病毒感染的診斷與防治ppt第26章立克次氏體和衣原體

1、第26章立克次氏體和衣原體 第一節(jié)第一節(jié) 立克次體立克次體 對人致病的立克次體有五個屬立克次體屬、對人致病的立克次體有五個屬立克次體屬、柯克斯體屬、東方體屬、埃立克體屬和巴柯克斯體屬、東方體屬、埃立克體屬和巴通體屬。通體屬。 共同特點共同特點大多是人畜共患病原體，引起人類發(fā)熱和出大多是人畜共患病原體，引起人類發(fā)熱和出疹性疾病；疹性疾?。灰怨?jié)肢動物為傳播媒介或為儲存宿主；以節(jié)肢動物為傳播媒介或為儲存宿主；大小介于細(xì)菌與病毒之間，光鏡下呈多形態(tài)大小介于細(xì)菌與病毒之間，光鏡下呈多形態(tài)性，主要為微，桿狀或球桿狀，革蘭陰性；性，主要為微，桿狀或球桿狀，革蘭陰性；除了少數(shù)外全是專性活細(xì)胞內(nèi)寄生；除了少數(shù)外

2、全是專性活細(xì)胞內(nèi)寄生；菌體內(nèi)同時含有菌體內(nèi)同時含有dnadna和和 rnarna兩類核酸；兩類核酸；以二分裂方式進(jìn)行繁殖；以二分裂方式進(jìn)行繁殖；對抗生素敏感。對抗生素敏感。 一、斑疹傷寒立克次體 (一一)臨床意義臨床意義 1普氏立克次體是流行性斑疹傷寒普氏立克次體是流行性斑疹傷寒(又稱虱傳又稱虱傳 斑疹傷寒斑疹傷寒)的病原體。的病原體。 病人是惟一的傳染源，體虱是主要傳播媒病人是惟一的傳染源，體虱是主要傳播媒介，介， 而非儲存宿主。而非儲存宿主。 傳播方式為虱傳播方式為虱-人人-虱，體虱僅是傳染媒介。虱，體虱僅是傳染媒介。莫氏立克次體莫氏立克次體n地方性斑疹傷寒地方性斑疹傷寒(又稱鼠型斑疹傷寒

3、又稱鼠型斑疹傷寒)的病原的病原體。嚙齒類動物是主宿主，傳播媒介是鼠體。嚙齒類動物是主宿主，傳播媒介是鼠蚤或鼠虱。蚤或鼠虱。n鼠蚤叮咬人體時，常排糞于皮膚上，斑疹傷鼠蚤叮咬人體時，常排糞于皮膚上，斑疹傷寒立克次體從抓破的傷口進(jìn)入人體。若有人寒立克次體從抓破的傷口進(jìn)入人體。若有人虱寄生，可通過人虱為傳播媒介，繼發(fā)性地虱寄生，可通過人虱為傳播媒介，繼發(fā)性地在人群中傳播。在人群中傳播。 致病物質(zhì)致病物質(zhì)n有兩種，其一是內(nèi)毒素，主要成分為脂多糖有兩種，其一是內(nèi)毒素，主要成分為脂多糖(lps)；其二為磷脂酶；其二為磷脂酶a,能損傷宿主細(xì)胞膜能損傷宿主細(xì)胞膜及溶解胞內(nèi)吞噬體膜，以利于病原體穿入宿及溶解胞內(nèi)吞

4、噬體膜，以利于病原體穿入宿主細(xì)胞并在其中生長。主細(xì)胞并在其中生長。n普氏和莫氏立克次體所致的斑疹傷寒癥狀相普氏和莫氏立克次體所致的斑疹傷寒癥狀相似，以高熱、頭痛、全身皮疹為主要特征。似，以高熱、頭痛、全身皮疹為主要特征。伴有神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等癥狀和實質(zhì)性伴有神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等癥狀和實質(zhì)性器官損傷。器官損傷。 (二二)微生物特性微生物特性1. 比細(xì)菌小，呈多形態(tài)性，在感染細(xì)胞內(nèi)聚比細(xì)菌小，呈多形態(tài)性，在感染細(xì)胞內(nèi)聚 集成團集成團,分布在胞質(zhì)內(nèi)分布在胞質(zhì)內(nèi), gimenez法染色后法染色后 呈紅色，外表含有微莢膜結(jié)構(gòu)。呈紅色，外表含有微莢膜結(jié)構(gòu)。2. 必須在真核細(xì)胞內(nèi)才能生長繁殖，培養(yǎng)時必

5、須在真核細(xì)胞內(nèi)才能生長繁殖，培養(yǎng)時 需要需要c02。通常采用。通常采用5-9日齡雞胚作卵黃囊日齡雞胚作卵黃囊接種，于接種，于32-35孵育孵育413d內(nèi)死亡，雞內(nèi)死亡，雞胚死亡時間與接種劑量大小呈直接相關(guān)。普胚死亡時間與接種劑量大小呈直接相關(guān)。普氏和莫氏立克次體能在多種單層細(xì)胞上生長氏和莫氏立克次體能在多種單層細(xì)胞上生長繁殖。豚鼠可作立克次體的初代分離。繁殖。豚鼠可作立克次體的初代分離。3.有群特異性和種特異性兩種抗原。大部分有群特異性和種特異性兩種抗原。大部分立克次體與普通變形桿菌立克次體與普通變形桿菌x菌株的菌體耐菌株的菌體耐熱多糖抗原有共同的抗原性，故可用這些熱多糖抗原有共同的抗原性，故

6、可用這些菌株代替立克次體抗原進(jìn)行凝集反應(yīng)去檢菌株代替立克次體抗原進(jìn)行凝集反應(yīng)去檢測抗體，這種交叉凝集試驗被稱為外斐反測抗體，這種交叉凝集試驗被稱為外斐反應(yīng)，可供輔助診斷。應(yīng)，可供輔助診斷。 外斐反應(yīng)外斐反應(yīng) 立克次體病立克次體病 變形桿菌變形桿菌 ox19ox19變形桿菌變形桿菌 ox2ox2變形桿菌變形桿菌 oxkoxk流行性斑疹傷寒流行性斑疹傷寒 + +- -地方性斑疹傷寒地方性斑疹傷寒 + +- -斑點熱斑點熱+/+/+/+ +/+ +- -恙蟲病恙蟲病- - -+腺熱腺熱- - -+( (三三) )微生物檢驗微生物檢驗1.1.標(biāo)本采集標(biāo)本采集(1)(1)病人血液標(biāo)本：發(fā)熱期均有立克次體

7、血癥，病人血液標(biāo)本：發(fā)熱期均有立克次體血癥， 在急性期較易檢出立克次體。爭取在用抗生在急性期較易檢出立克次體。爭取在用抗生 素前采血，立即床側(cè)接種。素前采血，立即床側(cè)接種。(2)(2)活檢或尸檢材料：肺、肝、脾、淋巴結(jié)、心活檢或尸檢材料：肺、肝、脾、淋巴結(jié)、心 瓣膜等標(biāo)本。瓣膜等標(biāo)本。 2.2.標(biāo)本直接檢查標(biāo)本直接檢查(1)免疫熒光檢測免疫熒光檢測 用于臟器檢查。制備標(biāo)本片用于臟器檢查。制備標(biāo)本片薄而均勻，組織結(jié)構(gòu)清晰，固定后用熒光抗薄而均勻，組織結(jié)構(gòu)清晰，固定后用熒光抗體染色體染色, 常見脾、肺及心瓣膜中有立克次體，常見脾、肺及心瓣膜中有立克次體，也可在肝、腎及皮疹活檢組織中檢出。也可在肝、

