六種常見口腔微生物培養(yǎng)

1、常見口腔微生物培養(yǎng)【摘要】變形鏈球菌、血鏈球菌、乳桿菌、粘性放線菌、中間普氏菌、白色念珠菌是常 見的口腔致齲菌。 本實驗主要作為大實驗的一部分， 以標(biāo)準(zhǔn)株為培養(yǎng)對象， 設(shè)置了各種細(xì)菌 的普通培養(yǎng)法以及外加原卟啉的培養(yǎng)基培養(yǎng)法?！娟P(guān)鍵詞】變形鏈球菌 血鏈球菌 乳桿菌 粘性放線菌 中間普氏菌 白色念珠菌 培養(yǎng)1 材料與儀器菌株選擇變形鏈球菌 ATCC 25175血鏈球菌 ATCC 105561嗜酸乳桿菌 ATCC 435613粘性放線菌 ATCC 159872中間普氏菌 ATCC 256112白色念珠菌 ATCC 90038試劑與培養(yǎng)基磷酸緩沖液 PBS無原卟啉培養(yǎng)液：BHI液體培養(yǎng)基：將粉末溶于

2、 100ml純水中，待溶解后調(diào)，高壓滅菌，4 C冰箱保存?zhèn)溆谩?3BHI平板：BHI粉末、 瓊脂溶解于100ml純水中，待溶解后調(diào)，高壓滅菌，4C冰箱保存?zhèn)溆?。MRS液體培養(yǎng)基：MRS粉末溶解于100ml純水中，調(diào)pH，高壓滅菌，4C保存?zhèn)溆谩?MRS平板：MRS粉末溶解于100ml純水中，加入2g瓊脂，調(diào)pH，高壓滅菌，4C 保存?zhèn)溆谩DA培養(yǎng)基：蛋白胨 1g,葡萄糖4g,瓊脂2g加蒸餾水至100mL,調(diào)節(jié)至 左右，121 C高壓蒸汽滅菌15min，冷卻后加青霉素（50卩g/ml）,倒板，置 4 C備用。YPD液體培養(yǎng)基：蛋白胨2g,葡萄糖2g,酵母粉1g加蒸餾水至100mL，調(diào)節(jié)至 12

3、1 C高壓蒸汽滅菌 15min，冷卻后加青霉素（50卩g/ml）,置4 C備用。 加原卟啉培養(yǎng)液：取原卟啉1X（亦可以換成鋅原卟啉或者原卟啉二鈉鹽等形式）56，加水定容到500ml，配制成 1g/L 的溶液在以上各種液體培養(yǎng)基中再加入，1g/L的原卟啉溶液配成約 3用/L的培養(yǎng)基?！咀ⅲ築HI配方表：每100ml水加入牛心浸出液 25ml，牛腦浸出液20ml，胰蛋白胨， 酵母提取物，葡萄糖，鹽酸半胱氨酸溶液，VPI鹽液，刃天青（）。2MRS培養(yǎng)液配方：每100ml純水加入胰蛋白胨，牛肉膏，酵母提取物，檸檬酸銨，葡 萄糖，醋酸鈉，磷酸氫二鉀，硫酸鎂，硫酸錳，加入吐溫 -80 ， ml.3本實驗采

4、用簡易的混合粉直接配制。 】培養(yǎng)環(huán)境無菌、厭氧（85%Nz, 10%H2、5%CQ） ,37C 主要儀器厭氧培養(yǎng)箱（ Bugboxdual， America ）無菌操作臺2 培養(yǎng)變形鏈球菌培養(yǎng)用固體培養(yǎng)基分離純化用接種環(huán)取變形鏈球菌 ATCC 25175接種于BHI固體培養(yǎng)基，37C培養(yǎng)24小時。 擴(kuò)大培養(yǎng)挑取單菌種分別接種到無原卟啉的BHI液體培養(yǎng)基與含原卟啉的BHI液體培養(yǎng)基，37 C恒溫培養(yǎng) 24 小時。血鏈球菌培養(yǎng)分離提純并擴(kuò)大培養(yǎng)血鏈球菌ATCC 10556步驟同。粘性放線菌培養(yǎng)分離提純并擴(kuò)大培養(yǎng)粘性放線菌ATCC 15987步驟同。中間普氏菌培養(yǎng)分離提純并擴(kuò)大培養(yǎng)中間普氏菌ATCC

5、 25611步驟同。乳桿菌培養(yǎng)用固體培養(yǎng)基分離純化用接種環(huán)取。擴(kuò)大培養(yǎng)挑取單菌種分別接種到無原卟啉的MRS液體培養(yǎng)基與含原卟啉的MRS液體培養(yǎng)基，37C恒溫培養(yǎng)24小時。白色念珠菌培養(yǎng)用固體培養(yǎng)基分離純化用接種環(huán)取白色念珠菌ATCC 90038接種于SDA固體培養(yǎng)基，37C培養(yǎng)24小時。擴(kuò)大培養(yǎng)挑取單菌種分別接種到無原卟啉的YPD液體培養(yǎng)基與含原卟啉的YPD液體培養(yǎng)基，37 C恒溫培養(yǎng)24小時?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 陶睿.Pleurocidin及其優(yōu)化多肽抑制常見致齲菌的研究D.第四軍醫(yī)大學(xué),2012.2 楊嗥.茶多酚聯(lián)用奧硝唑?qū)ρ乐芸梢芍虏【捏w外抑菌活性研究D.重慶醫(yī)科大學(xué)，2012.3 王勤花.乳酸桿菌對變形鏈球菌體外作用研究D.重慶醫(yī)科大學(xué),2012.4 鄭璐.白色念珠菌生物被膜體外模型的建立及分析D.重慶醫(yī)科大學(xué),2010.5 王自明，張陽德，何剪太，林伶.藥物誘導(dǎo)大鼠大腸癌組織原卟啉區(qū)積聚的定量分析J.