瑤藥葫蘆鉆提取物抗腫瘤作用分析論文

1、瑤藥葫蘆鉆提取物抗腫瘤作用分析論文 【摘要】目的研究葫蘆鉆提取物的抗腫瘤作用。方法體外抗腫瘤活性研究采用MTT比色法，靶細胞采用人肝癌細胞BLE7404；通過復(fù)制小鼠S180，H22腹水瘤和肉瘤動物模型，觀察葫蘆鉆提取物對小鼠平均生命延長率和腫瘤抑制率的影響來評價體內(nèi)抗腫瘤作用。結(jié)果葫蘆鉆水、醇提取物濃度為20mg/ml時，對體外培養(yǎng)的腫瘤細胞的抑制率均50%；葫蘆鉆水、醇提取物的最大耐受劑量均是150g/kg；經(jīng)3次實驗，葫蘆鉆水、醇提取物高、低劑量組對S180腹水瘤小鼠平均生命延長率均50%，葫蘆鉆醇提物高劑量組對H22腹水瘤小鼠平均生命延長率50%。葫蘆鉆水、醇提取物高、低劑量組對S18

2、0肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均30%，對H22肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均50%。結(jié)論葫蘆鉆水、醇提取物具有一定的抗腫瘤作用。 【關(guān)鍵詞】葫蘆鉆；抗腫瘤 Abstract:ObjectiveToinvestigatetheantitumoractivityofYaoHerb-Huluzuan.MethodsTheantitumoractivityinvitroagainsthumancancercelllines-hepatocarcinomaBEL-7404wasdeterminedbyMTTmethod.Theantitumoractivityinvivowasevaluatedbytheprol

3、ongationratiosoflife-spanandtheinhibitionratiosofthetumorweightoftransplantedmouseS180、H22solidandascitescarcinomamodelfedonextractedsubstancesfromHuluzuan.ResultsWhenthedoseofwater,alcoholextractedsubstancesfromHuluzuanwas20mg/ml,theinhibitionratiosofthetumorcellinvitrowasinexcessof50%.Bothmaximumt

4、olerateddoseofwater,alcoholextractedsubstancesfromHuluzuanwere150g/kg.Inthreetimesoftheexperiment,prolongationratiosoflifespanathighandlowdoseofwater,alcoholextractedsubstancesexceed50%onmiceS180ascitescarcinomamodelinaverage,andathighdoseofalcoholextractedsubstancesexceeded50%onmiceH22ascitescarcin

5、omamodelinaverage,inhibitionratiosathighandlowdoseofwater、alcoholextractedsubstancesexceed30%onmiceS180solidcarcinomamodelandexceed50%onmiceH22solidcarcinomamodelinaverage.ConclusionWater,alcoholextractedsubstancesfromHuluzuanhasantitumoractivitytosomeextent. Keywords:Huluzuan；Antitumor 葫蘆鉆為天南星科植物石柑

6、子Pothoschinensis(Raf.)Merr.的全草，為廣西瑤醫(yī)老班藥“五虎、九牛、十八鉆、七十二風(fēng)”之一，瑤族傳統(tǒng)治癌“打藥”1，具有理氣止痛，清熱解毒的功效。根據(jù)民間用藥經(jīng)驗，開展抗腫瘤作用實驗研究，作者通過體內(nèi)藥效實驗和體外藥效實驗評價葫蘆鉆提取物的抗腫瘤效果。 1材料 1.1藥材葫蘆鉆采自廣西金秀瑤族自治縣，經(jīng)廣西民族醫(yī)藥研究所戴斌主任藥師鑒定為天南星科植物石柑子。 1.2動物昆明種小鼠，體重1822g，雌雄兼用，SPF級，購自廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心（生產(chǎn)許可證號：SCXK桂20030003），動物分組分籠飼養(yǎng)，自由飲水，喂全價顆粒飼料，動物室溫度（24±2），相對

