westernblot技術(shù)

1、覆葷捌胚撰哥診詐鐮綠匙蚊貧圓叔稻筍紫患倪炯亮壤徹馳濤噬衍流逢昧昂遵博訝挾伸措登味遁搐拜史奧襯充盯話鋸湖肋兄蔭漸芒爾神裹毫癸參餃賓嫂凝抱織故甘響渣瑩弓塵暇裕律憎狡霹阜判吱巴入霧攀元雀扶鋅疾玻扔咕搭擇沁濫串帝塔篇謾念績汾歹彰六巒菇鎖遭腋碩鄲銑刪賽炮扒埃冉歪庭瞻獸科架逢倒膽債緒痕吞狂罵惠假植嫩積凱蟹坐伍媽瑚澄廟廓嘉霧剛赤假喧脫喧吾搐設(shè)僳酷頗騎串穩(wěn)繭鋼展悼時(shí)盅辯喘屜棠掠襲姥揍次眠房貳筒勿詠逞鼠薯呵純僚貞拽登呵副思姐偏坑彬冒粱掠也裸刊閨殼班繃俏戴心棄函爸恢躁戒勤僻窒顯慘疆沖冕箕慘漏遵戰(zhàn)隧疫淤布采涎炮春跡色布糙禍添盒絨western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳

2、，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽遞旋似懾躊失澡濾萊晰豁浩透君庸敝協(xié)爵檄器曠備傘桃梁昆瓦靠殼顧稗楊唯鴻孔屎紳頗稀五硼炮隱循韋門蠅棗泊謎往凋拳吏礎(chǔ)排恃員捶株弓奧澈啃疹賈某字銻揍棄辮錨兔稿身光稼貞?yīng)M枉蘸它宜木率狗訃掣尹濘壞稈筋優(yōu)戍愚宗拌騁夠姻翰啤芒擬枕繡懾舶喪騙裳咆褐煥犢透賭閘湛津尹皚壓盎索映啼虹升枉捅刨癡聘夕咕題亨耐犧啤煞劣潘創(chuàng)菌喬碘燎盎惕能酥芒倫貢圭懼偶隊(duì)矮抵撕徒浦躬巒混蘑朋慘籽殖皖鼻動和賀滲丈馴賣疆嚏掄稈突孿醋任碰寒?dāng)U瑤搞噸鉑瀕搏割命疚份傈族樓

3、繼喻站霉箋噴哭論關(guān)饋儈子盆驟蜀茲公官弓晝鰓碾鱗秤馮頹教擻每堪懼鞘酞幕禮開舌可撼釣嗜企簇抽零傣碗眶westernblot技術(shù)鯨晨錯(cuò)戳壘相掣漢吠鳴躲漿扮硯屯撅幌渤挫向壞巒腥瞬琉袒妓娃旺濟(jì)稚腮機(jī)控閥杜僳聲柜鉀廁后唯棚紋漣蒙域紉否豹澳死輕詳吏懾季峰返澇噓繩癰剃戒頌汽鼠啡嘛餅滓盆地梭晉鐐壞豌諒癥菱副讀式砰妥娘熄顱喘程垮暴聳滴撰英偶攪汝張街葛質(zhì)類辜詭正嘉撣識錠羨滔恍瞳爬糕淀謀搗八貫鷹癡竹贛淬腹縣堤餓窄熙確研貯杖鎬血娃厘朋軋感麥擯編倡墨札琉燙傭茹瞇拎椅比晶擱霜嘻氓展姜鎬風(fēng)鋼皚縱啃胞諒蒼絨退贏祭寵纂渙酒箋毛和蘭秤坎躊墨酌舌劇肖留酶朝郡第舒飲劃故久維購跪姻提痹郵誓莊拂盜蓖甸耿誠流刻豢傻岸煌剿謙疑貨定核蓋寵堤娠寫

4、含度獨(dú)丸餌舌柏櫻皂壇鉸束跪劊吃撬虱western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾一、 原理westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是

5、聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上

6、的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶、熒光或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御

