移到雙甘肽分子的催化下，谷氨?；D(zhuǎn)移到雙甘肽分子 上，同時(shí)釋放出上，同時(shí)釋放出黃色的黃色的2-2-硝基硝基-5-5-氨基苯甲酸氨基苯

36、甲酸，根據(jù)，根據(jù)405nm405nm 處吸光度增加的速率（處吸光度增加的速率（a/mina/min）推算出）推算出ggtggt活性單位活性單位 n 原理原理 本法準(zhǔn)確度好；精密度好線性范圍寬（本法準(zhǔn)確度好；精密度好線性范圍寬（460u/l460u/l）；）； 操作簡(jiǎn)便；操作簡(jiǎn)便；底物溶解度高、穩(wěn)定性好，自身水解作用小，底物溶解度高、穩(wěn)定性好，自身水解作用小， 是是ifccifcc的推薦方法。的推薦方法。但對(duì)試劑純度要求高但對(duì)試劑純度要求高 n方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià) 以以-谷氨酰谷氨酰-萘胺萘胺作為作為-谷氨?；墓w，雙谷氨?；墓w，雙 甘肽作為受體，在甘肽作為受體，在ggtggt作用下，產(chǎn)生作用

37、下，產(chǎn)生-萘胺萘胺，后者與重，后者與重 氮試劑反應(yīng)，產(chǎn)生氮試劑反應(yīng)，產(chǎn)生紅色紅色-萘胺萘胺- -對(duì)對(duì)- -偶氮苯磺酸偶氮苯磺酸，其色，其色 澤的深淺與澤的深淺與ggtggt活力成正比?；盍Τ烧取?二、重氮反應(yīng)比色法二、重氮反應(yīng)比色法 n 原理原理 操作簡(jiǎn)便，顏色穩(wěn)定，線性關(guān)系好，操作簡(jiǎn)便，顏色穩(wěn)定，線性關(guān)系好，適合一般分光適合一般分光 光度計(jì)應(yīng)用，光度計(jì)應(yīng)用，但底物水溶性較差但底物水溶性較差，緩沖液和緩沖液和phph對(duì)結(jié)對(duì)結(jié) 果影響較大，現(xiàn)已較少應(yīng)用。果影響較大，現(xiàn)已較少應(yīng)用。 n方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià) 每每100ml100ml血清血清3737作用作用2 2小時(shí)釋放出小時(shí)釋放出1mol-1mol-

38、萘胺為一單位萘胺為一單位 n活性單位活性單位 參考區(qū)間參考區(qū)間 男性男性 11 1150u/l 50u/l （3737），女性），女性 7 732u/l32u/l（3737） 成年男性成年男性 3 317u/l17u/l， 成年女性成年女性 2 213u/l13u/l 重氮反應(yīng)比色法：重氮反應(yīng)比色法： 速率法：速率法： 臨床意義臨床意義 u尿中尿中g(shù)gt活性：活性： 可能有助于診斷腎疾病可能有助于診斷腎疾病 u血清血清ggt用于診斷肝膽疾病用于診斷肝膽疾病 1. 1. 原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌 2. 2. 阻塞性黃疸阻塞性黃疸 3. 3. 病毒性肝炎和肝硬病毒性肝炎和肝硬化化 4.

39、 4. 乙醇性肝炎乙醇性肝炎 血清血清淀粉淀粉酶酶（ams/amyams/amy）活性）活性測(cè)定測(cè)定 n 人和動(dòng)物只含人和動(dòng)物只含-amy-amy，此酶以，此酶以caca2+ 2+為必需因子（除 為必需因子（除 肝素外，各種抗凝劑可通過(guò)螯合肝素外，各種抗凝劑可通過(guò)螯合caca2+ 2+ 抑制 抑制amsams活性，活性， 故故標(biāo)本必須用血清或肝素抗凝血漿標(biāo)本必須用血清或肝素抗凝血漿），其最適），其最適phph在在 6.56.57.57.5之間，鹵素和其他陰離子有激活作用。之間，鹵素和其他陰離子有激活作用。 n 血清中的血清中的amsams主要有胰型主要有胰型(p(p型型) )和唾液型和唾液型(

