化療藥物敏感性研究分析論文

1、化療藥物敏感性研究分析論文 摘要目的探討體外ATP法化療藥物敏感試驗(yàn)在乳腺癌細(xì)胞中的可行性。方法以ATP-TCA法，檢測(cè)37例乳腺癌患者的癌細(xì)胞對(duì)6種常用化療藥物的敏感性。結(jié)果ATP-TCA法的可評(píng)估率為91.89%；6種試驗(yàn)用化療藥物的敏感率分別為：足葉乙甙14.71%，紫杉醇20.59%，絲裂霉素32.35%，5-氟尿嘧啶47.06%，草酸鉑58.82%，表阿霉素67.65%。結(jié)論ATP-TCA腫瘤細(xì)胞化療藥敏試驗(yàn)可作為乳腺癌患者個(gè)體化療中化療藥物敏感性的預(yù)測(cè)。 關(guān)鍵詞ATP-TCA法；乳腺癌；化療藥物 ApplicationofATPbioluminescenceassayforscre

2、eningchemotherapeuticagentsofbreasttumor AbstractObjectiveTostudytheapplicationoftheexvivoATPbioluminescenceassay(ATP-TCA)inthechemotherapyofbreasttumor.MethodsThesurgicalspecimensof37patientsweretestedbytheATP-TCA.ResultsEvaluabletestresultswereachievedin34of37patients，theevaluabilityratewas91.89%.

3、Thesensitiveratesofetoposid(Vp-16)，paclitaxel(TXL)，mitomycin(MMC)，5-fluoruracil(5-FU)，oxaliplati(OXA)，epirubicin(EPI)was14.71%，20.59%，32.35%，47.06%，58.82%，67.65%，respectively.ConclusionATPbioluminescenceassayisagoodoptioninthechemotherapeuticagentsscreeningofbreasttumors. KeywordsATPbioluminescence；

4、breasttumor；chemotherapydrug 選擇針對(duì)個(gè)體有效的藥物進(jìn)行化療是治療乳腺癌的重要手段之一。由于同一化療方案對(duì)不同個(gè)體的類同腫瘤的療效存在差異，化療前對(duì)藥物進(jìn)行體外敏感試驗(yàn)，預(yù)測(cè)出有效的單藥或有效（或敏感）聯(lián)合藥物組成的化療方案，是提高化療藥物療效的潛在方法之一。ATP-TCA法（三磷酸腺苷-腫瘤細(xì)胞藥敏試驗(yàn)）是近年發(fā)展起來(lái)的敏感而穩(wěn)定的藥敏檢測(cè)方法1。本文應(yīng)用ATP-TCA法對(duì)37例乳腺癌患者的乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行6種化療藥物的藥敏試驗(yàn)，以探討ATP-TCA法用于乳腺癌患者體外化療藥物檢測(cè)在方法學(xué)方面的可靠性。 1材料與方法 1.1一般資料收集2003年3月2005年5月在

5、本院手術(shù)治療的乳腺癌（經(jīng)病理確診）患者37例標(biāo) 本。37例患者最小年齡25歲，最大年齡65歲。 1.2材料ATP-TCA試劑盒（包括改良PRMI-1640培養(yǎng)基）由北京金紫晶生物技術(shù)有限公司提供。MPL-1型自發(fā)光分析儀為德國(guó)Berthold公司產(chǎn)品。化療藥物：5-氟尿嘧啶（5-FU，南通制藥總廠），表阿霉素（EPI，浙江海政制藥），足葉乙甙（VP-16，江蘇恒瑞），紫杉醇（TXL，澳大利亞FH科貿(mào)有限公司），絲裂霉素（MMC，日本明治藥廠），草酸鉑（OXA，法國(guó)SanofiWinthrop公司）。 1.3方法ATP-TCA操作步驟（按試劑盒使用說(shuō)明操作）：取腫瘤組織標(biāo)本，在無(wú)菌條件下，剝離腫

6、瘤組織的纖維、脂肪及結(jié)締組織，然后用剪刀將腫瘤組織盡可能剪成小碎塊，過(guò)200目鋼網(wǎng)后放入腫瘤組織解離酶液中，置37、5%CO2、95%濕度下孵育1.53h。在室溫下，以1500r/mim條件下離心20min，棄上清液，用Hanks洗2次，以PRMI-1640制成癌細(xì)胞懸液，取35l用臺(tái)盼藍(lán)染色，顯微鏡下計(jì)數(shù)，并觀察細(xì)胞活性。調(diào)整細(xì)胞濃度至2040萬(wàn)/ml，以每孔0.1ml接種至96孔培養(yǎng)板內(nèi)。按400%、200%、100%、50%、25%和12.5%的血漿峰值濃度，將藥物加入培養(yǎng)孔每孔0.1ml，每個(gè)濃度3個(gè)平行孔，并設(shè)最大抑制（MI）和無(wú)藥物（MO）對(duì)照孔，于5%CO2、37、95%濕度下孵

