最新微生物學(xué)實驗3革蘭氏染色與細(xì)菌個體形態(tài)的觀察精選PPT文檔

1、1. 1. 細(xì)菌的細(xì)胞壁組成和結(jié)構(gòu)差異細(xì)菌的細(xì)胞壁組成和結(jié)構(gòu)差異g g+ +：壁厚，肽聚糖含量高，類脂質(zhì)含量低：壁厚，肽聚糖含量高，類脂質(zhì)含量低g g- -：壁薄，肽聚糖含量低，類脂質(zhì)含量高：壁薄，肽聚糖含量低，類脂質(zhì)含量高革蘭氏陽性細(xì)菌細(xì)胞壁革蘭氏陽性細(xì)菌細(xì)胞壁 革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁初染初染 媒染媒染 復(fù)染復(fù)染 脫色脫色2. 2. 染色染色（結(jié)晶紫）（結(jié)晶紫）（碘液）（碘液）（乙醇）（乙醇）（番紅）（番紅）g g+ +：藍(lán)紫色藍(lán)紫色g g- -：紅色紅色革蘭氏染色革蘭氏染色甲菌甲菌乙菌乙菌媒染媒染碘液碘液脫色脫色乙醇乙醇復(fù)染復(fù)染沙黃沙黃紫色紫色（g）初染初染結(jié)晶紫結(jié)晶紫紅

2、色紅色（g-） 1、制片、制片 （1）涂菌）涂菌：用無菌操作方法從試管中沾取菌液一環(huán)，用接種用無菌操作方法從試管中沾取菌液一環(huán)，用接種環(huán)在潔凈無脂的載玻片上做一環(huán)在潔凈無脂的載玻片上做一、直徑約、直徑約1 cm的菌膜。的菌膜。 （2）干燥）干燥：自然干燥或火焰上部略加溫加速干燥自然干燥或火焰上部略加溫加速干燥。 （3）固定）固定：將細(xì)菌涂片面向上，通過火焰將細(xì)菌涂片面向上，通過火焰3次。次。g g+ +g g- -?+ +- -2 2、染色、染色(p82-83)(p82-83)滴加結(jié)晶紫染液初染滴加結(jié)晶紫染液初染1 min水洗水洗滴加盧戈氏碘液媒染滴加盧戈氏碘液媒染1 min 水洗水洗滴加滴加

3、95乙醇脫色，搖動玻片至紫色不乙醇脫色，搖動玻片至紫色不再為乙醇脫退為止再為乙醇脫退為止(約約30 s) 水洗水洗滴加番紅復(fù)染滴加番紅復(fù)染12 min 水洗水洗用濾紙吸干，待鏡檢。用濾紙吸干，待鏡檢。 初染初染媒染媒染復(fù)染復(fù)染沖殘水沖殘水 吸殘水吸殘水 3 3、顯微鏡觀察（油鏡）。、顯微鏡觀察（油鏡）。1.1.菌齡：應(yīng)選擇活躍生長期的培養(yǎng)物作革蘭氏染色。菌齡：應(yīng)選擇活躍生長期的培養(yǎng)物作革蘭氏染色。培養(yǎng)時間過長，或死亡及部分自溶，改變了細(xì)菌細(xì)培養(yǎng)時間過長，或死亡及部分自溶，改變了細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性，造成陽性菌的假陰性反應(yīng)。胞壁的通透性，造成陽性菌的假陰性反應(yīng)。2.2.涂片不宜過厚，以免脫色不完全

4、，造成假陽性。涂片不宜過厚，以免脫色不完全，造成假陽性。3.3.+ +- -g g- -：壁薄，肽聚糖含量低，類脂質(zhì)含量高。脂多：壁薄，肽聚糖含量低，類脂質(zhì)含量高。脂多糖和蛋白質(zhì)的復(fù)合物遇強(qiáng)堿形成粘稠的膠胨狀糖和蛋白質(zhì)的復(fù)合物遇強(qiáng)堿形成粘稠的膠胨狀物，可以拉出粘狀絲來。物，可以拉出粘狀絲來。g g+ +：壁厚，肽聚糖含量高，類脂質(zhì)含量低。細(xì)胞：壁厚，肽聚糖含量高，類脂質(zhì)含量低。細(xì)胞壁堅固，對強(qiáng)堿無此反應(yīng)，不能拉出粘狀絲來。壁堅固，對強(qiáng)堿無此反應(yīng)，不能拉出粘狀絲來。載玻片上滴一小滴載玻片上滴一小滴3% koh3% koh溶液溶液用接種環(huán)接挑取被檢細(xì)菌于用接種環(huán)接挑取被檢細(xì)菌于3% koh3% k

5、oh溶液中混勻溶液中混勻30-60 s30-60 s后觀察菌液是否變粘稠，并拉出絲來后觀察菌液是否變粘稠，并拉出絲來根據(jù)實驗結(jié)果鑒別根據(jù)實驗結(jié)果鑒別g g+ +和和g g- -結(jié)果結(jié)果: 1: 1、 p84 1.p84 1.（1 1）、（）、（2 2）：描述）：描述( (繪繪) )所觀察細(xì)菌所觀察細(xì)菌(g(g+ +和和g g- -) )的個體形態(tài)；的個體形態(tài)； 2 2、描述、描述kohkoh試驗的結(jié)果；試驗的結(jié)果；思考題思考題 1 1、p84 2.p84 2.（3 3）題）題 2 2、kohkoh試驗現(xiàn)象直觀，可否取代現(xiàn)試驗現(xiàn)象直觀，可否取代現(xiàn)有染色方法，為什么？有染色方法，為什么？ 端正坐姿，臂懸空端正坐姿，臂懸空 托住瓶底，慢拔塞托住瓶底，慢拔塞 皿底在上，翻過來皿底在上，翻過來 懸空倒下，輕晃動懸空倒下，輕晃動 平推平板