氧氟沙星系列藥物有關(guān)物質(zhì)控制探討

1、氧氟沙星系列藥物有關(guān)物質(zhì)控制探討張立雯 成海平【摘要】本文總結(jié)了國家標(biāo)準(zhǔn)中氧氟沙星、左氧氟沙星、鹽酸左氧氟沙星、乳酸左氧氟沙星、甲磺酸左氧氟沙星系列藥物的有關(guān)物質(zhì)控制方法，分析了該類藥物注冊(cè)申報(bào)中有關(guān)物質(zhì)控制存在的問題，希望能為研發(fā)者提供幫助。 【關(guān)鍵詞】氧氟沙星、左氧氟沙星、有關(guān)物質(zhì)一、概況 氧氟沙星（Ofloxacin）為合成的第三代廣譜氟喹諾酮類抗菌藥，對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有明顯的抑制作用。臨床上主要用于敏感菌所致的呼吸系統(tǒng)感染、泌尿生殖系統(tǒng)感染。氧氟沙星由日本第一制藥株式會(huì)社研發(fā)，于1985年在日本、德國上市，制劑為口服片劑、注射劑等。目前國內(nèi)已上市的氧氟沙星制劑有片劑

2、、膠囊劑、顆粒劑、緩釋制劑、小針、葡萄糖注射液和氯化鈉注射液等。 左氧氟沙星（Levofloxacin）為氧氟沙星的左旋體，具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)的特點(diǎn)。日本第一制藥株式會(huì)社于1993年在日本上市銷售左氧氟沙星原料及片劑，并現(xiàn)已在英國、美國等多國上市。目前國內(nèi)上市的左氧氟沙星制劑主要有片劑、小針、葡萄糖注射液和滴眼劑等。另外，國內(nèi)已批準(zhǔn)上市的左氧氟沙星還有其鹽酸鹽、乳酸鹽和甲磺酸鹽，三種加酸根的左氧氟沙星均有片劑、膠囊劑、注射制劑等多種劑型上市。二、國家標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)控制方法比較 氧氟沙星系列藥物的有關(guān)物質(zhì)測定國家標(biāo)準(zhǔn)大多采用HPLC法，列表比較見表1。表1 氧氟沙星系列藥物的有關(guān)物質(zhì)測定方

3、法與限度的比較 這些方法有很多相似的地方，如均采用ODS柱，色譜條件與含量測定色譜條件相同，按照主成分自身稀釋對(duì)照法定量等。但也有一些不同的地方值得關(guān)注，作者從以下三個(gè)方面來對(duì)這些國家標(biāo)準(zhǔn)方法的不同之處進(jìn)行比較。1、流動(dòng)相 按照流動(dòng)相的不同，作者將有關(guān)物質(zhì)測定方法分為六種，具體如下： 方法A：醋酸銨高氯酸鈉溶液（取醋酸銨4.0g和高氯酸鈉7.0g，加水1300ml使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH至 2.2）-乙腈（8515）為流動(dòng)相，在294nm下檢測； 方法B：略； 方法C：略； 方法D：己烷磺酸鈉取己烷磺酸鈉0.98g，加磷酸鹽緩沖溶液（取磷酸二氫鉀6.8g，加水溶解并稀釋至 1000ml，加0.0

4、5mol/L磷酸約500ml，使pH為2.4）-甲醇（31）為流動(dòng)相，在293nm下檢測； 方法E：磷酸緩沖溶液（溶解27.2磷酸二氫鉀在1000ml水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.4）乙腈（9010）為流動(dòng)相，在294nm下檢測； 方法F：己烷磺酸鈉取己烷磺酸鈉0.98g，加磷酸鹽緩沖溶液（取磷酸二氫鉀6.8g，加水溶解并稀釋至 1000ml，加0.05mol/L磷酸約500ml，使pH為2.4）-甲醇（6535）為流動(dòng)相，在230nm下檢測。 六種流動(dòng)相的共同特點(diǎn)是：組成均是酸性緩沖溶液加有機(jī)溶劑（甲醇或乙腈）。方法A、B、E未加表面活性劑，方法C、D加有表面活性劑己烷磺酸鈉。除方法F在230n

