血型的鑒定方法及操作ppt課件

1、紅細(xì)胞血型系統(tǒng)及其檢測(cè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)及其檢測(cè)重慶醫(yī)科大學(xué)臨床血液教研室重慶醫(yī)科大學(xué)臨床血液教研室血型的發(fā)現(xiàn)血型的發(fā)現(xiàn)n1900年，年，ABO血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)n1940年，年，Rh血型系統(tǒng)血型系統(tǒng) n Karl Landsteiner血型血型blood type)n狹義地講，存在于紅細(xì)胞上的特異性同種抗原。n廣義地講，是人類(lèi)遺傳多態(tài)性的一種表現(xiàn)，血液中各種成分都有其各自型別。紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，抗原紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，抗原n是存在于紅細(xì)胞上的化學(xué)構(gòu)造，化學(xué)本質(zhì)是糖和多肽，是紅細(xì)胞膜上的跨膜蛋白。n存在于紅細(xì)胞膜上完全抗原，也存在于上皮細(xì)胞以及各種體液和分泌液中半抗原。RBC存在于體液、分泌液中存在于體液

2、、分泌液中紅細(xì)胞血型抗體紅細(xì)胞血型抗體n天然抗體、免疫抗體天然抗體、免疫抗體n規(guī)那么抗體、不規(guī)那么抗體規(guī)那么抗體、不規(guī)那么抗體n完全抗體，不完全抗體完全抗體，不完全抗體n同種抗體，本身抗體同種抗體，本身抗體天然抗體和免疫抗體天然抗體和免疫抗體n天然抗體：天然抗體：ABO血型系統(tǒng)中，血型系統(tǒng)中，A型個(gè)體血漿中型個(gè)體血漿中天然存在抗天然存在抗B，B型個(gè)體血漿中存在抗型個(gè)體血漿中存在抗A。多。多數(shù)天然抗體是數(shù)天然抗體是IgM型，最正確反響溫度為室溫型，最正確反響溫度為室溫或更低?；蚋汀免疫抗體：普統(tǒng)統(tǒng)過(guò)輸血、妊娠、注射三種方免疫抗體：普統(tǒng)統(tǒng)過(guò)輸血、妊娠、注射三種方式接受抗原刺激，多數(shù)免疫抗體是式

3、接受抗原刺激，多數(shù)免疫抗體是IgG型，最型，最正確反響溫度是正確反響溫度是37oC。天然抗體和免疫抗體特性比較天然抗體和免疫抗體特性比較規(guī)那么抗體和不規(guī)那么抗體規(guī)那么抗體和不規(guī)那么抗體n規(guī)那么抗體：規(guī)那么抗體：ABO系統(tǒng)產(chǎn)生抗、抗是有規(guī)律的。系統(tǒng)產(chǎn)生抗、抗是有規(guī)律的。nLandsteiner規(guī)律：規(guī)律：n型抗，型抗，型抗，抗型抗，型抗，型抗，抗n不規(guī)那么抗體：除不規(guī)那么抗體：除ABO 系統(tǒng)外，其他系統(tǒng)產(chǎn)生的抗系統(tǒng)外，其他系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體均不符合上述規(guī)律。體均不符合上述規(guī)律。n正常人血液中普通沒(méi)有不規(guī)那么抗體，又稱(chēng)為不測(cè)正常人血液中普通沒(méi)有不規(guī)那么抗體，又稱(chēng)為不測(cè)抗體抗體unexpected an

4、tibody。n完全抗體和不完全抗體完全抗體和不完全抗體n完全抗體：在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細(xì)胞抗體，多為完全抗體：在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細(xì)胞抗體，多為IgM抗體?？贵w。n不完全抗體：能使紅細(xì)胞致敏，但在鹽水質(zhì)中不能凝集紅細(xì)胞，不完全抗體：能使紅細(xì)胞致敏，但在鹽水質(zhì)中不能凝集紅細(xì)胞，需求經(jīng)過(guò)抗球蛋白法或其他非鹽水介質(zhì)法進(jìn)展檢測(cè)，多為需求經(jīng)過(guò)抗球蛋白法或其他非鹽水介質(zhì)法進(jìn)展檢測(cè)，多為IgG抗體?？贵w?？箍笽gG同種抗體、本身抗體同種抗體、本身抗體n同種抗體：針對(duì)患者缺乏的抗原所產(chǎn)生的抗體即為同種抗體，如Rh陰性者輸血后產(chǎn)生的抗抗體。n本身抗體：針對(duì)本身抗原產(chǎn)生的抗體，如引起本身免疫型溶血性貧血。紅細(xì)胞

