3哺乳動(dòng)物組織基因組DNA提取

1、2021-10-211genomic dna extraction from mammal tissue哺乳動(dòng)物組織基因組哺乳動(dòng)物組織基因組dna提取提取2021-10-212一、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?experimental purpose) after the experiment is finished, students should be able to extract genomic dna from mammal tissue, and to run an agarose gel. 1.1.掌握動(dòng)物基因組掌握動(dòng)物基因組dnadna提取的操作方法。提取的操作方法。2.2.掌握瓊脂糖

2、凝膠電泳的操作的方法。掌握瓊脂糖凝膠電泳的操作的方法。2021-10-213二、二、實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理(experimental principle)lthe detergents sds ( sodium dodecyl sulfate) is added to denature proteins and solubilize lipids in membranes leading to cell lysis . the cell lysate is often treated with enzymes that hydrolyze rna and proteins. 本實(shí)驗(yàn)利用去垢劑本實(shí)驗(yàn)利

3、用去垢劑sds(十二烷基磺酸鈉十二烷基磺酸鈉)是為了是為了使蛋白變性并溶解細(xì)胞膜中的脂質(zhì)從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解，使蛋白變性并溶解細(xì)胞膜中的脂質(zhì)從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解，而細(xì)胞裂解物又常用蛋白酶而細(xì)胞裂解物又常用蛋白酶k進(jìn)行水解處理。進(jìn)行水解處理。2021-10-214真核生物染真核生物染色體色體dnadna組組裝不同層次裝不同層次的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)2021-10-215lthen they are treated with phenol and chloroform to remove the remaining proteins, which will either enter the organic phas

4、e or, if they had denatured, appear at the interphase. alcohol help to concentrate the dna while removing nucleotides, amino acids, oligonucleotides and peptides. 隨后用酚隨后用酚氯仿進(jìn)行抽提，以去除殘留的蛋白質(zhì)，氯仿進(jìn)行抽提，以去除殘留的蛋白質(zhì)，這時(shí)蛋白質(zhì)將進(jìn)入有機(jī)相，或者假如己變性的話將呈現(xiàn)這時(shí)蛋白質(zhì)將進(jìn)入有機(jī)相，或者假如己變性的話將呈現(xiàn)在有機(jī)相與水相之間。乙醇沉淀處理則可以濃縮在有機(jī)相與水相之間。乙醇沉淀處理則可以濃縮dna，同

5、時(shí)去除核苷酸、氨基酸以及低分子量的寡核苷酸和肽。同時(shí)去除核苷酸、氨基酸以及低分子量的寡核苷酸和肽。2021-10-216lwe can add the eathylene diamine tetraacetic acid (edta) to keep the integrity of dna. edta can chelate mg2 + and reduce deoxyribonuclease (dnase) activity, because these enzymes require mg2+ to work. 為了進(jìn)一步保護(hù)為了進(jìn)一步保護(hù)dna樣樣品的完整性，通常需要在緩品的完整性，通

6、常需要在緩沖液中添加乙二胺四乙酸沖液中添加乙二胺四乙酸(edta)以整合以整合mg2+，這樣，這樣將會(huì)減少脫氧核糖核酸酶將會(huì)減少脫氧核糖核酸酶(dnase)的活性，因?yàn)樵撁傅幕钚?，因?yàn)樵撁副仨氃谟斜仨氃谟衜g2+存在時(shí)才會(huì)起存在時(shí)才會(huì)起作用。作用。2021-10-217 本實(shí)驗(yàn)方法分離得到的染色體本實(shí)驗(yàn)方法分離得到的染色體dna長(zhǎng)度為長(zhǎng)度為100-150kb，適用于構(gòu)建基因組文庫(kù)和，適用于構(gòu)建基因組文庫(kù)和southern雜交分析。雜交分析。如果要求得到較大分子量的如果要求得到較大分子量的dna，則必須省略其中的，則必須省略其中的振蕩步驟。振蕩步驟。2021-10-218核酸的分離純化、測(cè)定及核

