紅白蠶石丸中柚皮苷的含量測定研究 中藥學(xué)專業(yè)

1、目錄目錄 摘要摘要.1 關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞.1 ABSTRACT .1 1 儀器與試劑儀器與試劑.2 2 研究的起因研究的起因.2 3 制劑中各藥材的有效成份及作用分析制劑中各藥材的有效成份及作用分析.3 4 含量測定含量測定.5 4.1 方法與結(jié)果方法與結(jié)果.5 4.1.1 樣品溶液的制備樣品溶液的制備14： .5 4.2.1 空白干擾試驗空白干擾試驗.5 4.2.2 線性關(guān)系考察線性關(guān)系考察.6 4.2.3 精密度試驗精密度試驗.7 4.2.4 穩(wěn)定性試驗穩(wěn)定性試驗.7 4.2.5 重復(fù)性試驗重復(fù)性試驗.7 4.2.6 回收率試驗回收率試驗.8 4.2.7 樣品的測定樣品的測定15.8 5.討論

2、討論.9 參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn).9 致謝致謝.12 1 紅白蠶石丸中柚皮苷的含量測定研究紅白蠶石丸中柚皮苷的含量測定研究 摘要摘要 目的：對紅白蠶石丸中柚皮苷的含量進(jìn)行測定，為其構(gòu)建質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。方法： HPLC 法同時測定制劑中柚皮苷的含量。結(jié)果： HPLC 法測定同時測定制劑中的柚皮苷 的含量，該方法更為簡便靈敏，具有良好的重復(fù)性。結(jié)論：該方法可以作為紅白蠶石丸的 含量測定方法。 關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞 紅白蠶石丸；鑒別；檢查；含量測定 Study on quality standard of Hongbai canshi pellets Abstract Object: To determine

3、the content of naringin in Hongbai Canshi Wan, and to provide a reference for its construction of quality standards. Method: Simultaneously determine the content of naringin in the preparation by HPLC. Results: The HPLC method is used to determine the content of naringin in the preparation at the sa

4、me time. This method is simpler, more sensitive, and has good repeatability. Conclusion: This method can be used as a method for the determination of the content of Hongbai Canshi Wan. Key words Red and white silkworm stone pills;Identify;examination; Determination of content 2 紅白蠶石丸全方由生磁石粉、白礬、炒僵蠶、法

5、半夏、天麻、化橘紅等藥 材組成，具有熄風(fēng)鎮(zhèn)驚，平肝安神的功能，臨床主要用于治療頭目眩暈，目脹 耳鳴，肢麻震顫，語言不利，步履不穩(wěn)等之效1。為建立該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)， 有效控制成品的質(zhì)量，采用HPLC法對制劑中柚皮苷的含量進(jìn)行了測定，為建立 其可行、可控的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了充分的科學(xué)依據(jù)。 紅白蠶石丸組方中含有化橘紅，其所含柚皮苷成分是該藥物的主要有效成 分，柚皮苷是一種二氫黃酮類物質(zhì)，主要存在于柚及其變種的果皮及果實中， 具有抗氧化性、抗腫瘤、抑制微生物活性和抗骨質(zhì)疏松等作用，具有很高的藥 用價值，應(yīng)用范圍廣泛2。為探討本制劑的內(nèi)在質(zhì)量，制定該藥物的定量質(zhì)控 標(biāo)準(zhǔn)，參考2015版中國藥典一部及相關(guān)參

6、考文獻(xiàn)中的含測方法，對紅白蠶石丸 樣品中的柚皮苷建立了高效液相色譜含測方法。本法操作簡單易行，結(jié)果準(zhǔn)確、 靈敏、專屬性強、重現(xiàn)性好，是控制紅白蠶石丸制劑內(nèi)在質(zhì)量的較理想方法。 本文建立的質(zhì)量控制方法準(zhǔn)確可靠，為控制該制劑的質(zhì)量提供了依據(jù)。 1 儀器與試劑 表1 儀器型號生產(chǎn)廠家 高效液相色譜儀Ultimate 3000 二極管陣列檢測器 紫外檢測器Ultimate 3000美國Thermo公司 工作站Chromeleon 7美國Thermo科技公司 超聲波清洗機SB-5200 DTS 寧波新芝生物科技股份有限公司 含量測定用 電子天平BP211D型sartorius公司 色譜柱Supersil

