幾種常用的染色方法

1、幾種常用的染色方法1. 美藍(lán)染色法在己干燥、固定好的抹片上，滴加適量的美藍(lán)染色液，經(jīng)12min,水洗，瀝去多余的水分，吸干或烘干，鏡檢。2. 革蘭氏染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸錢(qián)結(jié)晶紫染色液，經(jīng)水洗。（2）加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染，作用水洗。（3）加95%酒精抹片上脫色，約30slmin,水洗。（4）加堿性復(fù)紅液（或沙黃或稀釋石炭酸復(fù)紅液）復(fù)染10-一30$,水洗。（5）吸干或烘干，鏡檢。革蘭氏陽(yáng)性菌呈藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。3. 抗酸性染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加較多量的石炭酸復(fù)紅染色液，在玻片下以酒 精燈火焰緩緩加熱，至發(fā)生蒸汽即止，維持微微發(fā)生蒸汽，

2、經(jīng)3-5min,水洗。（2）用3%鹽酸酒精脫色，直至標(biāo)本無(wú)色脫出為止，充分水洗。（3）用美藍(lán)染色液復(fù)染約lmin,水洗。（4）吸干或烘干，鏡檢。抗酸性細(xì)菌呈紅色，非抗酸性細(xì)菌呈藍(lán)色。以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸復(fù)紅染色lmin,水洗，用 1 %美藍(lán)染色液復(fù)染約20s ,水洗。對(duì)光觀察，標(biāo)本務(wù)必全呈藍(lán)色，在火焰上烘干、鏡檢?？顾嵝约?xì)菌呈紅色， 非抗酸性細(xì)菌和背景呈藍(lán)色。4. 瑞氏染色法（1）抹片口然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，為了避免很快變干，染色液可稍多 加些，或看情況補(bǔ)充滴加，經(jīng)l-3min,加約與染液等量的中性蒸鐳水或PBS液， 輕輕晃動(dòng)玻片，使與染液混勻，約3mi

3、n左右，直接用水沖洗（不可先將染液傾 去），吸干或烘干、鏡檢。細(xì)菌染成藍(lán)色，組織、細(xì)胞等物呈其它顏色。（2）另一方法抹片口然干燥后，按涂抹點(diǎn)大小，蓋上一塊略大的清潔濾紙片，在 其上輕輕滴加染色液，至略浸過(guò)濾紙，并看情況進(jìn)行補(bǔ)滴，維持不使變干：染色3- -5min ,直接用水沖洗，吸干或烘干、鏡檢。此法使染色液經(jīng)濾紙過(guò)濾，可大大避 免沉渣粘附丁抹片上影響鏡檢觀察。5. 姬姆薩染色法（1）I 5ml新煮過(guò)的中性蒸飾水中滴加5-10滴姬姆薩氏染色液原液，即稀釋成 為常用的姬姆薩氏染色液。（2）抹片經(jīng)甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或?qū)⒛ㄆ胧⒂腥旧旱?染色缸中，染色30min,或者染色數(shù)小

4、時(shí)至24h,取出水洗，吸干或烘干、鏡檢。 細(xì)菌呈藍(lán)青色，組織、細(xì)胞等呈其它顏色。視野常呈淡紅色。6. 克利特氏莢膜染色法（1）染色液配制 美藍(lán)溶液美藍(lán)lg, 95%酒精10ml,蒸飾水100ml.將美藍(lán)溶丁酒精內(nèi)，再加 蒸謂水混合。 堿性復(fù)紅溶液堿性復(fù)紅0.03g , 95 %酒精lml ,蒸館水99mlo將堿 性復(fù)紅溶于酒精內(nèi)，再加蒸鐳水混合。（2）染色法 涂片經(jīng)火焰固定后，滴加美藍(lán)溶液，將玻片至火焰上面加熱至發(fā)生蒸汽為 止。 水洗，以堿性復(fù)紅溶液復(fù)染15-30so 水洗后、吸干、鏡檢。 染色后，菌體呈藍(lán)色，莢膜呈紅色。（1）染色配制 結(jié)晶紫福爾馬林染色液結(jié)晶紫10g ,福爾馬林溶液100m

5、l o混合使其完 全溶解，隔夜過(guò)濾。 堿性復(fù)紅溶液見(jiàn)前：克利特氏莢膜染色法7. 結(jié)晶紫福爾馬林莢膜染色法（2）染色法 涂片用結(jié)晶紫福爾馬林染色液染色0. 5-lmino 水洗后，以堿性復(fù)紅染色液復(fù)染15 一 30so 水洗、吸干、鏡檢。 染色后，菌體呈深藍(lán)色，莢膜呈淡紅色。8. 番紅染色液莢膜染色法（1）染液配制番紅（或沙黃）0.7g , 95 %酒精20ml ,蒸鐳水 15ml o將番紅溶解于酒精內(nèi)，再加蒸鐳水混合而成。（2）染色法 涂片滴加番紅染色液，將玻片置火焰上加熱至發(fā)生蒸氣約5mino 水洗、吸干、鏡檢。 染色后，菌體呈暗紅色，莢膜呈淡黃色。9. 赫斯氏莢膜染色法（1）染色液配制 龍

