第7章免疫與血清學(xué)基本技術(shù).doc

1、學(xué)習(xí)資料收集于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考第七章免疫與血清學(xué)基本技術(shù)第一節(jié)免疫學(xué)基本知識一、抗原抗原是指能與 T 細胞及 B 細胞的受體結(jié)合，促使其增殖、分化，產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細胞，并與之結(jié)合，進而發(fā)揮免疫效應(yīng)的物質(zhì)。抗原一般具有兩個重要特性：一是免疫原性，即抗原刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，誘生抗體或致敏淋巴細胞的能力；二是抗原性，即抗原與其誘生的抗體或致敏淋巴細胞有特異性結(jié)合的能力。既有免疫源性又有抗原性的物質(zhì)為完全抗原，而只有抗原性無免疫源性的物質(zhì)稱為半抗原。決定 Ag 特異性的最小化學(xué)亞單位稱為決定簇（又稱表位）。依其與胸腺關(guān)系又分胸腺依賴抗原（TD-Ag ）和胸腺非依賴抗原（TI-Ag ）。絕大多數(shù)蛋白

2、質(zhì)抗原如病原微生物、血細胞、血清蛋白等均屬于TD-Ag ?？乖拿庖咴葱允钱愇镄?，抗原的特異性是免疫應(yīng)答中最重要的特點，也是免疫學(xué)診斷和免疫學(xué)防治的理論依據(jù)。人類血型抗原有A 和 B 抗原，它們刺激機體產(chǎn)生抗A和抗B抗體。人類血型抗原是同種異型抗原（同一種屬不同個體間的遺傳標(biāo)記不同）。器官移植所產(chǎn)生的排異反應(yīng)，也是因同種異型抗原所致。佐劑在免疫中常常采用，它主要的機制是增強機體對Ag 的免疫應(yīng)答。二、抗體抗體是抗原刺激機體由B 細胞產(chǎn)生的，本質(zhì)是免疫球蛋白（Ig）。Ig 的基本結(jié)構(gòu)是：4 條肽鏈（ 2 條輕鏈 -L 鏈、 2 條重鏈 -H 鏈）由二硫鍵連接。L 鏈分為可變部位（ V ）和恒定部

3、分（ C），即 VL+CL 。H 鏈也分為可變部位（V ）和恒定部分（ C），即 VH+CH ，但 CH 部分又分為 CH1、 CH2、 CH3。 IgM和 IgE 還有 CH4 部分。CH 1 與 CH2 區(qū)之間為絞鏈區(qū)。如果用木瓜酶水解后，將IgG 水解 2Fab 和 Fc。 Fab 是 Ig 與 Ag 結(jié)合部位， Fc 是可結(jié)晶部分。用胃蛋白酶水解IgG ，可分為 F(ab?)2 和 Fc 部分， F(ab?)2 是兩個 Fab 連在一起的部分。Ig 的分類是依據(jù)H 鏈的結(jié)構(gòu)特點， 主要依 Fc 部分（CH）。Ig 分為五大類： IgG 、IgM 、IgA 、IgE 、IgD 。Ig 同

4、種型是指 H 鏈所具有的的特性。同一類 Ig 分型依據(jù) L 鏈結(jié)構(gòu)特點，可分為 和 型。 Ig 的 Fc 段部分可與某些細胞的Fc 受體結(jié)合，如巨噬細胞等。F(ab?)2 部分是與 Ag 結(jié)合部， VH+VL是 F(ab?)2 中的高變區(qū)，直接與Ag 能結(jié)合的部位。人類 5 種 Ig 各具特色， IgM 分子量最大，免疫應(yīng)答早期產(chǎn)生的Ab 只要為 IgM 。IgG 在血清中含量最高，而且是唯一能通過人類胎盤的Ig。IgA 經(jīng) J 鏈連接，可形成多聚 IgA 。多聚 IgA 與分泌片結(jié)合后，能抵抗蛋白酶的水解作用。有人稱具備局部Ab 。IgE 可與肥大細胞膜上 Fc 受體結(jié)合。三、抗原抗體反應(yīng)每

