多糖含量測定的幾種不同方法比較

1、淮北煤炭師范學(xué)院信息學(xué)院 2012 級(jí)學(xué)士學(xué)位論文 多糖含量測定的幾種不同方法比較系系 別別 : : 信信 息息 學(xué)學(xué) 院院 專專 業(yè)業(yè) : : 生生 物物 工工 程程 學(xué)學(xué) 號(hào)號(hào): : 2008185302120081853021 姓姓 名名: : 姜姜 玉玉 龍龍 指指 導(dǎo)導(dǎo) 教教 師師: : 查查 嶺嶺 生生 指導(dǎo)教師職稱指導(dǎo)教師職稱: : 講講 師師 2012 年年 5 月月 10 日日多糖含量測定的幾種不同方法比較多糖含量測定的幾種不同方法比較姜玉龍(淮北師范大學(xué)信息學(xué)院 生物系)指導(dǎo)老師: 査嶺生摘要摘要：本文綜述了多糖含量測定的幾種常用方法，主要有苯酚-硫酸法、3, 5-二硝基水

2、楊酸法(簡稱 dns 法)、蒽酮-硫酸法、色譜法、紅外光譜定量分析多糖法等。并對(duì)這些方法的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行了分析和比較。這些方法可為多糖含量測定提供一定的參考，并為多糖含量測定的更深入研究提供一定的理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：多糖；含量；測定；方法a review of different methods to the determination of polysaccharides jiang yulong(department of biology, school of information, huaibei normal university)tutored by zha lingshenga

3、bstract: paper reviewed some different methods to the determination of polysaccharides, in it phenol-vitriol method, 3, 5-two nitro salicylic acid (dns) method, anthrone-vitriol method, chromatography, infrared spectrum quantitative analysis and etc had been dealed with. and the advantages and disad

4、vantages of these methods are analyzed and compared. it provided some related information and based theories to the determination of polysaccharides content.key words：polysaccharides; content; determination; methods 目目 錄錄中文摘要 .i英文摘要.ii1 前言.12 化學(xué)法測定多糖含量.12.1 苯酚-硫酸法 .12.2 3, 5-二硝基水楊酸法(簡稱 dns 法).22.3 蒽

5、酮-硫酸法 .23 色譜法測定多糖含量的研究.33.1 氣相色譜法(gc).33.2 液相色譜法(hplc).33.3 薄層色譜法(tlc).44 其他方法.44.1 紅外光譜定量分析多糖法.44.2 生物傳感器法.55 結(jié)論.56 展望.6參考文獻(xiàn).6致謝.91 前言前言多糖(polysaccharides，ps)是由10個(gè)以上的單糖聚合而成的生物高分子1。多糖包含均多糖(homosaccharide)和雜多糖(heterosaccharide)。前者是由同一種單糖組成，后者則是由兩種以上不同的單糖組成。多糖除含有單糖外，還含有糖醛酸、氨基糖、糖醇、脫氧糖等基團(tuán)。多糖按來源可分為動(dòng)物多糖、植

6、物多糖、微生物多糖和藻類多糖；按酸堿性可分為酸性多糖、中性多糖及堿性多糖；按溶解性可分水溶性多糖、水不溶性多糖、酸性多糖和堿性多糖等2。多糖的研究是現(xiàn)代藥學(xué)研究的熱點(diǎn)之一，多糖具有多種功效，經(jīng)研究表明其在免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎、抗?jié)?、降低膽固醇、降血壓以及抗血栓等多方面具有良好的藥理活性。在多糖工業(yè)生產(chǎn)過程中，常需對(duì)多糖的含量進(jìn)行測量和監(jiān)控，由于多糖的種類繁多，多糖含量和存在形式也多變。因此，選擇適當(dāng)?shù)亩嗵欠治龇椒ㄊ种匾?。傳統(tǒng)的多糖含量測定方法為苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法，但這兩種方法測定步驟繁瑣，而且只能測定樣品中總糖的含量，若樣品中含有單糖，則會(huì)使測定結(jié)果偏高；再者硫酸具有嚴(yán)重的腐蝕性

