擬除蟲菊酯類農(nóng)藥研究現(xiàn)狀論文

1、貴陽學(xué)院畢業(yè)論文1 前言1.1 研究概況1.1.1 擬除蟲菊酯類農(nóng)藥研究現(xiàn)狀有些擬除蟲菊酯類的品種有致癌、致畸、致突變等作用，給生態(tài)環(huán)境、農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量以及人身體健康帶來嚴(yán)重的威脅。擬除蟲菊酯類、有機磷類、氨基甲酸酯類是并駕齊驅(qū)的三大農(nóng)藥，具有選擇性強、用量低、防效高等特點，被廣泛應(yīng)用在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及衛(wèi)生害蟲方面的控制。隨著有些高毒有機磷農(nóng)藥被禁應(yīng)用后，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥被作為有機磷農(nóng)藥的主要替代品之一，由于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的使用量和施用頻率的逐漸加大，導(dǎo)致擬除蟲菊酯類農(nóng)藥成為污染水體質(zhì)量、食品安全及環(huán)境的重要因素。擬除蟲菊酯類殺蟲劑具有穩(wěn)定的性質(zhì)，不容易被光分解，沒有特殊臭味以及安全系數(shù)比較高，使用

2、濃度低，觸殺能力較強，滅害害蟲的速度快，殘效時間長等優(yōu)點。但是擬除蟲菊酯類殺蟲劑被廣泛使用后，也帶來了環(huán)境污染及食品安全等方面的問題。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的使用在糧食、蔬菜和果樹等農(nóng)作物中的殘留，對我國農(nóng)產(chǎn)品的出口率和國際競爭力具有嚴(yán)重的影響。1.1.2 甲氰菊酯農(nóng)藥研究現(xiàn)狀甲氰菊酯農(nóng)藥作為一種廣譜、高效的擬除蟲菊酯類殺蟲劑、殺螨劑，一直以來被認(rèn)為是一種安全有效的農(nóng)業(yè)蟲害的防治藥劑，從20世紀(jì)80年代以來，由于甲氰菊酯農(nóng)藥具有高效、低毒，在土壤中不易移動、難以揮發(fā)等特點，所以常被廣泛用于防治糧食、蔬菜、甘藍(lán)、蘋果、柑橘、茶葉、棉花等多種作物的害蟲，是一種應(yīng)用最廣泛的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。但是甲氰菊酯農(nóng)

3、藥的殘留會造成環(huán)境與食品的污染，特別是對家蠶以及魚類等生物具有高毒，并可以在魚體中儲存和積累，從而影響農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量及人的身體健康，所以引起人類的大量關(guān)注。甲氰菊酯農(nóng)藥化學(xué)名稱-氰基-3-苯氧基芐基-2,2,3,3-四甲基環(huán)丙烷酸酯，又叫滅掃利。對鱗翅目、同翅目、半翅目、雙翅目、鞘翅目等多種害蟲防治有效，并且對多種害螨的成螨、若螨和螨卵具有一定防治的效果，可用于防治蟲、螨。甲氰菊酯農(nóng)藥對一些農(nóng)作物具有促進生長、產(chǎn)量的增加、品質(zhì)的改善、觸殺及驅(qū)避的作用。但是各類田間藥效實驗結(jié)果表明，使用甲氰菊酯農(nóng)藥后，只有5%左右的農(nóng)藥被利用去殺死害蟲，而95%的農(nóng)藥殘留在水體、土壤和農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中，殘留在生態(tài)系

4、統(tǒng)中的農(nóng)藥會通過食物鏈的富集化，最終進入生物體中，那么對人類的生活以及人類的身體健康具有十分嚴(yán)重的影響。1.2 國內(nèi)外研究進展1.2.1 菌株的研究國外報道的菌株有芽孢桿菌屬(bacillus)、假單胞菌屬(pseudomonas )和沙雷氏菌屬(se rratia)等，然而國內(nèi)則只在產(chǎn)堿菌屬的一些菌株有報道。洪源范等從農(nóng)藥廠廢水處理池的活性污泥中分離得到鞘氨醇單胞菌屬（sphingomonassp.），并且該菌株能以甲氰菊酯為唯一碳源生長的細(xì)菌。張松柏等從長期使用氯氰菊酯的土壤中分離得到kurthia sp.，并且是對氯氰菊酯降解潛力最高的菌株。張松柏等從農(nóng)藥廠污泥中分離到一株能降解甲氰菊酯