8、腎及皮疹活檢組織中檢出。(2)核酸檢測核酸檢測 pcr敏感性高，所需樣品量只需敏感性高，所需樣品量只需elisa實驗的實驗的15。以編碼。以編碼17kd蛋白的基因蛋白的基因和編碼普氏和莫氏立克次體和編碼普氏和莫氏立克次體169kd蛋白的基因蛋白的基因作為擴增靶區(qū)。作為擴增靶區(qū)。n引物引物r17-1、-2在在65條件下能擴增普氏和莫條件下能擴增普氏和莫氏立克次體氏立克次體dna。在瓊脂凝膠上產(chǎn)生一條。在瓊脂凝膠上產(chǎn)生一條340bp的核酸帶；的核酸帶；n引物引物r169-1、-2僅能擴增普氏立克次體僅能擴增普氏立克次體dna，產(chǎn)生一條產(chǎn)生一條432bp的核酸帶。兩種引物同時使的核酸帶。兩種引物同時

9、使用，擴增后普氏可產(chǎn)生用，擴增后普氏可產(chǎn)生340bp和和432bp兩條帶，兩條帶，而莫氏只產(chǎn)生而莫氏只產(chǎn)生340bp一條帶。一條帶。n該法敏感性可達(dá)該法敏感性可達(dá)005ngdna水平，重復(fù)性水平，重復(fù)性好，操作方便，對兩型立克次體早期、鑒別好，操作方便，對兩型立克次體早期、鑒別診斷以及自然生態(tài)宿主調(diào)查研究具有較大價診斷以及自然生態(tài)宿主調(diào)查研究具有較大價值。值。3 3分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)(1)動物接種動物接種 選用健康雄性豚鼠接種以便觀察陰囊腫脹現(xiàn)選用健康雄性豚鼠接種以便觀察陰囊腫脹現(xiàn)象。每日測體溫，至象。每日測體溫，至40發(fā)熱時采血或臟器發(fā)熱時采血或臟器懸液、接種雞胚卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)以分離立懸液、

10、接種雞胚卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)以分離立克次體；克次體； 感染莫氏立克次體豚鼠在發(fā)熱感染莫氏立克次體豚鼠在發(fā)熱12日內(nèi)出現(xiàn)日內(nèi)出現(xiàn)陰囊紅腫，解剖可見腹股溝淋巴結(jié)腫大、充陰囊紅腫，解剖可見腹股溝淋巴結(jié)腫大、充血、脾大血、脾大2-3倍，有腹水；有陰囊反應(yīng)者，睪倍，有腹水；有陰囊反應(yīng)者，睪丸有小出血點，鞘膜充血并有漿液性滲出物丸有小出血點，鞘膜充血并有漿液性滲出物等。鞘膜涂片可查到立克次體。等。鞘膜涂片可查到立克次體。(2)(2)鑒定鑒定n用免疫熒光法鑒定感染動物臟器、雞胚卵用免疫熒光法鑒定感染動物臟器、雞胚卵黃囊、細(xì)胞培養(yǎng)物中的特異性抗原以已知黃囊、細(xì)胞培養(yǎng)物中的特異性抗原以已知抗原測定動物恢復(fù)期血清中的

11、相應(yīng)抗體?？乖瓬y定動物恢復(fù)期血清中的相應(yīng)抗體。必要時用補體結(jié)合試驗、微量凝集試驗等，必要時用補體結(jié)合試驗、微量凝集試驗等，作群和種的鑒定。作群和種的鑒定。(3)(3)分離株繁殖及保存分離株繁殖及保存雞胚卵黃囊培養(yǎng)雞胚卵黃囊培養(yǎng) 收獲卵黃囊，經(jīng)涂片染收獲卵黃囊，經(jīng)涂片染色鏡檢色鏡檢, 含立克次體較多而又未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌含立克次體較多而又未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌的卵黃囊膜，或?qū)⑵渥鞒蛇m當(dāng)濃度的懸的卵黃囊膜，或?qū)⑵渥鞒蛇m當(dāng)濃度的懸液置液置-70冰箱保存，或冰凍干燥保藏；冰箱保存，或冰凍干燥保藏；細(xì)胞培養(yǎng)：選雞胚、成纖維、人羊膜、細(xì)胞培養(yǎng)：選雞胚、成纖維、人羊膜、hela等細(xì)胞，接種培養(yǎng)、鑒定后將立克等細(xì)胞，接種培養(yǎng)、鑒

12、定后將立克次體大量繁殖的感染細(xì)胞置次體大量繁殖的感染細(xì)胞置-70儲存。儲存。 4 4抗體檢測抗體檢測立克次體病常用的血清學(xué)診斷方法除外斐立克次體病常用的血清學(xué)診斷方法除外斐反應(yīng)、間接免疫熒光反應(yīng)、間接免疫熒光(ifa )試驗、酶聯(lián)免試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗疫吸附試驗(elisa)外，還有補體結(jié)合外，還有補體結(jié)合(cf)試驗、微量凝集試驗、微量凝集(ma)試驗、間接血凝試驗、間接血凝(iha)試驗、膠乳凝集試驗、膠乳凝集(la)試驗等試驗等 。(1)(1)外斐反應(yīng)外斐反應(yīng)除除q熱、立克次體痘及羅沙利馬體感染為陰性熱、立克次體痘及羅沙利馬體感染為陰性外，其他為陽性。外，其他為陽性?；颊呋颊遫x凝集素

13、上升較晚，在病程凝集素上升較晚，在病程2周左右方出周左右方出現(xiàn)陽性，病程中雙份血清試驗，若效價有現(xiàn)陽性，病程中雙份血清試驗，若效價有4倍倍增長，方有診斷意義。增長，方有診斷意義。有些病例在病程中效價不見上升，約有些病例在病程中效價不見上升，約15的的經(jīng)疫苗接種后感染斑疹傷寒的病例。有些經(jīng)疫苗接種后感染斑疹傷寒的病例。有些輕癥斑疹傷寒或某些發(fā)病嚴(yán)重者，其他血輕癥斑疹傷寒或某些發(fā)病嚴(yán)重者，其他血清學(xué)試驗陽性，但外斐反應(yīng)可為陰性。清學(xué)試驗陽性，但外斐反應(yīng)可為陰性。斑點熱病人外斐反應(yīng)效價通常為斑點熱病人外斐反應(yīng)效價通常為ox19高于高于ox2，但也有，但也有ox2較高者。若僅出現(xiàn)較高者。若僅出現(xiàn)ox2

14、陽性，則對診斷斑點熱有特殊意義。陽性，則對診斷斑點熱有特殊意義。 (2)ifa試驗試驗為現(xiàn)在診斷立克次體病常用的方法。用已知為現(xiàn)在診斷立克次體病常用的方法。用已知立克次體抗原立克次體抗原( (感染雞胚卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)感染雞胚卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)懸液懸液) )制片，以低稀釋度的病人血清初篩，制片，以低稀釋度的病人血清初篩，有呈典型立克次體形態(tài)的明亮熒光顆粒者，有呈典型立克次體形態(tài)的明亮熒光顆粒者，判為陽性。再將病程早期及晚期血清分別作判為陽性。再將病程早期及晚期血清分別作雙倍或雙倍或4 4倍稀釋以測效價，如呈倍稀釋以測效價，如呈4 48 8倍增長倍增長者可明確診斷。者可明確診斷。(3)elisan檢

15、測檢測igmigm抗體對早期診斷有價值?？贵w對早期診斷有價值。n立克次體抗原吸附于載體。泛影葡胺梯度離心純化立克次體抗原吸附于載體。泛影葡胺梯度離心純化抗原為優(yōu)，檢出血清的抗體效價高，紙上抗原為優(yōu)，檢出血清的抗體效價高，紙上elisaelisa測測定抗體，方法簡便。將感染卵黃囊懸液加于玻片定抗體，方法簡便。將感染卵黃囊懸液加于玻片( (經(jīng)氯仿經(jīng)氯仿甲醇洗凈甲醇洗凈) )上，涼干、固定，加稀釋血清上，涼干、固定，加稀釋血清于抗原點上，每張玻片上包括陽性和陰性對照，加于抗原點上，每張玻片上包括陽性和陰性對照，加酶標(biāo)兔抗人酶標(biāo)兔抗人igm/gigm/g于抗原于抗原血清點作用后，將浸透新血清點作用后，