7、，苯酚極易氧化，給實(shí)驗(yàn)操作帶來極大不便。3, 5-二硝基水楊酸法(簡稱dns法)具有操作簡便、快速、靈敏度高、雜質(zhì)干擾較小等優(yōu)點(diǎn)，近年來逐漸被應(yīng)用于植物藥、中成藥、海洋生物藥等藥物中多糖含量的測定3-5。本文綜述了多糖測定的幾種常用方法，并對(duì)其優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行了比較。這些方法可為多糖含量測定提供一定的參考，并為多糖的更深入研究提供部分理論基礎(chǔ)。2 化學(xué)法測定多糖含量化學(xué)法測定多糖含量2.1 苯酚苯酚-硫酸法硫酸法在多糖的定量分析中，苯酚-濃硫酸法是被廣泛應(yīng)用的方法之一6。其原理是多糖在濃硫酸作用下水解成單糖并迅速脫水生成糠醛衍生物，與苯酚縮合成有色化合物，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，然后用紫外分光光度計(jì)在約

8、490nm 處測定光吸收值與糖濃度的線性關(guān)系，進(jìn)而對(duì)樣品定量，所得的測定結(jié)果是以葡萄糖含量計(jì)的多糖含量。該方法具有操作簡單、快速、重復(fù)性好，顯色后穩(wěn)定性較好等優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)有色樣品結(jié)果易偏高。苯酚-硫酸比色法主要用于甲基化的糖、戊糖、寡糖類以及多聚糖的測定。甚至可以用于糖肽和糖蛋白的測定7-8。此法優(yōu)勢(shì)在于可以進(jìn)行大量樣品的測定，實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，且產(chǎn)生的有色化合物在 120min 內(nèi)顏色穩(wěn)定。從目前各種文獻(xiàn)資料來看，苯酚硫酸法測定的最大吸收波長多在 480-491nm 范圍內(nèi)，而實(shí)際應(yīng)用時(shí)會(huì)因?yàn)樗獬鰡翁欠N類的不同而出現(xiàn)偏差，如螺旋藻多糖中含有鼠李糖、半乳糖、甘露糖、核糖等成分，最

9、大吸收波長在 480nm 處；茯苓多糖水解后得木糖、核糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖，最大吸收波長于 490nm 處9。楊春等指出苯酚暴露于空氣中或在日光下被氧化逐漸變成粉紅色，故應(yīng)進(jìn)行沙浴回流，用棕色瓶子收集餾出液。得到純凈苯酚。實(shí)驗(yàn)用苯酚溶液(未加硫酸)為現(xiàn)配溶液，并且每次用苯酚濃度一致，否則將會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。苯酚液配制時(shí)，需按比例加入一定量的鋁片和碳酸氫鈉蒸餾，所得餾分再加蒸餾水配得10。2.2 3, 5-二硝基水楊酸法二硝基水楊酸法(簡稱簡稱 dns 法法)3, 5-二硝基水楊酸法(簡稱 dns 法)是一種新的多糖含量測定的方法，此法已被用于植物藥、中成藥、海洋生物藥等藥物中多糖

10、成分的含量測定11。dns法測多糖含量具有操作簡便、快速、靈敏度高雜質(zhì)干擾較小等優(yōu)點(diǎn)。dns 法測定原理為 3, 5-二硝基水楊酸與多糖水解產(chǎn)物還原糖共熱后生成棕紅色的氨基化合物 (3-氨基-5-硝基水楊酸)，在一定的范圍內(nèi)，還原糖的含量和反應(yīng)液顏色成比例關(guān)系，利用比色法可測定多糖的含量。dns 比色法中，色素等還原性物質(zhì)可與 dns 顯色劑顯色，采用水解前測定值校正水解后測定值的方法，簡便、有效地排除了色素等雜質(zhì)的干擾12-15。dns 試劑即 3, 5-二硝基水楊酸試劑，可采用直接配制的方法，也可先配制甲液和乙液，再將兩液混合。配制顯色劑過程中加入結(jié)晶酚可增加試劑的顯色作用，亞硫酸鈉可進(jìn)一