5、的沼澤紅假單孢菌（rhodopseudomonas palustris），該菌以共代謝方式降解甲氰菊酯農(nóng)藥，張松柏等已曾對沼澤紅假單孢菌（rhodopseudomonas palustris）報道過。羅源華等從某農(nóng)藥廠污泥中篩選分離出一株高效降解甲氰菊酯的光合細(xì)菌，通過對該菌株細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、活細(xì)胞光吸收特征、生理生化特征及其16srdna序列同源性進行鑒定，最終判斷該psb07-14屬紅假單胞菌屬(rhodopseudomonas sp.)，張松柏等已曾對紅假單胞菌屬(rhodopseud omonas sp.)報道過。1.2.2 清除農(nóng)藥殘留的主要方法利用微生物的降解作用是為了使擬除蟲菊酯類

6、農(nóng)藥從土壤中清除的主要因素，并且以微生物為主的生物修復(fù)技術(shù)是一種環(huán)境友好且成本底的治污方法。以生物修復(fù)作為理論基礎(chǔ)來降解農(nóng)藥殘留菌的技術(shù)有望降低農(nóng)產(chǎn)品和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中農(nóng)藥的殘留物。該技術(shù)具有高效、安全、沒有二次污染等特點，而且經(jīng)濟較實用，操作簡便，目前已經(jīng)成為清除農(nóng)藥殘留污染的一種重要方法。國內(nèi)對有關(guān)農(nóng)藥殘留微生物降解研究的報道很多，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的微生物降解在降解菌的分離以及生理生化特征方面的報道比較多，但是對擬除蟲菊酯類農(nóng)藥降解菌的報道相對較少。國內(nèi)有少量對有機溶劑耐受菌的報道，但對擬除蟲菊酯類農(nóng)藥耐受菌的研究未見報道。1.3 分離菌株的方法筆者采用富集分離的方法從某化工廠廢水中分離出能

7、夠耐受甲氰菊酯農(nóng)藥的微生物菌株，研究該微生物菌株的降解特性，采用分光光度計測定該微生物菌株對甲氰菊酯農(nóng)藥的降解能力。張松柏等曾報道過用富集分離法從農(nóng)藥廠污泥中分離到一株能降解甲氰菊酯的光合細(xì)菌新菌株psb07-15，并通過對該菌株形態(tài)特征、生理生化特征以及對16srdna序列進行了同源比較、鑒定，最終表明該菌株為沼澤紅假單孢菌（rhodopseudomonaspalu stris）。1.4 研究的目的及意義筆者是從某化工廠排污口的廢水中分離出能夠耐受甲氰菊酯農(nóng)藥的微生物菌株，并且通過降解性能來對其耐受性能進行初步的研究，目的是在為擬除蟲菊酯類殺蟲劑對土壤殘留的治理提供一定的依據(jù)。 梯度稀釋富集

8、培養(yǎng)1.5 研究方案及設(shè)計路線采取樣品(某化工廠排污口的廢水)查閱資料，寫實驗方案及文獻綜述菌種培養(yǎng)后劃線純化得到純培養(yǎng)物用722型分光光度計測量甲氰菊酯農(nóng)藥的降解效果數(shù)據(jù)處理及計算查閱大量資料寫論文初稿，修改論文以及定稿2 實驗材料2.1 實驗菌株 微生物菌株的樣品采自某化工廠排污口。2.2 實驗試劑20甲氰菊酯乳油，ar分析純，大連瑞澤農(nóng)藥股份有限公司生產(chǎn)；nacl，ar分析純，重慶川江化學(xué)試劑廠；nh4no3，ar分析純，重慶茂業(yè)化學(xué)試劑廠；k2hpo4，ar分析純，廣東.汕頭市西隴化工廠；kh2po4，ar分析純，汕頭市隴化工廠有限公司；mgso47h2o，ar分析純，化工西隴股份有限

9、公司；蛋白胨，上海盛思生化科技有限公司；瓊脂，石獅市獅頭瓊脂有限公司。2.3 實驗主要儀器 表1 儀器的名稱、型號或批號和生廠家 table 1 the name of the instrument, model or batch number and born factory 儀器名稱 型號或批號 生廠家全溫?fù)u瓶柜 hyg-a 常州澳華儀器有限公司全自動立式電熱 上海博迅實業(yè)有限公司滅菌器 yxq-ls-s 醫(yī)壓力蒸汽療設(shè)備廠電熱恒溫培養(yǎng)箱 303a-2 上?？莆鲈囼瀮x器廠架盤天平 jpt-2 慈溪市華徐衡器實業(yè)有限公司培養(yǎng)皿 1177 上海五一玻璃儀器廠廚房冰箱 bcd-196tmzl 青