5、m下檢測外，其他方法均在294或293nm下檢測。2、主要雜質(zhì) 英國藥典收載了氧氟沙星雜質(zhì)A、B、C、D、E、F共6個(gè)已知雜質(zhì)，依次分別為去哌嗪環(huán)、去羧基、去氟、氟取代位置不同、去甲基以及氮氧化的化合物物。英國藥典氧氟沙星原料藥采用TLC法控制雜質(zhì)A，采用HPLC法控制其他已知和未知雜質(zhì)。美國藥典重點(diǎn)關(guān)注了雜質(zhì)desfluoroofloxacin，日本藥局方重點(diǎn)關(guān)注了ofloxacin demethyl substance，均與英國藥典的雜質(zhì)E相同，是氧氟沙星的去甲基化合物，該化合物為氧氟沙星的主要降解產(chǎn)物，光照下極易產(chǎn)生。美國藥典給出了desfluoroofloxacin的相應(yīng)因子為1.13

6、。中國藥典沒有明確已知雜質(zhì)，但有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)采用以下光照降解法進(jìn)行特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，光照試驗(yàn)中產(chǎn)生的雜質(zhì)即為氧氟沙星、左氧氟沙星的主要雜質(zhì)。 美國藥典中desfluoroofloxacin按加校正因子的主成分自身稀釋對(duì)照法定量，美國藥典氧氟沙星其他雜質(zhì)和其他國家標(biāo)準(zhǔn)中氧氟沙星或左氧氟沙星所有雜質(zhì)按不加校正因子的主成分自身稀釋對(duì)照法定量。有關(guān)物質(zhì)限度的要求詳見表1。3、特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 氧氟沙星、左氧氟沙星及其鹽的含量測定和有關(guān)物質(zhì)檢查方法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)除通常的進(jìn)樣精密度、記錄時(shí)間、理論塔板數(shù)等的要求外尚有一項(xiàng)較為特殊的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，其他標(biāo)準(zhǔn)方法采用I法，日本藥局方采用II法，詳述如下：

7、 特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn)I（光照降解法）：取供試品溶液于無色試管中，用日光燈（2500lux或3500lux）或紫外燈（254nm）照射1小時(shí)或3小時(shí)或4小時(shí)，取此液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，相對(duì)保留時(shí)間約為主峰1.2處應(yīng)能檢測出色譜峰。 特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn)II（雜質(zhì)對(duì)照品法）：氧氟沙星和雜質(zhì)E（ofloxacin impurity E CRS，英國藥典）或氧氟沙星的去甲基物（ofloxacin demethyl substance）分離度不得低于2.0或2.5。 由于缺少雜質(zhì)對(duì)照品，國內(nèi)氧氟沙星系列藥物的有關(guān)物質(zhì)測定系統(tǒng)試驗(yàn)常常是采用光照降解法。也正是因?yàn)槿鄙匐s質(zhì)對(duì)照品，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)才顯得尤

8、為重要，是考察系統(tǒng)分離能力的重要指標(biāo)。 另外，左氧氟沙星及其鹽的原料和制劑均需檢查右旋異構(gòu)體，方法基本相同，均是采用硫酸銅L異亮氨酸溶液甲醇或硫酸銅D苯丙氨酸溶液甲醇為手性流動(dòng)相檢測，限度要求不得過0.8%或1.0%。在此就不詳加討論。三、注冊(cè)申報(bào)中存在問題與探討1、不重視系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 氧氟沙星系列藥物的特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn)常常被忽視，其實(shí)卻非常重要。若不做該項(xiàng)試驗(yàn)，就不能保證所采用的系統(tǒng)能將最難分離的相對(duì)保留時(shí)間1.2倍的色譜峰分離出來，就有可能得到錯(cuò)誤的結(jié)果。 審評(píng)中曾發(fā)現(xiàn)申報(bào)鹽酸左氧氟沙星注射液的某廠家自測鹽酸左氧氟沙星含量較藥檢所檢驗(yàn)結(jié)果高約5（含量測定色譜條件與有關(guān)物質(zhì)檢查一致）。仔

