中藥化學(xué)——提取分離方法(中藥本)

1、 第二章第二章 中藥化學(xué)成分的中藥化學(xué)成分的 一般研究方法一般研究方法 2 21 1 中藥化學(xué)成分類型簡介中藥化學(xué)成分類型簡介 一、一、糖類糖類單糖、低聚糖、多糖大多屬于單糖、低聚糖、多糖大多屬于 水溶性成分水溶性成分。 二、二、苷類苷類糖和非糖物質(zhì)通過糖的端基糖和非糖物質(zhì)通過糖的端基C 原子鏈接而成的化合物。原子鏈接而成的化合物。 苷苷 苷元苷元 O OH OH OH OH O OH OH OH 苷多親水苷多親水 苷元偏親脂苷元偏親脂 三、三、醌類醌類分子中具有醌式結(jié)構(gòu)的化合物分子中具有醌式結(jié)構(gòu)的化合物 萘醌類萘醌類 分子含酚羥基，有一定酸性，可溶于堿水分子含酚羥基，有一定酸性，可溶于堿水。

2、 四、四、苯丙素類苯丙素類含有含有C6C3骨架的化合物骨架的化合物 1、香豆素香豆素：鄰羥基桂皮酸形成的酯，：鄰羥基桂皮酸形成的酯，分子多分子多 含酚羥基。偏親水性含酚羥基。偏親水性 OOOH O OOH 2、木脂素木脂素：具有：具有2個(gè)個(gè)C6C3骨架的衍生物骨架的衍生物 五、五、黃酮黃酮具有具有C6C3 C6骨架的衍生物 骨架的衍生物 異牡荊素異牡荊素 多含酚羥基，顯酸性，可溶于堿水。多含酚羥基，顯酸性，可溶于堿水。 O O OH glc OH OH 六、六、萜和揮發(fā)油萜和揮發(fā)油分子式符合（分子式符合（C5H8）n 通式的化合物。通式的化合物。 薄荷醇薄荷醇 龍腦龍腦 揮發(fā)油有揮發(fā)性，可隨水

3、蒸汽蒸餾。揮發(fā)油有揮發(fā)性，可隨水蒸汽蒸餾。 七、七、生物堿生物堿含含N有機(jī)化合物，有機(jī)化合物，有堿性有堿性。 龍膽堿龍膽堿 可溶于酸水可溶于酸水 OH OH N O O 八、八、甾體類化合物甾體類化合物含甾體母核的化合物。含甾體母核的化合物。 九、九、三萜化合物三萜化合物基本骨架由基本骨架由30個(gè)個(gè)C組成。組成。 OH OH O O O CH3 CH3 CH3CH3 CH3 H H H CH3CH3 CH3 H OH 十、十、鞣質(zhì)鞣質(zhì)復(fù)雜的多元酚類化合物總稱。復(fù)雜的多元酚類化合物總稱。 沒食子酸沒食子酸 逆沒食子酸逆沒食子酸 屬于水溶性成分。屬于水溶性成分。 OH OH OH COOH O O

4、 O O OH OH OH OH 2 22 2各類中藥化學(xué)成分的各類中藥化學(xué)成分的主要主要 的生物合成途徑的生物合成途徑 類型分類類型分類 C2單位單位（CH3COOH）：脂肪酸、酚酸、苯醌、）：脂肪酸、酚酸、苯醌、 等聚酮類等聚酮類 C5單位單位（異戊二烯）：萜類、甾類（異戊二烯）：萜類、甾類 C6單位單位 ：香豆素、木脂素等苯丙素類化合物：香豆素、木脂素等苯丙素類化合物 氨基酸氨基酸：如生物堿類：如生物堿類 復(fù)合單位：由上述單位復(fù)合構(gòu)成復(fù)合單位：由上述單位復(fù)合構(gòu)成 （一）醋酸（一）醋酸 丙二酸途徑丙二酸途徑 （AAAAMAMA途徑）途徑） 產(chǎn)物：脂肪酸、酚類、蒽醌等產(chǎn)物：脂肪酸、酚類、蒽醌

5、等 1、脂肪酸、脂肪酸 飽和脂肪酸飽和脂肪酸AAMA途徑途徑 (乙酰丙二酸酯途徑：縮合乙酰丙二酸酯途徑：縮合 、還原、還原 ) 不飽和脂肪酸不飽和脂肪酸 氧化成羥基衍生物氧化成羥基衍生物 （ 脫水而成脫水而成 ） （注：（注：ATP：三磷酸腺苷：三磷酸腺苷 ADP：二磷酸腺苷）：二磷酸腺苷） 2 2、酚類、酚類 AA AAMAMA途徑：只有縮合途徑：只有縮合 3 3、醌類、醌類 在在 AAAAMAMA途徑中由多酮環(huán)合途徑中由多酮環(huán)合 成各種醌類和聚酮類成各種醌類和聚酮類 （二）甲戊二羥酸途徑（二）甲戊二羥酸途徑（ MVAMVA） 產(chǎn)物產(chǎn)物 萜類、甾體類萜類、甾體類 MVA 頭頭尾尾 DMP（焦