11、步增強(qiáng)試劑的穩(wěn)定性。在選擇測定波長時(shí)要考慮多方面的因素，既要考慮是否為最大吸收波長，又要考慮在該波長下測定結(jié)果是否穩(wěn)定。樣品測試液的制備過程中，酸水解時(shí)間不能太短也不能太長，時(shí)間短則多糖水解不完全，時(shí)間長則單糖和鹽酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成糖醛，不能和 3, 5-二硝基水楊酸發(fā)生縮合反應(yīng)。因此，水解時(shí)間要嚴(yán)格控制，否則會(huì)影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。該方法為半微量定糖法，簡便、快速、適用于大量樣品的測定。改良的 dns 方法可使己糖和戊糖的混合糖樣的分析結(jié)果更準(zhǔn)確16。此外，尹銀嘉等采用 dns 法測二味康口服液中多糖的含量，二味康口服液具有益氣扶正，補(bǔ)脾益腎等功效，主要成分為黃芪和刺五加17。制劑工藝主要保

12、留了多糖成分。用該法測定多糖含量可以克服用苯酚-硫酸法測定過程中硫酸帶來的腐蝕性，因此安全可靠。2.3 蒽酮蒽酮-硫酸法硫酸法 蒽酮-硫酸法是多糖類在濃硫酸作用下水解、脫水，再與蒽酮結(jié)合成有色化合物，于最大吸收波長處測吸光度18-20。蒽酮-硫酸法穩(wěn)定性較差，宜新鮮配制并注意避光。此外，色氨酸含量較高的蛋白質(zhì)對(duì)顯色反應(yīng)有一定的干擾。蒽酮-硫酸法測多糖含量，特點(diǎn)是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖與己糖，而且可以測所有寡糖類和多糖類，其中包括淀粉、纖維素等。在沒有必要細(xì)致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)，苯酚有毒性，為致

13、癌物質(zhì)，且對(duì)某些多糖可能誘導(dǎo)發(fā)生副反應(yīng)，致使測得結(jié)果不準(zhǔn)，使用蒽酮?jiǎng)t避開了此點(diǎn)不足。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺，故測定糖的混合物時(shí)，常因不同糖類的比例不同造成誤差。蒽酮-硫酸法測定時(shí)的最大吸收波長差異范圍較大，一般葡萄糖在 580nm 處有最大吸收峰，而從目前文獻(xiàn)來看，植物多糖最大吸收波長多在 562-630nm 范圍內(nèi)21。在測定過程中，待測液需在冰水浴中緩慢滴加蒽酮-硫酸液，經(jīng)過一定時(shí)間，在沸水浴中反應(yīng)后，冰浴降溫后測量。另外，蒽酮-硫酸溶液的加入量要與供試品溶液成一定比例才有較好的顯色效果，加熱時(shí)間要足夠。3 色

14、譜法色譜法測定多糖含量的研究測定多糖含量的研究3.1 氣相色譜法氣相色譜法(gc) 氣相色譜法可定性、定量分析多糖的組分和含量。一般是將多糖酸水解或甲醇醇解，用衍生物法以增加其揮發(fā)性。在 gc 研究中，糖有兩類衍生物，一類是三甲基硅醚衍生物，是通過糖在吡啶或二甲基亞砜等非水溶劑中與六甲基二硅烷，三甲基氯硅烷，雙三甲基硅烷基乙酰胺，三氟甲磺酸三甲基硅酯等反應(yīng)形成，這類衍生物容易制取并具有較強(qiáng)揮發(fā)性。另一類糖衍生物是醋酸衍生物，包括三氟醋酸鹽多羥基醇衍生物，三氟醋酸多羥基醇衍生物，醋酸乙醛肟衍生物，醋酸腈衍生物等。氣相色譜分析法常用的色譜柱有填充柱和毛細(xì)管色譜柱22-24。近年來，隨著多程序升溫技