9、細(xì)審查其圖譜，發(fā)現(xiàn)未按鹽酸左氧氟沙星注射液的已有國家標(biāo)準(zhǔn)用光照降解法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，且色譜峰明顯拖尾。其測定結(jié)果偏高很可能是緊隨主峰之后的雜質(zhì)峰包裹進(jìn)了主峰。 申請(qǐng)人往往會(huì)留意進(jìn)樣精密度、理論塔板數(shù)這樣的常規(guī)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，卻常常忽略了光照降解系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，此種現(xiàn)象在申報(bào)資料中占很大比例。究其原因，是試驗(yàn)人員沒有理解到此項(xiàng)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的目的和重要性，希望提醒申請(qǐng)人提高對(duì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的重視程度。2、沒有雜質(zhì)個(gè)數(shù)與含量的詳細(xì)對(duì)比 申報(bào)資料中雜質(zhì)對(duì)比研究通常的做法就是按照國家標(biāo)準(zhǔn)方法檢驗(yàn)一下自制品和已上市對(duì)照藥品，若都在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)，就認(rèn)為自制品與已上市藥品質(zhì)量相當(dāng)。其實(shí)這樣的做法是對(duì)雜

10、質(zhì)對(duì)比的目的和比什么不甚明了的表現(xiàn)。雜質(zhì)對(duì)比一方面要了解自己的產(chǎn)品與已上市品雜質(zhì)有哪些不同，另一方面要了解制劑過程中有沒有新產(chǎn)生的雜質(zhì)，若有新產(chǎn)生的雜質(zhì)，應(yīng)加以控制。所以比較就要落到列表對(duì)比雜質(zhì)的個(gè)數(shù)與含量上，泛泛地比較雜質(zhì)總量是不足以說明問題的。 例如，申報(bào)鹽酸左氧氟沙星、乳酸左氧氟沙星的注射劑采用方法D測定的較為多見。在該色譜條件下，相對(duì)保留時(shí)間為0.23、0.43、1.2左右的雜質(zhì)峰較常見，其中相對(duì)保留時(shí)間為1.2的色譜峰是穩(wěn)定試驗(yàn)中含量有所增加的主要雜質(zhì)。 另外，統(tǒng)計(jì)雜質(zhì)的個(gè)數(shù)時(shí)要注意“忽略限度”。英國藥典氧氟沙星有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下明確規(guī)定：Disregard any peak with a

11、n area less than 0.1 times the area of the principal peak in the chromatogram obtained with reference solution (a)，即忽略面積小于對(duì)照溶液主峰面積0.1倍的色譜峰（0.02）。中國藥典沒有這么詳細(xì)的規(guī)定，但從實(shí)際操作來看，為增強(qiáng)方法的嚴(yán)謹(jǐn)性和數(shù)據(jù)的可比性，建議申請(qǐng)人在統(tǒng)計(jì)雜質(zhì)個(gè)數(shù)時(shí)應(yīng)明確忽略限度。3、強(qiáng)力破壞試驗(yàn)降解程度不合適 有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)驗(yàn)證的重要項(xiàng)目就是通過強(qiáng)力破壞試驗(yàn)考察方法的專屬性，但強(qiáng)力破壞試驗(yàn)破壞程度的掌握不盡合理。較容易出現(xiàn)的情況是破壞太輕微，酸、堿、氧化、光照破壞均幾乎未產(chǎn)生可檢測的雜質(zhì)，這樣就無法判斷所采用的色譜條件分離能力是否符合要求，破壞試驗(yàn)失去意義。另一種極端是破壞過度，主峰降解了大半，產(chǎn)生大量重疊的雜質(zhì)色譜峰，這樣很難找到合適的色譜條件將