16、將浸透新鮮配制的底物無灰濾紙覆蓋在玻片上約鮮配制的底物無灰濾紙覆蓋在玻片上約4-6min4-6min，可，可見濾紙條上陽性對照點位置顯紫棕色，取下濾紙條見濾紙條上陽性對照點位置顯紫棕色，取下濾紙條( (即終止反應(yīng)即終止反應(yīng)) )，觀察是否顯色，與對照比較判定結(jié)，觀察是否顯色，與對照比較判定結(jié)果。此法簡便，并可保存實驗記錄。果。此法簡便，并可保存實驗記錄。(4)cf試驗試驗 cf試驗原來是立克次體病血清學(xué)診斷的試驗原來是立克次體病血清學(xué)診斷的經(jīng)典試驗，雖然敏感性不如經(jīng)典試驗，雖然敏感性不如ifa和和 elisa，但非常特異。一般在立克次體病發(fā)病一周內(nèi)，但非常特異。一般在立克次體病發(fā)病一周內(nèi)，血清

17、中即有血清中即有cf抗體出現(xiàn)，以后逐漸上升，抗體出現(xiàn)，以后逐漸上升，至第至第3周達(dá)最高峰，然后逐漸降至較低的效周達(dá)最高峰，然后逐漸降至較低的效價，并可保持幾年不消失，但也有在病后幾價，并可保持幾年不消失，但也有在病后幾周即轉(zhuǎn)陰性者。病人恢復(fù)期血清與斑疹傷寒周即轉(zhuǎn)陰性者。病人恢復(fù)期血清與斑疹傷寒群及斑點熱群立克次體可溶性抗原試驗的陽群及斑點熱群立克次體可溶性抗原試驗的陽性結(jié)果，只能說明該群立克次體的感染性結(jié)果，只能說明該群立克次體的感染 。三、恙蟲病立克次體三、恙蟲病立克次體 又名東方立克次體是恙蟲病的病原體，由恙又名東方立克次體是恙蟲病的病原體，由恙螨叮咬侵入人體，對人體致病性很強，釋放螨叮咬

18、侵入人體，對人體致病性很強，釋放的毒素樣物質(zhì)是主要致病因素，引起發(fā)熱皮的毒素樣物質(zhì)是主要致病因素，引起發(fā)熱皮疹全身中毒癥狀，以及全身淋巴結(jié)腫大及各疹全身中毒癥狀，以及全身淋巴結(jié)腫大及各組織器官的血管炎病變。蟲咬處潰瘍形成黑組織器官的血管炎病變。蟲咬處潰瘍形成黑色焦痂，周圍有紅暈等為其特征。為自然疫色焦痂，周圍有紅暈等為其特征。為自然疫源性疾病。源性疾病。(一一)微生物特性微生物特性1具有多形性，但以短桿狀為常見。具有多形性，但以短桿狀為常見。g-,姬姆姬姆 薩染色呈紫紅色薩染色呈紫紅色, gimenez染色呈暗紅色，染色呈暗紅色， 背景為綠色?？梢澡b別恙蟲病立克次體和背景為綠色。可以鑒別恙蟲病

19、立克次體和 其他立克次體。分布在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，密集于其他立克次體。分布在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，密集于 細(xì)胞核旁。細(xì)胞內(nèi)寄生細(xì)胞核旁。細(xì)胞內(nèi)寄生。2培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性(1)動物接種：小鼠最敏感，刮取腹膜上的粘動物接種：小鼠最敏感，刮取腹膜上的粘液涂片檢查，可見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量立克次液涂片檢查，可見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量立克次體，尤以腹膜上皮細(xì)胞內(nèi)多見，常密集于體，尤以腹膜上皮細(xì)胞內(nèi)多見，常密集于細(xì)胞核旁。細(xì)胞核旁。(2)細(xì)胞培養(yǎng)：恙蟲病立克次體可以在多種細(xì)細(xì)胞培養(yǎng)：恙蟲病立克次體可以在多種細(xì)胞內(nèi)生長、繁殖，多采用胞內(nèi)生長、繁殖，多采用vero、l929細(xì)胞細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞感染需要適宜的溫度和吸進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞感染需要適宜的

20、溫度和吸附時間，通常以附時間，通常以37吸附吸附1h，培養(yǎng)，培養(yǎng)32為為宜，繁殖緩慢，用宜，繁殖緩慢，用vero細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)89d，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生長繁殖，在細(xì)胞核旁高度密在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生長繁殖，在細(xì)胞核旁高度密集，但不侵入細(xì)胞核。集，但不侵入細(xì)胞核。3 3抗原成分抗原成分n恙蟲病立克次體具有耐熱性多糖抗原和特異恙蟲病立克次體具有耐熱性多糖抗原和特異性抗原。性抗原。n恙蟲病立克次體和變形桿菌恙蟲病立克次體和變形桿菌oxk株有共同的株有共同的抗原成分，在抗原成分，在weil-felex反應(yīng)中，血清與反應(yīng)中，血清與ox，抗原發(fā)生凝集而不與抗原發(fā)生凝集而不與ox19、ox2發(fā)生凝集。發(fā)生凝集。( (二二

21、) )微生物檢驗微生物檢驗(1)抗原檢測：抗原檢測：elisa間接法是檢測標(biāo)本的特異間接法是檢測標(biāo)本的特異性抗原或抗體的最常用方法。性抗原或抗體的最常用方法。(2)pcr：可檢出：可檢出20ng恙蟲病立克次體恙蟲病立克次體dna；套；套式式pcr法可檢出法可檢出200pg，是目前最為快速、特，是目前最為快速、特異、敏感的實驗室診斷方法，可用于急性期異、敏感的實驗室診斷方法，可用于急性期患者的早期診斷?；颊叩脑缙谠\斷。依據(jù)依據(jù)56kd蛋白抗原基因或蛋白抗原基因或58kd蛋白抗原基因蛋白抗原基因序列選擇引物，進(jìn)行目的序列選擇引物，進(jìn)行目的 dna 擴增，然后用擴增，然后用15瓊脂糖電泳法檢出特異性

22、瓊脂糖電泳法檢出特異性dna帶。帶。(3)分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 接種小鼠分離病原。將標(biāo)本接種腹腔接種小鼠分離病原。將標(biāo)本接種腹腔o5ml，一般多在，一般多在718天死亡，感染小天死亡，感染小鼠有明顯癥狀，瀕死前解剖，可見皮下淋鼠有明顯癥狀，瀕死前解剖，可見皮下淋巴結(jié)腫大充血，脾腫大，有粘稠的腹腔滲巴結(jié)腫大充血，脾腫大，有粘稠的腹腔滲出液，以出液，以giemsa染色鏡檢，在靠近細(xì)胞核染色鏡檢，在靠近細(xì)胞核旁邊可見成堆排列的立克次體。也可接種旁邊可見成堆排列的立克次體。也可接種vero細(xì)胞、細(xì)胞、l929細(xì)胞進(jìn)行立克次體分離培細(xì)胞進(jìn)行立克次體分離培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)1015天，取細(xì)胞涂片，天，取