6、磷酸二甲烯丙酯）（焦磷酸二甲烯丙酯） IPP (焦磷酸異戊烯酯焦磷酸異戊烯酯) 氧化、還原、脫羧、縮合、重氧化、還原、脫羧、縮合、重 排排 反式角鯊烯反式角鯊烯 三萜、甾類三萜、甾類 （三）（三）莽草酸途徑莽草酸途徑（桂皮酸途徑桂皮酸途徑 ） 產(chǎn)物產(chǎn)物 具有具有C6-C3 骨架的苯丙素衍生物：香豆骨架的苯丙素衍生物：香豆 素、木質(zhì)素、木脂素等素、木質(zhì)素、木脂素等 具有具有 C6-C3-C6 骨架的衍生物：黃酮類骨架的衍生物：黃酮類 前體前體 苯丙氨酸苯丙氨酸 （四）氨基酸途徑（四）氨基酸途徑 （aa途徑途徑） 產(chǎn)物產(chǎn)物 生物堿生物堿 前體前體 烏氨酸烏氨酸 、賴氨酸、賴氨酸脂肪胺脂肪胺 （TC

7、A循環(huán)中循環(huán)中酮酸還原氨）酮酸還原氨） 苯丙氨酸、酪氨酸苯丙氨酸、酪氨酸 、色氨酸、色氨酸 芳香族芳香族 生物堿（莽草酸途徑）生物堿（莽草酸途徑） （五）復(fù)合途徑（五）復(fù)合途徑 1、AAMA途徑途徑 莽草酸途徑莽草酸途徑 2、AAMA途徑途徑 MVA途徑途徑 3、aa MVA途徑途徑 4、aa AAMA途徑途徑 5、aa 莽草酸途徑莽草酸途徑 2 22 2 提提 取取 分分 離離 方方 法法 一、中藥有效成分的提取方法一、中藥有效成分的提取方法 提取法提取法 溶劑法溶劑法 相似相溶原理（相似相溶原理（重點(diǎn)重點(diǎn)） 水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法 適于揮發(fā)性成分適于揮發(fā)性成分 超臨界流體萃取法超臨界流體

8、萃取法 適于多種物質(zhì)適于多種物質(zhì) （一）（一） 溶劑法溶劑法 1、溶劑類型、溶劑類型 水水 親水性溶劑親水性溶劑MeOH EtOH Me2CO 中等極性溶劑中等極性溶劑 n-BuOH EtOAC 親脂性溶劑親脂性溶劑 Et2O pet CHCL3 C6H6 相似相溶原理相似相溶原理 相似相似極性極性相溶，其溶解性與分子極性有關(guān)。相溶，其溶解性與分子極性有關(guān)。 非極性分子非極性分子所有飽和烷烴。所有飽和烷烴。R 極性分子含有以下官能團(tuán)的化合物都有極性：極性分子含有以下官能團(tuán)的化合物都有極性： OH COOH NH2 CO CHO COOR X （F CL Br I） OCH3 CC 溶劑極性強(qiáng)弱

9、排列順序溶劑極性強(qiáng)弱排列順序 Pet CCL4 C6H6 CH2CL2 CHCL3 Et2O EtOAc n-BuOH Me2CO MeOH（ EtOH） H2O 石油醚石油醚 四氯化碳四氯化碳 苯苯 二氯甲烷二氯甲烷 氯仿氯仿 乙醚乙醚 乙酸乙酯乙酸乙酯 正丁醇正丁醇 丙酮丙酮 甲醇甲醇 （乙醇）（乙醇） 水水 3 3 提取范圍提取范圍 pet 油脂、蠟、葉綠素、游離甾體及三萜類油脂、蠟、葉綠素、游離甾體及三萜類 CHCL3 EtOAC 游離生物堿、有機(jī)酸、黃酮游離生物堿、有機(jī)酸、黃酮 和和 香豆素苷元香豆素苷元 MeOH EtOH Me2CO 苷類、生物堿鹽、苷類、生物堿鹽、 及鞣質(zhì)類及鞣