7、 ODS2（4.6mm250mm，5m，大連依利特分析儀器有限公司） 試劑 柚皮苷（批號110737-200415），中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用。 乙腈為色譜純，純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)公司），其余試劑均為分析純。 中藥白礬、法半夏等由安徽濟(jì)順中藥飲片有限公司中藥廠提供。 2 研究的起因 近年來在癲癇的各方面研究都取得了很大的進(jìn)展?，F(xiàn)如今，以通過影響離 子通道為基本特征的新開發(fā)的西藥類型的抗癲癇藥，是借助于興奮性神經(jīng)元功 3 能的減弱而將抗癲癇的作用予以發(fā)揮的3。 在癲癇的中藥治療方面，相關(guān)的作用機制方面研究所取得的進(jìn)展是非常大 的。因此，將沒有毒副反應(yīng)為基本特征的光譜的抗癲癇的藥予以

8、研制出來是下 一步的研究的重點所在4。 在業(yè)界，這樣將中藥制劑的質(zhì)量予以確切地提升起來，一直是重要的課題5。 以化學(xué)成分特別復(fù)雜為基本特征的中藥通常情況下都是復(fù)方制劑。因此，諸如 有效成分之類的基礎(chǔ)研究在難度方面顯得特別大。就部分的中藥質(zhì)量方面的相 關(guān)標(biāo)準(zhǔn)而言，其中所選擇相關(guān)檢測方面指標(biāo)無法對中藥相關(guān)治療作用予以完全 地體現(xiàn)6。而在國務(wù)院發(fā)布的關(guān)于中醫(yī)藥事業(yè)的意見中曾提到，推進(jìn)實施中藥 生產(chǎn)質(zhì)量管理方面的規(guī)范化，從而強化中藥生產(chǎn)質(zhì)量方面監(jiān)管特別要予以重視7。 所以，在對相關(guān)的問題加以客觀地面對的情況下，要做到對中成藥質(zhì)量的整體 提升的不斷地推進(jìn)。對于中成藥的內(nèi)在的質(zhì)量，要通過質(zhì)量的評價予以客觀

9、地 反映。總而言之，中成藥的質(zhì)量，在諸如為人民服務(wù)和對中藥發(fā)展的強力推進(jìn) 等精神的感召下，都能夠在得力措施的采取之后不斷地提升8。 不過， 紅白蠶石丸全方由生磁石粉、白礬、炒僵蠶、法半夏、天麻、化橘紅 6 味 中藥組成，為制訂科學(xué)合理的提取制備工藝，保證產(chǎn)品質(zhì)量，采用 HPLC 法對 制劑中柚皮苷的含量進(jìn)行了測定，為建立其可行、可控的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了充分 的科學(xué)依據(jù)。 3 制劑中各藥材的有效成份及作用分析 3.1 生磁石粉： 作為FeO與Fe3O4的混合物，生磁石的重要成分之中，既有 C4H6O4Fe，也 有Fe2O3等9。這樣的物質(zhì)有潛陽安神、鎮(zhèn)靜作用，適用于陰虛陽亢所致的煩躁 不寧、睡眠不安

10、，頭暈頭痛及癲癇之證。 3.2 白礬： 以 KAl(SO4)212H2O 為重要的成分，有著諸如云母礬、羽澤、雪礬和理 石以及明礬等名稱的白礬實際上是硫酸鹽類的礦物明礬石經(jīng)在加工提煉的情況 下制成的10。白礬有解毒殺蟲之功，外用多煅成枯礬，尤能收濕止癢，主要用 于癰腫瘡毒、濕疹疥癬、口舌生瘡、耳內(nèi)流膿等證。內(nèi)服多用生白礬，有較強 4 的祛痰作用，用于風(fēng)痰壅盛，或癲癇等證。 3.3 炒僵蠶： 無論是腦炎的后遺癥和癲癇，還是腮腺炎的治療作用，都是以含有有刺激 腎上腺皮質(zhì)作用的蛋白質(zhì)為基本特征的僵蠶所具備的11。諸如痰熱和肝風(fēng)內(nèi)動 所致的中風(fēng)和癲癇以及驚風(fēng)等痙攣抽搐之證，都是炒僵蠶能夠治療的12。

