不同稀釋液對血清中HBsAg定量測定的影響

1、文檔收集于互聯(lián)網(wǎng)，已重新整理排版.word版本可編借，有幫助歡迎下載支持. 不同稀釋液對血清中HBsAg定量測定的影響 作者：胡偉，畢永春，宋景秋，戴蕾 【摘要】目的：探討不同稀釋液對血清中高濃度HBsAg測定結(jié)果 的影響。方法：將11例HBsAg高值的乙肝患者血清分別用HBsAg專用 稀釋液、生理鹽水、混合低值血清及蒸憎水稀釋，然后用ARCHITECT 12000SR化學(xué)發(fā)光分析儀測定其HBsAg值。結(jié)果：用生理鹽水和蒸飾 水稀釋的血清標木測得的HBsAg值與用專用稀釋液稀釋后測得的 HBsAg值比較存在統(tǒng)計學(xué)差異，而混合低值血清與專用稀釋液所測值 相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：除專用稀釋液

2、外，混合低值血清可 以用于ARCHITECT 12000SR化學(xué)發(fā)光分析儀測定高濃度HBsAg的替代 稀釋液，而生理鹽水和蒸飾水不能用作稀釋液測定高值HBsAgo 【關(guān)鍵詞】乙型肝炎表而抗原；稀釋液；化學(xué)發(fā)光免疫法 Abstract Objective： To explore the influence of the different diluents to hepatitis B surface antigen(HBsAg) in human serum. Methods: 11 hepatitis B patients寵 serum with high concentration of

3、HBsAg were selected, then diluted with specialized diluents, low serum, normal saline and distilled water respectively, the content of HBsAg were detected by Arch it ect i2000SR immunoassay analyzer Results: Serum specimen of HBsAg diluted with normal saline or distilled water had difference compare

4、d to specialized diluents group(P005), while there was no significance in determination of HBsAg 1文檔來源為:從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word版本可編輯. 文檔收集于互聯(lián)網(wǎng)，已重新整理排版.word版本可編借，有幫助歡迎下載支持. diluted with low serum comparing with specialized diluents group(P0. 05). Conclusion: The low serum can be a substitute for specialized dil

5、uents to Architect 12000SR immunoassayanalyzer while the normal saline and distilled water can not. .Key words hepatitis B surface antigen; diluents; chemiluminescence immunoassay 我國是乙型肝炎病毒(hepatitis B Virus, HBV)感染的高發(fā) 區(qū)，HBV感染的診斷主要依賴于患者血清中病毒標志物和病毒核酸 (HBV DNA)的檢出。乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,

6、 HBsAg)是HBV表而的外膜蛋白，由病毒S基因編碼，在病毒感染肝細 胞過程中起重要作用。最近一些研究證明HBsAg和HBV DNA水平之間 有良好的相關(guān)性1-2,定量檢測血清中HBsAg可以反映宿主體內(nèi)HBV DNA的水平，對評價抗病毒藥物治療的療效和判斷預(yù)后有重要意義 3 ,同時對于一些HBV DNA呈陰性的慢性乙肝患者，血清中HBsAg 的含量就為臨床醫(yī)生的診斷及治療提供了良好的依據(jù)。目前，我院采 用ARCHITECT 12000SR化學(xué)發(fā)光分析儀對血清中的HBsAg進行定量檢 測。臨床上有些乙肝患者HBsAg定量測定結(jié)果超出該儀器所能檢測的 線性范圍，為了得到準確、可靠的實驗結(jié)果，幫

7、助臨床醫(yī)生更好地了 解疾病進展，常需要對高濃度HBsAg血清進行稀釋后再測定。 1材料和方法 1. 1血清標木 篩選收集乙肝患者血清HBsAg定量250 IUml-1的標木 血清，標木來源于南京市鼓樓醫(yī)院門診。標木要求無明顯溶血、脂血。 1.2混合低值血清制備 收集木院住院病人中乙肝兩對半定量結(jié)果全陰性的血清標 本，混勻后2 000 rmin-1離心取其上清液（經(jīng)檢測HBsAg為0. 02 IU nill）。 1. 3儀器與試劑 美國雅培公司生產(chǎn)的ARCHITECT 12000SR全自動化學(xué)發(fā)光儀 及配套試劑（含HBsAg專用稀釋液）、生理鹽水、蒸鐲水、自制混合低 值血清等。 1.4實驗方法

8、將不同患者的高濃度HBsAg血清（250 IU ml-1）分別用 專用稀釋液、生理鹽水、混合低值血清及蒸懈水按照1 : 100的比例（5 U 1.血清加入495卩1稀釋液）稀釋,充分混勻后取雙份上機檢測HBsAg 含量。操作步驟嚴格按說明書進行，測定在1 h內(nèi)完成。 1. 5統(tǒng)計方法 用Microsoft Excel系統(tǒng)對數(shù)據(jù)進行分析，組間比較用配對t 檢驗，P0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果 高值HBsAg血清標木分別用HBsAg專用稀釋液、生理鹽水、 混合低值血清及蒸憎水按照1 ： 100比例稀釋后經(jīng)ARCHITECT 12000SR 化學(xué)發(fā)光儀測HBsAg濃度值，結(jié)果見表lo表1高濃