7、酸的分離純化、測(cè)定及研究方法研究方法一、一、 分離核酸的一般原則分離核酸的一般原則 因?yàn)檫z傳信息全部貯存在核因?yàn)檫z傳信息全部貯存在核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，故完整的一級(jí)酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，故完整的一級(jí)結(jié)構(gòu)是保證核酸結(jié)構(gòu)與功能研究結(jié)構(gòu)是保證核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的基礎(chǔ)。的基礎(chǔ)。2021-10-219（一）核酸的分離和純化時(shí)應(yīng)遵循兩個(gè)原則（一）核酸的分離和純化時(shí)應(yīng)遵循兩個(gè)原則 保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性； 排除其它分子的污染。排除其它分子的污染。 （二）核酸的純度要求（二）核酸的純度要求 核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃

8、度的金屬離子；的金屬離子； 其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到最低程度；最低程度； 排除其它核酸分子的污染，如提取排除其它核酸分子的污染，如提取dna分子時(shí)，應(yīng)去除分子時(shí)，應(yīng)去除rna，反之亦然反之亦然。2021-10-2110（三）核酸分離純化的注意事項(xiàng)（三）核酸分離純化的注意事項(xiàng)l為保證分離核酸的完整性和純度，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意：為保證分離核酸的完整性和純度，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意：l 盡量簡(jiǎn)化操作步驟，縮短提取過(guò)程，以減少各種有害因素對(duì)核酸的盡量簡(jiǎn)化操作步驟，縮短提取過(guò)程，以減少各種有害因素對(duì)核酸的破壞；破壞； l 減少化學(xué)物質(zhì)對(duì)

9、核酸的降解，為避免過(guò)酸、過(guò)堿對(duì)核酸鏈中磷酸二減少化學(xué)物質(zhì)對(duì)核酸的降解，為避免過(guò)酸、過(guò)堿對(duì)核酸鏈中磷酸二酯鍵的破壞，操作多在酯鍵的破壞，操作多在ph4ph41010條件下進(jìn)行；條件下進(jìn)行；l 防止核酸的生物降解。細(xì)胞內(nèi)或外來(lái)的各種核酸酶水解核酸鏈中的防止核酸的生物降解。細(xì)胞內(nèi)或外來(lái)的各種核酸酶水解核酸鏈中的磷酸二酯鍵，直接破壞核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)。其中磷酸二酯鍵，直接破壞核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)。其中dnadna酶需要金屬二價(jià)陽(yáng)離酶需要金屬二價(jià)陽(yáng)離子子mgmg2+2+，caca2+2+的激活，因此使用金屬離子螯合劑，如的激活，因此使用金屬離子螯合劑，如edtaedta或檸檬酸鹽等或檸檬酸鹽等基本上可以抑制基本上

10、可以抑制dnadna酶的活性。而酶的活性。而rnarna酶不但分布廣泛、極易污染樣品，酶不但分布廣泛、極易污染樣品，而且耐高溫、耐酸堿、不易失活，所以生物降解是而且耐高溫、耐酸堿、不易失活，所以生物降解是rnarna提取過(guò)程中的主提取過(guò)程中的主要危害因素；要危害因素； l 減少物理因素對(duì)核酸的降解，物理降解因素主要是減少物理因素對(duì)核酸的降解，物理降解因素主要是機(jī)械剪切力，其機(jī)械剪切力，其次是高溫。次是高溫。 2021-10-2111高溫：高溫：如長(zhǎng)時(shí)間煮沸，除水沸騰帶來(lái)的剪切力如長(zhǎng)時(shí)間煮沸，除水沸騰帶來(lái)的剪切力外，高溫本身對(duì)核酸分子中的某些化合鍵也有破外，高溫本身對(duì)核酸分子中的某些化合鍵也有破