11、3.4 法半夏： 除了亞麻仁油酸和油酸以及粘液質(zhì)在外，本品所包含的既有植物笛醇，也 有揮發(fā)油。而就現(xiàn)如今所發(fā)現(xiàn)的半夏具體的成分而言，在其 90 個化學(xué)成分之中， 定性的為 80 個化學(xué)成分。除了別的類型的 4 個化合物，這之中，既有 11 個的 酰胺類和 11 個的氨基酸類以及 10 個的醇氨類，也又 12 個的溶血磷脂酰膽堿類 和以及 5 個的黃酮類，并且有 12 個的脂肪酸甘油脂類和 8 個的醇醚類以及 7 個 的生物堿類13。 除了能夠做到對支氣管痙攣的緩解和鎮(zhèn)咳以及祛痰之外，得益于對嘔吐中 樞的抑制，本品還有止吐的功效。能燥濕化痰，為治濕痰、寒痰要藥。 以能夠為白帆所消除為重要特征的半

12、夏，不容易為熱所破壞14。 3.5 天麻： 天麻有鎮(zhèn)靜、抗驚厥、抗癲癇和促進(jìn)膽汁分泌的作用。 本品含生物堿，甙類、香草醇、維生素 A、粘液質(zhì)。這之中，能夠做到對 N-甲基-D-天冬氨酸受體（N-methyl-D-aspartic Acid Receptor，NMDA）鈣離子 通路加以進(jìn)一步地阻斷，從而達(dá)到抗驚厥的作用的天麻素，作為脂溶性物質(zhì)， 還能夠?qū)?MNDA 受體活性予以降低，從而有效地避免鈣離子的升高15?，F(xiàn)代 以本品配全蝎、僵蠶等藥用于“流感”、“乙腦”引起的腦神經(jīng)刺激癥狀如痙 攣、抽搐等有一定的療效，如天麻祛風(fēng)湯。 3.6 化橘紅 為橘的外層果皮。辛、苦，溫；歸肺、脾經(jīng)。除了對糖尿病

13、所造成的心肌 功能損傷的治療和抗氧化之外，止咳化痰等方面的作用也是化橘紅所具有的16。 4 含量測定 4.1 方法與結(jié)果方法與結(jié)果 5 4.1.1 樣品溶液的制備17： 表 2 方法 供試品溶液的 制備 取本品，研細(xì)，精密稱定 0.4g，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇 25ml，稱 定重量，水浴加熱回流 1 小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的 重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，以 0.45m 濾膜濾過，即得。 柚皮苷對照品 溶液的制備 精密稱取柚皮苷對照品 8.8mg 于 10ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻，其濃度為 88mg/ml。精密量取 1ml 上述對照品溶液于 25ml 量瓶

14、中， 用甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液，得濃度為 35.2mg/ml. 缺化橘紅空白 液的制備 按處方比例，準(zhǔn)確稱取除化橘紅以外的其它藥材，模擬本品的制備工藝 和供試品的制備方法，制成缺化橘紅空白溶液。 化橘紅藥材溶 液的制備 取化橘紅藥材 0.5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇 50ml，稱 定重量，水浴加熱回流 1 小時，放冷，稱定重量，用甲醇補足失重。搖 勻，濾過，取續(xù)濾液 5ml 置 50ml 量瓶中，加 50%甲醇定容至刻度，搖 勻既得。 4.1.1.1 在分別將乙腈-0.1%磷酸水和十八烷基硅烷鍵合硅膠作為流動相和填充 劑的情況下，在系統(tǒng)和色譜條件方面適用性試驗方面，理論板

15、數(shù)和檢測的波長 分別為超過了 1000 和 283nm。 4.1.1.2 本測定的檢測波長，在最大的吸收波長選擇方面是 283nm。 2、色譜條件與適用性試驗18： 4.2.1 空白干擾試驗：在 283nm 處，也各區(qū)進(jìn)樣 5l 的方式，實施缺化橘紅空 白液和化橘紅對照液以及供試液的檢測。如下面的圖 1 所表示的那樣，就柚皮 苷對照液而言，跟供試品溶液一樣，在這樣的波長之下都呈現(xiàn)如圖 1 所表示的 吸收峰。也就是說，本測定空白是無干擾的。 A 6 B C A 柚皮苷 B 缺化橘紅空白 C 供試品 圖 1 HPLC 色譜圖 4.2.2 線性關(guān)系考察19：配制柚皮苷對照品溶液濃度為 70.4g/m