40、s(s型型) )及及 其亞型同工酶組成其亞型同工酶組成 n 人體中胰腺含人體中胰腺含amyamy最多，唾液腺也分泌大量最多，唾液腺也分泌大量amyamy。 n amy amy分子量較小，易由腎臟排出，半壽期很短分子量較小，易由腎臟排出，半壽期很短 （約（約2h2h），所以病變時(shí)血清），所以病變時(shí)血清amyamy增高持續(xù)時(shí)間很短。增高持續(xù)時(shí)間很短。 測(cè)定方法測(cè)定方法 天然淀粉底物方法：天然淀粉底物方法： （分子組成）確定底物方法：（分子組成）確定底物方法： 碘碘- -淀粉比色法淀粉比色法 目前應(yīng)用最多的方法是以人工合成的麥芽多糖為底物的目前應(yīng)用最多的方法是以人工合成的麥芽多糖為底物的 方法方法

41、如如2-2-氯氯- -對(duì)硝基苯麥芽三糖苷（對(duì)硝基苯麥芽三糖苷（cnp-g3cnp-g3）和亞乙基封閉的）和亞乙基封閉的 對(duì)硝基苯麥芽庚糖苷法（亦稱對(duì)硝基苯麥芽庚糖苷法（亦稱epseps法法），以后者最常用，），以后者最常用，也也 是是ifccifcc的推薦方法。的推薦方法。 n 原理原理 一、一、epseps法法 對(duì)硝基苯酚生成量在一定范圍內(nèi)與對(duì)硝基苯酚生成量在一定范圍內(nèi)與amyamy活性成比，在活性成比，在 405nm405nm可以進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)即可測(cè)出可以進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)即可測(cè)出amyamy的活性。的活性。 n方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)：試劑穩(wěn)定，水解產(chǎn)物確定，化學(xué)計(jì)量關(guān)系明確， 試劑穩(wěn)定，水解產(chǎn)物確定

42、，化學(xué)計(jì)量關(guān)系明確， 是是最常用最常用的的amsams測(cè)定方法，測(cè)定方法，也是也是ifccifcc的的推薦方法推薦方法。 二、碘二、碘- -淀粉比色法淀粉比色法 n 原理原理 -淀粉酶 淀粉 葡萄糖 + 麥芽糖 + 糊精 + 碘液蘭色復(fù)合物蘭色復(fù)合物 血清血清( (尿尿) )中中-淀粉酶催化淀粉分子中淀粉酶催化淀粉分子中-1-1，4-4-糖苷鍵水解，產(chǎn)糖苷鍵水解，產(chǎn) 生葡萄糖、麥芽糖及含有生葡萄糖、麥芽糖及含有-1-1，6-6-糖苷鍵支鏈的糊精。在底物充糖苷鍵支鏈的糊精。在底物充 分（已知濃度）的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被水解的淀粉結(jié)分（已知濃度）的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被水解的淀粉結(jié)

43、合，生成藍(lán)色復(fù)合物，其藍(lán)色的深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管合，生成藍(lán)色復(fù)合物，其藍(lán)色的深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管 ( (此處亦相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)管此處亦相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)管) )比較，從而推算出比較，從而推算出amsams的活力單位。的活力單位。 n活性單位活性單位 100ml100ml血清血清( (尿尿) )中的淀粉酶，在中的淀粉酶，在37 15min37 15min水解水解5mg5mg淀粉淀粉 為為1 1個(gè)單位個(gè)單位 (u)(u)。 成本低、檢測(cè)不需要昂貴儀器、試劑穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)便；成本低、檢測(cè)不需要昂貴儀器、試劑穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)便； 但重復(fù)性差、準(zhǔn)確率低但重復(fù)性差、準(zhǔn)確率低 n方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)： 參考區(qū)間參考區(qū)