10、質(zhì)類 水水 氨基酸、糖類（黏液質(zhì)、果膠）無機(jī)鹽等氨基酸、糖類（黏液質(zhì)、果膠）無機(jī)鹽等 3 3 常用提取方法常用提取方法 （1）浸漬法）浸漬法 適于對熱不穩(wěn)定成分適于對熱不穩(wěn)定成分 l （提取率不高）（提取率不高） （2）滲濾法）滲濾法 優(yōu)于（優(yōu)于（1）法，但溶劑用量大）法，但溶劑用量大 （3）煎煮法）煎煮法 水提水提 ，不適于對熱不穩(wěn)，不適于對熱不穩(wěn) l 定的成分及揮發(fā)油成分定的成分及揮發(fā)油成分 （4）回流提取法）回流提取法 適于用有機(jī)溶劑提取適于用有機(jī)溶劑提取 （5）連續(xù)回流提取法）連續(xù)回流提取法 用索氏提取器用索氏提取器 提，溶劑用量少，提取率高提，溶劑用量少，提取率高 （二）水蒸汽蒸餾法

11、（二）水蒸汽蒸餾法 此法適于揮發(fā)性成分的提取。此法適于揮發(fā)性成分的提取。 （三）超臨界流體萃取法（三）超臨界流體萃取法（SFE） 是一種集提取與分離于一體，又基本上是一種集提取與分離于一體，又基本上 不用有機(jī)溶劑的新技術(shù)。不用有機(jī)溶劑的新技術(shù)。 超臨界流體是一種處于臨界溫度和臨界超臨界流體是一種處于臨界溫度和臨界 壓力以上，介于氣體和液體之間的流體，壓力以上，介于氣體和液體之間的流體， 具有很強(qiáng)的溶解能力，適于對很多物質(zhì)具有很強(qiáng)的溶解能力，適于對很多物質(zhì) 的提取。的提取。 （三）超臨界流體萃取儀（三）超臨界流體萃取儀 二、中藥有效成分的分離與精制二、中藥有效成分的分離與精制 （一）溶劑法（一）

12、溶劑法 1、酸溶堿沉法酸溶堿沉法 堿溶酸沉法堿溶酸沉法 酸溶堿沉法酸溶堿沉法 提取生物堿提取生物堿 堿溶酸沉法堿溶酸沉法 提取酚酸性成分：提取酚酸性成分： 黃酮、蒽醌等黃酮、蒽醌等 原理原理 離子態(tài)溶解，分子態(tài)難溶離子態(tài)溶解，分子態(tài)難溶 而沉淀析出而沉淀析出 2、溶劑分配法、溶劑分配法 （萃取法）（萃取法） 原理原理 利用混合物中各成分在兩種互利用混合物中各成分在兩種互 不相溶的溶劑中分配系數(shù)（不相溶的溶劑中分配系數(shù)（K）的不同而的不同而 達(dá)到分離的方法。達(dá)到分離的方法。 Cu （有機(jī)溶劑）上相（有機(jī)溶劑）上相 KD = CL (水層水層) 下相下相 萃取儀器萃取儀器分液漏斗分液漏斗 2 2、

13、萃取操作注意問題、萃取操作注意問題 必須是互不相容的兩相溶劑必須是互不相容的兩相溶劑 注意溫度濃度對注意溫度濃度對KD值的影響值的影響 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 防止乳化防止乳化 破乳方法破乳方法 抽濾，加熱，抽濾，加熱， 冷凍冷凍 長時(shí)間放置長時(shí)間放置 加入破乳劑加入破乳劑 3 3、可進(jìn)行兩相溶劑萃取的組合、可進(jìn)行兩相溶劑萃取的組合 水水石油醚石油醚 水水苯苯 水水乙醚乙醚 水水己烷己烷 水水氯仿氯仿 水水乙酸乙酯乙酸乙酯 水水正丁醇正丁醇 不可進(jìn)行萃取的溶劑組合不可進(jìn)行萃取的溶劑組合 水水乙醇乙醇 水水甲醇甲醇 水水丙酮丙酮 乙醇乙醇氯仿氯仿 甲醇甲醇乙酸乙酯乙酸乙酯 2 2、沉淀法、沉淀法 （1

14、 1 ）溶劑沉淀法）溶劑沉淀法 原理原理 改變混合溶劑極性使一部分成改變混合溶劑極性使一部分成 分沉淀分沉淀 分類分類 : 1.水提醇沉法水提醇沉法 去除多糖、蛋白質(zhì)等去除多糖、蛋白質(zhì)等 水溶性雜質(zhì)水溶性雜質(zhì) 2.醇提水沉法醇提水沉法 除去樹脂、葉綠素等除去樹脂、葉綠素等 親脂性雜質(zhì)親脂性雜質(zhì) 3.醇提醚（丙酮）沉淀法醇提醚（丙酮）沉淀法 可沉淀皂苷可沉淀皂苷 （2 2） 金屬鹽沉淀法金屬鹽沉淀法 酸性物酸性物 可用可用 Ca+ Ba+ Pb+等沉淀等沉淀 堿性物堿性物 苦味酸鹽沉淀苦味酸鹽沉淀 雷氏銨鹽沉淀雷氏銨鹽沉淀 中性中性 Pb(AC)2 可沉淀可沉淀COOH， 鄰二酚羥基鄰二酚羥基