23、細(xì)胞涂片，giemsa染色鏡檢。染色鏡檢。(4)抗體檢測抗體檢測n外斐試驗：臨床血清學(xué)診斷方法，血清抗外斐試驗：臨床血清學(xué)診斷方法，血清抗體體oxk效價達(dá)效價達(dá)l：160以上有意義，病程中雙以上有意義，病程中雙份或多份血清試驗，若效價有份或多份血清試驗，若效價有4倍增高，有倍增高，有診斷意義。由于外斐試驗特異性、敏感性診斷意義。由于外斐試驗特異性、敏感性低，容易造成誤診或漏診，不應(yīng)作為恙蟲低，容易造成誤診或漏診，不應(yīng)作為恙蟲病的診斷方法。病的診斷方法。n免疫熒光試驗：快速敏感特異，可分別檢免疫熒光試驗：快速敏感特異，可分別檢測患者血清中的抗恙蟲病立克次體測患者血清中的抗恙蟲病立克次體lgg、i

24、gm抗體，效價在抗體，效價在1：80以上有診斷意義。以上有診斷意義。雙份血清有雙份血清有4倍或以上增長可以確診。倍或以上增長可以確診。四、貝納柯克斯體四、貝納柯克斯體n又稱又稱q q熱立克次體，是引起熱立克次體，是引起q q熱熱( (疑問熱，指最疑問熱，指最初不明病因的發(fā)熱初不明病因的發(fā)熱) )的病原體。的病原體。n傳染源主要是受染的牛、羊等家畜，以蜱為傳染源主要是受染的牛、羊等家畜，以蜱為傳播媒介，對人感染力特別強，通過接觸、傳播媒介，對人感染力特別強，通過接觸、呼吸道、消化道等途徑使人及動物發(fā)生感染。呼吸道、消化道等途徑使人及動物發(fā)生感染。nq q熱除有發(fā)熱、頭痛及肌肉痛外，以出現(xiàn)肺炎熱除

25、有發(fā)熱、頭痛及肌肉痛外，以出現(xiàn)肺炎和肝炎為其臨床特征。和肝炎為其臨床特征。n慢性慢性q q熱主要表現(xiàn)為心內(nèi)膜炎。熱主要表現(xiàn)為心內(nèi)膜炎。 （一）微生物特性（一）微生物特性1.形態(tài)與結(jié)構(gòu)形態(tài)與結(jié)構(gòu) 個體較小，多為短桿狀，常排列個體較小，多為短桿狀，常排列成對，成對，gimenez法染色呈紅色，背景呈綠色，法染色呈紅色，背景呈綠色，用用giemsa法染色呈紫紅色。有莢膜，在雞胚法染色呈紫紅色。有莢膜，在雞胚卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)均可有芽胞形成。卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)均可有芽胞形成。2.基因組與抗原成分基因組與抗原成分 基因組分子量為大腸桿菌基因組分子量為大腸桿菌的的13；編碼代謝酶、表面抗原與毒力因子；編碼

26、代謝酶、表面抗原與毒力因子有關(guān)基因。有兩相抗原，有關(guān)基因。有兩相抗原，相為光滑型相為光滑型lps，相為粗糙型短鏈相為粗糙型短鏈lps。3培養(yǎng)特點培養(yǎng)特點雞胚是培養(yǎng)的極好宿主。一般經(jīng)培養(yǎng)雞胚是培養(yǎng)的極好宿主。一般經(jīng)培養(yǎng)1012d，1g卵黃囊膜常可獲得約卵黃囊膜?？色@得約1000g純凈純凈的立克次體能在多種人和動物的原代或傳的立克次體能在多種人和動物的原代或傳代細(xì)胞內(nèi)繁殖。一般不引起明顯的細(xì)胞病代細(xì)胞內(nèi)繁殖。一般不引起明顯的細(xì)胞病變。變。4抵抗力抵抗力n貝納柯克斯體抵抗力強，貝納柯克斯體抵抗力強，70 -90加熱加熱3060min尚難殺死。尚難殺死。n1%福爾馬林作用福爾馬林作用24小時也不能完全

27、滅活。小時也不能完全滅活。對氯霉素和四環(huán)素類抗生素敏感。對氯霉素和四環(huán)素類抗生素敏感。(二二)微生物檢驗微生物檢驗 (1)標(biāo)本直接抗原檢測：免疫熒光法進(jìn)行檢測。標(biāo)本直接抗原檢測：免疫熒光法進(jìn)行檢測。(2)標(biāo)本直接核酸檢查：按標(biāo)本直接核酸檢查：按16srrna非保守區(qū)非保守區(qū)序列合成寡核苷酸探針，能檢出序列合成寡核苷酸探針，能檢出5pgrrna，如將非保守區(qū)特異性擴增，其敏感性可達(dá)如將非保守區(qū)特異性擴增，其敏感性可達(dá)檢出檢出110個貝納柯克斯體的水平。個貝納柯克斯體的水平。 用貝納柯克斯休質(zhì)粒用貝納柯克斯休質(zhì)粒dna片段制備的探針，片段制備的探針，不僅能快速檢出病原體，且能鑒別含不僅能快速檢出病

28、原體，且能鑒別含qphi或或qprs質(zhì)粒分離株，與呼吸道感染病原體質(zhì)粒分離株，與呼吸道感染病原體dna無交叉反應(yīng)。試驗僅需無交叉反應(yīng)。試驗僅需812h即可得即可得到結(jié)果。到結(jié)果。3分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)n病原體分離只是在該地區(qū)尚未證明有病原體分離只是在該地區(qū)尚未證明有q熱存在，病情特別嚴(yán)重有必要。將標(biāo)本熱存在，病情特別嚴(yán)重有必要。將標(biāo)本接種于豚鼠或培養(yǎng)細(xì)胞，觀察其發(fā)病與接種于豚鼠或培養(yǎng)細(xì)胞，觀察其發(fā)病與否或生長情況，經(jīng)形態(tài)學(xué)、血清免疫學(xué)否或生長情況，經(jīng)形態(tài)學(xué)、血清免疫學(xué)等鑒定后作出結(jié)論等鑒定后作出結(jié)論 。4抗體檢測抗體檢測 用間接免疫熒光試驗、用間接免疫熒光試驗、elisa和和cf試驗。試驗。 cf

29、試驗中抗原相的選擇對結(jié)果影響極大，對試驗中抗原相的選擇對結(jié)果影響極大，對現(xiàn)癥診斷主要看現(xiàn)癥診斷主要看相抗體逐漸上升，若相抗體逐漸上升，若相相抗體保持較高水平，則往往說明慢性感染或抗體保持較高水平，則往往說明慢性感染或隱性感染。隱性感染。 五、埃立克體五、埃立克體(一一)臨床意義為埃立克體病病原體。臨床意義為埃立克體病病原體。1.人腺熱埃立克體病人腺熱埃立克體病 可能由蜱傳播，也可能由蜱傳播，也 可能由于攝食生魚引起。臨床表現(xiàn)為發(fā)可能由于攝食生魚引起。臨床表現(xiàn)為發(fā) 熱頭痛、淋巴細(xì)胞數(shù)增加，并出現(xiàn)非典熱頭痛、淋巴細(xì)胞數(shù)增加，并出現(xiàn)非典 型淋巴細(xì)胞。型淋巴細(xì)胞。2.人單核細(xì)胞埃立克體人單核細(xì)胞埃立克

30、體(hme)病，主要侵病，主要侵 染人的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。傳播媒介染人的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。傳播媒介 為蜱。為蜱。 3人粒細(xì)胞埃立克體人粒細(xì)胞埃立克體(hge)病病 主要侵犯人主要侵犯人 粒細(xì)胞。硬蜱是傳播媒介。也是萊姆病粒細(xì)胞。硬蜱是傳播媒介。也是萊姆病 病原體的攜帶和傳播者，故與萊姆病的病原體的攜帶和傳播者，故與萊姆病的 相重疊。相重疊。 （二）微生物特性二）微生物特性1為為g-小球菌，呈多形性，小球菌，呈多形性，romanows染染 色呈蘭色和紫色。吞噬細(xì)胞以內(nèi)吞的方色呈蘭色和紫色。吞噬細(xì)胞以內(nèi)吞的方 式將埃立克體攝入胞內(nèi)，在胞質(zhì)內(nèi)以二式將埃立克體攝入胞內(nèi)，在胞質(zhì)內(nèi)以二 分裂的方式繁殖