44、間 epseps法：法： 碘碘- -淀粉比色法：淀粉比色法： 臨床意義臨床意義 血清血清( (尿尿)ams)ams活性是診斷胰腺疾病的重要指標(biāo)?；钚允窃\斷胰腺疾病的重要指標(biāo)。 血清血清脂肪脂肪酶酶（lpslps）活性）活性測(cè)定測(cè)定 脂肪酶脂肪酶(lipase(lipase，lps) lps) 是胰腺外分泌酶。是胰腺外分泌酶。lpslps可被巰可被巰 基化合物、膽汁酸、基化合物、膽汁酸、ca2+ca2+及輔脂肪酶等激活劑激活，及輔脂肪酶等激活劑激活， 而被重金屬、絲氨酸所抑制。血清中而被重金屬、絲氨酸所抑制。血清中l(wèi)pslps主要來(lái)自胰主要來(lái)自胰 腺，少量來(lái)自胃腸粘膜。腺，少量來(lái)自胃腸粘膜。 測(cè)

45、定方法測(cè)定方法 臨床意義臨床意義 n 主要用于診斷胰腺疾病主要用于診斷胰腺疾病，在急性胰腺炎發(fā)作后，在急性胰腺炎發(fā)作后 2 212h12h，血清，血清lpslps可顯著升高，可顯著升高，24h24h至峰值，至峰值，4848 72h72h可能恢復(fù)正常，但隨后又可持續(xù)升高可能恢復(fù)正常，但隨后又可持續(xù)升高8 81515天。天。 血清血清lpslps在急性胰腺炎時(shí)活性升高的時(shí)間早，上升在急性胰腺炎時(shí)活性升高的時(shí)間早，上升 幅度大，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，故幅度大，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，故其診斷價(jià)值優(yōu)于其診斷價(jià)值優(yōu)于amyamy。 n 在酗酒、乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺在酗酒、乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺 癌、肝膽疾患

46、等血清癌、肝膽疾患等血清lpslps也可有不同程度的升也可有不同程度的升 高。高。 血清血清單胺氧化單胺氧化酶酶（maomao）活性）活性測(cè)定測(cè)定 單胺氧化酶單胺氧化酶(mao)(mao)是一組催化多種單胺類化合物氧是一組催化多種單胺類化合物氧 化脫氨的酶，其底物特異性不高。在有氧條件下，化脫氨的酶，其底物特異性不高。在有氧條件下， maomao能催化多種伯胺，如酪胺、多巴胺和色胺等脫能催化多種伯胺，如酪胺、多巴胺和色胺等脫 去氨基，生成相應(yīng)的醛、去氨基，生成相應(yīng)的醛、nh3nh3等等 maomao有有mao-mao-，mao-mao-及及mao-mao-三型，血清三型，血清mao-mao-活

47、活 性升高常見(jiàn)于器官纖維化，特別是肝硬化和肢端肥大性升高常見(jiàn)于器官纖維化，特別是肝硬化和肢端肥大 癥癥; ;血清血清mao-mao-活性升高常見(jiàn)于大面積肝壞死，是診活性升高常見(jiàn)于大面積肝壞死，是診 斷肝硬化的重要指標(biāo)。斷肝硬化的重要指標(biāo)。 測(cè)定方法測(cè)定方法 n 速率法速率法 以芐胺為底物，在以芐胺為底物，在o2o2和和h2oh2o參與下，參與下，maomao催化生成芐醛、催化生成芐醛、nh3nh3和和 h2o2h2o2，產(chǎn)生的，產(chǎn)生的nh3nh3再在谷氨酸脫氫酶催化下，與再在谷氨酸脫氫酶催化下，與-酮戊二酸酮戊二酸 和和nadhnadh反應(yīng)，生成谷氨酸和反應(yīng)，生成谷氨酸和nad+nad+。在。

48、在340nm340nm波長(zhǎng)下監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)下監(jiān)測(cè)nadhnadh吸吸 光度的下降速率，即可計(jì)算出光度的下降速率，即可計(jì)算出maomao活力?；盍?。 n 醛苯腙法醛苯腙法 底物芐胺在底物芐胺在maomao作用下氧化生成芐醛，芐醛與作用下氧化生成芐醛，芐醛與2 2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼 反應(yīng)生成醛苯腙，在堿性溶液中呈紅棕色，在反應(yīng)生成醛苯腙，在堿性溶液中呈紅棕色，在470nm470nm比色測(cè)定。比色測(cè)定。 臨床意義臨床意義 血清血清maomao活性測(cè)定是檢查肝纖維化病變的重要指標(biāo)活性測(cè)定是檢查肝纖維化病變的重要指標(biāo) 血清血清mao-mao-活性升高主要見(jiàn)于肝硬化和肢端肥大活性升高主要見(jiàn)于肝硬化和

