三種冷凍切片固定液在臨床應(yīng)用中的比較

1、三種冷凍切片固定液在臨床應(yīng)用中的比較余強(qiáng)趙會(huì)傳（通訊作者）（湖北省荊州市第一人民醫(yī)院病理科 湖北 荊州434000）【摘 要】木文通過大量臨床實(shí)踐工作，對(duì)三種常用冷凍切片固定液進(jìn)行對(duì) 比分析，找出不同固定液的優(yōu)缺點(diǎn)，從而指導(dǎo)技術(shù)人員運(yùn)用合適的冷凍切片固定 液，取得制片的滿意效果。【關(guān)鍵詞】冷凍切片；冷丙酮；95%乙醇；aaf液；固定【中圖分類號(hào)】r361【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】b【文章編號(hào)】1003-5028 （ 2015 ）5-0086-02隨著恒溫冷凍切片機(jī)的普及，越來越多的基層醫(yī)院將術(shù)中快速冷凍切片作為 病理科必備檢查項(xiàng)目進(jìn)行開展。冷凍切片因其制片過程簡單，快捷，在對(duì)于臨床 上需要進(jìn)行術(shù)中快速病理

2、診斷，以確定手術(shù)方式及范圍的病例上，具有石蠟切片 無法比擬的優(yōu)點(diǎn)，但因組織在制片前未經(jīng)固定，脫水等一系列處理，影響切片質(zhì) 量的因素多，導(dǎo)致術(shù)中快速病理診斷的誤診，漏診率也明顯高于常規(guī)石蠟切片病 理診斷。如何在有限的時(shí)間里制作出一張優(yōu)質(zhì)切片，是值得技術(shù)人員不斷實(shí)踐與 探究的問題。在儀器設(shè)備及人員素質(zhì)相同的情況下，制片后的處理至關(guān)重要，而 固定的過程則是重中之重。冷丙酮，95%乙醇，aaf液是臨床上應(yīng)用較廣泛的三 種冷凍切片固定液，固定效果各有優(yōu)點(diǎn)。我們運(yùn)用上述三種固定液，在各種組織 的冷凍切片制備中進(jìn)行了大量實(shí)驗(yàn)，對(duì)切片的固定效果以及最終質(zhì)量進(jìn)行了比較, 以便選用合適的固定液來獲得優(yōu)質(zhì)的冷凍切片

3、。1材料與方法1.1材料 標(biāo)木來源選用我院及外院術(shù)中切除新鮮組織，其中甲狀腺，乳腺 組織各40例，肝，腎組織及胃腸道腫瘤各20例，子宮及其附件組織60例。切 片機(jī)為shandon cyto fsm恒溫冷凍切片機(jī)，包埋劑為進(jìn)口 oct包埋劑。1.2固定液 純丙酮（4°c冰箱預(yù)冷），95%乙醇，aaf液（95%乙醇85ml,甲醛10ml,冰醋酸5ml）1.3方法切片機(jī)開啟速凍工作臺(tái)，箱體溫度設(shè)定為20°c左右。標(biāo)本切取大 小為2cm×2cm×0.3cm的組織塊，平放于冷凍組織托盤上，滴加oct 包埋劑，待組織急速冷凍至硬度適中，放置于冷凍

4、夾頭上，調(diào)整切片刀角度以 4?m厚度切片。連續(xù)切片3張，立即分別放入冷丙酮，95%乙醇，aaf液中固定 imino流水沖洗后行常規(guī)he染色，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。2結(jié)果顯微鏡下從細(xì)胞核形態(tài)，細(xì)胞核染色，細(xì)胞漿染色，核漿對(duì)比度，組織結(jié)構(gòu) 完整度五個(gè)方面進(jìn)行比較，并按5分制評(píng)分，總分25分。（表1）從觀察結(jié)果可以看出丙酮對(duì)細(xì)胞核的固定效果優(yōu)于另兩種固定液，但丙酮固 定的切片色彩暗淡，胞漿著色不均勻，核漿對(duì)比度差，口切片的完整性較差。95% 乙醇固定效果介于另兩種固定液之間，切片色彩尚可，但胞核形態(tài)及切片完整性 略差。aaf液在三種固定液中效果最好，除胞核稍腫脹外，切片色彩鮮艷，胞