11、壞作用。核酸提取過(guò)程中常規(guī)操作溫度為壞作用。核酸提取過(guò)程中常規(guī)操作溫度為0 044以降低核酸酶的活性從而減少對(duì)核酸的生物降解。以降低核酸酶的活性從而減少對(duì)核酸的生物降解。 機(jī)械剪切力：機(jī)械剪切力：包括強(qiáng)力高速的溶液振蕩、攪包括強(qiáng)力高速的溶液振蕩、攪拌，細(xì)胞突然置于低滲液中；細(xì)胞爆炸式地破裂拌，細(xì)胞突然置于低滲液中；細(xì)胞爆炸式地破裂及及dnadna樣品的反復(fù)凍融等。這些操作細(xì)節(jié)在實(shí)驗(yàn)操樣品的反復(fù)凍融等。這些操作細(xì)節(jié)在實(shí)驗(yàn)操作中應(yīng)加倍注意。機(jī)械剪切作用的主要危害對(duì)象作中應(yīng)加倍注意。機(jī)械剪切作用的主要危害對(duì)象是大分子量的線性是大分子量的線性dnadna分子，如真核細(xì)胞的染色體分子，如真核細(xì)胞的染色體

12、dnadna等等。 2021-10-2112二、核酸分離純化的一般步驟二、核酸分離純化的一般步驟l破碎細(xì)胞破碎細(xì)胞去除蛋白質(zhì)、多糖、脂類等生物大分去除蛋白質(zhì)、多糖、脂類等生物大分子子沉淀核酸沉淀核酸去除鹽類、有機(jī)溶劑等雜質(zhì)去除鹽類、有機(jī)溶劑等雜質(zhì)純純化干燥化干燥溶解。溶解。l核酸提取方案，應(yīng)根據(jù)具體生物材料和待提取核核酸提取方案，應(yīng)根據(jù)具體生物材料和待提取核酸分子的特點(diǎn)而定。對(duì)于某特定細(xì)胞器中富集的酸分子的特點(diǎn)而定。對(duì)于某特定細(xì)胞器中富集的核酸分子，采用先提取細(xì)胞器后再提取目的核酸核酸分子，采用先提取細(xì)胞器后再提取目的核酸分子的方案，可獲得完整性和純度兩方面質(zhì)量均分子的方案，可獲得完整性和純度

13、兩方面質(zhì)量均高的核酸分子。高的核酸分子。2021-10-2113三、試劑與器材三、試劑與器材(reagents and apparatus) . instruments high speed refrigerated centrifuge（高速冷凍離心機(jī)）、（高速冷凍離心機(jī)）、 glass homogenizer（玻璃勻漿器）（玻璃勻漿器）、 electrophoresis system（電泳系統(tǒng)）（電泳系統(tǒng)）、 ultraviolet transilluminator（紫外透（紫外透射儀）射儀）、ultra cold storage freezer（超低溫冰箱）（超低溫冰箱）、autocla

14、ve（高壓滅菌鍋）（高壓滅菌鍋）、 pipettes（微量加樣器）（微量加樣器）、electronic balance（電子天平）（電子天平）、acidometer（酸度計(jì)）（酸度計(jì)）2021-10-2114. material liver of mice 2021-10-2115. reagentstris、sds、edta、 hcl、 naoh 、 sodium acetate (naac)、 acetic acid (hac)、phenol、chloroform、ethanol、isoamylol、te buffer 、protease k、rnase a、agarose、dna mol

15、ecular weight markers 、boric acid、sugar、bromophenol blue、fluorescent dye (gelview)2021-10-21161. 5 mol1. 5 moll nacl l nacl 2. 1 mol2. 1 moll trisl tris hcl ph8.0hcl ph8.03. 0.5 mol3. 0.5 moll edta ph8.0 l edta ph8.0 4. dddh4. dddh2 2o o 5. 3 mol5. 3 moll naac ph5.2 l naac ph5.2 6. 6. 生理鹽水（生理鹽水（0.85

16、0.85 naclnacl） 7 7. 10. 10sds sds 8. 58. 5tbe tbe 9. 10mg9. 10mgmlml蛋白酶蛋白酶k -20k -20保存保存 10. 10mg10. 10mgmlml無(wú)無(wú)dnadna酶的酶的rnarna酶酶 -20-20保存保存11. 611. 6凝膠加樣緩沖液凝膠加樣緩沖液（一）（一）儲(chǔ)備液的制備儲(chǔ)備液的制備四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 (experimental procedures)2021-10-2117四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟(experimental procedures) 冰浴處理生理鹽水冰浴處理生理鹽水 玻璃勻漿器玻璃勻漿器 冰冷