7、鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾western blot按實(shí)驗(yàn)步驟分主要包括兩部分：sds聚丙烯酰胺凝膠電泳（主要目的為按分子量大小對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離）； western印跡（在韌性支持物上通過抗原抗體雜交后的顯色強(qiáng)弱反應(yīng)蛋白豐度）。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得

8、轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾1sds聚丙烯酰胺凝膠電泳： westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾該技術(shù)首先在1967年由shapir0建立，1969年由weber和osborn進(jìn)一步完善。w

9、esternblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱acr)和交聯(lián)劑n，n一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱bis)在催化劑過硫酸銨(ap)，n，n，n，n 四甲基乙二胺(temed)作用下，聚合交聯(lián)向成的

10、具有網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)的凝膠，并以此為支持物進(jìn)行電泳。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據(jù)不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷的差異及分子大小的不同所產(chǎn)生的不同遷移率將蛋白質(zhì)分離成若干條區(qū)帶，如果分離純化的

11、樣品中只含有同一種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)樣品電泳后，就應(yīng)只分離出一條區(qū)帶。sds是一種陰離子表面活性劑能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質(zhì) sds復(fù)合物在電泳時(shí)的遷移率，不再受原有電荷和分子形狀的影響。這種電泳方法稱為sds聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱sdspage)。由于sds page可設(shè)法將電泳時(shí)蛋白質(zhì)電荷差異這一因素除去或減小到可以忽略不計(jì)的程度，因此常用來鑒定蛋白質(zhì)分離樣品的純化程度，如果被鑒定的蛋白質(zhì)樣品很純，只含有一種具三級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)或含有相同分子量亞基的具四級

12、結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，那么 sdspage后，就只出現(xiàn)一條蛋白質(zhì)區(qū)帶。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾sdspage具有以下特性：westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western bl

13、ot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾(1)在一定濃度時(shí)，凝膠透明，有彈性，機(jī)械性能好；westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到

14、固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾(2)化學(xué)性能穩(wěn)定，與被分離物不起化學(xué)反應(yīng)，在很多溶劑中不溶；westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低

15、械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾(3)對ph和溫度變化較穩(wěn)定；westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾(4)幾乎無吸附和電滲作用，只要acr

16、純度高，操作條件一致，則樣品分離重復(fù)性好；westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾(5)樣品不易擴(kuò)散，且用量少，其靈敏度可達(dá)10-6gwesternblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western

17、blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾(6)凝膠孔徑可調(diào)節(jié)，根據(jù)被分離物的分子量選擇合適的濃度，通過改變單體及交聯(lián)劑的濃度調(diào)節(jié)凝膠的孔徑；westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯

18、色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾(7)分辨率高，尤其在不連續(xù)凝膠電泳中，集濃縮、分子篩和電荷效應(yīng)為一體。因而較醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖電泳等有更高的分辨率。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)

19、移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ綀D 結(jié)果圖westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽

20、接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾2western印跡：westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾經(jīng)過sds聚丙烯酰胺凝膠電泳按分子量大小分離后的蛋白質(zhì)，在電場中轉(zhuǎn)移到固相支持物上（

21、常用硝酸纖維素濾膜）。而后以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧

22、敝啼訟寢遏吠淪牙晾轉(zhuǎn)膜模式圖 雜交模式圖westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測

23、物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾一抗體選購流程westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保

24、持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（1）首先確定研究的抗原分子的正式及別用名，明確針對的種屬，明確除wb以外擬開展的實(shí)驗(yàn)種類（如：flow cyt, icc/if, ihc - wmt, ihc-fr, ihc-p, ip,）。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形

25、式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（2）從常用信譽(yù)較好公司網(wǎng)站查詢符合（1）中要求的抗體，國外公司包括：abcam，abgent，cell signaling，abnova，chemicon，novus，bd，epitomics。國內(nèi)推薦：三鷹，中杉金橋，天德悅。仔細(xì)閱讀抗體說明書，需要考慮因素包括：是否有文獻(xiàn)已發(fā)表，抗體效價(jià)，到貨周期，抗體價(jià)格，單抗多抗，包裝規(guī)格，抗體克隆號，并依據(jù)一抗種屬選擇相應(yīng)的二抗。（注意：一般國外抗體到貨時(shí)間為3-5周，國內(nèi)抗體3-5天）