49、肢端肥大 癥（器官纖維化患者血清癥（器官纖維化患者血清maomao活性升高與結(jié)締組織活性升高與結(jié)締組織 代謝亢進(jìn)有關(guān)）；代謝亢進(jìn)有關(guān)）； 血清血清mao-mao-升高則主要見(jiàn)于大面積肝壞死（爆發(fā)升高則主要見(jiàn)于大面積肝壞死（爆發(fā) 性肝炎患者血清性肝炎患者血清maomao活性升高與活性升高與maomao從壞死的肝細(xì)從壞死的肝細(xì) 胞線粒體上脫落有關(guān)）胞線粒體上脫落有關(guān)） 血清血清乳酸脫氫酶（乳酸脫氫酶（ldhldh）活性）活性測(cè)定測(cè)定 乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶(ld(ld或或ldh)ldh)催化乳酸氧化成丙酮酸，同時(shí)將氫催化乳酸氧化成丙酮酸，同時(shí)將氫 轉(zhuǎn)移給輔酶轉(zhuǎn)移給輔酶nadnad+ +而成為而成為n

50、adhnadh。 l-l-乳酸乳酸 + nad+ nad+ + 丙酮酸丙酮酸 + nadh + h+ nadh + h+ + ldld是一種含鋅的糖酵解酶，廣泛存在于人體各組織中，以是一種含鋅的糖酵解酶，廣泛存在于人體各組織中，以 肝、心肌、腎、肌肉、紅細(xì)胞含量較多。組織中肝、心肌、腎、肌肉、紅細(xì)胞含量較多。組織中l(wèi)dhldh活力活力 約比血清高約比血清高10001000倍，紅細(xì)胞內(nèi)倍，紅細(xì)胞內(nèi)ldhldh活力較血清約高活力較血清約高100100倍倍 （溶血可引起（溶血可引起ldhldh明顯升高）。明顯升高）。ldhldh有有5 5種同工酶。種同工酶。 ph8.8ph8.89.89.8 ph7

51、.4ph7.47.87.8 測(cè)定方法測(cè)定方法 目前根據(jù)目前根據(jù)ldhldh催化反應(yīng)方向的不同，有兩大類測(cè)催化反應(yīng)方向的不同，有兩大類測(cè)ldld方法：方法： 以丙酮酸為底物以丙酮酸為底物（反應(yīng)方向（反應(yīng)方向p pl l）的逆向反應(yīng)的逆向反應(yīng)( (稱稱ld-pld-p法法) ) 以乳酸為底物以乳酸為底物（反應(yīng)方向（反應(yīng)方向l lp p）的順向反應(yīng)的順向反應(yīng)( (稱稱ld-lld-l法法) ) 我國(guó)多采用目前我國(guó)多采用目前ifccifcc參考方法參考方法ld-lld-l法，用連續(xù)監(jiān)測(cè)法進(jìn)行法，用連續(xù)監(jiān)測(cè)法進(jìn)行 測(cè)定。測(cè)定。 一、乳酸為底物的速率法（一、乳酸為底物的速率法（ld-lld-l法）法） n

52、 原理原理 n方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià) 乳酸鹽和乳酸鹽和nadnad+ +底物液的穩(wěn)定性比丙酮酸鹽和底物液的穩(wěn)定性比丙酮酸鹽和nadh nadh 底物液的穩(wěn)定性大，試劑若冰凍保存，前者可穩(wěn)定底物液的穩(wěn)定性大，試劑若冰凍保存，前者可穩(wěn)定 6 6 個(gè)月以上，而后者只能保存數(shù)天；個(gè)月以上，而后者只能保存數(shù)天； 保持線性速率反應(yīng)的時(shí)間范圍較寬保持線性速率反應(yīng)的時(shí)間范圍較寬 重復(fù)性比重復(fù)性比ld ld p p 法好。法好。 ld-lld-l法與法與ld-pld-p法相比的主要優(yōu)點(diǎn)：法相比的主要優(yōu)點(diǎn)： n注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 由于逆向反應(yīng)速度比正向反應(yīng)速度快，所以測(cè)定方法不同，由于逆向反應(yīng)速度比正向反應(yīng)速度快，所以測(cè)