15、Pb+ 堿性堿性 Pb(OH)AC ( 除以上可沉除以上可沉 淀淀 外外) 再加使單酚羥基或多元醇沉淀再加使單酚羥基或多元醇沉淀 3、結(jié)晶、重結(jié)晶法、結(jié)晶、重結(jié)晶法 原理原理 利用溫度不同引起溶解度利用溫度不同引起溶解度 的的 改變進(jìn)行分離改變進(jìn)行分離 （1） 溶劑選擇溶劑選擇 對純化成分對純化成分 熱溶，冷不溶熱溶，冷不溶 對雜質(zhì)對雜質(zhì) 冷熱都不溶或冷熱都溶冷熱都不溶或冷熱都溶 沸點(diǎn)不可太高，易于回收（沸點(diǎn)不可太高，易于回收（n-BuOH不不 適合適合b.p太高）太高） 對純化成分不反應(yīng)對純化成分不反應(yīng) （2 2）結(jié)晶純度的檢查）結(jié)晶純度的檢查 1、外觀：顏色、晶型、外觀：顏色、晶型 完全一

16、致完全一致 2、mp： 檢查溶點(diǎn)、溶距檢查溶點(diǎn)、溶距 （不超過（不超過1） 3、TLC 三種不同溶劑系統(tǒng)均為一三種不同溶劑系統(tǒng)均為一 個(gè)個(gè) 斑點(diǎn)斑點(diǎn) （3 3）結(jié)晶制備）結(jié)晶制備 去雜去雜 制備過飽和溶液制備過飽和溶液 析晶析晶 操作關(guān)鍵：溶解操作關(guān)鍵：溶解 趁熱抽濾趁熱抽濾 沉淀沉淀 （熱不溶的雜質(zhì)）（熱不溶的雜質(zhì)） 濾液濾液 放冷析晶放冷析晶 （冷熱都溶雜質(zhì)）母液（冷熱都溶雜質(zhì)）母液 結(jié)晶結(jié)晶 4 4 、其他方法、其他方法 （1）分餾法）分餾法利用被分離物各成分沸點(diǎn)的不同利用被分離物各成分沸點(diǎn)的不同 進(jìn)行分離。進(jìn)行分離。 （2）膜分離法）膜分離法小分子可通過生物膜，大分子小分子可通過生物膜

17、，大分子 通不過，適于多糖、肽及蛋白質(zhì)大分子的精制。通不過，適于多糖、肽及蛋白質(zhì)大分子的精制。 （3）升華法）升華法適于有升華性的成分的分離。適于有升華性的成分的分離。 （三）色譜分離法（三）色譜分離法 1、定義、定義利用混合物中各成分對固定利用混合物中各成分對固定 相和移動(dòng)相的親和力的差異使之相互分相和移動(dòng)相的親和力的差異使之相互分 離的方法，又稱層析法或色層法。這是離的方法，又稱層析法或色層法。這是 一種物理化學(xué)分離、分析技術(shù)。一種物理化學(xué)分離、分析技術(shù)。 2、作用、作用可用于混合物的分離，又可可用于混合物的分離，又可 用于化合物的定性檢識和定量分析。用于化合物的定性檢識和定量分析。 一一

18、色譜法分類色譜法分類 【1】按分離原理分：按分離原理分： 1、 極性吸附色譜法極性吸附色譜法 2、 分配色譜法分配色譜法 3、 聚酰胺色譜法聚酰胺色譜法 4、 大孔樹脂色譜法大孔樹脂色譜法 5、 凝膠色譜法凝膠色譜法 6、 離子交換樹脂色譜法離子交換樹脂色譜法 【2】按操作方法分按操作方法分 1、柱層析、柱層析用于樣品分離、精制用于樣品分離、精制 2、薄層層析（、薄層層析（TLC）定性、定量定性、定量 3、紙色譜（、紙色譜（ PC） 定性、定量定性、定量 【3】按兩相狀態(tài)分按兩相狀態(tài)分 1、液固色譜、液固色譜 2、液液色譜、液液色譜 3、氣固色譜、氣固色譜 4、氣液色譜、氣液色譜 【一一】吸附

19、色譜吸附色譜 極性吸附劑極性吸附劑硅膠，氧化鋁硅膠，氧化鋁 1、 分類分類 非極性吸附劑非極性吸附劑活性炭活性炭 2、吸附規(guī)律吸附規(guī)律總原則為相似者易于吸附總原則為相似者易于吸附 極性吸附層析極性吸附層析極性強(qiáng)者易吸附極性強(qiáng)者易吸附 非極性吸附層析非極性吸附層析對非極性物質(zhì)吸附牢對非極性物質(zhì)吸附牢 極性層析法分離規(guī)律極性層析法分離規(guī)律 1）吸附規(guī)律）吸附規(guī)律被分離物極性越強(qiáng)，吸附越牢，被分離物極性越強(qiáng)，吸附越牢， 極性越弱，吸附越弱。極性越弱，吸附越弱。 2）分離規(guī)律）分離規(guī)律: TLC: 極性強(qiáng)的吸附牢，展開距離短，極性強(qiáng)的吸附牢，展開距離短，Rf值小值小 極性弱的吸附弱，展開距離長，極性弱

