大黃素抑制體外淋巴細(xì)胞增殖的作用研究

1、大黃素抑制體外淋巴細(xì)胞增殖的作用研宄【關(guān)鍵詞】淋巴細(xì)胞；細(xì)胞增殖；大黃素；免疫耐受inhibitoryeffectsofemodinonproliferationofhumanlymphocyt esinvitroabstrac t aim： toevaluateth einhibitoryeffectsofemodinonprolifer cytesinvitroandtoeechanism. methods:h dlymphocytesisolat swereculturedwithp pha),interleukin2 ( teculture (mlc), re redbydiffere

2、ntagen eproliferat i onofhu observedbymtt. resuncentrationsfrom3 xol/l,emodincouldsu tionoflymphocytesi lcobviously,andsho trationdependentin alsoemodinhadasyne sa in immunosuppreat i onofhuman1ympho xploreitspossiblem umanperipheralbloo edfromhealthydonor hytohemagglutinin( il2)ormixedleukocy spect

3、ively. interfe ts,emodinandcsa,th man1ymphocyteswas lts：intherangeofco10-6mol/lto3 x 10-5m ppresstheprolifera nducedbypha,il2orm wedapositiveconcen hibitoryeffect. and rgisticeffectwithcssivebehavior. conclusion：emodinexertsitsimmunosuppress iveeffectsthroughi nhibitingtheprolif erationoflymphocyt e

4、sinvitro.keywor ds lymphocytes；cel lproliferation；emodin；immunetoleranc e【摘要】目的：研究大黃素的體外免疫抑制作用，探討 其可能的作用機(jī)制.方法：通過(guò)pha, il2及mlc活化淋巴細(xì) 胞，給予大黃素和csa干預(yù)，采用mtt法觀(guān)察比較大黃素和 csa對(duì)淋巴細(xì)胞活化的抑制作用.結(jié)果：在3x10 -63x 10-5mol/l的濃度范圍內(nèi)，大黃素對(duì)pha，il2及mlc引起的 淋巴細(xì)胞活化表現(xiàn)出明顯的抑制作用，其作用隨濃度增加而 增強(qiáng)，并與csa具有協(xié)同性.結(jié)論：大黃素在體外通過(guò)抑制 淋巴細(xì)胞增殖來(lái)發(fā)揮其免疫抑制作用.【關(guān)鍵詞

5、】淋巴細(xì)胞；細(xì)胞增殖；大黃素；免疫耐受 0引言大黃素屬蒽醌類(lèi)，是蓼科植物提取的主要成分.具有抗 腫瘤、抗炎抑菌及保護(hù)肝腎等作用1-3.我們觀(guān)察emodin 對(duì)離體琳巴細(xì)胞活化的影響，并與環(huán)孢素a比較，研究?jī)烧?的協(xié)同性，以探討emodin在移植免疫抑制中的作用.1材料和方法材料emodin由陜西省藥品檢驗(yàn)所提供;csa由novartis公司提供；淋巴細(xì)胞分離液、四甲基偶氮唑鹽，重組人il2均購(gòu)自晶美公司；新生牛血清由杭州四季青生物工程研究所 提供；rp mi1640,植物血凝素分別購(gòu)自gi bco公司和上海 市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所.方法實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、csa組，emo din大，中，小 劑量組，cs

6、a與emodin聯(lián)用組.外周血淋巴細(xì)胞取自健康成 年人靜脈血，細(xì)胞密度為1x109 /l，按200 ul/孔培養(yǎng)于 96孔培養(yǎng)板中，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)2個(gè)復(fù)孔對(duì)照，置 入37°cc02的孵育箱中培養(yǎng).pha與il2刺激組：分別將p ha溶液按1 : 50的比例、il2貯存液按1 : 40的比例加入淋 巴細(xì)胞懸液中，分組給藥后培養(yǎng).mlc組：采用雙向混合淋 巴細(xì)胞培養(yǎng)，取兩位健康成年人無(wú)菌外周靜脈血，分別制備 外周血淋巴細(xì)胞.將供者、受者淋巴細(xì)胞每孔分別加入各100 ml,分組給藥后培養(yǎng).培養(yǎng)2 4,48,72h后用四甲基偶氮唑鹽 法于酶聯(lián)免疫分析儀上檢測(cè)各孔的吸光度值.淋巴細(xì)胞增

7、殖 抑制率=1_/ xi 00%.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)均用x±s表示，各組淋巴細(xì)胞增殖 抑制率比較用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析.p2結(jié)果在p ha，il2刺激或混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)后24，48，72h 后，emodin對(duì)不同刺激原引起的淋巴細(xì)胞增殖較正常對(duì)照組 均表現(xiàn)出與csa組一致的抑制作用，但其抑制強(qiáng)度弱于csa 組.在48和72h，csa與大黃素聯(lián)用組表現(xiàn)出較csa單劑組更 高的淋巴細(xì)胞增殖抑制率，但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.在3xio -53x10-6mol/l的濃度范圍內(nèi)，抑制率表現(xiàn)出一定 的劑量依賴(lài)性.同時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用 均表現(xiàn)出隨作用時(shí)間推移而呈逐漸增強(qiáng)趨勢(shì).1ph

8、a組不同藥物的淋巴細(xì)胞增殖抑制率 2il2組不同藥物的淋巴細(xì)胞增殖抑制率 3mlc組不同藥物的淋巴細(xì)胞增殖抑制率 4不同濃度大黃素的淋巴細(xì)胞增殖抑制率 3討論細(xì)胞免疫應(yīng)答是移植排斥的主要機(jī)制4 .emodin具 有多種藥理作用，移植術(shù)后患者在服用大黃制劑類(lèi)藥物后出 現(xiàn)全血免疫抑制劑藥物濃度增高5.本結(jié)果表明emodin 可以明顯的抑制特異性及非特異性的淋巴細(xì)胞活化，在3x10-63x 10-5mol/l 的濃度范內(nèi)emodin對(duì)淋巴細(xì)胞活化的抑制作用呈明顯的量效依賴(lài)關(guān)系，這種抑制作用與陽(yáng)性對(duì)照 組相一致，同時(shí)，em odin亦表現(xiàn)出與csa抑制淋巴細(xì)胞增 殖活化的協(xié)同作用.證明emodin能有

9、效地抑制淋巴細(xì)胞活化 后的克隆擴(kuò)增，從而進(jìn)一步影響免疫激活的后續(xù)環(huán)節(jié).【參考文獻(xiàn)】1 huangq,shenhm,shuig,etal. emodininhibitstumorcelladhesionthroughdisruptionofthemembranelipidraftas sociatedintegrinsi gnalingpathway j . cancerres,xx, 66： 58 07-5815.basus，ghosha，hazrab. evaluationoftheantibvent ilagomadraspatdifolialinnandlantacterialactivityof anagaertn,rubiacoranacamaralinn：isolationofemodinandph yscionasactiveanti bacterialagents j . phytotherres，xx，1 9: 888-894.3 高志強(qiáng)，王彩茂.大黃素與器官纖維化j.中 國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，xx，25: 10 30-1032.jungingv,etal. theinflu ectionepisodesonloeg,tulliussg,klitz enceofla