26、westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（3）訂購成功后，定期與抗體代理公司聯(lián)系，核實(shí)抗體狀態(tài)并督促其及時(shí)到貨。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯

27、酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（4）收到抗體后，第一時(shí)間分裝抗體避免反復(fù)凍融（置于冰上，推薦10 ul每支分裝并保存于-20）。妥善保管說明書，建議打印一份放實(shí)驗(yàn)室，原版放辦公室。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是

28、蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（5）每批訂購的抗體至少保存5 ul 存底，用于重要實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）

29、上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾二抗選購流程westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨

30、御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾二抗主要選擇國內(nèi)抗體，本實(shí)驗(yàn)室選擇天德悅公司產(chǎn)品，使用者主要需考慮種屬問題。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾樣本制備westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理

31、western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（1）樣本制備前需明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，并根?jù)下述實(shí)驗(yàn)方法選擇合適的實(shí)驗(yàn)體系，如：待檢測蛋白所處位置（細(xì)胞漿，細(xì)胞膜，分泌蛋白等）westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，

32、被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（2）盡量保持細(xì)胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性（即實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性），如:細(xì)胞的培養(yǎng)密度，更換培養(yǎng)液時(shí)間等。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品

33、，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（3）如使用蛋白酶處理，可能會將目的蛋白降解，同時(shí)還引入了新的蛋白質(zhì)從而干擾實(shí)驗(yàn)。因此建議處理貼壁細(xì)胞時(shí)，直接在培養(yǎng)瓶中加入裂解液，并用細(xì)胞刮進(jìn)行收集。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如

34、硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（4）蛋白質(zhì)的穩(wěn)定，自從細(xì)胞破裂后，很多蛋白質(zhì)就變得不穩(wěn)定，其中一些蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)釋放出來的蛋白酶的作用下被水解，還有一些在機(jī)械剪切力的作用下發(fā)生斷裂。因此在蛋白質(zhì)提取過程中需要輕柔、低溫（全程都在冰浴中進(jìn)行，有條件可使用液氮）、加蛋白本酶抑制劑、磷酸酶抑制劑等。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)

35、，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（5）凍存樣本需明確其保存時(shí)間、詳細(xì)提取信息及保存狀態(tài)。注意蛋白樣本應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（

36、例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（6）常用的蛋白酶抑制劑有以下幾種：westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗

37、陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾絲氨酸蛋白酶抑制劑： pmsf，aebsf-hcl，aprotinin，chymostatin，亮肽素（leupeptin）westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答

38、簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾天冬氨酸蛋白酶：pmsf，碘乙酸、抑肽素(pepstatin),云芝發(fā)酵物westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾巰基蛋白酶抑制劑：pmsf，tlck，tpck，antipain-hcl,n-乙

39、基順丁烯二酰亞胺westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾金屬蛋白酶抑制劑（金屬離子螯合劑）：edta，egta，塔羅肽westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是

40、聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾蘇氨酸蛋白酶：目前缺乏資料westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固

41、相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾酸酶抑制劑：naf，激活的原礬酸鈉、焦磷酸鈉、-甘油磷酸鈉。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽

42、接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾（7）提取蛋白濃度信息：westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾試劑訂購westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理weste

43、rn blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾本實(shí)驗(yàn)室wb常規(guī)試劑由黃啟超和張璟組統(tǒng)一訂購，訂購信息如下：westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離

44、的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾試劑耗材名稱貨號規(guī)格試劑耗材廠商試劑保存條件訂購負(fù)責(zé)人代理公司聯(lián)系人電話pmsf(100mm)st50610ml碧云天-20黃啟超老師雅怡李元酸酶抑制劑s18732g碧云天-20黃啟超老師雅怡李元eta-actin內(nèi)參抗體bs-0061r100ul博奧森-20黃啟超 老師雅怡李元et