20、的吸附弱，展開距離長，Rf值大值大 柱層析柱層析 : 極性強(qiáng)的吸附牢，洗脫速度慢，后洗下極性強(qiáng)的吸附牢，洗脫速度慢，后洗下 極性弱的吸附弱，洗脫速度快，先洗下極性弱的吸附弱，洗脫速度快，先洗下 3 3、極性強(qiáng)弱的判斷、極性強(qiáng)弱的判斷 （1）極性的概念）極性的概念表示分子中電荷不對稱程度表示分子中電荷不對稱程度 分子偶極矩分子偶極矩越大者，極性越強(qiáng)越大者，極性越強(qiáng) 相關(guān)因素相關(guān)因素 分子極化度分子極化度越強(qiáng)者，極性越強(qiáng)越強(qiáng)者，極性越強(qiáng) 介電常數(shù)介電常數(shù)越大，極性越強(qiáng)越大，極性越強(qiáng) （2）常見有機(jī)官能團(tuán)極性順序）常見有機(jī)官能團(tuán)極性順序: -CH2- CH2- (-R) -CH2=CH2 OCH3

21、-COOR C=O (CHO) -NH2 -OH - COOH (3)常見有機(jī)溶劑極性順序與常見有機(jī)溶劑極性順序與 己烷己烷（1.88） C6H6（2.29） Et2O （無水（無水 4.47） CHCL3（5.20） EtOAc（6.11） n-BuOH （ 17.5 ) Me2CO ( 20.7） EtOH （26.0） MeOH （31.2） 流動(dòng)相流動(dòng)相 分類分類 反相分配色譜反相分配色譜固定相極性固定相極性 10） （3）分離對象親水性，或水溶性成分，）分離對象親水性，或水溶性成分， 如：苷類，糖類，生物堿類如：苷類，糖類，生物堿類 反相分配層析分離親脂性成分反相分配層析分離親脂性成

22、分 硅膠表面親油性表面（不同長度硅膠表面親油性表面（不同長度R 取代）取代） 分離規(guī)律分離規(guī)律 正相分配色譜：正相分配色譜： 親脂性成分易溶于流動(dòng)相，吸附弱，親脂性成分易溶于流動(dòng)相，吸附弱，Rf 值大（柱層析值大（柱層析先洗下）；先洗下）； 親水性成分易溶于固定相，吸附牢，親水性成分易溶于固定相，吸附牢，Rf 值?。ㄖ鶎游鲋敌。ㄖ鶎游龊笙聪拢┖笙聪拢?反相分配色譜：反相分配色譜： 與以上結(jié)果相反與以上結(jié)果相反 【三三】聚酰胺吸附色譜法聚酰胺吸附色譜法 （1）吸附原理）吸附原理形成分子間氫鍵形成分子間氫鍵 n 聚酰胺聚酰胺 分離對象：分離對象： （2）可形成氫鍵的官能團(tuán)：）可形成氫鍵的官能團(tuán)：

23、Ar-OH， NH2， COOH， C=O ，（，（CHO）NO2 OH NH O. （3 3）吸附規(guī)律：）吸附規(guī)律： 1 形成氫鍵基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)形成氫鍵基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng). 2 已形成分子內(nèi)氫鍵者吸附力減弱已形成分子內(nèi)氫鍵者吸附力減弱. 3 分子芳香化程度越高者，吸附越牢分子芳香化程度越高者，吸附越牢 4 糖一般不參與吸附糖一般不參與吸附 5與溶劑介質(zhì)有關(guān)與溶劑介質(zhì)有關(guān).形成氫鍵能力形成氫鍵能力 水中最強(qiáng)水中最強(qiáng) 堿中最弱堿中最弱 OH OH OH O H O H O H OH OH 水水 MeOH Me2CO NaOH/H2O 甲酰胺甲酰胺 二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺

24、 尿素尿素/H2O 溶劑洗脫順序：溶劑洗脫順序： 【四】大孔樹脂大孔樹脂 色譜法色譜法 吸附原理吸附原理吸附性分子篩吸附性分子篩 吸附性吸附性范德華引力范德華引力 分子篩分子篩分子量大小分子量大小 分離對象分離對象苷、糖類苷、糖類(多糖多糖)、黃酮三萜等分、黃酮三萜等分 離收集離收集 【五五】凝膠色譜法凝膠色譜法 1.原理原理根據(jù)物質(zhì)分子大小差別進(jìn)行分離，根據(jù)物質(zhì)分子大小差別進(jìn)行分離， 利用利用 分子篩分離物質(zhì)進(jìn)行分離分子篩分離物質(zhì)進(jìn)行分離 ( 又名又名:分子篩過濾、排阻色譜分子篩過濾、排阻色譜) 洗脫規(guī)律洗脫規(guī)律 分子量大的先洗下分子量大的先洗下 分子量小的后洗下分子量小的后洗下 凝膠色譜示

