folin-酚試劑法測定蛋白質(zhì)的濃度

1、實(shí)驗(yàn)題目 福林(Folin)-酚試劑法測定蛋白質(zhì)的濃度一【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?. 學(xué)會使用福林(Folin)-酚試劑法測定蛋白質(zhì)的濃度。二【實(shí)驗(yàn)原理】蛋白質(zhì)或多肽分子中有帶酚基酪氨酸或色氨酸，在堿性條件下，可使 酚試劑中的磷鈕酸化合物還原成藍(lán)色(生成鉗藍(lán)和鴿藍(lán)化合物)。藍(lán) 色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，可用比色法測定三【實(shí)驗(yàn)儀器】1.卵清蛋白片分光光度計(jì)3. 試管4. 移液管四【實(shí)驗(yàn)試劑】酚試劑A：堿性銅溶液甲液：取Na2C032g溶于1氫氧化鈉溶液中乙液：取晶體0.5g,溶于1%酒石酸鉀100ml中。臨用時按甲：乙=50： 1混合使用。酚試劑B：將100g鵠酸鈉、25g鉗酸鈉、700ml蒸飽水、50

2、ml85%磷 酸繼100ml濃鹽酸置于1500ml的磨口圓底燒瓶中，充分混勻后， 接上磨口冷凝管，回館10小時，再加入硫酸鋰150g,蒸飽水50ml 及液澳數(shù)滴，開口煮沸15分鐘，在通風(fēng)櫥內(nèi)驅(qū)除過量的澳。冷卻, 稀釋至1000ml,過濾，濾液成微綠色，貯于棕色瓶中。臨用時， 用linol/1的氫氧化鈉溶液滴定，用酚駄作指示劑，根據(jù)滴定結(jié)果, 將試劑稀釋至相當(dāng)于Imol/L的酸。3. lmg/mL牛血清蛋白液：稱取lg牛血清蛋白片溶于氯化鈉溶液中, 并稀釋至1000ml五【試驗(yàn)步驟】1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取7支干燥的試管，編號，按下表加入試劑，比色后，以 光密度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)作圖。2

3、. 樣品測定準(zhǔn)確吸取樣液于干燥的試管中，同樣按下表加入試劑，測出 光密度值后，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣液的蛋白質(zhì)濃度。管號1234567樣品牛血清賀白液00.05().10.20.30.40.50.5 （樣液）(lmg/ml)ml蒸餡水inJ0.50.450.4().30.20.100Folin-酚試刑A4.04.04.04.04.04.04.04.0搖勻，在家溫下放宜10力卜鐘Folin-酚試劑B0.50.50.50.50.50.50.5).5在室溫下放賓30分釧P后在500nm下比色OD500六【實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象及結(jié)果計(jì)算】最 后 測 得 的 實(shí) 驗(yàn) 數(shù) 據(jù) 如 圖根據(jù)表格繪制圖像如下y = 1. llOlx + 0. 0233 R2 = 0. 985500.a ao.a標(biāo)準(zhǔn)曲線0.20.4蛋口液濃度mg/ml系列1線件（系列1）0.6樣品吸光度尸，則計(jì)算得到樣品蛋白液的濃度為x=nil所以待測蛋白液樣品的濃度為ml七【實(shí)驗(yàn)分析】一實(shí)驗(yàn)注意1 一定要注意實(shí)驗(yàn)所需要的時間，因?yàn)槿芤旱墓饷芏戎惦S時間會發(fā)生變化的。不然的話會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差。2在使用分光光度計(jì)的時候要拿比色皿的毛面。3實(shí)驗(yàn)前應(yīng)把試管洗干凈并烤干，以使實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性增加。若有水殘留則會使標(biāo)準(zhǔn)液濃度偏低，繼而使測得的樣液濃度偏高二誤差來源分析：1顯色時間控制存在誤差，各個樣品的比