17、的生理鹽水清洗（冰冷的生理鹽水清洗（3次）次）配制工作液配制工作液 處死小鼠處死小鼠 取出肝臟取出肝臟 組織勻漿液組織勻漿液 酶解液酶解液2ml2ml勻漿液勻漿液 組織細(xì)胞液組織細(xì)胞液 玻璃勻漿器勻漿玻璃勻漿器勻漿 移至移至1.5ml離心管離心管 5000r5000rmin30min3060s 60s 加加400ul 400ul 吹散吹散 加加400ul400ul 離心離心 無(wú)菌水無(wú)菌水 酶解液酶解液 水浴處理（水浴處理（55、1218h） （二）（二） 破碎、酶解細(xì)胞（過(guò)夜）破碎、酶解細(xì)胞（過(guò)夜）0.2g4棄上清棄上清2021-10-2118四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟(experimental

18、 procedures) 等量分裝在兩支離心管內(nèi)等量分裝在兩支離心管內(nèi) 加入加入20ul20ul的的rnase rnase 加入等體積加入等體積提取液提取液( (翻轉(zhuǎn)混勻翻轉(zhuǎn)混勻) ) 4 10min 4 10min酶解樣品酶解樣品 待抽提的樣品待抽提的樣品 抽提抽提 靜置靜置 離心離心 配制配制 tete緩沖液緩沖液 加等體積加等體積提取液提取液500ul500ul10000r10000rminmin離心離心10min 10min 4 10min4 10min 移出水相移出水相 至離心管至離心管 抽提抽提 靜置靜置 10000r10000rminmin離心離心10min 10min 加加1/

19、10 1/10 加加2 2倍倍 放入放入離心離心 移出水相移出水相 naacnaac 無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇 -20 1-2h 12000r-20 1-2h 12000rminmin離心離心15min 15min 加入加入超低溫冰箱超低溫冰箱 融化、離心融化、離心 棄上清液棄上清液 洗滌洗滌 12000r12000rminmin離心離心15min 15min 干燥干燥 混勻混勻75%75%冷乙醇冷乙醇 離心離心 棄上清液棄上清液 加加te50ulte50ul （三）（三） 抽提抽提dna 、乙醇沉淀純化、乙醇沉淀純化dna37 水浴水浴1h2021-10-2119四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟(exper

20、imental procedures)agarose gel electrophoresis ： preparation of the gel 制備制備0.3瓊脂糖凝膠瓊脂糖凝膠 loading dna samples dna samples 16l + loading buffer4l gel 電壓電壓120v gel photography（四）（四） 、瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)、瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna2021-10-21201.制備制備 0.3 瓊脂糖凝膠。稱取瓊脂糖凝膠。稱取 0.06 g 瓊脂糖，放人錐形瓶中，瓊脂糖，放人錐形瓶中，加入加入 20 ml的的 0.5tbe 緩沖液緩沖液，放

21、入微波爐加熱至完全溶化，放入微波爐加熱至完全溶化，則為則為 0.3 瓊脂糖凝膠液。（瓊脂糖凝膠液。（由于蒸發(fā)作用，溶解前在容量瓶由于蒸發(fā)作用，溶解前在容量瓶上作一個(gè)記號(hào)，溶解后用三蒸水補(bǔ)足上作一個(gè)記號(hào)，溶解后用三蒸水補(bǔ)足）2.制膠器的安裝。制膠器的安裝。3.gelviewgelview4. 將冷到將冷到60左右，緩緩倒入制膠器左右，緩緩倒入制膠器(注意不要形成氣泡注意不要形成氣泡)。5. 待膠凝固后（待膠凝固后（80min），輕輕拔掉梳子，將凝膠盤從制膠槽），輕輕拔掉梳子，將凝膠盤從制膠槽中取出，放入電泳槽內(nèi)。中取出，放入電泳槽內(nèi)。6. 加入電泳緩沖液加入電泳緩沖液(0.5)至電泳槽中。至電泳