5、漿 染色好，核漿對(duì)比度好，組織結(jié)構(gòu)完整。3討論冷凍切片的固定屬于切片后固定，近似于細(xì)胞涂片的固定，為節(jié)省吋間，切 片需要由滲透力強(qiáng)，固定效果好的固定液進(jìn)行快速固定。冷丙酮，95%乙醇，aaf 液用于冷凍切片的固定均可見于許多文獻(xiàn)的報(bào)導(dǎo)，固定效果各有優(yōu)缺點(diǎn)。下面進(jìn) 行逐一的探討與分析。 丙酮可沉淀蛋白質(zhì)，滲透力強(qiáng)，主要用于各種酶的固定，也有使組織細(xì)胞 嚴(yán)重收縮的缺點(diǎn)，我們認(rèn)為，冷凍切片因其自身的特點(diǎn)，在組織速凍過程中，細(xì) 胞有不同程度的腫脹變形，丙酮使細(xì)胞強(qiáng)烈收縮，從而使胞核的形態(tài)趨于正常, 因此胞核固定較好，輪廓較清晰，著色較好，這一觀察結(jié)果與一些文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)相一 致。但也正因?yàn)榧?xì)胞收縮劇烈，導(dǎo)致

6、皺縮變形，組織間距變大，部分組織成 分脫落，切片完整性被破壞。 95%乙醇是最常用的細(xì)胞涂片固定液，它可沉淀蛋白質(zhì)，也可固定糖原, 滲透力較弱，對(duì)核的固定效果較差，高濃度乙醇用作固定劑可溶解脂質(zhì)兼有脫水 的作用2。但其使組織收縮的作用不如丙酮?jiǎng)×?，?5%乙醇固定的切片，胞漿 染色鮮艷，核漿對(duì)比度較好，但核的輪廓不清，ii某些組織成分亦有脫落現(xiàn)象。 aaf液為混合固定液，其中甲醛為常規(guī)切片常用的固定劑，它滲透力強(qiáng), 使蛋白質(zhì)分子交聯(lián)發(fā)揮固定作用，固定均勻，對(duì)組織收縮小。冰醋酸穿透力強(qiáng), 可沉淀核蛋是細(xì)胞核的良好固定劑，亦可使細(xì)胞膨脹變形，與95%乙醇合用 可部分抵消此作用。aaf固定液固定的切

7、片，胞核著色良好，切片完整，核漿對(duì) 比度好，色彩鮮艷。但我們也發(fā)現(xiàn)，aaf液必須新鮮配制，否則因甲醛久置后產(chǎn) 生甲酸，使此液偏酸性，影響細(xì)胞核的染色，導(dǎo)致胞核輪廓不清，色彩暗淡， 影響診斷。從以上分析可以看出，丙酮，95%乙醇為單一固定劑，對(duì)細(xì)胞內(nèi)某些成分可 起到較好的固定效果，因此常應(yīng)用于一些有特殊染色要求的冷凍切片制備中，如 有報(bào)導(dǎo)丙酮作為胰腺冷凍切片免疫組織化學(xué)染色的組織固定劑可取得滿意的效 果3。而應(yīng)用于常規(guī)術(shù)中快速病理檢查的冷凍切片固定則有某些不足之處，不 能達(dá)到預(yù)期的目的與效果。aaf液是混合固定液，其中的三種成分均有固定作用, 三者合用能發(fā)揮優(yōu)勢(shì)，彌補(bǔ)缺點(diǎn)，新鮮配制的aaf液不但能做到固定，脫水兼 顧，并可對(duì)細(xì)胞內(nèi)各種成分都能起到較好的固定作用，完全可以滿足常規(guī)術(shù)中快 速冷凍切片的制作需要。（缺圖）圖片說明：圖1, 2冷丙酮固定甲狀腺組織，可見胞核著色較好，切片色 彩較暗淡，胞質(zhì)染色不均勻，部分組織成分脫落。圖3, 4 95%乙醇固定甲狀腺 組織，可見胞核著色稍差，切片色彩較好，胞質(zhì)染色尚可，部分組織成分亦有脫 落。圖5,6 aaf液固定的甲狀腺組織，可見切片色彩鮮艷，核漿染色對(duì)比度好， 切片完整無脫落。參考文獻(xiàn)：1馬恒輝，周曉軍，如何提高冷凍切片的技術(shù)水平j(luò)臨床與實(shí)驗(yàn)