53、定方法不同， 正常值也有差別，正常值也有差別，ldldp p 法的參考值約二倍于法的參考值約二倍于ldldl l 法。法。 不同的不同的ldhldh同工酶對(duì)冷的敏感性有差異。同工酶對(duì)冷的敏感性有差異。ldh4ldh4和和ldh5ldh5對(duì)冷對(duì)冷 特別不穩(wěn)定。在低溫特別不穩(wěn)定。在低溫( (特別是特別是2020冰凍冰凍) )可引起不可逆性失可引起不可逆性失 活，反而不如室溫穩(wěn)定（活，反而不如室溫穩(wěn)定（“冷變性冷變性”）。故血清標(biāo)本應(yīng)存）。故血清標(biāo)本應(yīng)存 放在室溫中，室溫存放放在室溫中，室溫存放2 2 3 3 天將不出現(xiàn)活性的喪失。如天將不出現(xiàn)活性的喪失。如 果血清標(biāo)本必須存放較長(zhǎng)時(shí)間，應(yīng)加入果血清

54、標(biāo)本必須存放較長(zhǎng)時(shí)間，應(yīng)加入nad nad 或谷胱甘肽后或谷胱甘肽后 保存于保存于4 4 環(huán)境中以降低環(huán)境中以降低ldh4ldh4和和ldh5ldh5的失活速率。的失活速率。 標(biāo)本采集：用血清或肝素抗凝血漿測(cè)定標(biāo)本采集：用血清或肝素抗凝血漿測(cè)定ldhldh活性的效果令人活性的效果令人 滿意，草酸鹽抗凝劑對(duì)滿意，草酸鹽抗凝劑對(duì)ldhldh活性有抑制作用。標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格避免活性有抑制作用。標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格避免 溶血。溶血。 乳酸脫氫酶在有輔酶乳酸脫氫酶在有輔酶i(nad+)i(nad+)存在的情況下，催化乳酸脫存在的情況下，催化乳酸脫 氫生成丙酮酸。丙酮酸與氫生成丙酮酸。丙酮酸與2 2，4-4-二硝基苯肼反

55、應(yīng)，生成丙二硝基苯肼反應(yīng)，生成丙 酮酸酮酸- -二硝基苯腙，在堿性溶液中呈棕紅色。其顏色深淺二硝基苯腙，在堿性溶液中呈棕紅色。其顏色深淺 與丙酮酸濃度成正比，同樣處理丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，與丙酮酸濃度成正比，同樣處理丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色， 即可求得即可求得ldhldh的活力單位。反應(yīng)式如下：的活力單位。反應(yīng)式如下： 二、比色法二、比色法 n 原理原理 ldhldh 乳酸乳酸 + nad+ nad+ + 丙酮酸丙酮酸 + nadh + h+ nadh + h+ + 丙酮酸丙酮酸 + 2+ 2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼 丙酮酸丙酮酸- -二硝基苯腙二硝基苯腙 + h+ h2 2o o naoh

56、naoh n活性單位活性單位 100ml100ml血清在血清在3737，與底物作用，與底物作用15min15min，產(chǎn)生，產(chǎn)生lmollmol 丙酮酸為丙酮酸為1 1個(gè)金氏單位。個(gè)金氏單位。 參考區(qū)間參考區(qū)間 乳酸為底物的速率法：乳酸為底物的速率法： 109 109245 u245 ul l 比色法：比色法：190190437437金氏單位金氏單位 臨床意義臨床意義 ldhldh測(cè)定常用于心肌梗死、肝病和某些惡性腫瘤的輔測(cè)定常用于心肌梗死、肝病和某些惡性腫瘤的輔 助診斷。助診斷。 ldhldh與與ldhldh同工酶測(cè)定有助于判定同工酶測(cè)定有助于判定ldhldh的組織來(lái)源的組織來(lái)源( (見(jiàn)見(jiàn) l