31、，形成包涵體。稱為桑分裂的方式繁殖，形成包涵體。稱為桑 椹體。椹體。2基因組基因組 埃立克體的埃立克體的16srrna基因極保守，基因極保守， 但但5端的端的50100堿基為高變區(qū)，適合設(shè)計堿基為高變區(qū)，適合設(shè)計 pcr引物或核酸雜交探針。人粒細(xì)胞埃立引物或核酸雜交探針。人粒細(xì)胞埃立 克體的外膜蛋白克體的外膜蛋白44kda蛋白被克隆，可用蛋白被克隆，可用 作探針。作探針。3抗原成分抗原成分 在埃立克體屬內(nèi)的各種埃立克在埃立克體屬內(nèi)的各種埃立克 體均可有血清學(xué)交叉反應(yīng)。體均可有血清學(xué)交叉反應(yīng)。 (三三)微生物檢驗微生物檢驗 1.標(biāo)本直接顯微鏡檢查標(biāo)本直接顯微鏡檢查 采集病人的外周血制備血片，經(jīng)采

32、集病人的外周血制備血片，經(jīng)giemsa或或wright染色，在光鏡下發(fā)現(xiàn)粒細(xì)胞及染色，在光鏡下發(fā)現(xiàn)粒細(xì)胞及單核細(xì)胞質(zhì)或血小板內(nèi)有圓形、深紫色單核細(xì)胞質(zhì)或血小板內(nèi)有圓形、深紫色的桑椹體，可作為急性期埃立克體病的的桑椹體，可作為急性期埃立克體病的一種簡便和有效的輔助診斷方法。一種簡便和有效的輔助診斷方法。2.核酸檢測核酸檢測 pcr是最有效的埃立克體病的病原學(xué)診斷方是最有效的埃立克體病的病原學(xué)診斷方法，可用于埃立克體病的早期診斷。大約法，可用于埃立克體病的早期診斷。大約80-87hme和和43-75的的hge患者的血標(biāo)患者的血標(biāo)本被本被pcr檢測為陽性。檢測為陽性。 特異性幾乎為特異性幾乎為100

33、，主要依賴引物的特異性。，主要依賴引物的特異性。可用可用16srrna基因設(shè)計引物或做基因探針。基因設(shè)計引物或做基因探針。有極高的敏感性，感染后數(shù)天就可檢出陽性有極高的敏感性，感染后數(shù)天就可檢出陽性結(jié)果。結(jié)果。 3.細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)n查菲埃立克體可用犬巨噬細(xì)胞系查菲埃立克體可用犬巨噬細(xì)胞系(dh82)，腺，腺熱埃立克體用小鼠的巨噬細(xì)胞系熱埃立克體用小鼠的巨噬細(xì)胞系(p388d1)，人粒細(xì)胞埃立克體則用人的粒細(xì)胞白血病細(xì)人粒細(xì)胞埃立克體則用人的粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系胞系(hl-60)作它們的體外培養(yǎng)的宿主細(xì)胞。作它們的體外培養(yǎng)的宿主細(xì)胞。n將將3ml抗凝血的白細(xì)胞層，接種細(xì)胞單層，置抗凝血的白細(xì)胞層

34、，接種細(xì)胞單層，置 37的的5c02孵育箱中培養(yǎng)，每隔孵育箱中培養(yǎng)，每隔3-4天換一天換一次細(xì)胞維持液，并刮少許細(xì)胞涂片，用次細(xì)胞維持液，并刮少許細(xì)胞涂片，用giemsa染色，在光鏡下檢查埃立克體包涵體。染色，在光鏡下檢查埃立克體包涵體。4.小鼠接種小鼠接種 從蜱體內(nèi)分離埃立克體讓蜱叮咬小鼠和吸血。從蜱體內(nèi)分離埃立克體讓蜱叮咬小鼠和吸血?；?qū)⒉∪嘶騽游锏目鼓陌准?xì)胞注入小鼠或?qū)⒉∪嘶騽游锏目鼓陌准?xì)胞注入小鼠腹腔。觀察小鼠發(fā)病。腹腔。觀察小鼠發(fā)病。 定時采小鼠血作涂片染色、定時采小鼠血作涂片染色、ifa、pcr等證明等證明小鼠被埃立克體感染，用腹腔液涂片染色鏡小鼠被埃立克體感染，用腹腔液涂

35、片染色鏡檢包涵體。檢包涵體。 5.抗體檢測抗體檢測(1)間接免疫熒光間接免疫熒光(1fa)： 將感染血清作倍比稀釋，加入抗原孔內(nèi)，將感染血清作倍比稀釋，加入抗原孔內(nèi)， 置濕盒置濕盒37孵育孵育lh；玻片沖洗后，用；玻片沖洗后，用 evans藍(lán)作背景染色，然后每孔加一滴固藍(lán)作背景染色，然后每孔加一滴固 定液，加蓋玻片，在熒光顯微鏡下檢查感定液，加蓋玻片，在熒光顯微鏡下檢查感 染細(xì)胞內(nèi)的帶熒光的包涵體，通常血清中染細(xì)胞內(nèi)的帶熒光的包涵體，通常血清中 抗體滴度抗體滴度 1：20為陽性。若獲雙份血清效為陽性。若獲雙份血清效 價增高價增高4倍以上即可明確診斷。倍以上即可明確診斷。(2)(2)免疫印跡免疫

36、印跡 采用免疫印跡檢測埃立克體病患者血清采用免疫印跡檢測埃立克體病患者血清 中抗埃立克體主要抗原組分的抗體，可中抗埃立克體主要抗原組分的抗體，可 以改善血清學(xué)檢測的特異性。經(jīng)免疫印以改善血清學(xué)檢測的特異性。經(jīng)免疫印 跡分析發(fā)現(xiàn)跡分析發(fā)現(xiàn)hmehme患者血清中含有抗查菲患者血清中含有抗查菲 埃立克體的埃立克體的44kda44kda抗原組分的抗原組分的iggigg抗體?？贵w。 但不能用于埃立克體病的早期診斷。但不能用于埃立克體病的早期診斷。 六、漢賽巴通體六、漢賽巴通體 n引起桿菌性血管瘤引起桿菌性血管瘤桿菌性紫癜桿菌性紫癜(bap)和和貓抓病貓抓病(csd)的病原體。常在免疫缺陷病的病原體。常在

37、免疫缺陷病毒毒(hiv)感染者發(fā)生，也感染有免疫潛能感染者發(fā)生，也感染有免疫潛能的人群，與接觸貓有關(guān)。為的人群，與接觸貓有關(guān)。為g-營養(yǎng)要求營養(yǎng)要求苛刻的需氧桿菌，為兼性胞內(nèi)寄生菌?？量痰男柩鯒U菌，為兼性胞內(nèi)寄生菌。n貓抓病有與貓接觸史，抓咬部位形成丘貓抓病有與貓接觸史，抓咬部位形成丘疹膿皰，繼而出現(xiàn)淋巴結(jié)腫大，約疹膿皰，繼而出現(xiàn)淋巴結(jié)腫大，約10病例有肉芽腫性結(jié)膜炎、骨質(zhì)溶解、肺病例有肉芽腫性結(jié)膜炎、骨質(zhì)溶解、肺炎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害等。炎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害等。桿菌性血管瘤桿菌性血管瘤- -桿菌性紫癜桿菌性紫癜n常在免疫低下者發(fā)生。與貓抓傷咬傷有關(guān)，常在免疫低下者發(fā)生。與貓抓傷咬傷有關(guān)，主要表

