4實(shí)驗(yàn)四放線菌酵母和霉菌形態(tài)的觀察

1、實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 四四放線菌、霉菌和酵母菌放線菌、霉菌和酵母菌形形 態(tài)態(tài) 的的 觀觀 察察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊笠?、?shí)驗(yàn)?zāi)康囊?1.學(xué)習(xí)掌握觀察放線菌、霉菌和酵母菌學(xué)習(xí)掌握觀察放線菌、霉菌和酵母菌形態(tài)的基本方法。形態(tài)的基本方法。 2.加深理解放線菌、霉菌和酵母菌的形加深理解放線菌、霉菌和酵母菌的形態(tài)特征。態(tài)特征。原核類原核類：細(xì)菌、古生菌、：細(xì)菌、古生菌、放線菌放線菌、藍(lán)細(xì)菌、支原、藍(lán)細(xì)菌、支原體體、立克次氏體、衣原體等。、立克次氏體、衣原體等。 真核類真核類：真菌（：真菌（酵母菌、霉菌酵母菌、霉菌、蕈菌）、原生動(dòng)、蕈菌）、原生動(dòng)物物、 顯微藻類。顯微藻類。 非細(xì)胞類非細(xì)胞類：病毒、亞病毒（類病毒、朊病

2、毒等）：病毒、亞病毒（類病毒、朊病毒等）二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理放線菌、霉菌和酵母菌放線菌、霉菌和酵母菌分類地位分類地位二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理1 1放線菌：放線菌：是一類主要呈菌絲狀生長(zhǎng)和孢子繁是一類主要呈菌絲狀生長(zhǎng)和孢子繁殖的陸生性較強(qiáng)的殖的陸生性較強(qiáng)的革蘭氏陽(yáng)性革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，廣泛分布細(xì)菌，廣泛分布于含水量低、有機(jī)質(zhì)豐富的微于含水量低、有機(jī)質(zhì)豐富的微堿性土壤中堿性土壤中。 放線菌的放線菌的菌落形態(tài)特征菌落形態(tài)特征為：形成為：形成干燥、不透干燥、不透明、明、表面呈致密表面呈致密絲絨絲絨狀，上有一層彩色狀，上有一層彩色“干粉干粉”的菌落。菌落與培養(yǎng)基連接緊密，的菌落。菌落與培養(yǎng)基連接緊密，難

3、以挑取，難以挑取，菌落正反面菌落正反面顏色不一致顏色不一致，在菌落邊緣的瓊脂平，在菌落邊緣的瓊脂平板上有變形的現(xiàn)象，有板上有變形的現(xiàn)象，有泥腥味泥腥味。鏈鏈霉霉菌菌不不同同類類型型孢孢子子絲絲 2 2酵母菌酵母菌：酵母的菌：酵母的菌落形態(tài)與細(xì)菌的相仿，落形態(tài)與細(xì)菌的相仿，由于酵菌細(xì)胞比細(xì)菌的由于酵菌細(xì)胞比細(xì)菌的大，細(xì)胞間隙含水量較大，細(xì)胞間隙含水量較少，少，不能運(yùn)動(dòng)不能運(yùn)動(dòng)，菌落較，菌落較大、較厚，外觀較稠、大、較厚，外觀較稠、不透明，菌落顏色多為不透明，菌落顏色多為乳白色乳白色或或礦燭色礦燭色。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 （1 1）形態(tài)觀察）形態(tài)觀察：不運(yùn)動(dòng)、：不運(yùn)動(dòng)、單細(xì)胞單細(xì)胞、真核生物，

4、比、真核生物，比常見細(xì)胞大幾倍甚至十幾倍。常見細(xì)胞大幾倍甚至十幾倍。 大多數(shù)以大多數(shù)以出芽出芽方式方式無性繁殖，分裂繁殖；有性繁殖是通過結(jié)合產(chǎn)生無性繁殖，分裂繁殖；有性繁殖是通過結(jié)合產(chǎn)生子囊孢子。子囊孢子。 （2 2）死活鑒定）死活鑒定：美藍(lán)美藍(lán)是一種是一種無毒無毒的染料，的染料，它的氧它的氧化型呈藍(lán)色，還原型呈無色?；统仕{(lán)色，還原型呈無色。用美藍(lán)對(duì)酵母的活用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。因此，化型變?yōu)闊o色的還原型。因此