16、l。表 3 所表示 的即為其峰面積積分值。在 0.07040.4224g 范圍內(nèi)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線圖的繪制， 我們會發(fā)現(xiàn)：柚皮苷進(jìn)樣量的線性關(guān)系良好。就上述數(shù)據(jù)的分析所得到的回歸 方程為：y=2.1696X，r2=0.9997。圖 2 所表示的，即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。 表 3 柚皮苷線性關(guān)系考察結(jié)果 進(jìn)樣量（g）0.07040.14080.21120.28160.35200.4224 峰面積（A）1.9134.4456.6728.76110.81712.915 7 圖 2 柚皮苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線 4.2.3 精密度試驗20：在對 5l 的照品溶液加以精密地吸取的前提下，將峰面 積積分值予以測定，從而實施精密度的

17、計算。結(jié)果 RSD 是 0.142%，也就是說， 精密度是良好的。具體的情況見表 4。 表 4 精密度試驗結(jié)果 次數(shù)123456 SDX RSD（% ） 峰面積 （A） 5.2425.2505.2605.2535.2535.2635.254 0.00745 0.142 4.2.4 穩(wěn)定性試驗21：在對 5l 的供試品溶液予以精密地吸取的情況下，實施 供試品柚皮苷方面 7 次的測定。相關(guān)的結(jié)果顯示：穩(wěn)定性在測定時間的 24h 內(nèi) 是良好的。見表 5。 表 5 穩(wěn)定性試驗結(jié)果 時間 （h） 0369121824 SDX RSD （% ） 峰面積 （A） 5.655 5.6475.6665.6585

18、.670 5.6755.6805.6640.01170.207 4.2.5重復(fù)性試驗：在將一批樣品予以取出來的情況下，依照含量予以測定項下。 在依法將柚皮苷的含量予以測定的情況下，所得到的柚皮苷平均含量結(jié)果為 2.361mg/g。也就是說，重復(fù)性的良好的。 具體的結(jié)果見表6。 表 6 重復(fù)性試驗結(jié)果 次數(shù)123456 SDX RSD（% ） 淫羊藿苷 （mg/g） 2.3612.3842.3612.4122.3012.3472.3610.03721.58 4.2.6 回收率試驗：在將柚皮苷加入一批樣品之中的情況下，把回收率供試液予 以制得以便依法予以測定。這樣，回收率就能夠得以計算。具體 結(jié)果

19、見表7。 表 7 回收率試驗結(jié)果 8 稱樣量樣品中的量加入量測得量回收率（%） （g）（mg）（mg）（mg）單次平均RSD 0.20050.4730.4960.96398.63 0.20040.4730.4960.96498.98 0.20090.4740.4960.96198.20 0.20060.4740.4960.970100.07 0.20020.4730.4960.971100.46 0.20370.4810.4960.95595.58 98.651.75 4.2.7 樣品的測定18：在將分別為 5l 的三批供試的溶液和對照品溶液加以吸 取的情況下，將其注入到液相色譜儀之中加以測定

20、。這樣，每一個批次的樣品 里面柚皮苷的含量凈得以計算出來，具體的結(jié)果見表 8。 表 8 3 批樣品含量測定結(jié)果 含量（mg/g）平均含量 批號 12（mg/袋） 2104072.3612.3842.373 2104082.6142.6512.632 2104092.6532.7222.688 5.討論 紅白蠶石丸全方由生磁石粉、白礬、炒僵蠶、法半夏、天麻、橘紅等藥材 組成，具有熄風(fēng)鎮(zhèn)驚，平肝安神之效，臨床主要用于治療頭目眩暈，目脹耳鳴， 肢麻震顫，語言不利，步履不穩(wěn)等證?？偨Y(jié)上述實驗結(jié)果，本課題制定了紅白 蠶石丸的含量測定研究方法，為有效評價該制劑質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。 在止咳化痰和咳嗽治療方面

21、藥物的制備方面，以具備的藥用方面價值特別 大為基本特征的柚皮苷所起到的作用是非常大的。而諸如牙周病和骨質(zhì)疏松以 及骨缺損等疾病，得益于其良好的誘導(dǎo)成骨方面的作用而能夠借助于這樣的藥 物加以治療2。與此同時，這樣的藥物既有對心肌細(xì)胞的保護(hù)和對胃潰瘍愈合 9 的促進(jìn)等方面的顯著作用2，具有較高的藥物開發(fā)價值。 參考文獻(xiàn) 1國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部M.北京：中國醫(yī)藥出版社，2015：318-319. 2劉影，龐富.化橘紅有效成分柚皮苷的研究進(jìn)展J.糧食與油脂，2021，34(02)：8-10. 3胡艷麗，周園，楊德林，吳越.抗癲癇新藥研究進(jìn)展J.農(nóng)墾醫(yī)學(xué)，2001(06)：405-40

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