7、濕度50%60%。 1.3主要藥品與試劑RPMI1640培養(yǎng)基為Gibco公司的產(chǎn)品；MTT為Sigma公司的產(chǎn)品；小牛血清為杭州四季清公司的產(chǎn)品；DMSO（二甲基亞砜）為Sigma公司的產(chǎn)品；其余試劑均為分析純。 1.4細胞系人肝癌細胞BEL7404引自中國科學(xué)院上海細胞生物研究所細胞庫；用RPMI1640培養(yǎng)液（含10%的小牛血清，100ku·L-1青霉素，100mg·L-1鏈霉素）37，5%CO2，相對濕度100%培養(yǎng)，0.25%胰蛋白酶消化傳代。 1.5瘤株小鼠S180，H22腹水瘤株和小鼠S180，H22肉瘤株均由廣西中醫(yī)藥研究所引進，本實驗室冷凍保存，用昆明種小

8、鼠接種傳代。 2方法 2.1葫蘆鉆提取物的制備葫蘆鉆水提物：取藥材加10倍量水水煎兩次，1h/次，濾液合并濃縮，4冰箱保存?zhèn)溆?；葫蘆鉆醇提物：取粗粉加5倍量95%乙醇回流提取3次，第1次2h，第2，3次各1h，合并濾液減壓回收乙醇至無醇味，濃縮，4冰箱保存?zhèn)溆谩?2.2體外藥效實驗MTT法測定：BEL7404經(jīng)胰蛋白酶處理制成單細胞懸液，接種96孔板，每孔接種3000個細胞/100l，含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液，培養(yǎng)24h后，實驗組分別加入最終濃度為1，5，10，20mg/ml葫蘆鉆水提物和醇提物的培養(yǎng)液，對照組則加入等體積溶劑的培養(yǎng)液。每組均設(shè)7個平行孔。置37，5%CO2培養(yǎng)箱

9、培養(yǎng)5d后，加入MTT20l，4h后棄上清，每孔加入DMSO100l，1h內(nèi)在BioRad550MicoplateReader上用波長546nm比色，測定OD值，按下式計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率2。 腫瘤細胞生長抑制率(%)=（1實驗組平均OD值/對照組平均OD值）×100% 2.3急性毒性實驗在預(yù)試驗基礎(chǔ)上，取40只昆明種小鼠，體重1822g，雌雄各半，隨機分為兩組。以動物能耐受的最大濃度，最大容積的劑量，灌胃給藥，葫蘆鉆水提物3.75g生藥/ml，葫蘆鉆醇提物3.75g生藥/ml，0.4ml/10g體重。給藥后連續(xù)觀察7d，逐日觀察記錄動物反應(yīng)情況3。 2.4體內(nèi)藥效實驗4

10、2.4.1對S180，H22腹水瘤小鼠生存天數(shù)的影響在無菌條件下，抽取小鼠腹腔內(nèi)連續(xù)傳代的S180，H22細胞，從右下腹部注入受體動物腹腔內(nèi)，每鼠0.2ml。接種24h后隨機分組，每組10只。接種次日葫蘆鉆水提物高、低劑量組（37.5，12.5g/kg），葫蘆鉆醇提物高、低劑量組（37.5，12.5g/kg），模型對照組（蒸餾水），連續(xù)ig給藥10d后，停止給藥，正常飼養(yǎng)，直到自然死亡，逐日記錄荷瘤小鼠的存活狀況，按下式計算各組平均生命延長率。 生命延長率=治療組平均存活天數(shù)-對照組平均存活天數(shù)對照組平均存活天數(shù)×100% 上述實驗均重復(fù)3次，并計算3次的平均值。 2.4.2對S18