10、島海爾股份有限公司離心沉降機 80-1 姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司潔凈工作臺 sw-cj-1g 蘇州凈化設(shè)備有限公司分光光度計 722型 天津市普瑞斯儀器有限公司2.4 培養(yǎng)基基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基（g/l）：nacl0.5g，nh4no3 1.0g，k2hpo4 1.50g，kh2po4 0.5g，mgso47h2o 0.04g；氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基（g/l）：在基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入5.0g蛋白胨；氮源基礎(chǔ)鹽固體培養(yǎng)基（g/l）：在氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入15g/l瓊脂。3 實驗方法3.1 微生物菌株的富集取一定量某化工廠和化工廠排廢水口的污水分別加入到100ml含甲氰菊酯農(nóng)藥為57.5mg/l的

11、液體基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中（每樣品3瓶），放入到30 、98r/min全溫?fù)u瓶柜中培養(yǎng)5天，取5%（體積分?jǐn)?shù)）的培養(yǎng)物和培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到100ml含甲氰菊酯農(nóng)藥為57.5mg/l的液體基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中，再放入到30、98r/min全溫?fù)u瓶柜中培養(yǎng)5天后，即得到富集液。3.2 微生物菌株的分離 取富集液和富集液分別1ml加入到9ml無菌水的試管中，混合均勻后得的稀釋液，再取的稀釋液1ml加入到9ml無菌水的試管中，得到的稀釋液，重復(fù)以上的步驟，依次可得、的稀釋液。取上述經(jīng)過梯度稀釋的、各1ml分別涂布在相對應(yīng)的加有57.5mg/l的甲氰菊酯農(nóng)藥的固體基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基平板上，放入到30的電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天后，

12、挑取菌落接種在加有57.5mg/l的甲氰菊酯農(nóng)藥的氮源固體基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基平板上，用無菌玻璃凃棒在培養(yǎng)基的表面輕輕涂布使之均勻，然后再放入到30的電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天后，在長出菌落的平板上進行劃線使菌落純化，然后再放入到30的電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天后得到純化的菌落，然后挑取劃線純化的菌落接種在加有57.5mg/l的甲氰菊酯農(nóng)藥氮源的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中，放入到30 、98r/min的全溫?fù)u瓶柜中培養(yǎng)7天后，然后測定該微生物菌株對57.5mg/l甲氰菊酯農(nóng)藥的降解效果。3.3 甲氰菊酯農(nóng)藥降解率的測定先用離心沉降機以1500r/min的速度離心氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物10min，然后取上清液置于7

13、22型分光光度計中，在波長為600nm處進行測定其吸光值，通過吸光值計算出降解率，并做好記錄。甲氰菊酯降解率的計算公式為：甲氰菊酯農(nóng)藥降解率=（1-x1/x0）100%式中：x1為加有微生物菌株的培養(yǎng)基培養(yǎng)7天后甲氰菊酯農(nóng)藥殘留的質(zhì)量濃度，mg/l；x0為空白對照培養(yǎng)7天后甲氰菊酯農(nóng)藥殘留的質(zhì)量濃度，mg/l。4 結(jié)果與討論4.1 微生物菌株對甲氰菊酯農(nóng)藥的降解在50ml液體氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中分別加入2ml樣和樣的菌液（每個樣設(shè)3個培養(yǎng)基），然后加入質(zhì)量濃度為57.5mg/l的甲氰菊酯農(nóng)藥于培養(yǎng)基中，然后放入到30 、98rmin的全溫?fù)u瓶柜中，培養(yǎng)7天后測定甲氰菊酯農(nóng)藥殘留的質(zhì)量濃度。同時，