5、血型紅細(xì)胞血型n紅細(xì)胞血型分類(lèi)：紅細(xì)胞血型分類(lèi)：n ISBTThe International Society of Blood Transfusion)n 2002年，年，29個(gè)系統(tǒng)，個(gè)系統(tǒng)，200多個(gè)抗原多個(gè)抗原n 目前，目前，30個(gè)系統(tǒng)，個(gè)系統(tǒng)，300多個(gè)抗原多個(gè)抗原一、一、ABO血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)1. ABO血型抗原和抗體特性血型抗原和抗體特性2.ABO血型的遺傳與生化血型的遺傳與生化1ABO基因型與表型基因型與表型 A型型AA，AO B型型BB，BO AB型型AB O型型O A，B是顯性基因，是顯性基因，O是隱性基因是隱性基因 ABO基因不是產(chǎn)生基因不是產(chǎn)生ABO抗原的遺傳密碼抗原的遺

6、傳密碼2ABO血型的生化合成血型的生化合成nH基因基因 L-fucocyltransferase，19chrn nA基因基因 N-acetyl-0-galactosaminyltransferase，9chr nB基因基因galactosyltransferase, 9chrnO基因基因無(wú)效基因，不產(chǎn)生轉(zhuǎn)移無(wú)效基因，不產(chǎn)生轉(zhuǎn)移酶，酶，O型紅細(xì)胞含有型紅細(xì)胞含有H物質(zhì)物質(zhì)基因基因酶酶合成抗原合成抗原思索：思索：A、B、AB型紅細(xì)胞能否存在型紅細(xì)胞能否存在H物質(zhì)？物質(zhì)？3ABH可溶性抗原構(gòu)成可溶性抗原構(gòu)成n分泌型血型物質(zhì)：分泌型血型物質(zhì)：ABH抗原存在于紅細(xì)胞、抗原存在于紅細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、

7、淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞等，內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞等，也可出如今除腦脊液外的分泌液中，唾液中最也可出如今除腦脊液外的分泌液中，唾液中最豐富。豐富。nSe，se基因基因與體液分泌有關(guān)，與體液分泌有關(guān)，Se編碼編碼 L-fucocyltransferase，構(gòu)成分泌液中的，構(gòu)成分泌液中的H抗抗原，原，H也可轉(zhuǎn)化為也可轉(zhuǎn)化為A或或B抗原，抗原，Se不影響紅細(xì)不影響紅細(xì)胞上胞上ABH構(gòu)成，構(gòu)成，Se為分泌型；為分泌型；se為非分泌型；為非分泌型；19chr。分泌型血型物質(zhì)的意義：分泌型血型物質(zhì)的意義：n在RBC抗原弱表達(dá)個(gè)體中確定ABO血型。n檢測(cè)唾液、羊水中的血型物質(zhì)，輔助鑒定血型和預(yù)測(cè)胎兒

8、血型。n能中和天然抗體IgM，有助鑒別Ab性質(zhì)。3.ABO亞型：亞型：n亞型：同一血型抗原的構(gòu)造、性能質(zhì)或抗原位點(diǎn)數(shù)量存在一定差別。nA亞型：A1，A2，A3，Ax，Ay，AmnB亞型：B1，B2，B3，Bx，Bm二、二、Rh血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)n1940年，Landerstein和Wiener用恒河猴rhesusRBC免疫家兔或豚鼠，得到一種抗體，可與85%白種人紅細(xì)胞發(fā)生反響。nRh系統(tǒng)有50個(gè)抗原，最復(fù)雜，重要性僅次于ABO血型。1.遺傳與發(fā)育規(guī)律遺傳與發(fā)育規(guī)律n胎兒早期充分發(fā)育，臍帶血/新生兒紅細(xì)胞同成人。n基因位于1chr，分別命名為RHD，RHCE，RHD編碼D抗原，RHCE編碼不同組