5、一種抗原物質(zhì)都能在具有免疫功能的機體中遇到與其相應(yīng)的免疫細胞，結(jié)合在其表面受體上，激發(fā)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并且能夠與這種抗體特異性地結(jié)合?？乖c抗體的結(jié)合為非共價結(jié)合。其分子空間結(jié)構(gòu)的互補性，決定了結(jié)合部位原子間的接近程度，使各種弱作用鍵充分發(fā)揮作用，形成相對穩(wěn)定的結(jié)合。學(xué)習(xí)資料學(xué)習(xí)資料收集于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考在機體內(nèi)，抗原和抗體的結(jié)合導(dǎo)致補體激活，最終引起殺細胞或殺菌作用；或者結(jié)合于吞噬細胞表面的受體，引起對細菌或異物的吞噬作用。抗原與抗體的結(jié)合使特異性的，這種性質(zhì)構(gòu)成了各種免疫學(xué)測定的基礎(chǔ)；同時，這種結(jié)合反應(yīng)只是相對穩(wěn)固的，可以利用洗脫的方法將它們重新分離而不損害其活性，這種方法可以用于抗原或抗體

6、的提純。四、補體（ C ）存在于人和動物血清中，不耐熱，可輔助特異性抗體介導(dǎo)的溶菌作用，由于這種成分是抗體發(fā)揮溶細胞作用的必要補充條件，這種物質(zhì)稱為補體。補體由 9 種成分， 11 種蛋白組成： C1（ q、 r、 s）、 C2 、C3、C4 、 C5、 C6、 C7、 C8、 C9。它們對溫度很敏感，易被破壞。補體系統(tǒng)包括補體及D、 P、B 等因子，約有20 種成分。補體激活有兩個途徑：傳統(tǒng)途徑（第一途徑）和旁路途徑（第二途徑）。第一途徑可被Ag-Ab 免疫復(fù)合物（IC ）活化。活化順序是：C1、C4、C2、C3、 C5、 C6、 C7、 C8、 C9。第二途徑可被細菌的脂多糖激活。補體的激

7、活是一種酶促級連反應(yīng)：第一種成分激活后，稱為一種有活性的酶，催化下一種成分轉(zhuǎn)化為具有生物活性的物質(zhì)（蛋白酶或炎癥誘導(dǎo)成分）。補體的最后3 種成分將聚合成為“終末復(fù)合物”，其本身或在抗體的幫助下插入細菌外膜，導(dǎo)致細菌死亡。五、免疫系統(tǒng)1、免疫組織器官（ 1）中蘇免疫器官：骨髓、胸腺、法氏囊（禽類）（ 2）周圍免疫器官：脾臟、淋巴結(jié)、皮膚免疫系統(tǒng)、黏膜免疫系統(tǒng)。2、免疫細胞干細胞、淋巴細胞系（TH 、TC、T S、T DH 、B C 漿細胞等）、單核細胞、巨噬細胞、肥大細胞、NK 細胞等。單核細胞及巨噬細胞產(chǎn)生 IL-1 。3、免疫分子T CR、B CR、 CD、MHC 、 Ig、補體、細胞因子（

8、IL-1 、 IL-2 ）六、各免疫細胞特點1、T 細胞CD4 +可被 PHA 、ConA 、 PWM 、花生凝集素刺激活可分為幾群，其中T H 細胞是很重要的免疫細胞，化進行有絲分裂，幫助產(chǎn)生抗體，司管細胞免疫。+TS 細胞是抑制細胞，CD8 參加免疫調(diào)節(jié)。T H 細胞成熟需要胸腺加工處理。T 細胞定位于淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)。2、B 細胞B 淋巴細胞主管體液免疫調(diào)節(jié)。表面有抗原受體（ SMIg）。BC 成熟在骨髓中（相當(dāng)禽類法氏囊）。未成熟 BC 最初可查到 Ig 的 鏈，活化 BC 可衍變成漿細胞，漿細胞能產(chǎn)生Ab 和分泌 Ab 。PWM 可以刺激 BC 有絲分裂。人類外周血中 T 細胞與 B