14、以甲氰菊酯農(nóng)藥質(zhì)量濃度為57.5mg/l的氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基（不接種微生物菌株）在相同條件下進行培養(yǎng)，作為空白對照。表2 菌株對甲氰菊酯的降解效果table 2 degradation effect of fenpropathrin treaded by strains 處理 對照品 菌株 菌株甲氰菊酯起 始質(zhì)量濃度 57.5 57.5 57.5/（mg/l）7天后甲氰菊酯殘留質(zhì)量濃度 57.18 34.04 28.40 /（mg/l）降解率/% - 40.47% 50.34%由表2可得，在接種微生物菌株的培養(yǎng)基中，樣和樣對甲氰菊酯農(nóng)藥的降解率分別為40.47%、50.34%，說明微生物菌株對甲

15、氰菊酯農(nóng)藥具有降解的能力。4.2 微生物菌株對甲氰菊酯的降解特性4.2.1 不同質(zhì)量濃度對菌株降解甲氰菊酯農(nóng)藥的影響在50ml液體氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中分別加入2ml樣和樣的菌液（每個樣設(shè)3個培養(yǎng)基），然后再加入質(zhì)量濃度為23mg/l、57.5mg/l、115mg/l、172mg/l、207mg/l、230mg/l的甲氰菊酯農(nóng)藥于相對應(yīng)的氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中，然后放入到30 、98r/min全溫?fù)u瓶柜中，培養(yǎng)7天后測定甲氰菊酯農(nóng)藥的質(zhì)量濃度。同時，以不同質(zhì)量濃度的甲氰菊酯農(nóng)藥液體氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基（不接種微生物菌株）在相同條件下進行培養(yǎng)，作為空白對照。 表3 不同質(zhì)量濃度對菌株降解甲氰菊酯的影響 ta

16、ble 3 effects of different mass concentration on the fenpropahrin degradation by strains 質(zhì)量濃度/（mg/l） 菌株的降解率% 菌株的降解率%23 mg/l 61.10% 60.99% 57.5 mg/l 40.47% 50.34% 115 mg/l 34.59% 21.16% 172 mg/l 33.38% 28.44% 207 mg/l 29.39% 55.98% 230 mg/l 60.69% 75.06%4.2.2 不同裝液量對菌株降解甲氰菊酯農(nóng)藥的影響取2ml樣和樣的微生物菌液分別加入到20ml

17、、50ml、80ml、110ml、140ml的液體氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中（每個樣品設(shè)3個培養(yǎng)基），然后分別加入1ml的質(zhì)量濃度為57.5mg/l的甲氰菊酯農(nóng)藥于培養(yǎng)基中，然后放入到30 、98r/min全溫?fù)u瓶柜中，培養(yǎng)7天后測定甲氰菊酯農(nóng)藥殘留的質(zhì)量濃度。同時，在20ml、50ml、80ml、110ml、140ml的液體氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基（不接種微生物菌株）中分別加入1ml質(zhì)量濃度為57.5mg/l的甲氰菊酯農(nóng)藥，在相同條件下進行培養(yǎng)，作為空白對照。表4 裝液量對菌株降解甲氰菊酯的影響table 4 effects of installed capacity on the fenpropahrin

18、 degradation by strains裝液量ml 菌株的降解率% 菌株的降解率% 20 70.01% 69.56% 50 29.40% 43.53%80 74.09% 76.01% 110 66.47% 66.37% 140 6.239% 3.558% 5 討論 采用富集分離法分離得到能夠耐受甲氰菊酯農(nóng)藥的微生物菌株，微生物菌株的最大測量濃度為230mg/l。微生物菌株在甲氰菊酯農(nóng)藥質(zhì)量濃度為57.5mg/l的液體氮源基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天后，測得菌株對甲氰菊酯農(nóng)藥的降解率分別為40.47%、50.34%。參考文獻 張松柏,張德詠,劉勇,等. 光合細(xì)菌psb07-15對水培黃瓜體系中甲

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25、導(dǎo)師的耐心指導(dǎo)、寬以待人、平易近人的態(tài)度對我影響深遠(yuǎn)。不僅使我掌握了基本的研究方法，還使我明白了許多道理。本論文從選題到完成論文，每一步都是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下完成的，在此，向?qū)煴硎境绺叩木匆夂椭孕牡母兄x！感謝學(xué)校及系上提供我做實驗的器材和藥品，感謝在整個畢業(yè)論文設(shè)計期間和我密切合作的同學(xué)，感謝曾經(jīng)在各個方面幫助過我的同學(xué)及老師。 在此，我再一次向幫助過的老師和同學(xué)表示真誠的感謝！袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀

26、膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀

27、薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇

28、蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁

29、蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅

30、蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