微生物-金黃色葡萄球菌

1、 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 一、生物學(xué)特性一、生物學(xué)特性菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征 革蘭氏陽(yáng)性球菌，直徑為革蘭氏陽(yáng)性球菌，直徑為0.5-1.0微米，鏡檢時(shí)呈單個(gè)、成微米，鏡檢時(shí)呈單個(gè)、成 對(duì)、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群，如葡萄狀，故稱為葡萄球菌。對(duì)、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群，如葡萄狀，故稱為葡萄球菌。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 大多數(shù)菌株產(chǎn)生大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素類胡羅卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色深橙色 到淺黃色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長(zhǎng)的條件

2、，故稱，色素的產(chǎn)生取決于生長(zhǎng)的條件，故稱金黃金黃 色葡萄球菌色葡萄球菌。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 大多數(shù)菌株最適生長(zhǎng)溫度大多數(shù)菌株最適生長(zhǎng)溫度30-37，最適，最適pH為為7.0-7.5； 兼性厭氧菌，在好氧條件下生長(zhǎng)最好；兼性厭氧菌，在好氧條件下生長(zhǎng)最好； 可在可在15%氯化鈉和氯化鈉和40%膽汁中生長(zhǎng)。膽汁中生長(zhǎng)。 一般用含一般用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌或氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌或7.5% 氯化鈉肉湯增菌。氯化鈉肉湯增菌。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物

3、部分） 所有的毒株產(chǎn)生血漿凝固酶，人和動(dòng)物來(lái)源的菌所有的毒株產(chǎn)生血漿凝固酶，人和動(dòng)物來(lái)源的菌 株通?？赡掏?、人、馬和豬的血漿。株通常可凝固兔、人、馬和豬的血漿。 金黃色葡萄球菌產(chǎn)生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和金黃色葡萄球菌產(chǎn)生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和 溶菌酶等，大多數(shù)菌株可水解天然的動(dòng)物蛋白并釋放溶菌酶等，大多數(shù)菌株可水解天然的動(dòng)物蛋白并釋放 脂肪酸。在脂肪酸。在BP平板產(chǎn)生磷脂環(huán)。平板產(chǎn)生磷脂環(huán)。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 生物學(xué)特性生物學(xué)特性 致致 病病 性性 金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強(qiáng)弱主金黃色葡萄球菌為條

4、件致病菌，菌株致病力的強(qiáng)弱主 要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶： a.溶血素：溶血素：外毒素，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌外毒素，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌 體局部缺血和壞死；在體局部缺血和壞死；在血平板培養(yǎng)出現(xiàn)溶血環(huán)血平板培養(yǎng)出現(xiàn)溶血環(huán)。 b.殺白細(xì)胞素：殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞； c.血漿凝固酶：血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血 液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬 細(xì)胞的吞噬作用。細(xì)胞的吞噬作

5、用。 d.脫氧核糖核酸酶（脫氧核糖核酸酶（DNA酶）酶） e.腸毒素：腸毒素：引起急性胃腸炎。引起急性胃腸炎。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 金黃色葡萄球菌是人類金黃色葡萄球菌是人類化膿感染化膿感染中最常見(jiàn)的病原菌，中最常見(jiàn)的病原菌， 臨床表現(xiàn)多種多樣，可引起局部化膿感染，也可引起肺臨床表現(xiàn)多種多樣，可引起局部化膿感染，也可引起肺 炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 葡萄球菌皮膚感染葡

6、萄球菌皮膚感染 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾 病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最 為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。 當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品， 如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時(shí)，經(jīng)如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時(shí)，經(jīng)8- 10小時(shí)即可相當(dāng)數(shù)量的腸毒素。小時(shí)即可相當(dāng)數(shù)

7、量的腸毒素。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 二、檢驗(yàn)程序與操作方法二、檢驗(yàn)程序與操作方法 根據(jù)中根據(jù)中 華華 人人 民民 共共 和和 國(guó)國(guó) 國(guó)國(guó) 家家 標(biāo)標(biāo) 準(zhǔn)：準(zhǔn)： 食食 品品 衛(wèi)衛(wèi) 生生 微微 生生 物物 學(xué)學(xué) 檢檢 驗(yàn)驗(yàn) GB 4789.10-94 金金 黃黃 色色 葡葡 萄萄 球球 菌菌 檢檢 驗(yàn)驗(yàn) 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）檢樣檢樣 25g(ml)+225ml滅菌生理鹽水滅菌生理鹽水 國(guó)標(biāo)：金黃色葡國(guó)標(biāo)：金黃色葡 萄球菌檢驗(yàn)程序萄球菌檢驗(yàn)程序 直接計(jì)數(shù)方法