25、意圖凝膠色譜示意圖 【六六】離子交換色譜法離子交換色譜法 1、分離對象、分離對象酸性、堿性化合物分離酸性、堿性化合物分離 2.分類分類 陽離子交換樹脂陽離子交換樹脂 SO3H 陰離子交換樹脂陰離子交換樹脂 N (CH3)3 3、吸附規(guī)律、吸附規(guī)律離子化程度高者吸附牢離子化程度高者吸附牢 陽離子樹脂陽離子樹脂堿性強(qiáng)者吸附牢堿性強(qiáng)者吸附牢 陰離子樹脂陰離子樹脂酸性強(qiáng)者吸附牢酸性強(qiáng)者吸附牢 色譜分離法小結(jié)色譜分離法小結(jié) 一、分類一、分類 吸附層析吸附層析吸附能力不同吸附能力不同 1、按原理分、按原理分 分配層析分配層析分離系數(shù)不同分離系數(shù)不同 凝膠層析凝膠層析分子大小不同分子大小不同 離子交換層析離

26、子交換層析分子解離分子解離 程度不同程度不同 柱層析柱層析LSC 2、按操作分、按操作分 薄層層析薄層層析TLC 紙層析紙層析PC 二、吸附規(guī)律二、吸附規(guī)律 硅膠硅膠 AL2O3極性大著吸附牢極性大著吸附牢 1、吸附層析、吸附層析 活性炭活性炭極性弱著吸附牢極性弱著吸附牢 聚酰胺聚酰胺易形成分子間氫鍵易形成分子間氫鍵 的吸附牢的吸附牢 正相正相 親水性強(qiáng)著吸附牢親水性強(qiáng)著吸附牢Rf小小 2、分配層析、分配層析 層析層析 親脂性強(qiáng)者吸附弱親脂性強(qiáng)者吸附弱Rf大大 反相層析反相層析 與上相反與上相反 陰離子交換樹脂陰離子交換樹脂酸性越強(qiáng)吸附酸性越強(qiáng)吸附 越強(qiáng)，反之吸附越弱越強(qiáng)，反之吸附越弱 4、離

27、子交換、離子交換 陽離子交換樹脂陽離子交換樹脂堿性越強(qiáng)吸附堿性越強(qiáng)吸附 越牢，越牢， 反之吸附越弱反之吸附越弱 3、凝膠層析、凝膠層析 分子量小的吸附牢，分子量大分子量小的吸附牢，分子量大 的位阻的位阻 小，吸附弱，分子量大的先洗下，分子小，吸附弱，分子量大的先洗下，分子 量小的后下量小的后下 三、分離對象三、分離對象 吸附層析吸附層析分離親脂性成分如：游離生物堿、分離親脂性成分如：游離生物堿、 甾類和三萜等。甾類和三萜等。 分配層析分配層析分離極性大的成分如各類苷類分離極性大的成分如各類苷類 聚酰胺層析聚酰胺層析 分離香豆素、黃酮、蒽醌類含酚分離香豆素、黃酮、蒽醌類含酚 羥基的成分羥基的成分

28、 離子交換樹脂離子交換樹脂 分離生物堿和酸性成分分離生物堿和酸性成分 凝膠層析凝膠層析 分離分子量差別大的成分分離分子量差別大的成分 其它色譜法其它色譜法 1、氣相色譜法、氣相色譜法GC氣體作移動(dòng)相氣體作移動(dòng)相 2、高效液相色譜法、高效液相色譜法HPLC 3、真空液相色譜法、真空液相色譜法 4、高效薄層色譜法、高效薄層色譜法 HPTLC 5、高速逆流色譜法、高速逆流色譜法 6、離心薄層色譜法、離心薄層色譜法 2 24 4 中藥化學(xué)成分的檢識方法中藥化學(xué)成分的檢識方法 一、理化檢識一、理化檢識 1、沉淀反應(yīng)、沉淀反應(yīng) 2、顯色反應(yīng)、顯色反應(yīng) 二、色譜檢識：二、色譜檢識： （對照品、（對照品、Rf