9、細胞比為2：1。3、單核類細胞學(xué)習(xí)資料學(xué)習(xí)資料收集于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考無Ag受體，但不能處理Ag ，加工Ag ，并向T 細胞呈遞Ag 。七、過敏反應(yīng)（變態(tài)反應(yīng)）國際公認的過敏反應(yīng)是4 個型：型（速發(fā)型） 、型（溶細胞型） 、型（免疫復(fù)合物型或稱血管炎型）、型（遲發(fā)型） 。第型是由IgE 抗體所致， IgE 與肥大細胞的IgE 的 Fc 受體結(jié)合產(chǎn)生一系列變化，出現(xiàn)型過敏。如青霉素過敏（皮內(nèi)注射過敏原）。患有慢性寄生蟲感染疾患；IgE 抗體升高顯著。第型過敏反應(yīng)是由T 細胞中 T DH 細胞釋放淋巴因子所致。如結(jié)核菌素過敏試驗（皮內(nèi)直射過敏原）第型、型過敏系由IgM 、 IgG 抗體及補體參與介導(dǎo)。

10、第二節(jié)抗體檢測一、抗體檢測的基本原理抗原與抗體之間特異性的結(jié)合反應(yīng)，是免疫學(xué)檢測的基礎(chǔ)，既抗原使用已知抗原來檢測抗體，也可以使用一直抗體來檢測抗原?？乖c抗體雖然都是大分子物質(zhì)，但單分子的抗原與抗體反應(yīng)仍然是肉眼無法覺察的反應(yīng)。要檢測抗體的存在， 就必須建立一中顯示系統(tǒng)，將看不見的抗原 -抗體反應(yīng)， 轉(zhuǎn)化為抗原看見、或者可以測定的反應(yīng)?？贵w測定抗原使用許多種不同的方法，本質(zhì)上浙西而方法只有顯示系統(tǒng)的誤差。不同的方法可以顯示出不同量的抗原-抗體反應(yīng)，因而，抗體檢測的方法主要決定了抗體檢測的靈敏度。檢測抗體必須使用已知的抗原，抗原可能是混雜的物質(zhì)。因而，在抗體測定中使用的抗原種類，主要決定了抗體檢

11、測的特異性。二、抗體檢測方法(一）中和反應(yīng)中和反應(yīng)不僅測定抗體是否存在，而且測定抗體是否具有免疫保護作用，因而，盡管這種方法復(fù)雜、費時，影響因素眾多而且不穩(wěn)定，在預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域特別是病毒性疾病中，仍然是不可區(qū)帶的抗體檢測方法。中和試驗的基本方法是，將待檢物質(zhì)與活的致病微生物混合，感染實驗動物或敏感的細胞，然后觀察實驗動物是否發(fā)病、死亡、或細胞是否發(fā)生病變。早期中和試驗主要利用疾病的動物模型進行，目前，在病毒性疾病領(lǐng)域，通常利用培養(yǎng)病毒的細胞進行。在結(jié)果的解釋中應(yīng)當(dāng)注意，細胞的中和試驗通常只反映抗體阻斷病毒進入細胞的能力，這只是病毒致病過程中的一小部分。（二）沉淀反應(yīng)血清蛋白質(zhì)、細胞裂解液或組織浸