9、合的CE抗原，ce，cE，Ce，CE。2.命名和種類(lèi)命名和種類(lèi)n三種命名方式三種命名方式n n Fisher-Race、數(shù)字命名法、現(xiàn)代命名法、數(shù)字命名法、現(xiàn)代命名法Fisher-Race命名法命名法CDE命名法命名法3.Rh血型種類(lèi)血型種類(lèi)nD、E、C、e、cn抗原的強(qiáng)弱次序n DECce5.Rh抗體抗體nRh抗體產(chǎn)生抗體產(chǎn)生n 天然抗體稀有天然抗體稀有n 主要經(jīng)過(guò)輸血和妊娠免疫產(chǎn)生主要經(jīng)過(guò)輸血和妊娠免疫產(chǎn)生IgGn 初次免疫后初次免疫后36月出現(xiàn)，再次免疫后月出現(xiàn)，再次免疫后3周達(dá)頂周達(dá)頂峰峰nRh抗體種類(lèi)抗體種類(lèi)n 抗抗D，抗，抗E，抗，抗C，抗，抗c，抗，抗eABO和和Rh血型系統(tǒng)的臨

10、床意義血型系統(tǒng)的臨床意義n平安輸血的主要保證平安輸血的主要保證n新生兒溶血病的診斷新生兒溶血病的診斷n器官移植的必要條件器官移植的必要條件n其他：遺傳學(xué)研討，法醫(yī)學(xué)鑒定其他：遺傳學(xué)研討，法醫(yī)學(xué)鑒定四、四、ABO和和Rh血型鑒定血型鑒定n常用方法：常用方法： n 鹽水介質(zhì)法、酶介質(zhì)法、抗人球蛋白法、聚鹽水介質(zhì)法、酶介質(zhì)法、抗人球蛋白法、聚凝胺法凝胺法n 試管法、玻片法、微柱凝膠法試管法、玻片法、微柱凝膠法1.鹽水介質(zhì)法鹽水介質(zhì)法salt medium testn原理：根據(jù)原理：根據(jù)IgM類(lèi)抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗類(lèi)抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗原能發(fā)生凝集反響。原能發(fā)生凝集反響。n 正定型：知血型抗體

11、試劑正定型：知血型抗體試劑 + 紅細(xì)胞紅細(xì)胞n n 反定型：知規(guī)范紅細(xì)胞反定型：知規(guī)范紅細(xì)胞 + 血清血清鑒定紅細(xì)胞上血型抗原鑒定紅細(xì)胞上血型抗原鑒定血清中抗體鑒定血清中抗體n反響條件：生理鹽水介質(zhì)，室溫，肉眼可見(jiàn)凝反響條件：生理鹽水介質(zhì)，室溫，肉眼可見(jiàn)凝集反響集反響n平板法，試管法，微孔板法，試管離心法最可平板法，試管法，微孔板法，試管離心法最可信任。信任。n運(yùn)用：運(yùn)用：ABO血型定型、血型定型、RhD抗原定型抗原定型IgG+IgM，IgM單克隆抗體，交叉合血單克隆抗體，交叉合血結(jié)果判別結(jié)果判別本卷須知一：本卷須知一：n規(guī)范血清：安康壯年人混合血清，培育細(xì)胞株規(guī)范血清：安康壯年人混合血清，培

12、育細(xì)胞株的單克隆抗體的單克隆抗體n要求：要求：n 高效價(jià)：抗高效價(jià)：抗A、抗、抗B1：128n 高親和性：高親和性：15s內(nèi)出現(xiàn)凝集，內(nèi)出現(xiàn)凝集，3min后凝集塊后凝集塊 1mm2n 單克隆抗體具有檢出單克隆抗體具有檢出A2，A2B的才干的才干n 冷凝集素效價(jià)冷凝集素效價(jià) 1：4n 無(wú)菌，病毒滅活無(wú)菌，病毒滅活本卷須知二：本卷須知二：n紅細(xì)胞試劑：三個(gè)安康者同型新穎紅細(xì)胞混合，紅細(xì)胞試劑：三個(gè)安康者同型新穎紅細(xì)胞混合，用生理鹽水洗滌三次。用生理鹽水洗滌三次。n紅細(xì)胞懸液不能過(guò)濃或過(guò)淡，紅細(xì)胞懸液不能過(guò)濃或過(guò)淡，5%生理鹽水紅生理鹽水紅細(xì)胞懸液細(xì)胞懸液本卷須知三：本卷須知三：n一切器材清潔枯燥一