29、、顯色）、顯色） 1、薄層色譜法（、薄層色譜法（TLC） 2、紙色譜法（、紙色譜法（PC） 3、氣相色譜（、氣相色譜（GC）和高效液相色譜法）和高效液相色譜法 （HPLC） 14 結(jié)構(gòu)研究法結(jié)構(gòu)研究法 一、結(jié)構(gòu)研究的主要程序：一、結(jié)構(gòu)研究的主要程序： 1、確定化合物純度、確定化合物純度 mp TLC PC HPLC法法 2、測定分子量、測定分子量 MS法：法：M 3、確定分子式、確定分子式 元素分析法元素分析法定性、定量分析定性、定量分析 高分辨高分辨MS法（法（HRMS）分子量可精確到小數(shù)分子量可精確到小數(shù) 點(diǎn)后點(diǎn)后3位數(shù)位數(shù) 4、計(jì)算分子不飽和度、計(jì)算分子不飽和度 I / 2 III /

30、2 1 I 1價(jià)原子價(jià)原子 （H、D、X）的數(shù)目）的數(shù)目 3價(jià)原子（價(jià)原子（N、P等）的數(shù)目等）的數(shù)目 4價(jià)原子（價(jià)原子（C、S）的數(shù)目）的數(shù)目 （O、S為二價(jià)原子，與不飽和度無關(guān)，不考慮）為二價(jià)原子，與不飽和度無關(guān)，不考慮） 二、光譜測定和解析二、光譜測定和解析 （MS、IR、UV、NMR） 一、不同電磁波的波譜分類一、不同電磁波的波譜分類 1、X-射線衍射射線衍射內(nèi)層電子能級躍遷：內(nèi)層電子能級躍遷：X-衍射衍射 2、紫外可見光譜、紫外可見光譜外層電子能級躍遷：紫外外層電子能級躍遷：紫外 3、紅外光譜、紅外光譜分子振動(dòng)與轉(zhuǎn)動(dòng)能級躍遷：紅分子振動(dòng)與轉(zhuǎn)動(dòng)能級躍遷：紅 外外 4、微波吸收譜、微波吸

31、收譜電子自旋能級躍遷：微波電子自旋能級躍遷：微波 5、核磁共振譜、核磁共振譜核自旋能級躍遷：無線電波核自旋能級躍遷：無線電波 二、主要電磁波的不同區(qū)域二、主要電磁波的不同區(qū)域 近紫外區(qū)近紫外區(qū)200nm400nm 紫外可見光譜紫外可見光譜 可見光區(qū)可見光區(qū)400nm800nm 中紅外區(qū)中紅外區(qū)2.525m（4000400cm 1） ） 核磁共振光譜區(qū)核磁共振光譜區(qū)0.6m300m （一）、（一）、MSMS（質(zhì)譜）（質(zhì)譜） 1 1、MSMS圖譜的表示方法圖譜的表示方法 m/z（碎片峰）（碎片峰） 推測分子結(jié)構(gòu)推測分子結(jié)構(gòu) 2、作用、作用 M （分子離子峰） （分子離子峰） 確定分子量確定分子量

32、3、分類、分類 EIMS（電子轟擊）（電子轟擊） 適于適于M 穩(wěn)定的化合物 穩(wěn)定的化合物 FDMS（場解吸）（場解吸） 適于難揮發(fā)，對熱不穩(wěn)適于難揮發(fā)，對熱不穩(wěn) 定化合物，如肽定化合物，如肽 FABMS（快速原子轟擊）（快速原子轟擊） 適于高分子、適于高分子、 對熱不穩(wěn)定、對熱不穩(wěn)定、和強(qiáng)極性化合物如：肽、糖、和強(qiáng)極性化合物如：肽、糖、 苷、抗生素、維生素等苷、抗生素、維生素等 CIMS（化學(xué)電離）（化學(xué)電離） 可解析碎片峰少可解析碎片峰少 （二）（二）IRIR（紅外光譜）（紅外光譜）鑒定分子鑒定分子 各官能團(tuán)各官能團(tuán) 1、IR光譜圖示光譜圖示： O H infrared spectrum 分

33、子價(jià)鍵分子價(jià)鍵 V （伸縮）（伸縮） 在在4000625cm 1 測得圖譜 測得圖譜 1、特征頻率區(qū)（、特征頻率區(qū)（40001500cm 1） ） 1VOH （32003700 cm 1） ） 游離游離OH： 37003500 cm 1 締合締合OH： 34503200 cm 1 VNH （35003300 cm 1）（弱） ）（弱） 2VCH （30002700 cm 1） ） VCH3： 29602870 cm 1 VC CH：3300 cm 1 3 Vcc ： 24002100 cm 1 4VCO （19001650 cm1） 17051725 cm 1 17401725 cm 1 R