12、液等可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)沉淀物，這類反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)。該類反應(yīng)可檢測到202mg/mL 水平的抗體。較常用的檢測方法有：1、單項免疫擴散將一定量抑制抗原混于瓊脂中制成瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后將抗體加入孔中擴散，抗原抗體在擴散過程形成以抗體孔為中心的沉淀環(huán)，可用于檢測血清中的 IgG、 IgM 、 IgA 和補體 C3 等含量。2、雙相免疫擴散將抗原與抗體分別加于瓊脂凝膠中， 二者自由向四周擴散， 在相遇處形成沉淀線。 可用于抗體的定性、定量檢測。（三）凝集反應(yīng)細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集團塊，這一類反應(yīng)稱為凝集反應(yīng)，該類反應(yīng)可檢測到 1g/mL。學(xué)習(xí)資料學(xué)習(xí)資料收集

13、于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考1、直接凝集將細菌或紅細胞與相應(yīng)的抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細菌或紅細胞凝集現(xiàn)象。檢測方法有兩種：是玻片凝集試驗，用于定性測抗原，多用于快速診斷；是試管凝集試驗，在試管種系列稀釋待檢血清，加入已知顆?？乖ㄋ谰蚧罹?，多用死菌）行的血清反應(yīng)，用于定量檢測抗體。溫箱中放24 小時后取出反應(yīng)管在室溫放2 個小時再判斷為宜，判定凝集滴度以凝集程度為，進+ 而定。2、間接凝集將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表面，與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)顆粒凝集的現(xiàn)象。如用 球蛋白包被的乳膠顆粒，檢測病人血清中的一種抗球蛋白的抗體（類風(fēng)濕因子）（四）補體參加的反應(yīng)利用抗體與紅細胞上的抗原結(jié)合，激活反應(yīng)體系中的補體，

14、導(dǎo)致紅細胞的溶解，用溶血現(xiàn)象作為指示系統(tǒng)幫助結(jié)果判定。常用的方法有補體結(jié)合試驗和溶血空斑試驗。（五）用標(biāo)記抗原進行的抗原抗體反應(yīng)利用熒光素、酶或放射性核素等標(biāo)記物標(biāo)記抗原或抗體，進行的抗原抗體反應(yīng)。靈敏度高、快速，可定性或定量，甚至定位等優(yōu)點。1、免疫熒光將已知細菌、感染病毒的細胞等顆?？乖裙潭ㄓ谳d玻片，加待檢血清反應(yīng)后，再加熒光素標(biāo)記的抗體，置熒光顯微鏡下觀察判定，用于檢測抗體。2、酶免疫測定是用酶標(biāo)記的抗體進行的抗原抗體反應(yīng)。可用目測定性，也可用酶標(biāo)測定儀測定光密度（OD ）值以反映抗體的含量，敏感度可達ng/mL甚至pg/mL 。常用語標(biāo)記的酶有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等。常用的方法

15、有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA ）。或采用雙抗體夾心法或間接法檢測特異抗體。3、放射免疫測定法用放射性的核素（ 125I 和 131I ）標(biāo)記抗原，檢測抗體，靈敏度達pg/mL 。4、免疫印跡法將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合，把電泳區(qū)分的蛋白質(zhì)抗原轉(zhuǎn)移至NC 或 PVDF 等膜上。檢測特異的抗體。用該法檢測血清HIV 抗體為診斷 HIV 感染的方法之一。三、抗體檢測所使用的抗原病原微生物，無論是細菌還是病毒，都含有許多種抗原物質(zhì)，在感染過程中，會形成反應(yīng)性非常復(fù)雜的抗體。這些抗原的特異性很不相同，有的只存在于該種致病微生物中，也有的可能是在細菌或病毒中廣泛存在時，甚至可以和動物以至人體的組織產(chǎn)生交叉

