PCR臨床應(yīng)用PPT學(xué)習(xí)教案

1、會計學(xué)1 PCR臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用PPT課件課件 第1頁/共69頁 4 基因診斷 3 免疫學(xué)診斷 臨床診斷 細(xì)胞膜 細(xì)胞核 DNA 轉(zhuǎn)錄 mRNA 翻譯 蛋白質(zhì) 1 形態(tài)學(xué)診斷 2 生化診斷 第2頁/共69頁 第3頁/共69頁 第4頁/共69頁 第5頁/共69頁 第6頁/共69頁 PCRPCR.exe動畫 第7頁/共69頁 No. ofNo. Amplicon CyclesCopies of Target 12 24 38 416 532 664 201,048,576 301,073,741,824 第8頁/共69頁 第9頁/共69頁 第10頁/共69頁 Ct值與重復(fù)性值與重復(fù)性 同一樣本在相

2、同條件下同時進(jìn)行同一樣本在相同條件下同時進(jìn)行96次次 擴增擴增 FQ-PCR Ct值與濃度值與濃度 不同的模板達(dá)到熒光域值時的不同的模板達(dá)到熒光域值時的Ct 值不同值不同 第11頁/共69頁 熒光定量熒光定量PCR的臨床應(yīng)用的臨床應(yīng)用 第12頁/共69頁 第13頁/共69頁 臨床應(yīng)用 第14頁/共69頁 臨床應(yīng)用 二 腫瘤 1. 腫瘤標(biāo)志物：癌胚抗原、同功酶、抗體、激素、細(xì)胞 因子、受體等 2. 腫瘤相關(guān)基因表達(dá)的檢測：包括癌基因抗癌基因、腫 瘤轉(zhuǎn)移基因及轉(zhuǎn)移抑制基因 第15頁/共69頁 三 遺傳病 1. 等位基因檢測 2. 多基因遺傳病的突變檢測 3. 基因表達(dá)異常所致遺傳病檢測 第16頁/

3、共69頁 1.親子鑒定 2.法醫(yī)物證 3.PCR-RFLP技術(shù)的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用 4.罪犯鑒定 第17頁/共69頁 免疫學(xué)診斷主要是抗原抗體反應(yīng)，應(yīng)用于免疫學(xué)診斷主要是抗原抗體反應(yīng)，應(yīng)用于 臨床通常在體內(nèi)產(chǎn)生抗體以后，而許多病臨床通常在體內(nèi)產(chǎn)生抗體以后，而許多病 原體的免疫學(xué)檢測存在較長的原體的免疫學(xué)檢測存在較長的“窗口期窗口期” ，不利于對疾病的早期診斷；，不利于對疾病的早期診斷；PCRPCR方法直接方法直接 檢測病原體的檢測病原體的DNA/RNADNA/RNA，能大大縮短，能大大縮短“窗口窗口 期期”，其高靈敏度的檢測顯然也有利于疾，其高靈敏度的檢測顯然也有利于疾 病的早期診斷病的早期診斷。 第

4、18頁/共69頁 臨床應(yīng)用 第19頁/共69頁 一 肝炎病毒定量檢測 HBV HCV 臨床應(yīng)用 第20頁/共69頁 HBV 第21頁/共69頁 HBV （二） HBV-DNA與“兩對半” 第22頁/共69頁 HBV HBsAg() HBV-DNA() HBeAg () HBV-DNA() 103 copy 第23頁/共69頁 HBV (三)HBV-DNA定量檢測的臨床意義 3. HBV-DNA定量與預(yù)后 a. 含量高者急性肝炎患者易慢性化 b. 癌變的幾率明顯高于含量低者 1. HBV-DNA定量與HBV復(fù)制水平及傳染性 2. HBV-DNA定量與乙肝藥物療效 a. 專家提出103 copy

5、/ml做為陰性或臨床治愈標(biāo)準(zhǔn) b. HBV-DNA定量分析與干擾素干擾素治療(前、中、后) c. 拉咪呋啶拉咪呋啶 第24頁/共69頁 HBV (三)HBV-DNA定量檢測的臨床意義 4. HBV-DNA定量有助于指導(dǎo)懷孕與孕期，哺乳期檢查 5. 肝臟移植與HBV-DNA Mazzaferro等報告：105copy /ml 發(fā)生了嚴(yán)重HBV再感染 6. 血液制品和獻(xiàn)血員的篩選 第25頁/共69頁 第26頁/共69頁 （一）丙型肝炎病毒特點 HCV 感染特點： 1.HCV在血中含量極微 2.輸血后肝炎主要致病因子 3.免疫學(xué)標(biāo)志僅有抗-HCV，非中和抗體，產(chǎn)生時間不一 4.有一部分人感染HCV后