5、，具有還原能力的具有還原能力的酵母酵母活細(xì)胞是活細(xì)胞是無色無色的的，而，而死細(xì)胞死細(xì)胞或代謝作用微弱或代謝作用微弱的的衰老衰老細(xì)胞則成細(xì)胞則成藍(lán)色藍(lán)色或或淡藍(lán)淡藍(lán)色。色。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理2酵母菌酵母菌酵母菌的菌落酵母菌的菌落啤酒酵母啤酒酵母1、菌落較大、較菌落較大、較厚厚、外觀較外觀較稠稠和和較不透明較不透明。2、與培養(yǎng)基結(jié)合與培養(yǎng)基結(jié)合不緊不緊密密，易挑起易挑起。3、正面和反面、邊緣正面和反面、邊緣與中央與中央顏色一致顏色一致。 3 3霉菌霉菌：霉菌的菌絲和孢子：霉菌的菌絲和孢子比放線菌比放線菌的的粗粗得多。得多。菌落形態(tài)較大，菌落形態(tài)較大，質(zhì)地蔬松質(zhì)地蔬松，外觀，外觀干燥干燥，不透

6、明，不透明，菌落與培養(yǎng)基間連接菌落與培養(yǎng)基間連接緊密緊密，不易挑取不易挑取，菌落菌落正反正反面，邊緣與中心的面，邊緣與中心的顏色顏色、構(gòu)造通常、構(gòu)造通常不一致不一致，有，有霉霉味味。菌絲的。菌絲的孢子孢子較大，在低倍鏡下即可清晰觀察較大，在低倍鏡下即可清晰觀察到有隔或無隔到有隔或無隔菌絲菌絲和和孢子孢子及巨大的及巨大的孢子囊孢子囊。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理黑曲霉黑曲霉三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料1.1. 放線菌培養(yǎng)物：放線菌培養(yǎng)物：鏈霉菌鏈霉菌( (醫(yī)學(xué)院學(xué)生分醫(yī)學(xué)院學(xué)生分離離) )4 4天培養(yǎng)物。天培養(yǎng)物。2.2. 啤酒酵母啤酒酵母2424至至28h28h培養(yǎng)物。培養(yǎng)物。3.3. 黑曲霉黑曲霉4

7、d4d平面培養(yǎng)物。平面培養(yǎng)物。 顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、解剖刀、酒精燈、鑷子、顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、解剖刀、酒精燈、鑷子、酒精、蒸餾水等。酒精、蒸餾水等。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 觀察放線菌的形態(tài)觀察放線菌的形態(tài) 觀察酵母菌的形態(tài)觀察酵母菌的形態(tài) 觀察霉菌的形態(tài)觀察霉菌的形態(tài) 1. 1. 放線菌孢子絲形態(tài)觀察放線菌孢子絲形態(tài)觀察( (插片法插片法) )（1 1） 融化高氏融化高氏1 1號(hào)培養(yǎng)基，冷卻至號(hào)培養(yǎng)基，冷卻至5050度倒平板，平度倒平板，平板要厚一些，以利于插片。接種、插片、培養(yǎng)。板要厚一些，以利于插片。接種、插片、培養(yǎng)。（2 2）染色：）染色：用鑷子小心取出蓋玻片，并將其背面附用鑷

8、子小心取出蓋玻片，并將其背面附著的菌絲體擦干凈，著的菌絲體擦干凈，用用0.05%0.05%美藍(lán)染色美藍(lán)染色約約1min1min后水后水洗。洗。然后將蓋玻片無菌絲體的面放在載玻片上。然后將蓋玻片無菌絲體的面放在載玻片上。（3 3）鏡檢：）鏡檢：晾干晾干后用后用100x100x油鏡觀察油鏡觀察孢子絲形態(tài)特征。孢子絲形態(tài)特征。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 注意：注意：染色水洗時(shí)水流要緩，以免破壞孢子絲形態(tài)。染色水洗時(shí)水流要緩，以免破壞孢子絲形態(tài)。10092436俞佩楓拍攝俞佩楓拍攝放線菌放線菌放線菌放線菌 2. 2. 酵母菌酵母菌形態(tài)形態(tài)觀察及觀察及死活死活細(xì)胞鑒別：細(xì)胞鑒別： 美藍(lán)浸片美藍(lán)浸片的觀察的