16、反應(yīng)。因此，我們在衡量一項抗體檢測的結(jié)果時，不僅需要考慮所采用的方法和滴度的高低，還必須考慮用于檢測的是那一種類型的抗原。1、全菌或全病毒抗原最早的血清學(xué)反應(yīng)，就是將細菌或病毒直接殺死后作為抗原進行的。目前，這種類型的抗原在一些疾病， 幾種類型的試驗方法如細菌凝集試驗或免疫熒光檢測中仍在應(yīng)用。由于這種類型的抗原物質(zhì)中成分復(fù)雜，很難避免交叉反應(yīng)，在用作疾病診斷時，必須結(jié)合臨床癥狀并對結(jié)果判定有較嚴格的限制。由于結(jié)果難于解釋，這些方法很難用于大規(guī)模的疾病監(jiān)測。2、替代抗原由于一些種類的微生物只能在細胞中生長，無法獲得純培養(yǎng)，傳統(tǒng)上使用與它們具有交叉反應(yīng)的抗原物質(zhì)來測定這些疾病產(chǎn)生的抗體。學(xué)習(xí)資料學(xué)

17、習(xí)資料收集于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考如診斷立克次體病使用的變形桿菌抗原或診斷梅毒的牛心脂抗原。由于這些抗原廣泛存在，這種檢測方法的結(jié)果只能具有參考價值。3、粗提取抗原在一些監(jiān)測方法發(fā)展較早的疾病中，已經(jīng)選用了病原微生物中高度特異的抗原成分，而在監(jiān)測方法中使用的抗原物質(zhì)，也已經(jīng)過了一定程度的提純，但其中仍會含有少量的其他雜散蛋白質(zhì)。在當(dāng)前使用的高靈敏度檢測方法中，極微量的蛋白質(zhì)也能顯示反應(yīng)。這說明，使用這種類型抗原的試驗，雖然對結(jié)果能有明確的解釋，但仍然存在著交叉反應(yīng)的可能性。4、精提純抗原當(dāng)前，已經(jīng)有一些疾病的抗體檢測中，使用高度提純的抗原?？赡苁翘烊坏?，也可能是克隆的蛋白質(zhì)，能夠達到“層析純”的純度，

18、即經(jīng)過電泳只能見到清晰的單一蛋白質(zhì)條帶。使用這樣的抗原物質(zhì)進行的檢測，可以得到最可靠的結(jié)果。然而，這仍然不能保證不同微生物之間具有共同抗原的可能性。使用分子克隆方法獲取的蛋白質(zhì)，不能認為就已經(jīng)是精提純的抗原。因為任何克隆都必須在載體中表達，不管表達的蛋白質(zhì)量有多大，其中還是會含有受體細胞或表達系統(tǒng)中成分，這些成分仍然能夠引起交叉反應(yīng)。還有一些疾病，抗原的特異性本身就不夠明確，目前仍然需要通過蛋白印跡試驗，不是通過明確的蛋白質(zhì)種類，而是根據(jù)多種不明性質(zhì)的蛋白質(zhì)組成的圖形來確定診斷。在這樣的疾病，即使高度提純的抗原物質(zhì)也難于在監(jiān)測中應(yīng)用。四、抗體本地測定無論發(fā)展得多么成熟的檢測方法，也無論提取得多

19、么純粹的抗原，在大規(guī)模的疾病監(jiān)測中，還是會在無疾病的人群或動物中顯示一定程度的反應(yīng)，這稱為抗體本底，誒一種新的方法投入使用前，都必須進行抗體本底測定。本底抗體可能有以下幾個主要的來源：1、雜散抗原致病微生物通常具有復(fù)雜的抗原結(jié)構(gòu)，其中許多是低特異性的，存在于許多微生物，甚至宿主機體之中。這些雜散抗原能產(chǎn)生低滴度的抗體。因而在根本沒有疾病流行的人群或動物中，本底抗體反映著其他類型的感染，甚至其他未知來源產(chǎn)生的抗體。2、共同抗原現(xiàn)代分子生物學(xué)表明，任何一個基因都是可能轉(zhuǎn)移的，多為的病原微生物，都是由于基因的轉(zhuǎn)移，從其非致病的祖先轉(zhuǎn)化而來。盡管在檢測中采用了高度特異并且高度提純的抗原，這種抗原仍然可