15、術(shù)的完善，石英毛細(xì)管柱應(yīng)用更為普遍，在糖分析中主要采用 at-1701、db-1701、hp-1701、ov-1701、ov-17、ov- 225、se-30、se-33、se-52、db-1 等。被分離產(chǎn)物的檢測常采用靈敏度高、選擇性好的檢測器，最常用的氫火焰離子化檢測器(hydrogen flameionization detector，fid)，具有最高的選擇性和靈敏度。此外也用到火焰光度檢測器( flame photomericdetector，fpd)、電子捕獲檢測器(electron capturdetector，ecd)、質(zhì)譜檢測器(ms)等。3.2 液相色譜法液相色譜法(hpl

16、c) 糖的高效液相色譜分析方法已成為常規(guī)分析方法?？蓪?duì)單糖和寡糖進(jìn)行常量和微量分析。高效液相色譜分析糖類化合物色譜柱一般采用氨基鍵合固定相，可用于分離一般的單糖、寡糖等。常用的氨基鍵合色譜柱有碳水化合物柱、amino- sil-x-1、lic hroe orb-nh2、hypersil nh2、polygosil 60-5nh2、ymg-nh2、amide-80、zorbax 氨基柱等。乙腈和水通?？勺鳛榱鲃?dòng)相，糖的保留時(shí)間隨水的比例減少而減少。c18和 c8硅烷色譜柱也常用于糖分析。此外，陽離子交換柱也可用于糖分析，一般是以聚苯乙烯型陽交換色譜樹脂制作，有h+型、ca 2+、ag+、pb2+

17、等離子型。一般以水作流動(dòng)相，在較高溫度(75-85)下，分離效果較好。hplc 常用的檢測器有示差折光檢測器(differential refractometers，ri)、蒸發(fā)光檢測器(evaporative lightscattering detector，elsd)、紫外檢測器(ul travioletdetector，uv)、熒光檢測器(fluorescence detector，fld)、電化學(xué)檢測器(electrochemical detector，ed)等。ri 檢測器具有樣品毋需衍生化、操作簡單、穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)，但存在靈敏度偏低、不適合梯度洗脫、受流速和溫度影響大等缺點(diǎn)；els

18、d 是一種質(zhì)量檢測器，其靈敏度比 ri 檢測器高；uv 檢測器主要用于在 190-210nm 有紫外吸收的非衍生醛糖、酮糖、二糖和脫氧糖等，二級(jí)管陣列檢測器(photodiode ar ray detector，pda)是紫外-可見光檢測器中的一種，二者靈敏度遠(yuǎn)高于 ri 和 elsd 檢測器；fld 是利用物質(zhì)的熒光吸收而實(shí)現(xiàn)檢測，靈敏度更高。由于糖類不具有紫外吸收和熒光吸收，需對(duì)其進(jìn)行衍生化處理。檢測極限可達(dá)到 pmol-amol 級(jí)，可比 ri 檢測器靈敏度提高 1000倍。常用的糖類紫外衍生化試劑有 2，4-二硝基苯、對(duì)甲氧基苯胺、2-氨基吡啶、6- 氨基喹啉、苯甲酸、對(duì)氨基苯甲酸乙酷

19、、3-甲基-1-苯基-2 吡唑琳酮、苯甲酰氯等。另外糖醇可以對(duì)硝基苯甲酰氯(p-nitrobenzoyl chloride)衍生后可在 260nm檢測，肌醇在以異氰酸苯酯(phenyl isocyanate)衍生后在 240nm 處可檢測25。作為熒光檢測的衍生化試劑主要 2-氨基吡啶、芴甲基羥基肼、鄰氨基苯甲酸、2-氨基苯甲酰胺、2，3-二氨基萘、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮、乙酰乙酰苯胺、3-(4-羧基苯甲?；?-2-喹啉羧基醛、8-氨基萘-1，3，6-三磺酸、1-氨基芘-3，6，8-三磺酸、7-氨基-萘磺酸、四甲基若丹明等26。3.3 薄層色譜法薄層色譜法(tlc)薄層色譜又叫薄層層