38、現(xiàn)為皮膚損害和內(nèi)臟發(fā)生紫癜。在主要表現(xiàn)為皮膚損害和內(nèi)臟發(fā)生紫癜。在病變處能發(fā)現(xiàn)桿菌狀小體。開始皮膚出現(xiàn)病變處能發(fā)現(xiàn)桿菌狀小體。開始皮膚出現(xiàn)紅丘疹，偶有潰瘍。皮下出現(xiàn)肉色結(jié)節(jié)。紅丘疹，偶有潰瘍。皮下出現(xiàn)肉色結(jié)節(jié)。n桿菌性血管瘤可發(fā)生在任何實質(zhì)性器官，桿菌性血管瘤可發(fā)生在任何實質(zhì)性器官，很難與分枝桿菌和真菌感染或惡性腫瘤鑒很難與分枝桿菌和真菌感染或惡性腫瘤鑒別。別。(一一)微生物特性微生物特性1為為g-彎曲的桿狀小體，常呈多形性；初彎曲的桿狀小體，常呈多形性；初 分離有菌毛，發(fā)現(xiàn)有噬菌體。分離有菌毛，發(fā)現(xiàn)有噬菌體。2培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性 營養(yǎng)要求苛刻的需氧桿菌，用營養(yǎng)要求苛刻的需氧桿菌，用 含新鮮血的

39、瓊脂或腦心浸液于含新鮮血的瓊脂或腦心浸液于355 c02環(huán)境下培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)25周才長出灰色凸起周才長出灰色凸起 并嵌入瓊脂內(nèi)的菌落。并嵌入瓊脂內(nèi)的菌落。3基因組基因組 約為約為2005kb。已經(jīng)測序的基因。已經(jīng)測序的基因 有有16srrna和和 glt a基因序列包括基因序列包括1293 核苷酸，始于核苷酸，始于atg起始密碼子，終于起始密碼子，終于 兩兩taa終止密碼子。終止密碼子。(二二)微生物檢驗微生物檢驗1. 標(biāo)本染色直接檢查標(biāo)本染色直接檢查 活檢病理標(biāo)本和淋巴結(jié)活檢用活檢病理標(biāo)本和淋巴結(jié)活檢用warthin- starry染色能查見多形性菌體。染色能查見多形性菌體。2. 核酸檢測核

40、酸檢測 依依16s rrna或或glta基因設(shè)計引物，對臨床標(biāo)基因設(shè)計引物，對臨床標(biāo) 本作本作 pcr，其擴增產(chǎn)物經(jīng)序列測定或用特異，其擴增產(chǎn)物經(jīng)序列測定或用特異 性性dna探針鑒定，可直接作出病原診斷。探針鑒定，可直接作出病原診斷。 3.分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)可將血液標(biāo)本先經(jīng)溶血和離心處理，待長出可將血液標(biāo)本先經(jīng)溶血和離心處理，待長出菌落后作生化反應(yīng)，分析其細(xì)胞脂肪酸和菌落后作生化反應(yīng)，分析其細(xì)胞脂肪酸和16srrna序列等加以鑒定。于培養(yǎng)序列等加以鑒定。于培養(yǎng)1周仍不見生周仍不見生長，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至長，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至4周。周。 4.抗體檢測抗體檢測(1)ifa：雙份血清滴度呈：雙份血清滴度呈4倍增長

41、為陽性；單份倍增長為陽性；單份 血清滴度至少達(dá)血清滴度至少達(dá)1：64方可考慮診斷。方可考慮診斷。(2)elisa：用：用 17kd重組體抗原作重組體抗原作 elisa檢測檢測 人血清抗體人血清抗體igg，有助于診斷。，有助于診斷。(3)免疫印跡試驗：可顯示免疫印跡試驗：可顯示 485kda 蛋白質(zhì)組蛋白質(zhì)組 分，而非巴通體感染病人血清則不能與此蛋分，而非巴通體感染病人血清則不能與此蛋 白組分反應(yīng)，以此作為確證試驗。白組分反應(yīng)，以此作為確證試驗。第二節(jié) 衣 原 體 n是一類專性細(xì)胞內(nèi)寄生、有獨特發(fā)育周是一類專性細(xì)胞內(nèi)寄生、有獨特發(fā)育周期、能通過細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞型微生期、能通過細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞

42、型微生物。歸屬于廣義的細(xì)菌范疇。物。歸屬于廣義的細(xì)菌范疇。n衣原體科包括沙眼衣原體、肺炎衣原體、衣原體科包括沙眼衣原體、肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體和家畜衣原體等四種。鸚鵡熱衣原體和家畜衣原體等四種。一、沙眼衣原體一、沙眼衣原體n不僅可致眼部感染，而且可引起生殖泌尿系不僅可致眼部感染，而且可引起生殖泌尿系統(tǒng)感染、性病淋巴肉芽腫以及其他器官疾病。統(tǒng)感染、性病淋巴肉芽腫以及其他器官疾病。n近年沙眼衣原體的感染率和危害性已超過淋近年沙眼衣原體的感染率和危害性已超過淋球菌而居性傳播疾病之首，因而日益受到醫(yī)球菌而居性傳播疾病之首，因而日益受到醫(yī)學(xué)界的重視。學(xué)界的重視。n沙眼衣原體有沙眼生物變種、性病淋巴肉芽

43、沙眼衣原體有沙眼生物變種、性病淋巴肉芽腫生物變種（腫生物變種（lgv）和鼠生物變種等）和鼠生物變種等3個生個生物變種。物變種。1沙眼亞種沙眼亞種(1)沙眼：沙眼： 通過眼通過眼-手手-眼途徑直接或間接密切接觸傳眼途徑直接或間接密切接觸傳 播。由播。由a、b、ba和和c血清型引起。結(jié)膜引血清型引起。結(jié)膜引 起局部炎癥。有濾泡增生。后期出現(xiàn)瘢痕起局部炎癥。有濾泡增生。后期出現(xiàn)瘢痕 及角膜血管翳，影響視力。及角膜血管翳，影響視力。(2)(2)包涵體結(jié)膜炎：包涵體結(jié)膜炎： 由由b b、baba、d d、dada等血清型引起。嬰兒通過等血清型引起。嬰兒通過 產(chǎn)道感染，引起濾泡性結(jié)膜炎，不出現(xiàn)角產(chǎn)道感染，

44、引起濾泡性結(jié)膜炎，不出現(xiàn)角 膜血管翳。膜血管翳。(3)(3)泌尿生殖道感染：泌尿生殖道感染： 由由d-kd-k血清型引起。在性接觸傳播引起的血清型引起。在性接觸傳播引起的 非淋菌性泌尿生殖道感染（非淋菌性泌尿生殖道感染（50506060）。）。 易發(fā)展為持續(xù)感染或無癥狀攜帶者。易發(fā)展為持續(xù)感染或無癥狀攜帶者。 2.2.性病淋巴肉芽腫亞種，由性病淋巴肉芽腫亞種，由l l血清型引起血清型引起性病淋巴肉芽腫。侵犯腹股溝淋巴結(jié)，性病淋巴肉芽腫。侵犯腹股溝淋巴結(jié)，引起化膿性淋巴結(jié)炎和慢性淋巴肉芽腫。引起化膿性淋巴結(jié)炎和慢性淋巴肉芽腫。3.3.鼠生物變種為鼠間傳播，不侵犯人，與鼠生物變種為鼠間傳播，不侵犯