34、R O RH O 2、指紋區(qū)特征、指紋區(qū)特征 1500650 cm 1 （因各分子指紋區(qū)不同，（因各分子指紋區(qū)不同，IR光譜可代表光譜可代表 分子整體結(jié)構(gòu)）分子整體結(jié)構(gòu)） 1VCCH RCHCH2 990 910 強(qiáng)強(qiáng) RCHCHR （順）（順） 690 中強(qiáng)中強(qiáng) RCHCHR （反）（反） 970 中強(qiáng)中強(qiáng) RCCH2（末端）（末端） 870 中強(qiáng)中強(qiáng) 2V Ar-H 單取代（單取代（5鄰氫）鄰氫） 700 770 強(qiáng)強(qiáng) 鄰位取代（鄰位取代（4鄰氫）鄰氫） 700735 強(qiáng)強(qiáng) 間位取代（間位取代（3鄰氫）鄰氫） 810750 強(qiáng)強(qiáng) 對位取代（對位取代（2鄰氫）鄰氫） 860800 強(qiáng)強(qiáng) 三、

35、三、UV可見吸收光譜可見吸收光譜 （200700nm） 1、鑒定分子中不飽和雙鍵和共軛雙鍵的結(jié)構(gòu)（不、鑒定分子中不飽和雙鍵和共軛雙鍵的結(jié)構(gòu)（不 代表分子整體結(jié)構(gòu)）代表分子整體結(jié)構(gòu)） R（飽和烴）（飽和烴） * (無紫外吸收無紫外吸收) CHCH（不飽和烴）（不飽和烴）* (有紫外吸收有紫外吸收) PhOH（含雜原子）（含雜原子） n * （有紫外可（有紫外可 見光吸收）見光吸收） 芳香族化合物芳香族化合物香豆素、蒽醌、黃酮等可用香豆素、蒽醌、黃酮等可用UV 光譜推測分子結(jié)構(gòu)及取代基類型和數(shù)目。光譜推測分子結(jié)構(gòu)及取代基類型和數(shù)目。 2、UV光譜表示方法：光譜表示方法： ultraviolet s

36、pectra （四）（四）NMRNMR（核磁共振譜）（核磁共振譜） 化學(xué)位移化學(xué)位移 化學(xué)位移為相對標(biāo)量，不隨測試儀器改變化學(xué)位移為相對標(biāo)量，不隨測試儀器改變 有機(jī)化合物：多數(shù)在有機(jī)化合物：多數(shù)在 0 13 ppm TMS (tetramethylsilane)作內(nèi)標(biāo)作內(nèi)標(biāo) = 0 ppm (屏蔽作用很大屏蔽作用很大)。 只有一個(gè)信號只有一個(gè)信號(單峰單峰)。 易揮發(fā)除去，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。易揮發(fā)除去，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。 去屏蔽效應(yīng)去屏蔽效應(yīng) 屏蔽效應(yīng)屏蔽效應(yīng) 大大 向低磁場移向低磁場移 小小 向高磁場移向高磁場移 H 19 ppm 0 ppm C 200ppm 0 ppm 1 1HNMR HNMR（

37、氫譜）（氫譜） 1、1HNMR（氫譜）（氫譜）提供分子中提供分子中H的數(shù)的數(shù) 目、類型及化學(xué)環(huán)境。目、類型及化學(xué)環(huán)境。 11HNMR光譜圖示：光譜圖示： CH3CH2OH a b C （ 乙乙 醇醇 的的 氫氫 譜譜 圖圖 不同氫核不同氫核的大致范圍的大致范圍 CH3 0.81.2 CH2 12.5 CH 2.53.5 CH 58 C CH 23 芳環(huán)及芳雜環(huán)芳環(huán)及芳雜環(huán) 69 CHO 910 COOH 1011 活潑活潑H（OH、SH、NH） 不定，加不定，加D2O后消失后消失 不同氫核不同氫核的相對位置的相對位置 0123456789101112131415 化學(xué)位移 H C C H CO

38、 H C O OH H3CO 3.7 H3CN 3.0 H3CC 2.1 O H3CC 1.8 C H3CC 0.9 (ppm) 影響因素不同影響因素不同 而而 不同不同 1、誘導(dǎo)、共軛、誘導(dǎo)、共軛 2、各相異性、各相異性 3、 氫鍵、原子快速交換氫鍵、原子快速交換 （1）誘導(dǎo)效應(yīng)）誘導(dǎo)效應(yīng) M （推電基）（推電基）使電子云密度加大，使電子云密度加大， 變小，向高場移變小，向高場移 I（吸電基）（吸電基）使電子云密度減少，使電子云密度減少， 加大，向低場移加大，向低場移 推電基推電基R（烷烴基）（烷烴基） 吸電基吸電基不飽和雙鍵和含雜原子的基團(tuán)不飽和雙鍵和含雜原子的基團(tuán) 如電負(fù)性如電負(fù)性 O N C 所以所以：OCH3 NCH3 CH3 （2）共軛效應(yīng)）共軛效應(yīng) 使電子云密度加大者，使電子云密度加大者，變??；變小； 使電子云密度減少者，使電子云密度減少者，加