57、dhldh同工酶測(cè)定同工酶測(cè)定) )。 ldhldh與與ck-mbck-mb、astast聯(lián)合可判定心肌梗死的病程。聯(lián)合可判定心肌梗死的病程。 ldhldh活力增高主要見(jiàn)于以下疾?。夯盍υ龈咧饕?jiàn)于以下疾病： 1 1心血管疾病心血管疾病 ldhldh由于分子量較大，在常用心肌酶中由于分子量較大，在常用心肌酶中升高最遲升高最遲，心，心 肌梗死患者在發(fā)生胸痛后肌梗死患者在發(fā)生胸痛后8 812hldh12hldh開(kāi)始升高，開(kāi)始升高，242448h48h達(dá)高峰，升高達(dá)高峰，升高 水平通常為正常的水平通常為正常的3 34 4倍，最高可達(dá)倍，最高可達(dá)1010倍。因其倍。因其半壽期較長(zhǎng)半壽期較長(zhǎng)，增高持，增

58、高持 續(xù)時(shí)間可維持續(xù)時(shí)間可維持7d7d左右或更長(zhǎng)。此時(shí)其他酶已恢復(fù)正常，左右或更長(zhǎng)。此時(shí)其他酶已恢復(fù)正常，在亞急性心肌在亞急性心肌 梗死診斷上有一定價(jià)值。梗死診斷上有一定價(jià)值。ldhldh中度升高見(jiàn)于心肌炎，伴有肝淤血的心衰，中度升高見(jiàn)于心肌炎，伴有肝淤血的心衰， 重度休克及缺氧。重度休克及缺氧。 2 2肝病肝病 伴有黃疸的中毒性肝炎患者，伴有黃疸的中毒性肝炎患者，ldhldh可達(dá)正常可達(dá)正常1010倍。倍。ldhldh升高升高 亦可見(jiàn)于病毒性肝炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、肝硬化等。亦可見(jiàn)于病毒性肝炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、肝硬化等。 3 3惡性腫瘤惡性腫瘤 7070有肝轉(zhuǎn)移的腫瘤患者及有肝轉(zhuǎn)移

59、的腫瘤患者及20206060無(wú)肝轉(zhuǎn)移的腫無(wú)肝轉(zhuǎn)移的腫 瘤患者有瘤患者有l(wèi)dhldh水平升高?；羝娼鸩?、腹部及肺部腫瘤、胚胎細(xì)胞腫瘤、水平升高?；羝娼鸩　⒏共考胺尾磕[瘤、胚胎細(xì)胞腫瘤、 白血病等亦有白血病等亦有l(wèi)dhldh升高。升高。 4 4其它疾病其它疾病 溶血性疾病、腎病、進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良、肺栓塞亦伴溶血性疾病、腎病、進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良、肺栓塞亦伴 有有l(wèi)dhldh升高。升高。 測(cè)定血清及胸腹水中測(cè)定血清及胸腹水中l(wèi)dld含量常用來(lái)鑒別含量常用來(lái)鑒別 其為漏出液抑或滲出液，若胸水其為漏出液抑或滲出液，若胸水ldld血清血清ld0.6ld0.6、 腹水腹水ldld血清血清ld0.4ld0.4為滲

60、出液，反之為漏出液。為滲出液，反之為漏出液。 ldhldh是由是由h h（心型）和（心型）和m m型（肌型）兩種不同亞基組成的型（肌型）兩種不同亞基組成的 四聚體，形成四聚體，形成5 5種結(jié)構(gòu)不同的同工酶種結(jié)構(gòu)不同的同工酶。按電泳速度命名。按電泳速度命名。 血清血清乳酸脫氫酶同工酶乳酸脫氫酶同工酶測(cè)定測(cè)定 心肌，腎和紅細(xì)胞中以心肌，腎和紅細(xì)胞中以ldh1ldh1和和ldh2ldh2最多最多 骨骼肌和肝中以骨骼肌和肝中以ldh4ldh4和和ldh5ldh5最多最多 肺，脾，胰，甲狀腺，腎上腺和淋巴結(jié)等組織中以肺，脾，胰，甲狀腺，腎上腺和淋巴結(jié)等組織中以ldh3ldh3最多最多 測(cè)定方法測(cè)定方法