8、增菌培養(yǎng)方法 Baird-parker（貝爾德- 帕克） 0.3ml、0.3ml、0.4ml 75氯化鈉肉湯或 胰酪胨大豆肉湯 血平板 血平板 ，Baird-parker 涂片染色 觀察溶血 血漿凝固酶試驗(yàn) 報(bào) 告 36 1 24hr 36 1 24hr 36 1 24hr 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序 增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng) 利用金黃色葡萄球菌利用金黃色葡萄球菌耐鹽耐鹽的特性（可耐受的特性（可耐受15%的的 氯化鈉），用含氯化鈉），用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯或氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯或7.5% 氯化鈉肉湯增菌。氯

9、化鈉肉湯增菌。 置置37攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。小時(shí)。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序 分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血 平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。 典型菌落：呈金黃色，有時(shí)也為白色，大而突起，圓典型菌落：呈金黃色，有時(shí)也為白色，大而突起，圓 形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)。形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）

10、 大而突起，圓形，不透明，大而突起，圓形，不透明， 表面光滑，有溶血環(huán)表面光滑，有溶血環(huán) 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 血平板制作血平板制作 成分：豆粉瓊脂（或營(yíng)養(yǎng)瓊脂）成分：豆粉瓊脂（或營(yíng)養(yǎng)瓊脂）100mL，脫纖維，脫纖維 羊血（或兔血）羊血（或兔血）5-10mL。 制法：加熱融化瓊脂，冷至制法：加熱融化瓊脂，冷至50，以無(wú)菌操作加，以無(wú)菌操作加 入脫纖維羊血或兔血，搖勻，傾注平板。或分裝入脫纖維羊血或兔血，搖勻，傾注平板?；蚍盅b 滅菌試管，擺成斜面。滅菌試管，擺成斜面。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物

11、部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） BP（貝爾德（貝爾德- 帕克）平板：帕克）平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素 和礦物元素和礦物元素 丙酮酸鈉是一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑丙酮酸鈉是一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑 亞碲酸鹽對(duì)除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有亞碲酸鹽對(duì)除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有 毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色 卵黃提供營(yíng)養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)卵黃提供營(yíng)養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán) 甘氨酸和氯化鋰對(duì)金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制甘氨酸和氯化鋰對(duì)金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制 作用。作用。 檢驗(yàn)程序

12、檢驗(yàn)程序分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 在在BP平板上典型菌落為：灰色到黑玉色，圓形，光平板上典型菌落為：灰色到黑玉色，圓形，光 滑突起，濕潤(rùn)，直徑滑突起，濕潤(rùn)，直徑2-3mm，邊緣常為淡色（米黃色或，邊緣常為淡色（米黃色或 灰色），周圍為一混濁帶，在其外緣常有一透明圈。用灰色），周圍為一混濁帶，在其外緣常有一透明圈。用 接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。 長(zhǎng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落，其黑長(zhǎng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落，其黑 色常較典型菌落淡些，且外觀可能粗

13、燥，質(zhì)地較干燥。色常較典型菌落淡些，且外觀可能粗燥，質(zhì)地較干燥。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） B-P平板平板 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 革蘭氏陽(yáng)性，球形，組成葡萄狀革蘭氏陽(yáng)性，球形，組成葡萄狀 檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序 鑒定之革蘭氏染色鏡檢鑒定之革蘭氏染色鏡檢 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序 鑒定之凝固酶試驗(yàn)鑒定之凝固酶試驗(yàn) 金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生血漿凝固酶，因此對(duì)其鑒別金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)

14、生血漿凝固酶，因此對(duì)其鑒別 的主要試驗(yàn)是測(cè)定其凝固酶。的主要試驗(yàn)是測(cè)定其凝固酶。 方法一：試管法方法一：試管法 吸取吸取1:4新鮮兔血漿新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入，放入小試管中，再加入 培養(yǎng)培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球肉浸液肉湯培養(yǎng)物的金黃色葡萄球肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩，振蕩 搖勻，放搖勻，放361恒溫箱或水浴內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，恒溫箱或水浴內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次， 觀察觀察6h，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝 塊者，被認(rèn)為陽(yáng)性結(jié)果。塊者，被認(rèn)為陽(yáng)性結(jié)果。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食