9、觀察: :（1 1）滴一小滴滴一小滴0.050.05呂氏堿性呂氏堿性美藍(lán)染色液美藍(lán)染色液于于載玻片載玻片中央，按中央，按無菌無菌操作取少量操作取少量酵母菌酵母菌與其混合均勻。與其混合均勻。 用鑷子取一塊用鑷子取一塊蓋玻片蓋玻片，將蓋玻片一邊與菌體接觸，將蓋玻片一邊與菌體接觸，緩緩將蓋玻片傾斜并緩緩將蓋玻片傾斜并覆蓋覆蓋在菌液上。在菌液上。 放置約放置約3min3min后，先用后，先用低倍鏡后用低倍鏡后用40x40x高倍鏡高倍鏡( (不用油不用油鏡鏡),),觀察酵母的觀察酵母的形態(tài)形態(tài)和和出芽出芽情況，并根據(jù)顏色情況，并根據(jù)顏色區(qū)別區(qū)別死活細(xì)胞。死活細(xì)胞。（2 2）染色染色0.5h0.5h后后再

10、次觀察，注意再次觀察，注意死細(xì)胞死細(xì)胞是否增加。是否增加。 四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 用接種環(huán)將菌體與染液混合時(shí)用接種環(huán)將菌體與染液混合時(shí)不要?jiǎng)×彝磕ú灰獎(jiǎng)×彝磕ǎ悦馄茐募?xì)胞。以免破壞細(xì)胞。 滴加滴加染液要適中染液要適中，否則用蓋玻片覆蓋時(shí)，染，否則用蓋玻片覆蓋時(shí)，染液過多會(huì)溢出，過少會(huì)產(chǎn)生大量氣泡。液過多會(huì)溢出，過少會(huì)產(chǎn)生大量氣泡。 蓋玻片要緩慢蓋玻片要緩慢傾斜覆蓋，以免產(chǎn)生氣泡。傾斜覆蓋，以免產(chǎn)生氣泡。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟2. 酵母菌酵母菌形態(tài)形態(tài)觀察及觀察及死活死活細(xì)胞鑒別：細(xì)胞鑒別：3分鐘分鐘10092436俞佩楓拍攝俞佩楓拍攝30分鐘分鐘10092436俞

11、佩楓拍攝俞佩楓拍攝 3.3. 霉菌霉菌的的形態(tài)形態(tài)觀察觀察：（1 1）在載玻片上滴加一滴在載玻片上滴加一滴0.05%0.05%美藍(lán)美藍(lán)染液；染液；（2 2）用解剖針或鑷子從霉菌菌落底部小心用解剖針或鑷子從霉菌菌落底部小心挑挑取少量取少量已經(jīng)已經(jīng)產(chǎn)孢子產(chǎn)孢子的的霉菌菌絲霉菌菌絲；（3 3）放在載玻片上的染液中，用解剖針小心放在載玻片上的染液中，用解剖針小心將將菌絲分開菌絲分開；（4 4）蓋上蓋上蓋玻片蓋玻片，置于，置于10x10x低倍鏡下觀察，必低倍鏡下觀察，必要時(shí)換要時(shí)換40x40x高倍鏡高倍鏡.(.(不用油鏡不用油鏡! !) )四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟黑曲霉黑曲霉10092436俞佩楓拍攝俞

12、佩楓拍攝3.3. 霉菌霉菌的的形態(tài)形態(tài)觀察觀察注意：注意： 用鑷子取菌和用解剖針分散菌絲時(shí)要細(xì)用鑷子取菌和用解剖針分散菌絲時(shí)要細(xì)心，盡量減少菌絲斷裂及形態(tài)被破壞，心，盡量減少菌絲斷裂及形態(tài)被破壞，蓋蓋玻片時(shí)避免氣泡產(chǎn)生。蓋蓋玻片時(shí)避免氣泡產(chǎn)生。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1.1.繪圖繪圖并說明放線菌基內(nèi)菌絲、氣生菌絲及孢子并說明放線菌基內(nèi)菌絲、氣生菌絲及孢子絲的形態(tài)和特征絲的形態(tài)和特征2.2.繪圖繪圖并說明酵母菌形態(tài)及出芽生殖情況并說明酵母菌形態(tài)及出芽生殖情況3.3.列表列表說明在顯微鏡下，細(xì)菌、放線菌、酵母菌說明在顯微鏡下，細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌的和霉菌的主要主要區(qū)別是什么？區(qū)別是什么？4.4.根據(jù)你所觀察到的呂氏