22、槽中。 2021-10-21215 5tbetbe（電泳緩沖液）（電泳緩沖液） 100ml100mll5.4gtris，l2.75g硼酸，硼酸， l2ml 0.5mol/l edta(ph8.0)l加蒸餾水到加蒸餾水到100mllph8.00.5tbe2021-10-21226 6上樣緩沖液上樣緩沖液l0 02525溴酚藍(lán)：取溴酚藍(lán)：取60ml60ml三蒸水，將三蒸水，將250mg250mg溴酚藍(lán)溶解于其中溴酚藍(lán)溶解于其中l(wèi)4040(w(wv)v)蔗糖水溶液：在上述溶液中加蔗糖水溶液：在上述溶液中加入入40g40g蔗糖蔗糖2021-10-2123 illuminate the gel with

23、 uv light and then take pictures. by comparing product bands with bands from the known molecular-weight markers, you should be able to identify any product fragments which are of the appropriate molecular weight. 通過(guò)紫外透射儀檢測(cè)凝膠，然后獲取圖通過(guò)紫外透射儀檢測(cè)凝膠，然后獲取圖片。并將產(chǎn)物條帶與已知分子量的標(biāo)淮條帶片。并將產(chǎn)物條帶與已知分子量的標(biāo)淮條帶進(jìn)行比較，便可以對(duì)合適分子量大

24、小的產(chǎn)物進(jìn)行比較，便可以對(duì)合適分子量大小的產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。進(jìn)行鑒定。2021-10-2124五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(experimental results)2021-10-2125l哺乳動(dòng)物基因組哺乳動(dòng)物基因組dna的提取的提取 （綜合性實(shí)驗(yàn)報(bào)告）（綜合性實(shí)驗(yàn)報(bào)告）六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告2021-10-2126溶液溶液的配制的配制摩爾質(zhì)量的計(jì)算摩爾質(zhì)量的計(jì)算:質(zhì)量質(zhì)量(g)分子量分子量 5 mol5 moll nacl l nacl 分子量分子量58.4458.44 x58.44(1) 5mol/l氯化鈉（氯化鈉（naclnacl）：）： 溶解溶解14.6g14.6g氯化鈉于足量的水中，定

25、容至氯化鈉于足量的水中，定容至50ml50ml。 0.05(l) 5（mol/l） x 14.61（g）體積體積(l) 摩爾體積（摩爾體積（mol/l）2021-10-2127(2) 0.5mol/l(2) 0.5mol/l乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（edtaedta）: : 配制等摩爾的配制等摩爾的nana2 2edtaedta和和naohnaoh溶液（溶液（0.5mol/l0.5mol/l），），混合后形成混合后形成edtaedta的三鈉鹽?；蚍Q取的三鈉鹽?；蚍Q取9.31g9.31g的的nana2 2edta2hedta2h2 2o o和和1g1g的的naohnaoh，phph調(diào)至調(diào)至8.

26、08.0，并溶于，并溶于約約40ml40ml水中，定容至水中，定容至50ml 50ml 。（3) 3mol/l3) 3mol/l乙酸鈉（乙酸鈉（naacnaac）：）： 溶解溶解20.4g20.4g的三水乙酸鈉于約的三水乙酸鈉于約40ml40ml水中，用冰乙水中，用冰乙酸調(diào)溶液的酸調(diào)溶液的phph至至5.25.2，再加水定容到，再加水定容到50ml 50ml 。2021-10-2128(4) 10(4) 10十二烷基硫酸鈉（十二烷基硫酸鈉（sdssds）：）： 稱取稱取5gsds5gsds慢慢轉(zhuǎn)移到約含慢慢轉(zhuǎn)移到約含40ml40ml的水的燒杯中，用磁力的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解