6、，不產(chǎn)生抗-HCV 5.感染易于慢性化(50-85%) 6.疫苗研制尚不成功 單鏈RNA 第27頁/共69頁 HCV 第28頁/共69頁 HCV (二)HCV-RNA定量檢測的臨床意義 2. HCV-RNA載量與抗-HCV滴度、ALT水平之間的相關(guān)性。 抗-HCV滴度和ALT異常率隨著HCV-RNA載量升高而增加。 3. HCV-RNA是評價抗病毒治療效果的重要指標(biāo)。 4. 慢性丙型肝炎長期抗-HCV陽性，這時如果進(jìn)行HCV-RNA 定量檢測可以鑒別活動性、復(fù)制程度。 第29頁/共69頁 STD 第30頁/共69頁 NGH 淋球菌感染與致病 1. 人是淋球菌的惟一宿主。 2. 2. 發(fā)病率最高

7、，在所發(fā)病率最高，在所STDSTD疾病中，高達(dá)疾病中，高達(dá)60%60%左右。左右。 3. 發(fā)病趨勢： a. 男性多于女性。 b. 城市走向農(nóng)村， c. 高收入階層向低收入階層擴展 4. 4. 人對淋球菌感染無天然抵抗力，免疫不持人對淋球菌感染無天然抵抗力，免疫不持 久，再感染和慢性患者普遍存在。久，再感染和慢性患者普遍存在。 5. 如母親為淋病患者，嬰兒出生時易患上淋球菌性結(jié)膜炎 第31頁/共69頁 CT 沙眼衣原體感染與致病 1. 嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生。 2. 不僅可致眼部感染、肺部感染、也是STD的主要 病原體。 3. 近年來在歐美等國，沙眼衣原體的感染率和危害 性已超過淋球菌而居STD之首。

8、 4. 在我國，在非淋球菌性尿道炎中，居首位。在我國，在非淋球菌性尿道炎中，居首位。 5. 泌尿生殖道感染，妨礙妊娠。 6. 盆腔感染，可致生殖能力損害。 第32頁/共69頁 UU 解脲脲原體感染與致病 1. 合成尿素酶，分解尿素 2. 在非淋球菌性尿道炎其感染率僅次于衣原 體感染，居第二位。 3. 流產(chǎn)超過4次以上者，檢出率高達(dá)80%。 4. 有30-40%男性尿道炎是由感染UU所致。 5. 與男性不育相關(guān)。男性不育患者精液中，脲原體 檢出率高達(dá)66.6。檢出率隨精子數(shù)減少和精子 活動力下降而升高。 第33頁/共69頁 NGH/CT/UU 第34頁/共69頁 NGH/CT/UU 熒光定量PC

9、R診斷NGH/CT/UU的意義 第35頁/共69頁 第36頁/共69頁 HPV 第37頁/共69頁 人乳頭瘤病毒感染與致病 HPV 第38頁/共69頁 梅艷芳梅艷芳(40(40歲歲) ) 國家一級演員國家一級演員 李媛媛李媛媛(41(41歲歲) ) 第39頁/共69頁 HPV 第40頁/共69頁 HPV 熒光定量PCR檢測HPV的意義 第41頁/共69頁 HPV 第42頁/共69頁 第43頁/共69頁 TB 第44頁/共69頁 第45頁/共69頁 第46頁/共69頁 TB 第47頁/共69頁 TB 第48頁/共69頁 TB 熒光定量PCR檢測TB-DNA的意義 第49頁/共69頁 TORCH

10、第50頁/共69頁 TORCH 第51頁/共69頁 TORCH TOX 第52頁/共69頁 (二) 人巨細(xì)胞病毒感染與致病 TORCH-CMV 第53頁/共69頁 (三) 人風(fēng)疹病毒感染與致病 TORCH-RV 第54頁/共69頁 TORCH-RV (三) 人風(fēng)疹病毒感染與致病 第55頁/共69頁 TORCH-HSV 第56頁/共69頁 TORCH-HSV (四) 人單純皰疹病毒感染與致病 第57頁/共69頁 TORCH 第58頁/共69頁 TORCH 第59頁/共69頁 TORCH TOXCMVRVHSV 核測核酸DNADNARNADNA 檢測標(biāo)本 血液、羊 水、絨毛 膜 血液、尿液、 乳汁、唾液、 精液、分泌物 咽拭子、血 液、尿液 、羊水、胎 盤、妊娠物 皰疹液、患 處刮片、粘 膜、血液 TORCH檢測核酸與檢測標(biāo)本的比較 第60頁/共69