15、品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 試管法試管法 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 陽(yáng)性反應(yīng)陽(yáng)性反應(yīng) 陰性反應(yīng)陰性反應(yīng) 不凝固 少量、 零散凝 固 明顯的塊 狀凝固 巨大塊 凝固 完全凝固， 倒置不流動(dòng) 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 有凝塊 血漿 均勻混濁 生理鹽水 方法二：玻片法方法二：玻片法 在一張潔凈玻片中央加在一張潔凈玻片中央加1滴生理鹽水，用接種環(huán)取滴生理鹽水，用接種環(huán)取 待檢培養(yǎng)物與其混合（設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照）制成菌懸液，待檢培養(yǎng)物與其混合（設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照）制成菌懸

16、液， 若經(jīng)若經(jīng)1020s內(nèi)無(wú)自凝現(xiàn)象發(fā)生，則加入人或兔新鮮血漿內(nèi)無(wú)自凝現(xiàn)象發(fā)生，則加入人或兔新鮮血漿 1環(huán)（不用稀釋），與菌懸液混合，觀察結(jié)果環(huán)（不用稀釋），與菌懸液混合，觀察結(jié)果 。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 兔血漿制備兔血漿制備 成分：檸檬酸鈉成分：檸檬酸鈉0.106 mol/L （31.3g Na3C6H5O72H2O溶于溶于1L蒸餾水中）蒸餾水中） 制法：一份加兔血制法：一份加兔血9份混合后離心份混合后離心2000rpm， 10min吸取上清液即為兔血漿。吸取上清液即為兔血漿。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全

17、檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 葡萄糖肉浸液肉湯的制備葡萄糖肉浸液肉湯的制備 成分：絞碎牛肉成分：絞碎牛肉500g，氯化鈉，氯化鈉5g，蛋白胨，蛋白胨10g，磷酸氫二，磷酸氫二 鉀鉀2g，葡萄糖，葡萄糖10g，蒸餾水，蒸餾水1000mL，pH7.47.6。 制法：將絞碎之去筋膜無(wú)油脂牛肉制法：將絞碎之去筋膜無(wú)油脂牛肉500g，與蒸餾水混合后，與蒸餾水混合后 放冰箱放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時(shí)，使肉渣，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時(shí)，使肉渣 完全凝結(jié)成塊，用絨布過(guò)濾，并擠壓收集全部濾液，加水完全凝結(jié)成塊，用絨布過(guò)濾，并擠壓收集全部濾液，加水 補(bǔ)足原量。加入蛋

18、白胨、葡萄糖，氯化鈉和磷酸鹽，溶解補(bǔ)足原量。加入蛋白胨、葡萄糖，氯化鈉和磷酸鹽，溶解 后校正后校正pH，煮沸并過(guò)濾、分裝，煮沸并過(guò)濾、分裝，12130min高壓滅菌。高壓滅菌。 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 25g樣品樣品+ 225ml 生理鹽水生理鹽水 5mL樣品勻液（樣品勻液（1:10）+ 50mL胰酪胨大豆肉湯胰酪胨大豆肉湯 血平板血平板 36 1 24hr 鏡鏡 檢檢 與與 肉浸液肉湯培養(yǎng)肉浸液肉湯培養(yǎng) 血漿凝固酶血漿凝固酶 試驗(yàn)試驗(yàn) 報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果 36 1 24hr 36 1 24hr 36 1 6hr BP平板平板

19、 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分）食品安全檢驗(yàn)技術(shù)（微生物部分） 25g樣品樣品+ 225ml 生理鹽水生理鹽水 選三個(gè)連續(xù)梯度，每個(gè)梯度分別取選三個(gè)連續(xù)梯度，每個(gè)梯度分別取1mL接種之至表面接種之至表面 干燥的干燥的BP平板（如平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL） 平板計(jì)數(shù)（分別記錄每種平板計(jì)數(shù)（分別記錄每種 類型的菌落數(shù)）類型的菌落數(shù)） 36 1 48hr 血平板、鏡血平板、鏡 檢與檢與 肉浸液肉湯培養(yǎng)肉浸液肉湯培養(yǎng) 血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn) 報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果 金葡菌數(shù)金葡菌數(shù) /g(mL) 每種類型選取一個(gè)菌落每種類型選取一個(gè)菌落 36 1 24hr 36 1 6hr 適用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌適用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌 數(shù)不小于數(shù)不小于10/g（mL）的食品）的食品 計(jì)算辦法：（三個(gè)平板中疑計(jì)算辦法：（三個(gè)平板中疑 似金黃色葡萄球菌黑色菌落似金黃色葡萄球菌黑色菌落 數(shù)相加）數(shù)相加）血漿凝固酶陽(yáng)性血漿凝固酶陽(yáng)性 數(shù)數(shù)5 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 梯度稀釋梯度稀釋 金色葡萄球菌檢驗(yàn)金色葡萄球菌檢驗(yàn)食品安全