13、切器材清潔枯燥n普通先加血清，后加紅細(xì)胞普通先加血清，后加紅細(xì)胞n反響溫度：反響溫度：IgM抗體反響最適溫度為抗體反響最適溫度為40C，為防，為防止冷凝集素干擾，采用室溫，止冷凝集素干擾，采用室溫，370C反響減弱反響減弱n離心時(shí)間和速度：離心時(shí)間和速度：3000g,30sn反定型不宜用玻片法反定型不宜用玻片法n結(jié)果核對(duì)，防止筆誤結(jié)果核對(duì)，防止筆誤n正、反定型結(jié)果一致才干報(bào)告，否那么查找緣正、反定型結(jié)果一致才干報(bào)告，否那么查找緣由由正反定型不一致的能夠緣由一：正反定型不一致的能夠緣由一：n操作技術(shù)上的錯(cuò)誤：主要緣由操作技術(shù)上的錯(cuò)誤：主要緣由n n 離心過(guò)度或缺乏離心過(guò)度或缺乏n 細(xì)胞與血清反響

14、比例不適當(dāng)細(xì)胞與血清反響比例不適當(dāng)n 陽(yáng)性反響產(chǎn)生溶血景象而未能識(shí)別陽(yáng)性反響產(chǎn)生溶血景象而未能識(shí)別n 漏加試劑、結(jié)果判讀錯(cuò)誤等漏加試劑、結(jié)果判讀錯(cuò)誤等 正反定型不一致的能夠緣由二：正反定型不一致的能夠緣由二：n出現(xiàn)假陰性的常見(jiàn)緣由：出現(xiàn)假陰性的常見(jiàn)緣由：n n 某些白血病患者和難治性貧血等導(dǎo)致某些白血病患者和難治性貧血等導(dǎo)致ABO抗原減弱；抗原減弱；n 免疫系統(tǒng)尚未健全的新生兒、免疫系統(tǒng)尚未健全的新生兒、4月月6月內(nèi)月內(nèi)嬰兒、抗體程度下降的老人；嬰兒、抗體程度下降的老人；n 亞型紅細(xì)胞抗原性弱，難以檢出；亞型紅細(xì)胞抗原性弱，難以檢出；n 低丙種球蛋白血癥患者，血清定型時(shí)不凝低丙種球蛋白血癥患者

15、，血清定型時(shí)不凝集或弱凝集。集或弱凝集。 正反定型不一致的能夠緣由三正反定型不一致的能夠緣由三n出現(xiàn)假陽(yáng)性的常見(jiàn)緣由：出現(xiàn)假陽(yáng)性的常見(jiàn)緣由：n n 紅細(xì)胞出現(xiàn)多凝集景象；紅細(xì)胞出現(xiàn)多凝集景象；n 嚴(yán)重腸道革蘭氏陰性桿菌感染，可嚴(yán)重腸道革蘭氏陰性桿菌感染，可使紅細(xì)胞獲得類(lèi)使紅細(xì)胞獲得類(lèi)B景象；景象；n 異常的血漿蛋白升高、白蛋白異常的血漿蛋白升高、白蛋白/球蛋球蛋白異常，高濃度纖維蛋白原呵斥假凝白異常，高濃度纖維蛋白原呵斥假凝集景象；集景象；n 待檢血清中有不規(guī)那么抗體存在；待檢血清中有不規(guī)那么抗體存在；n 右旋糖酐、靜脈注射某些造影劑等右旋糖酐、靜脈注射某些造影劑等引起紅細(xì)胞引起紅細(xì)胞 類(lèi)似凝