7、育67天。加入腫瘤細(xì)胞ATP提取液0.1ml，混勻后室溫下15min，取0.05ml混合液置微板熒光分析儀檢測(cè)。 1.4ATP-TCA結(jié)果評(píng)估 1.4.1應(yīng)用ATP-TCA的條件(1)檢測(cè)的標(biāo)本必須經(jīng)細(xì)胞學(xué)和病理學(xué)證實(shí)為惡性腫瘤，且混懸液中腫瘤細(xì)胞數(shù)20%。(2)培養(yǎng)板MO對(duì)照行必須可觀察。(3)藥物活性的劑量反應(yīng)曲線須可觀察。(4)平行孔間CV值 1.4.2ATP-TCA藥物敏感和耐藥的解讀(1)藥物敏感定義：高AUC（抑制曲線下面積）值，低IC90（抑制90%癌細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的藥物濃度）、IC50（抑制半數(shù)癌細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的藥物濃度）和SI（敏感指數(shù)）值，和高TGI（癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制）值（表示癌細(xì)胞

8、生存100%抑制）。(2)藥物耐受定義：低AUC值，高IC90、IC50和SI值和低TGI值（特別是在高測(cè)試濃度和弱劑量反應(yīng)時(shí)）。(3)敏感度分級(jí)，定義為：強(qiáng)敏感：IC90100%TDC（測(cè)試腫瘤藥物濃度）和IC5025%TDC。部分敏感：IC90100%TDC和IC5025%TDC。弱敏感：IC90100%TDC和IC5025%TDC。耐藥：IC90100%TDC和IC5025%TDC。 2結(jié)果 在收集的37例患者中，34例具有評(píng)估性，總可評(píng)估率為91.89%，乳腺癌ATP-TCA試驗(yàn)藥物劑量效應(yīng)曲線圖（見(jiàn)圖1）。 ATP-TCA試驗(yàn)結(jié)果顯示不同個(gè)體的乳腺癌細(xì)胞對(duì)6種化療藥物具有不同的敏感性

9、。在所測(cè)試的化療藥物中，它們的敏感率排序如下：表阿霉素（EPI）67.65%，草酸鉑（OXA）58.82%，5-氟尿嘧啶（5-FU）47.05%，絲裂霉素（MMC）32.35%，紫杉醇（TXL）20.59%，足葉乙甙（VP-16）14.71%。其中表阿霉素的敏感率最高，足葉乙甙的敏感率最低（見(jiàn)表1）。 3討論 在本研究中，應(yīng)用對(duì)乳腺癌有較高評(píng)估率的ATP-TCA法2，對(duì)37例乳腺癌患者的癌細(xì)胞進(jìn)行體外化療藥物敏感性檢測(cè)方法學(xué)的再研究。ATP是活細(xì)胞的基本能量單位，當(dāng)細(xì)胞的代謝受損時(shí)，ATP合成水平下降，其與活細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，故通過(guò)測(cè)定ATP水平可反映生物體的增殖活性。ATP體外藥敏試驗(yàn)的原理

10、是細(xì)胞內(nèi)ATP與熒光素-熒光素酶復(fù)合物作用產(chǎn)生可測(cè)定熒光（波長(zhǎng)562nm），檢測(cè)熒光值計(jì)算出ATP量可反映活細(xì)胞數(shù)。Sevin等研究認(rèn)為乳腺癌手術(shù)后組織的可評(píng)估率為97%，敏感性為90%，特異性為86%，其臨床符合率為70%80%2。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果較之為低，這可能與我們的操作不夠熟練、培養(yǎng)過(guò)程真菌污染及試驗(yàn)用藥有關(guān)。乳腺癌被認(rèn)為是一種全身性疾病，對(duì)化療中度敏感，Rein等3用ATP-TCA法測(cè)試晚期乳腺癌體外對(duì)蒽環(huán)類抗生素、肽素類和鉑類的敏感性，同時(shí)用免疫組化法檢測(cè)P53、bcl-2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)體外反應(yīng)率最高為66.7%，提示化療反應(yīng)和凋亡無(wú)關(guān)及P53、bcl-2的表達(dá)與體外藥敏結(jié)果無(wú)關(guān)。我們應(yīng)

11、用北京金紫晶生物技術(shù)有限公司提供的ATP-TCA試劑盒，體會(huì)到ATP-TCA法有如下優(yōu)點(diǎn)：（1）成功率及重復(fù)性高，達(dá)97%；（2）細(xì)胞用量少（1.52.5）1011/L；（3）采用熒光檢測(cè)范圍較大，且可定量；（4）藥物濃度呈線性范圍，有6個(gè)細(xì)胞級(jí)數(shù)，判斷趨勢(shì)明顯；（5）干擾因素少；（6）改良的RMPI-1640培養(yǎng)基可選擇性地促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，并抑制纖維細(xì)胞和血細(xì)胞的生長(zhǎng)4。研究表明，ATP-TCA法用于體外乳腺癌患者的癌細(xì)胞化療藥物檢測(cè)在方法學(xué)上是可靠的5。因本研究樣本有限，涉及臨床因素不多，藥敏試驗(yàn)結(jié)果與臨床療效一致性有待進(jìn)一步的研究。 參考文獻(xiàn) 1NgTY，NganHY，ChengDK，

12、etal.ClinicalapplicabilityoftheATPcellviabilityassayasapredictorofchemoresponseinplatinum-resistantepithelialovariancancerusingnonsurgicaltumorcellsamples.GenecolOncol，2000，76:405-408. 2SevinBU，PerrasJP.Tumorheterogeneityandinvitrochemosensitivitytestinginovariancancer.AmJObstetGynecol，1997，176(4):759. 3IkawaH，KamedaH，KamitaniH，etal.EffectofPPARactivatorsoncytokinestimulatedcyclooxygenase-2expressioninhumancolorectalcarcinomacells.ExpCellRes，2001，267(1):