9、度HBsAg用不 同稀釋液稀釋后的測定結(jié)果及偏差注：上述測定值均為稀釋后的測定 值，實際值二測定值X100生理鹽水和蒸憎水作為稀釋液后的測定值與 專用稀釋液稀釋后的測定值相比，P0. 05,有統(tǒng)計學(xué)差異，所以在 日常檢測中，不能用生理鹽水或蒸憎水作為化學(xué)發(fā)光免疫分析法測定 HBsAg的稀釋液;而混合低值血清稀釋后的測定值與專用稀釋液相比 偏差較小，P0. 05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義，故混合低值血清可以作為 替代稀釋液用于化學(xué)發(fā)光免疫分析法測定HBsAgo 3討論 雅培ARCHITECT 12000SR全自動免疫分析儀核心技術(shù)為化學(xué) 發(fā)光微粒子免疫分析(chemiluminesent micropa

10、ticle immunoassay), 以叮叮酯作為標記發(fā)光劑，主要用于測定蛋白質(zhì)、病毒抗原等大分子 物質(zhì)，試劑具有極高的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性。它對HBsAg的可測 范圍是0250 IUml-1,而臨床上有些血清的HBsAg往往超出了該 檢測范圍，所以需要稀釋后再測定，但是由廠家提供的專用稀釋液價 格相當(dāng)昂貴且保存有效期很短，有時會有供貨不及時或稀釋液超過有 效期的情況發(fā)生。木研究通過用生理鹽水、混合低值血清、蒸憎水作 為稀釋液來稀釋高濃度的HBsAg血清，旨在探討三者對血清HBsAg測 定的影響，以期選擇出合適的稀釋液來代替專用稀釋液。免疫反應(yīng)體 系中的蛋白分子種類及含量、pH值、離子強度

11、對免疫反應(yīng)木身有較大 影響。待測血清經(jīng)稀釋后如果反應(yīng)體系發(fā)生明顯變化，則會影響檢驗 結(jié)果的準確性4。 通過這3種稀釋液分別對11份不同乙肝患者血清稀釋后進行 測定，比較偏差計算結(jié)果發(fā)現(xiàn)用生理鹽水及蒸憎水稀釋后測得的結(jié)果 都偏高，均存在明顯偏差，分別為-2. 05%157.81%、-16. 32% 313. 64%,而用混合低值血清稀釋后的偏差為-35. 03%32. 60%,與專 用稀釋液稀釋后測定值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義?？赡芤驗榈椭祷旌?血清的蛋口質(zhì)、pH值、離子強度和其他血清成分與樣木血清基本相近, 因此其測定結(jié)果偏差最小。因只對較高濃度HBsAg的血清標本(一般 250 IU-ml-1

12、)進行稀釋，所以用混合低值血清稀釋測定的偏差并 不影響對HBsAg定量結(jié)果的陰陽性判定，僅對其高濃度的值有所影響, 而這個結(jié)果應(yīng)該是可以接受的。生理鹽水的離子強度、pH值與血清相 近，但缺乏蛋白質(zhì)和血清成分，所以測定結(jié)果偏差較大。而蒸憎水與 血清相比在蛋白質(zhì)、pH值方而均相差較大，不適宜作為免疫反應(yīng)的血 清稀釋液，這與丁忠旗等5-7研究結(jié)果一致。考慮到胎牛血清在離子 強度、pH值方而與人血清接近，另選取5份高濃度HBsAg的血清標本 稀釋后進行比較，發(fā)現(xiàn)與專用稀釋液比較偏差亦較大，可超過100%(結(jié) 果未在表1中列出)，可能是胎牛血清中所含蛋白種類和人血清相比有 一定差異，對整個反應(yīng)體系有影響

13、所致。 木實驗結(jié)果表明，雅培ARCHITECT 12000SR全自動免疫分析 儀在測定HBsAg濃度時，如遇到超岀儀器線性范圍(250 IU inl-1) 的標本需進行稀釋，除專用稀釋液外，低值血清可以作為替代稀釋液 使用，以測定高濃度HBsAg的實際值來觀察患者病情及轉(zhuǎn)歸。 【參考文獻】 1孫長義，王山梅.乙肝病毒標志物與PCR擬HBV定量水平的 關(guān)系J.中國公共衛(wèi)生,2002, 18(12):1480擬1481. 2侯遠沛，宋麗.乙型肝炎標志物定量檢測結(jié)果與 HBV擬DNA含量相關(guān)性分析J.實用醫(yī)技雜 志，2004, 11(10) :2112擬2113. 3 陳祥勝，廖雯君.乙肝HBsAg定量檢測的臨床診斷意義 J湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2009, 11 (2) : 21擬23. 4 高云朝，楊亞東，陸漢魁.稀釋介質(zhì)對化學(xué)發(fā)光免疫分析 檢測血清HCG的影響J.標記免疫分析與臨床,2007, 14(2) :