45、人，與鼠肺炎有關(guān)。鼠肺炎有關(guān)。 微生物特性微生物特性1發(fā)育周期與形態(tài)染色發(fā)育周期與形態(tài)染色 衣原體具有特殊的發(fā)衣原體具有特殊的發(fā)育周期。育周期。原體是細(xì)胞外存在形式，卵圓形，原體是細(xì)胞外存在形式，卵圓形，有胞壁和擬核有胞壁和擬核, 是發(fā)育成熟的衣原體，具有高是發(fā)育成熟的衣原體，具有高度感染性，能吸附于易感細(xì)胞特異受體，增度感染性，能吸附于易感細(xì)胞特異受體，增大形成網(wǎng)狀體；大形成網(wǎng)狀體；網(wǎng)狀體或稱始體，圓形，網(wǎng)狀體或稱始體，圓形，二分裂增殖為繁殖型，無感染性。于感染二分裂增殖為繁殖型，無感染性。于感染24h后濃縮形成原體，最后細(xì)胞破裂釋放原體，后濃縮形成原體，最后細(xì)胞破裂釋放原體，再感染其他細(xì)胞

46、，每個發(fā)育周期約需再感染其他細(xì)胞，每個發(fā)育周期約需4872h。 抗原結(jié)構(gòu)抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，有屬、種、型等特異性抗原。復(fù)雜，有屬、種、型等特異性抗原。 (1)屬特異性抗原：為胞壁屬特異性抗原：為胞壁lps，屬特異性補，屬特異性補 體結(jié)合抗原，應(yīng)用于血清學(xué)診斷。體結(jié)合抗原，應(yīng)用于血清學(xué)診斷。 (2)種特異性抗原：位于主要外膜蛋白種特異性抗原：位于主要外膜蛋白 （momp）上，可用補體結(jié)合試驗和中和）上，可用補體結(jié)合試驗和中和 試驗檢測。試驗檢測。 (3)型特異性抗原：也位于型特異性抗原：也位于momp上，用單上，用單 克隆抗體作微量免疫熒光試驗?zāi)茏R別沙眼克隆抗體作微量免疫熒光試驗?zāi)茏R別沙眼 體的體的1

47、8個型別。個型別。 培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性n沙眼衣原體專性活細(xì)胞內(nèi)寄生，用沙眼衣原體專性活細(xì)胞內(nèi)寄生，用68d齡齡雞胚卵黃囊及各種傳代細(xì)肋培養(yǎng)。一般培雞胚卵黃囊及各種傳代細(xì)肋培養(yǎng)。一般培養(yǎng)養(yǎng)4872h后可在細(xì)胞內(nèi)查到包涵體及原體后可在細(xì)胞內(nèi)查到包涵體及原體和始體顆粒。和始體顆粒。n近年多采用細(xì)胞培養(yǎng)衣原體，常用的細(xì)胞近年多采用細(xì)胞培養(yǎng)衣原體，常用的細(xì)胞株為株為hela-299和和mccoy。抵抗力抵抗力n沙眼衣原體感染材料在沙眼衣原體感染材料在37條件下，經(jīng)條件下，經(jīng)48h左右即失去活力，左右即失去活力，566 min滅活。滅活。-70可保存數(shù)年，冷凍干燥可保存可保存數(shù)年，冷凍干燥可保存30年以上仍

48、年以上仍有活性。有活性。o.1甲醛或甲醛或o.5石炭酸溶液石炭酸溶液24h殺死沙眼衣原體，殺死沙眼衣原體，2來蘇僅需來蘇僅需5min。n紅霉素、四環(huán)素、強力霉素或青霉素對衣紅霉素、四環(huán)素、強力霉素或青霉素對衣原體有抑制作用。原體有抑制作用。 沙眼和包涵體結(jié)膜炎病人，用拭子在結(jié)沙眼和包涵體結(jié)膜炎病人，用拭子在結(jié)膜上穹窿涂擦或取結(jié)膜刮片。性病淋巴肉芽膜上穹窿涂擦或取結(jié)膜刮片。性病淋巴肉芽腫：采淋巴結(jié)膿汁，也可取直腸拭子或活檢腫：采淋巴結(jié)膿汁，也可取直腸拭子或活檢材料送檢。材料送檢。 用光學(xué)顯微鏡觀察包涵體有診斷意義，用光學(xué)顯微鏡觀察包涵體有診斷意義，特別在眼結(jié)膜、尿道及子宮頸上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)特別在眼結(jié)

49、膜、尿道及子宮頸上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)典型包涵體更有沙眼衣原體感染的參考?，F(xiàn)典型包涵體更有沙眼衣原體感染的參考。免疫學(xué)方法免疫學(xué)方法1)免疫熒光檢查：用熒光抗體檢測上皮細(xì)胞免疫熒光檢查：用熒光抗體檢測上皮細(xì)胞內(nèi)衣原體抗原。標(biāo)記抗衣原體內(nèi)衣原體抗原。標(biāo)記抗衣原體lps抗體，抗體，可與所有衣原體反應(yīng)；而抗可與所有衣原體反應(yīng)；而抗momp抗體有抗體有種、型特異性。可在種、型特異性?？稍?h內(nèi)即作出診斷并可內(nèi)即作出診斷并可分型。分型。2)酶免疫檢測：能在數(shù)小時內(nèi)檢測出衣原體酶免疫檢測：能在數(shù)小時內(nèi)檢測出衣原體可溶性抗原，并適用于同時檢測大量標(biāo)本。可溶性抗原，并適用于同時檢測大量標(biāo)本。 核酸檢測核酸檢測1)核酸

50、雜交：用核酸雜交：用125i標(biāo)記的衣原體標(biāo)記的衣原體rdna探針檢探針檢測宮頸標(biāo)本的敏感性和特異性，與培養(yǎng)相比測宮頸標(biāo)本的敏感性和特異性，與培養(yǎng)相比分別為分別為82.8和和99.4。2)pcr：具有高度敏感性和特異性。一般按沙：具有高度敏感性和特異性。一般按沙眼衣原體眼衣原體75kb質(zhì)粒、質(zhì)粒、momp序列及序列及16srrna基因序列設(shè)計引物?；蛐蛄性O(shè)計引物。 分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)n將標(biāo)本拭子，用含抗生素的稀釋液制成將標(biāo)本拭子，用含抗生素的稀釋液制成10-20懸液。分離的細(xì)胞有懸液。分離的細(xì)胞有mccoy、hela-229細(xì)胞等。置細(xì)胞等。置5co2下培養(yǎng)。下培養(yǎng)。n初代分離培養(yǎng)初代分離培養(yǎng)7

51、2-96h后傳代或盲傳。有癥狀后傳代或盲傳。有癥狀病人病人90標(biāo)本第標(biāo)本第1代即可見包涵體，而無癥代即可見包涵體，而無癥狀病人需傳代后才得到陽性。狀病人需傳代后才得到陽性。n敏感性為敏感性為80-90，特異性，特異性100，是目前，是目前確診最可靠的方法，而且是評價實驗室診斷確診最可靠的方法，而且是評價實驗室診斷法的標(biāo)準(zhǔn)。法的標(biāo)準(zhǔn)。雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)n有細(xì)菌污染的臨床標(biāo)本加適當(dāng)?shù)目股赜屑?xì)菌污染的臨床標(biāo)本加適當(dāng)?shù)目股?如鏈霉素、慶大霉素和制霉菌素等如鏈霉素、慶大霉素和制霉菌素等)肉肉湯，在室溫中作用湯，在室溫中作用lh后，接種后，接種3-4只孵只孵育育7天的雞胚卵黃囊，天的雞胚卵黃囊，35孵育

52、，觀察孵育，觀察至至13天，收獲卵黃囊涂片，作天，收獲卵黃囊涂片，作gimenez染色，鏡檢原體。染色，鏡檢原體。 鑒定鑒定1.將細(xì)胞培養(yǎng)蓋片用將細(xì)胞培養(yǎng)蓋片用giemsa或碘染色鏡檢或碘染色鏡檢胞質(zhì)內(nèi)包涵體。胞質(zhì)內(nèi)包涵體。giemsa染色比碘染色敏染色比碘染色敏感，可作為鑒別沙眼衣原體的參考。感，可作為鑒別沙眼衣原體的參考。2.可用型特異性熒光血清鑒定其型別。對可用型特異性熒光血清鑒定其型別。對于卵黃囊和小鼠分離的材料可用免疫熒于卵黃囊和小鼠分離的材料可用免疫熒光法鑒定原體或補體結(jié)合抗原光法鑒定原體或補體結(jié)合抗原 。 抗體檢測抗體檢測n目前檢測抗體的血清學(xué)方法在常規(guī)臨床診斷中價目前檢測抗體的