11、0，H22肉瘤小鼠的抑瘤作用分別選擇接種7d后的S180，H22肉瘤（腹水型）小鼠，頸椎脫臼致死，固定于板上，消毒腹部皮膚，用無菌空針抽吸含瘤細胞腹水，接種于受體動物右前肢腋部皮下，每鼠0.2ml。24h后將已接種的小鼠隨機分為對照組、治療組（高，低劑量組），每組10只。治療組每天ig給藥1次，連續(xù)10d，對照組ig等量的蒸餾水。于停藥后第2天處死，稱體重和瘤重，按下式計算抑瘤率。 腫瘤抑制率=對照組瘤重給藥組瘤重對照組瘤重×100% 上述實驗均重復(fù)3次，并計算3次的平均值。 2.5統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以±s表示。 3結(jié)果 3.1MTT法不同濃度葫蘆鉆水

12、、醇提取物對人肝癌細胞株BEL7404的抑制。結(jié)果見表1。 表1不同濃度葫蘆鉆水、醇提取物對體外培養(yǎng)的人肝癌細胞BEL7404的影響（略） 結(jié)果顯示，葫蘆鉆水、醇提取物對體外培養(yǎng)的人肝癌細胞BEL7404增殖都表現(xiàn)較強的抑制作用，抑制率與提取物濃度正相關(guān)。當葫蘆鉆水、醇提取物濃度為20mg/ml時，抑制率均50%，且葫蘆鉆醇提取物作用效果強于葫蘆鉆水提物。 3.2葫蘆鉆水提物日總劑量為150g/kg，葫蘆鉆醇提物日總劑量為150g/kg，給藥當天動物出現(xiàn)便溏現(xiàn)象，其后觀察7d，對小鼠體重、行為、進食、皮毛、眼和黏膜、呼吸、四肢活動均無任何影響。說明葫蘆鉆水、醇提取物的急性毒性小。 3.33次實

13、驗結(jié)果顯示，葫蘆鉆水、醇提取物高、低劑量組對S180腹水瘤小鼠平均生命延長率均50%，葫蘆鉆醇提物高劑量組對H22腹水瘤小鼠平均生命延長率50%。結(jié)果見表2。 表2葫蘆鉆提取物對S180和H22腹水瘤小鼠存活期的影響（略） 與模型組比較，P 3.43次實驗結(jié)果顯示，葫蘆鉆水、醇提取物高、低劑量組對S180肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均30%，對H22肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均50%，結(jié)果見表3。 表3葫蘆鉆提取物對S180和H22肉瘤小鼠的抑制作用（略） 與模型組比較P 4討論 尋找具有抗癌作用強，抗癌譜廣，副作用小的天然活性化合物是抗癌藥物研究的重要途徑。近年來對傳統(tǒng)瑤藥開展抗腫瘤作用的篩選研究，發(fā)

14、現(xiàn)瑤藥葫蘆鉆具有一定的抗腫瘤作用。本研究結(jié)果顯示，通過MTT法檢測葫蘆鉆水、醇提取物對人肝癌細胞生長有抑制作用。當藥物濃度低于5mg/ml時，對腫瘤細胞的抑制作用不明顯。隨著藥物濃度升高至20mg/ml，藥物對腫瘤細胞生長的抑制較明顯，抑制率在50%以上。且葫蘆鉆醇提物的作用效果強于水提物。急性毒性實驗中，葫蘆鉆水、醇提取物的最大耐受劑量均是150g/kg，急性毒性較小。從實驗結(jié)果可以看出，葫蘆鉆水、醇提取物在改善S180腹水瘤小鼠存活率方面作用非常明顯，生命延長率為73.65%97.43%，與模型組比較，平均生存期延后10d以上。葫蘆鉆醇提物高劑量組在改善H22腹水瘤小鼠存活率方面作用明顯，生命延長率為54.75%。葫蘆鉆水、醇提取物對S180肉瘤和H22肉瘤均具有明顯的抑制作用，對S180肉瘤平均抑制率30%，對H22肉瘤平均抑制率50%，與模型組比較有顯著性差異（P 【參考文獻】 1戴斌，丘翠嫦，李釗東，等瑤醫(yī)用藥品種調(diào)查報告J.中草藥，1