20、析，是根據(jù)樣品組分與吸附劑的吸附力及其在展層溶劑中的分配系數(shù)的不同而使混合物分離。薄層層析對(duì)設(shè)備要求不高，分離效果好、操作簡便、分離速度快(1-3h)、樣品需要量較少(500ng-1g)，紙色譜因分離時(shí)間和樣品量均處劣勢(shì)，逐漸淘汰。鄧國棟等以雙波長薄層掃描技術(shù)測定了一種茶葉多糖的單糖組成。建立了單糖濃度和斑點(diǎn)面積的定量關(guān)系，以此對(duì)樣品中各單糖作定量分析，并對(duì)阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、木糖檢測限可達(dá) 1.2g。tlc 方法還可以實(shí)現(xiàn)糖醇、寡糖等分析，檢測限都可達(dá)到 g 級(jí)別。利用高效薄層色譜(high per-formance thin layer chromatograph，hptlc)，進(jìn)行

21、薄層掃描，檢測限可達(dá)到 ng 級(jí)27。4 其他方法其他方法4.1 紅外光譜定量分析多糖法紅外光譜定量分析多糖法 紅外光譜定量分析多糖是通過對(duì)特征吸收譜帶強(qiáng)度的測量來求出組份含量。其理論依據(jù)是朗伯-比耳定律28。定量分析方法可用標(biāo)準(zhǔn)曲線法、求解聯(lián)立方程法方法進(jìn)行定量分析。利用傅里葉變換紅外光譜估測多糖含量時(shí)，一般認(rèn)為糖量的特征波在 970cm 和 1182cm 之間。blakeney 等用近紅外反射光譜測定了谷物中非淀粉多糖，該方法快速、便宜，作為一種快速分析具有營養(yǎng)功能重要多糖的方法使用具有很大的潛力。 4.2 生物傳感器法生物傳感器法生物傳感器法利用酶的專一性反應(yīng)，能實(shí)現(xiàn)糖的快速分析。葡萄糖

22、、蔗糖、果糖、乳糖等糖類的快速分析生物傳感器已較成熟，檢測限達(dá) 3.510-5mol/l29。5 結(jié)論結(jié)論 通過以上介紹的對(duì)多糖含量測定的幾種不同方法比較，不難發(fā)現(xiàn)每種方法都有自己的優(yōu)缺點(diǎn)，現(xiàn)在就對(duì)這幾種方法針對(duì)不同植物多糖含量的測定進(jìn)行一下比較。 傳統(tǒng)的多糖含量測定方法為苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法，但這兩種方法測定步驟繁瑣，而且只能測定樣品中總糖的含量，若樣品中含有單糖，則會(huì)使測定結(jié)果偏高；再者硫酸具有嚴(yán)重的腐蝕性，苯酚極易氧化，給實(shí)驗(yàn)操作帶來極大不便。3, 5-二硝基水楊酸法(簡稱 dns 法)具有操作簡便、快速、靈敏度高、雜質(zhì)干擾較小等優(yōu)點(diǎn)，近年來逐漸被應(yīng)用于植物藥、中成藥、海洋生物藥等

23、藥物中多糖含量的測定30。 dns 法測定原理為 3, 5-二硝基水楊酸與多糖水解產(chǎn)物還原糖共熱后生成棕紅色的氨基化合物(3-氨基-5-硝基水楊酸)，在一定的范圍內(nèi)，還原糖的含量和反應(yīng)液顏色成比例關(guān)系，利用比色法可測定多糖的含量。dns 比色法中，色素等還原性物質(zhì)可與 dns 顯色劑顯色，采用水解前測定值校正水解后測定值的方法，簡便、 有效地排除了色素等雜質(zhì)的干擾。dns 試劑即 3, 5-二硝基水楊酸試劑，可采用直接配制的方法，也可先配制甲液和乙液,再將兩液混合。配制顯色劑過程中加入結(jié)晶酚可增加試劑的顯色作用亞硫酸鈉可進(jìn)一步增強(qiáng)試劑的穩(wěn)定性。在選擇測定波長時(shí)要考慮多方面的因素，既要考慮是否為