20、能存在著目前未知的其他來源。這種來源的抗原，有時可以在無疾病個體中產(chǎn)生高滴度的抗體。3、既往感染并非所有的本底抗體反應(yīng)都源自非特異性，個體在感染后，抗體可能保持相當(dāng)長的時間，疾病在動物間的存在常常不被人所發(fā)掘，人類的感染也可能由于癥狀輕微或時間久遠而無從追溯，于是，這些疾病過程所產(chǎn)生的抗體便成了本底抗體。進行本底調(diào)查需要在一個已經(jīng)確認沒有疾病流行的地區(qū)，采取一定數(shù)量的“健康個體”血清標(biāo)本，測定其中的抗體，并計算反應(yīng)的幾何平均抗體滴度。抗體本底測定最主要的目標(biāo)，是建立疾病的安定標(biāo)準(zhǔn)。這需要積累一定數(shù)量的，經(jīng)過病原學(xué)確診的個體，測定病后不同時間的抗體水平，再與本底抗體水平相比較，運用數(shù)理統(tǒng)計方法確

21、定期間的判別值。只有這樣，抗體測定的方法才能夠在疾病診斷和監(jiān)測中實際應(yīng)用。第三節(jié)細胞免疫檢查學(xué)習(xí)資料學(xué)習(xí)資料收集于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考一、淋巴細胞的分離與類型鑒定體外檢測淋巴細胞，需要先制備外周血單個核細胞（ PBMC ），制備 PBMC 常用的方法是葡聚糖 -泛影葡胺（淋巴細胞分離液）密度梯度離心法。以下方法通過檢測淋巴細胞的某些表面標(biāo)志，可確定細胞的不同類型。1、免疫熒光法常用直接或間接免疫熒光法檢查淋巴細胞的表面標(biāo)志，鑒定細胞的群、亞群。如 CD4+ 和 CD8+ 細胞亞群，表達mIgD 、 mIgM 的 B 細胞亞群。2、磁珠分離法將已知抗細胞表面標(biāo)記的抗體交聯(lián)到磁珠顆粒，與細胞懸液反應(yīng)后，

22、磁珠通過抗體結(jié)合相應(yīng)的細胞群或亞群表面，借助磁場，將磁珠結(jié)合的細胞與未結(jié)合的細胞分開。3、淘選法將一直抗細胞表面標(biāo)記的抗體包被培養(yǎng)皿，加淋巴細胞懸液，表達響應(yīng)表面標(biāo)記的細胞即與相應(yīng)抗體結(jié)合，而黏附于固相上，與懸液中的其他細胞分開。4、流式細胞術(shù)使用流式細胞儀進行分離，借助熒光激活細胞分選器（FACS ）對免疫細胞及其他細胞進行快速準(zhǔn)確鑒定和分類技術(shù)。二、免疫細胞功能測定（一） T 細胞功能測定1、 T 細胞增殖試驗采用 3H-TdR 摻入法檢測。在 PBMC 中加入植物血凝素（ PHA ）共同培養(yǎng)，終止培養(yǎng)前 815 小時加入 3H-TdR ，由于 3H-TdR 能摻入細胞合成的 DNA 中，