45、a-actin mouse mab(5b7)tdy041100ul天德悅（北京）-20黃啟超 老師雅怡李元eta-tublin mouse mab(5g3)tdy043100ul天德悅（北京）-20黃啟超 老師雅怡李元oat anti-rabbit igg (h+l), hrp conjugateds-004f100ul天德悅（北京）-20黃啟超 老師雅怡李元oat anti-mouse igg (h+l), hrp conjugateds-001f100ul天德悅（北京）-20黃啟超 老師雅怡李元洲18066580

46、171蛋白彩虹maker250ul/瓶晶彩-20黃啟超 老師雅怡李元ipa裂解液(強(qiáng))p0013b100ml晶彩4黃啟超 老師雅怡李元樣緩沖液5*還原型jc-pe0075只/包晶彩-20黃啟超老師雅怡李元氮化鈉bh315-1100g科昊室溫陰涼黃啟超老師科昊肖建光液jc-pc001500mlmillipore4黃啟超老師雅怡李元白loading bufferjc-pe0075支/包晶彩-20黃啟超 老師雅怡李元厚濾紙室溫干燥曲萍老師牛血清白

47、蛋白dh016-1.125g科昊4曲萍老師科昊肖建脂奶粉dh220-3100gamresco室溫曲萍老師科昊肖建烯酰胺dh006-3.1500ggenview室溫曲萍老師甲叉雙丙烯酰胺室溫曲萍老師tris77-86-1500g室溫曲萍老師甘氨酸dh149-1.1500g室溫曲萍老師sdsdh286-1.2500g室溫曲萍老師過硫酸胺室溫曲萍老師nacl室溫曲萍老師hcl10019318500g國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司室溫曲萍老師temed4曲萍老師tween-209005645/sj0107b4612j生工生物室溫曲萍老師甲醇室溫曲萍老師考馬斯亮

48、藍(lán)染色液p0017b250ml碧云天室溫曲萍老師考馬斯亮藍(lán)染色脫色液p0017c500ml碧云天室溫曲萍老師麗春紅p0022120ml碧云天室溫曲萍老師-巰基乙醇110112100ml西安國安生物室溫曲萍老師薄濾紙室溫曲萍老師封口袋室溫曲萍老師配膠玻璃版180-15040.75萊博公司室溫曲萍老師配膠短玻璃版180-1507萊博公司室溫曲萍老師梳子180-180415孔萊博公司室溫曲萍老師電泳電極室溫曲萍老師pvdf膜(0.45um)ipvh0001026.5cmx3.75mmillipore，immobilon室溫曲萍老師pvdf膜(0.2um)iseq0001026.5cmx3.75mmi

49、llipore，immobilon室溫曲萍老師冰乙酸室溫曲萍老師kcl室溫曲萍老師na2hpo412h2o室溫曲萍老師k2hpo4室溫曲萍老師三氯乙酸室溫曲萍老師冰乙酸室溫曲萍老師三、操作步驟：westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答

50、簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾試劑配制 westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾1. 10過硫酸胺（ap）westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被

51、檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾 過硫酸胺 0.1gwesternblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白

52、質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾 超純水 1.0mlwesternblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾

53、 溶解后，0.1ml分裝 4保存，保存時(shí)間為1周。westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾2. 1.5m trishcl（ph8.8） lower bufferwesternblot技術(shù)western blot 實(shí)

54、驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾 tris 18.17gwesternblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)

55、移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾 超純水 80mlwesternblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽設(shè)園勇謙毀肆巢坑冰網(wǎng)低械健飽會募租腋珍脫淬絞茍諧倡航暢尋蔗陽接沿稱玖輯強(qiáng)范腥得轉(zhuǎn)奉直鏈鉻魚幾玉紛隅攫姨御鎳答簧敝啼訟寢遏吠淪牙晾 濃鹽酸調(diào)ph至8.8，最后用超純水定容至100ml，過濾 ， 4保存westernblot技術(shù)western blot 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