6、膽紫酒精溶液龍膽紫酒精飽和液5ml ,蒸憎水 95ml o 硫酸銅水溶液 硫酸銅20g ,蒸憎水100ml （2 ）染色法 涂片加熱固定，將龍膽紫酒精溶液滴加于玻片。將玻片置火焰上微加 熱至見(jiàn)蒸氣并保持蒸氣約20mino 用硫酸銅液代替水沖洗染液，用吸水紙吸干、鏡檢。 染色后，菌體呈深紫色，莢膜呈淺藍(lán)色。10 安沙尼氏莢膜染色法（1）染色液配制 1%結(jié)晶紫水溶液。 20%硫酸銅水溶液。（2 ）染色法將涂片在空氣中自然干燥。以1 %結(jié)晶紫水溶液染色2min （不必加熱），再以20 %硫酸銅代水 沖洗染液。 吸干、鏡檢。 染色后，菌體呈紫色，莢膜呈淡紫色。11 .苗列爾氏芽砲染色法（1）染色液配制

7、媒染液5%珞酸液（珞酸5ml,加蒸鐳水95ml） 染色液石炭酸復(fù)紅液 脫色液2 %硫酸液（純硫酸2ml ,加蒸詡水98ml ） 復(fù)染液堿性美藍(lán)（2）染色法涂片，干燥，火焰固定，用媒染液染色lOmin ,充分水洗，用炭酸酸復(fù)紅液 加溫染色（最好在標(biāo)本上覆蓋一張濾紙）2min,水洗，用脫色劑脫色10s,水 洗，用美藍(lán)液復(fù)染lmin,水洗，干燥、鏡檢。結(jié)果：芽泡呈紅色，菌體呈藍(lán)色。12. 孔雀綠沙黃芽泡染色法（1）染色液5%孔雀綠液，0.5%沙黃液。（2）染色法涂片火焰固定，加5%孔雀綠液微微加溫染色30s-lmin,至發(fā)生蒸氣為止，待冷 后水洗，再加沙黃液復(fù)染30s,水洗，干燥后鏡檢。結(jié)果：芽抱呈

8、綠色，菌體其它部分呈淡紅色。13. 李富遜氏鞭毛染色法（1）染色液配制5%鉀明磯水溶液10ml, 20%軟酸水溶液10ml, 1 %堿性復(fù)紅酒杯精溶液10ml o將上述三種溶液按次混合配成，如發(fā)生沉淀，用其上清液，本染液保存1周，復(fù)染 液可用下列染液：美藍(lán)0. lg,硼砂0. 5g,蒸館水100ml 0（2）染色法所用的載玻片必須十分清潔無(wú)油脂、無(wú)劃痕?？蓪⒉Ｆ冉谥劓溗徕浨?潔液數(shù)天，用銀子取出后以清水沖洗干凈（沖洗時(shí)切勿用手捏玻片），然后 斜插于木架上，置37度溫箱中任其干燥后備用。 菌液最好用10 一 16h的幼年肉湯培養(yǎng)物。若取自瓊脂培養(yǎng)基上的菌 落，則用接種環(huán)挑取少許，置蒸憎水中制

9、成輕度混濁的細(xì)菌懸液，切忌用接 種環(huán)多作攪動(dòng)，以免損傷鞭毛。 挑取肉湯培養(yǎng)物或細(xì)菌懸液一環(huán)，輕置于玻片一滴，玻片作傾斜放 置，使菌液沿玻片面順向下流，自成一薄菌膜，置37度恒溫箱內(nèi)干燥。 將上述染液滴加于涂片上，染10 15min ,染色時(shí)間的長(zhǎng)短隨室溫 的高低 而不同，如在冬季，可置于37度溫箱內(nèi)染色。 輕輕地水洗12min。 在室溫或37度溫箱內(nèi)任其干燥后作鏡檢，細(xì)菌菌體及鞭毛呈紅色。 如需復(fù)染色，則用上述美藍(lán)硼砂復(fù)染液在水洗后，染色lOmin ,用水 沖洗，干燥后作鏡檢。菌體呈藍(lán)色，鞭毛呈紅色。 良好的鞭毛染色涂片，應(yīng)在顯微鏡的視野中見(jiàn)到大部分細(xì)菌菌體均附 有鞭毛。14 .過(guò)碘酸錫夫氏真

10、菌染色法（1）染色液配制甲液：1%過(guò)碘酸液乙液：堿性復(fù)紅0.1“95%乙醇5ml,蒸館水95ml丙液：亞硫酸氫鋅lg,酒石酸0. 5g,蒸憾水100ml丁液：1.22 %飽和苦味酸液（2 ）染色法將標(biāo)本在屮液中染lOmin ,水洗后再用乙液染2 3min ,置內(nèi)液中染30一 40min,至玻片呈淡紅色為合適，水洗lmin,再置于丁液中染3min。充分 水 洗至無(wú)黃色液體為止。脫水、透明，樹(shù)膠封固后鏡檢。結(jié)果：真菌組織染色鮮紅色。15 中國(guó)藍(lán)真菌染色法（1）染色液 純石炭酸20ml,乳酸20ml,甘油40ml,蒸館水20ml。將上述成分混合，加溫溶解后加入中國(guó)藍(lán)0.05g,混合振蕩即成。（2）染色法先將染色液加在載玻片上，將培養(yǎng)物被檢樣放在玻片上的染色液中，涂勻后 覆蓋蓋玻片，微加溫后鏡檢。16. 黑色素螺旋體染色法（1）染色液配制黑色素5g,蒸憎水50mlo混合加熱使其溶解，在溶