23、細胞增殖的水平越高，摻入的放射性核素越高。用液體閃爍儀檢測細胞樣品中的放射活性，測定細胞的增值情況。2、細胞毒試驗（ 1） 51Cr 釋放法：用 Na2CrO 4 標(biāo)記靶細胞，若待檢效應(yīng)細胞能殺傷靶細胞，測51Cr 從靶細胞內(nèi)釋放，用 計數(shù)儀測定釋放的 51Cr 放射活性，靶細胞溶解破壞越多，51Cr 釋放越多，上清液中的放射活性越低。（ 2）乳酸脫氫酶釋放法：將效應(yīng)細胞與靶細胞按比例混合，靶細胞被殺傷后細胞膜受損，釋放出乳酸脫氫酶，用光度計測定溶液中的該酶的含量，反映效應(yīng)細胞的殺傷活性。（ 3）皮膚試驗：根據(jù)局部紅腫為特征的遲發(fā)型超敏反應(yīng)的強度檢測。常用的生物性抗原常從病原體中提取，如結(jié)核菌

24、素、麻風(fēng)菌素等。（二） B 細胞功能測定1、 B 細胞增殖試驗B 細胞受絲裂原刺激后，進行分裂增殖，溫育一定時間后檢查抗體形成細胞的數(shù)目。2、抗體形成細胞測定常用溶血空斑試驗測定。將 SRBC、待檢 B 細胞、補體及適量瓊脂糖液混合，傾斜平皿，溫育 13 小時后，肉眼觀測分散的溶血空斑出現(xiàn)，每一空斑中央含一個抗體形成細胞，空斑的數(shù)量即為抗體形成細胞數(shù)。三、免疫細胞因子測定細胞因子的檢測有助于了解其在免疫調(diào)節(jié)中的作用，鑒定分離的淋巴細胞，監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的細胞免疫功能。1、免疫學(xué)檢測法用細胞因子單克隆抗體包被固相的雙抗體夾心法或酶聯(lián)免疫斑點試驗（也可用熒光素標(biāo)記抗細胞因子抗體，對細胞內(nèi)細胞因子作

25、染色，直接用ELISPOT ）測定法。FACS 分析法測定產(chǎn)生該細胞學(xué)習(xí)資料學(xué)習(xí)資料收集于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考因子的細胞比例。2、 RT-PCR 法設(shè)計特定引物，逆轉(zhuǎn)錄特定細胞因子的mRNA ，然后用特定引物進行PCR 擴增，進行定性、定量檢測。第四節(jié)抗原檢測一、抗原檢測的目的1、疾病的快速診斷由人或動物的組織、器官或其他標(biāo)本中檢出病原微生物特征性的抗原成分，可以對某些疾病作出早期診斷。2、病原微生物鑒定分離獲得病原微生物后，可以通過抗原檢測確定其血清型，或者通過針對致病決定因子的抗原檢測確定其致病性。3、生物活性物質(zhì)的抗原分析提取的或人工合成的生物活性物質(zhì)，如果具有抗原性，都可以利用抗原檢測的方法

26、確定其生物活性。二、抗原的檢測方法在“抗體檢測”一節(jié)中介紹的方法，都可以通過相反方向的運用，即使用已知抗體，通過類似的方法來進行抗原檢測。三、單克隆抗體的應(yīng)用與抗體檢測方法類似，用于檢測的抗體，決定了抗原檢測的特異性。單克隆抗體的出現(xiàn)，使抗原測定稱為精確的免疫學(xué)方法。一種 B 淋巴細胞抗原刺激后只能產(chǎn)生一種抗體，因此稱其為單克隆抗體。使用細胞雜交技術(shù)，使免疫的小鼠脾細胞，與小鼠的骨髓瘤細胞融合，產(chǎn)生的雜交瘤細胞株可以在體外條件下任意增殖，并產(chǎn)生專一的，融合的 B 淋巴細胞特異的抗體，從而使單克隆抗體成為一種實用的技術(shù)。單克隆抗體的特點是：理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結(jié)合的特異性強、便于人為處理和質(zhì)量控制，并且來源容易。單克隆抗體用于抗原檢測時能充分發(fā)揮其優(yōu)勢。單克隆抗體的特異性強， 大大提高了抗原 -抗體反應(yīng)的特異性， 減少了和其他物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)的可能性，使試驗結(jié)果可信度更大。單抗