27、。用水定容至攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至50ml 50ml 。(5) 40%(5) 40%氫氧化鈉（氫氧化鈉（naohnaoh）：）： 溶解溶解40g40g氫氧化鈉顆粒于約氫氧化鈉顆粒于約90ml90ml水的燒杯中（磁力攪拌水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至100ml 100ml 。(6) 1mol/l(6) 1mol/l鹽酸（鹽酸（hclhcl）：）： 加加8.6ml8.6ml的濃鹽酸至的濃鹽酸至91.4ml91.4ml的水中。的水中。2021-10-2129(7) 20mg/ml(7) 20mg/ml蛋白酶蛋白酶k k（p

28、roteinase kproteinase k）：）： 將將200mg200mg的蛋白酶的蛋白酶k k加入到加入到9.5ml9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶直至蛋白酶k k完全溶解。不要渦旋混合。加水定容完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到到10ml10ml，然后分裝成小份貯存于，然后分裝成小份貯存于-20-20。(8) 10mg/mlrnase(8) 10mg/mlrnase（無(wú)（無(wú)dnasednase）（）（dnasednasefree free rnasernase）：）： 溶解溶解10mg10mg的胰蛋白的胰蛋白rnarna酶于酶于1ml1ml的的10mmol/l10

29、mmol/l的乙酸鈉的乙酸鈉水溶液中（水溶液中（ph 5.0ph 5.0）。溶解后于水浴中煮沸）。溶解后于水浴中煮沸15min15min，使使dnadna酶失活。用酶失活。用1mol/l1mol/l的的tristrishclhcl調(diào)調(diào)phph至至7.57.5，于于-20-20貯存。（配制過(guò)程中要戴手套）貯存。（配制過(guò)程中要戴手套） 2021-10-2130(9)(9) 1 mol1 moll l tristris緩沖液（緩沖液（tristrishcl bufferhcl buffer） 將將121g121g的的tristris堿溶解于約堿溶解于約0.9l0.9l水中，再根據(jù)所要求的水中，再根據(jù)

30、所要求的phph（2525下）加一定量的濃鹽酸（下）加一定量的濃鹽酸（11.6n11.6n），用水調(diào)整終），用水調(diào)整終體積至體積至1l1l。 濃鹽酸的體積（ml）ph14148.68.6212128.528.5383846465656666671.371.376 76 9.09.08.88.88.68.68.48.48.28.28.08.07.87.87.67.67.47.47.2 7.2 2021-10-2131(10)5(10)5tbetbe（電泳緩沖液）（電泳緩沖液） 100ml100mll5.4gtris5.4gtris， l2.75g2.75g硼酸，硼酸， l2ml 0.5mol2m

31、l 0.5moll edta(ph8.0)l edta(ph8.0)l加加蒸餾蒸餾水到水到100ml 100ml ph8.0ph8.0(11) 6上樣緩沖液上樣緩沖液 0.25溴酚藍(lán)：取溴酚藍(lán)：取60ml雙蒸水，將雙蒸水，將250mg溴酚藍(lán)溶解于其中溴酚藍(lán)溶解于其中 40(wv)蔗糖水溶液：在上述溶液中加入蔗糖水溶液：在上述溶液中加入40g蔗糖蔗糖2021-10-2132（1212）組織勻漿液）組織勻漿液 （裝入（裝入10ml10ml離心管中）離心管中） 10ml10ml l100mmol100mmoll nacll nacl：0.2ml0.2ml（5m nacl5m nacl）l25 mmo

32、l25 mmoll edta(ph8.0)l edta(ph8.0)： 0.5ml0.5ml（ 0.5m 0.5m edta ph8.0)edta ph8.0)ll0mmoll0mmoll trisl tris hciph 8.0)hciph 8.0)：0.1ml0.1ml（1m 1m tristris hciph 8.0)hciph 8.0)l加三蒸水加三蒸水: 9.2ml: 9.2ml計(jì)算方法：計(jì)算方法：5 moll nacl 100mmoll 5 moll x 0.1moll 10ml 0.2ml 2021-10-2133（1313） 酶解液（裝入酶解液（裝入1.5ml1.5ml離心管中）離心管中） 1ml1mll200mmo