53、血清學(xué)方法在常規(guī)臨床診斷中價值很小。值很小。n原因是不易獲得雙份血清，而且性傳播疾病的高原因是不易獲得雙份血清，而且性傳播疾病的高危人群多有慢性重復(fù)感染，原有的抗體水平較高，危人群多有慢性重復(fù)感染，原有的抗體水平較高，因而限制了血清學(xué)方法的診斷價值。因而限制了血清學(xué)方法的診斷價值。n方法有補體結(jié)合試驗方法有補體結(jié)合試驗(cf)、微量免疫熒光試驗、微量免疫熒光試驗(mif)、酶免疫法等。其中、酶免疫法等。其中cf敏感性和特異性較敏感性和特異性較差，而差，而mif敏感性和特異性較高。敏感性和特異性較高。 三、鸚鵡熱衣原體三、鸚鵡熱衣原體n鸚鵡熱衣原體是鸚鵡熱的病原體，主要引鸚鵡熱衣原體是鸚鵡熱的病

54、原體，主要引起禽畜感染，也可由動物傳染到人，引起起禽畜感染，也可由動物傳染到人，引起肺炎和毒血癥，亦有引起心內(nèi)膜炎的報道。肺炎和毒血癥，亦有引起心內(nèi)膜炎的報道。n也有衣原體獨特的生活周期，包涵體較致也有衣原體獨特的生活周期，包涵體較致密，形態(tài)不一，碘染色陰性，是與沙眼衣密，形態(tài)不一，碘染色陰性，是與沙眼衣原體鑒別要點原體鑒別要點 (沙眼衣原體含糖原，碘染沙眼衣原體含糖原，碘染色陽性色陽性)?？乖瓩z測抗原檢測1)免疫熒光檢查：以衣原體屬、種或型的單免疫熒光檢查：以衣原體屬、種或型的單克隆抗體與熒光素結(jié)合后中衣原體抗原的克隆抗體與熒光素結(jié)合后中衣原體抗原的存在，用微量免疫熒光法還可用于衣原體存在，

55、用微量免疫熒光法還可用于衣原體的分型。的分型。2)酶免疫法酶免疫法(eia)檢測：將衣原體單克隆抗檢測：將衣原體單克隆抗體與酶結(jié)合，用于組織或細(xì)胞的染色，槍體與酶結(jié)合，用于組織或細(xì)胞的染色，槍測衣原體抗原。測衣原體抗原。e1a法比免疫熒光法準(zhǔn)確法比免疫熒光法準(zhǔn)確性略高，且可避免主觀因素的影響。性略高，且可避免主觀因素的影響。核酸檢測核酸檢測1)核酸探針檢測法：將衣原體核酸探針檢測法：將衣原體momp基因、基因、特異特異lps表位基因，及其他決定鸚鵡熱衣原表位基因，及其他決定鸚鵡熱衣原體抗原的基因片段做成探針，對衣原體體抗原的基因片段做成探針，對衣原體dna進(jìn)行斑點雜交或進(jìn)行斑點雜交或south

56、ern印跡雜交試印跡雜交試驗，可準(zhǔn)確靈敏測出鸚鵡熱衣原體，也可用驗，可準(zhǔn)確靈敏測出鸚鵡熱衣原體，也可用于種內(nèi)株系的鑒別。于種內(nèi)株系的鑒別。2)pcr： 檢測檢測3種衣原體的種衣原體的momp基因序列是基因序列是簡便、微量、快速、敏感的檢測力法。簡便、微量、快速、敏感的檢測力法。 分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)(1)雞胚培養(yǎng)：鸚鵡熱衣原體的分離常用雞胚卵雞胚培養(yǎng)：鸚鵡熱衣原體的分離常用雞胚卵 黃囊接種與傳代，可取得滿意效果。黃囊接種與傳代，可取得滿意效果。(2)小鼠分離：選擇腹腔接種、顱內(nèi)接種和滴鼻小鼠分離：選擇腹腔接種、顱內(nèi)接種和滴鼻 接種進(jìn)行試驗。最具特征性的發(fā)現(xiàn)小鼠嗜眠接種進(jìn)行試驗。最具特征性的發(fā)現(xiàn)小鼠

57、嗜眠 和麻痹，脹氣的十二指腸上覆蓋一層薄的粘和麻痹，脹氣的十二指腸上覆蓋一層薄的粘 性滲出物，全肺葉有實變。性滲出物，全肺葉有實變。(3)細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)常用細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)常用pl細(xì)胞、細(xì)胞、bhk細(xì)細(xì) 胞、胞、vero細(xì)胞等，鸚鵡熱衣原體均能生長。細(xì)胞等，鸚鵡熱衣原體均能生長。 但直接用于臨床標(biāo)本的分離培養(yǎng)效果不好，但直接用于臨床標(biāo)本的分離培養(yǎng)效果不好， 最好先接種雞胚卵黃囊，經(jīng)繁殖后再細(xì)胞培最好先接種雞胚卵黃囊，經(jīng)繁殖后再細(xì)胞培 養(yǎng)容易成功。養(yǎng)容易成功。 抗體檢測抗體檢測方法有補體結(jié)合試驗方法有補體結(jié)合試驗(cf)、間接血凝試驗、間接血凝試驗(iha)和酶聯(lián)免疫吸附試和酶聯(lián)免疫吸附試

58、 (elisa)等。等。補體結(jié)合試驗：主要用于鸚鵡熱和性病淋巴肉補體結(jié)合試驗：主要用于鸚鵡熱和性病淋巴肉芽腫以及肺炎的試驗。芽腫以及肺炎的試驗。cf抗體效價呈抗體效價呈4倍增長倍增長者可作診斷。一次者可作診斷。一次cf抗體結(jié)果，需效價高于抗體結(jié)果，需效價高于1：64才可能作臨床診斷。才可能作臨床診斷。 四、肺炎衣原體四、肺炎衣原體 n肺炎衣原體是衣原體屬中的一個新種，只肺炎衣原體是衣原體屬中的一個新種，只有一個血清型，是一種重要的呼吸道病原有一個血清型，是一種重要的呼吸道病原體。主要引起青少年急性呼吸道感染，可體。主要引起青少年急性呼吸道感染，可引起肺炎、支氣管炎、咽炎和鼻竇炎等。引起肺炎、支

59、氣管炎、咽炎和鼻竇炎等。n還可引起心包炎、心肌炎和心內(nèi)膜炎。肺還可引起心包炎、心肌炎和心內(nèi)膜炎。肺炎衣原體性感染與急性心肌梗死和慢性冠炎衣原體性感染與急性心肌梗死和慢性冠心病的關(guān)系，越來越引起人們的注意。心病的關(guān)系，越來越引起人們的注意。 微生物特性微生物特性1有衣原體獨特的生活周期，原體在電鏡下呈有衣原體獨特的生活周期，原體在電鏡下呈 型的梨形，并有清晰的周漿間隙。型的梨形，并有清晰的周漿間隙。2全基因組測序已完成，與鸚鵡熱衣原體、沙全基因組測序已完成，與鸚鵡熱衣原體、沙 眼衣原體的眼衣原體的dna同源性同源性10，而不同來，而不同來 擗擗twar株都具有株都具有94以上的以上的dna同源性，同源性， 其限制性內(nèi)切酶的圖譜相同。其單克隆抗體其限制性內(nèi)切酶的圖譜相同。其單克隆抗體 與沙眼衣原體及鸚鵡熱