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文檔簡介

1、病理生理教研室細胞凋亡是指細胞在一定的生理或病理條件下，受內(nèi)在遺傳機制的控制自動結(jié)束生命的過程細胞凋亡的過程不同于壞死性死亡，其染色質(zhì)斷裂，細胞核碎裂程核裂片，細胞質(zhì)濃縮，細胞體積減小，細胞膜內(nèi)折，整個細胞通過起泡和發(fā)芽方式形成大小不等凋亡小體。凋亡的細胞的核dna的斷裂發(fā)生在核小體之間，因此產(chǎn)生的斷裂dna在電泳時會呈180-200bp整數(shù)倍大小的階梯狀條帶，這是識別凋亡細胞的可靠生化特征。能誘導細胞凋亡的枉法有很多，這里主要采取化療藥物誘導細胞凋亡hepg2 肝癌細胞株，dna提取試劑盒，移液器，ep管，pbs，低溫離心機1.在細胞懸液中加入20 l proteinase k溶液，混勻。2

2、.加入200 l緩沖液gb，充分顛倒混勻，70放置10 min，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除水珠。3.加人200 l 無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。4.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱cb3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (13,400g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱cb3放回收集管中。5.向吸附柱cb3中加入500 l緩沖液gd （使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (13,400g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱cb3放入收集管中。6. 向吸附柱cb3中加入600 l 漂洗液pw（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (13,400g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱cb3放入收集管中。7. 重復(fù)操作步驟6。8. 將吸附柱cb3放回收集管中，12,000 rpm(13,400g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱cb3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。9. 吸附柱cb3轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 l洗脫緩沖液te，室溫放置2-5 min，12,000 rpm (13,400g)離心 2 min，將溶液收集到離

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