24、最大吸收波長，又要考慮在該波長下測定結(jié)果是否穩(wěn)定。樣品測試液的制備過程中，酸水解時(shí)間不能太短也不能太長，時(shí)間短則多糖水解不完全，時(shí)間長則單糖和鹽酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成糖醛，不能和 3, 5-二硝基水楊酸發(fā)生縮合反應(yīng)。因此，水解時(shí)間要嚴(yán)格控制，否則會(huì)影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。 dns 法可用于羧甲基殼聚糖的含量測定，鄒巧根等用該法測得了羧甲基殼聚糖的含量，羧甲基殼聚糖為殼聚糖的羧甲基化產(chǎn)物31。殼聚糖是從蝦、蟹類等甲殼類海洋生物中提取出的甲殼素經(jīng)脫乙?；玫?，羧甲基殼聚糖由于引入羧甲基使其水溶容性大大增強(qiáng)，在制藥、生物醫(yī)用材料行業(yè)用途廣泛。由于組成羧甲基殼聚糖的單糖結(jié)構(gòu)為羧甲基氨基葡萄糖和羧甲基乙酰氨基

25、葡萄糖而且均為還原糖，從原理上分析很適合用 dns 法測定其含量，最終測定結(jié)果與理論相符。蘇廣宇等人在研究產(chǎn)幾丁質(zhì)酶海洋細(xì)菌的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，也采用了 dns 法測定多糖含量。幾丁質(zhì)廣泛存在于甲殼綱動(dòng)物蝦蟹及昆蟲的甲殼中，具有抗癌活性，免疫調(diào)節(jié)等作用。由于幾丁質(zhì)很穩(wěn)定，在測定其含量前必須先進(jìn)行降解，其中酶解法反應(yīng)條件溫和，不必加入其他反應(yīng)試劑，不發(fā)生其他副反應(yīng)，產(chǎn)物聚合度適中、節(jié)能、高效、無污染，所以常用酶解法先進(jìn)行酵解再進(jìn)行含量測定，其測定方法與用 dns 法測其他多糖方法類似。dns 法越來越多的被用于多糖的含量測定，越來越受工作者的關(guān)注。采用 dns 法可以克服傳統(tǒng)方法的不足

26、，而且測定結(jié)果準(zhǔn)確度高，精密度良好，安全可靠，操作簡單，原理清晰明了，容易掌握,因此，dns 法具有很好的應(yīng)用前景。6 展望展望多糖的研究雖然較生命科學(xué)中其他三大類物質(zhì)蛋白質(zhì)、核酸和脂類起步為晚，但由于其在生命過程中重要的生理功能及其廣泛的應(yīng)用被不斷挖掘，引起了人們?cè)絹碓酱蟮呐d趣?，F(xiàn)在多糖已成為天然藥物及保健品研發(fā)中的重要組成部分。同時(shí)也應(yīng)看到，無論是國內(nèi)還是國外，多糖的研究與蛋白質(zhì)和核酸的研究相比還有相當(dāng)?shù)牟罹?。所以開展各種植物多糖分離純化及含量測定方法研究，既有理論意義，也有現(xiàn)實(shí)意義。此外，糖分析還有其他一些方法，隨著檢測儀器不斷革新升級(jí)，多糖含量檢測方法趨于多樣化。多糖含量檢測總的發(fā)展趨

27、勢(shì)是使檢測過程更簡便、快速、準(zhǔn)確、實(shí)現(xiàn)痕量檢測、在線檢測及更多反應(yīng)結(jié)構(gòu)信息等。參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)1 李衛(wèi)彬，陽文輝，黃鎖義，等. 當(dāng)歸總糖、還原糖和多糖的含量測定方法探討j. 微量元素與健康研究，2008，25(3): 46-47.2 王俊，朱一凡. 槲寄生多糖的提取分離和含量測定j. 中國中藥雜志，2007， 32(22): 2387-2390.3 王紅英，錢斯日古楞，趙前程，等. 3, 5-二硝基水楊酸比色法測定麥冬多糖含量j. 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，36(5): 628-630 .4 崔本連，宋海韜，齊放，等. 3, 5-二硝基水楊酸法測定安絡(luò)小皮傘菌中多糖的含量j. 長春中醫(yī)藥大學(xué)

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