16、集。類(lèi)似凝集。 方法學(xué)評(píng)價(jià)方法學(xué)評(píng)價(jià)n簡(jiǎn)單，靈敏度低，只適宜簡(jiǎn)單，靈敏度低，只適宜IgM抗體抗體n試管法：需時(shí)短，離心加強(qiáng)凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型試管法：需時(shí)短，離心加強(qiáng)凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型和較弱的反響，正、反定型皆適宜和較弱的反響，正、反定型皆適宜n玻片法：適宜大規(guī)模血型普查，反響時(shí)間長(zhǎng)，玻片法：適宜大規(guī)模血型普查，反響時(shí)間長(zhǎng)，有時(shí)漏掉弱反響，反定型不適宜。有時(shí)漏掉弱反響，反定型不適宜。2.酶介質(zhì)法酶介質(zhì)法enzymic medium test：n原理和方法：主要用于原理和方法：主要用于Rh血型鑒定血型鑒定IgG抗體抗體蛋白水解酶蛋白水解酶加強(qiáng)加強(qiáng)IgG抗體抗體的凝集作用的凝集作用本卷須知：本卷須知：n

17、Rh血型不需作反定型血型不需作反定型n每次實(shí)驗(yàn)均需作陽(yáng)性、陰性對(duì)照每次實(shí)驗(yàn)均需作陽(yáng)性、陰性對(duì)照方法學(xué)評(píng)價(jià)方法學(xué)評(píng)價(jià)n簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)n穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性較差，不能檢出穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性較差，不能檢出MN、Duffy血血型系統(tǒng)型系統(tǒng)3.抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)Coombs testn原理和方法原理和方法抗抗IgG待測(cè)紅細(xì)胞待測(cè)紅細(xì)胞 + 抗抗RhDIgG+ 抗人球蛋白抗人球蛋白紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞凝集運(yùn)用延伸：運(yùn)用延伸：n檢測(cè)紅細(xì)胞同種抗體的經(jīng)典方法，新生兒溶血、病、溶血性輸血反響、本身免疫性溶血性貧血n直接Coombsdirect antiglobulin test, DATn間接Coombsindi

18、rect antiglobulin test, IDATDAT：檢查紅細(xì)胞能否致敏：檢查紅細(xì)胞能否致敏IDAT：檢測(cè)血清中不完全抗體：檢測(cè)血清中不完全抗體4.聚凝胺介質(zhì)法聚凝胺介質(zhì)法polybrene testn原理和方法原理和方法n 低離子強(qiáng)度鹽溶液低離子強(qiáng)度鹽溶液low ionic strength salt solution, LISS)：降低介質(zhì)離子強(qiáng)度，添：降低介質(zhì)離子強(qiáng)度，添加抗原抗體結(jié)合加抗原抗體結(jié)合n 聚凝胺：中和紅細(xì)胞外表負(fù)電荷，使紅細(xì)胞聚凝胺：中和紅細(xì)胞外表負(fù)電荷，使紅細(xì)胞發(fā)生非特異性凝集。發(fā)生非特異性凝集。n 重懸液重懸液resuspension)方法學(xué)評(píng)價(jià)方法學(xué)評(píng)價(jià)n適

19、于各類(lèi)抗體適于各類(lèi)抗體IgM，IgGn快速、靈敏、可靠快速、靈敏、可靠n對(duì)檢測(cè)對(duì)檢測(cè)Kell血型系統(tǒng)抗體不理想，不能用肝素血型系統(tǒng)抗體不理想，不能用肝素抗凝。抗凝。5.微柱凝膠法微柱凝膠法(gel cards with microtubes)n1986年法國(guó)人Dr. Yves Lappierre發(fā)明n1994年，獲美國(guó)FDA認(rèn)證原理和方法原理和方法n葡聚糖做成微型凝膠柱葡聚糖做成微型凝膠柱，上端為反響室，下端，上端為反響室，下端凝膠柱為抗原抗體凝集凝膠柱為抗原抗體凝集反響的介質(zhì)。反響的介質(zhì)。n抗原與抗體結(jié)合后離心抗原與抗體結(jié)合后離心，經(jīng)過(guò)凝膠分子篩作用，經(jīng)過(guò)凝膠分子篩作用，游離紅細(xì)胞在凝膠底，游離紅細(xì)胞在凝膠底部，而與抗體結(jié)合凝集部，而與抗體結(jié)合凝集的紅細(xì)胞位于凝膠上部的紅細(xì)胞位于凝膠上部或懸浮于凝膠中?；驊腋∮谀z中。 反響室反響室凝膠柱凝膠柱結(jié)果判讀：結(jié)果判讀：n陽(yáng)性結(jié)果：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠外表或凝膠中，和陽(yáng)性結(jié)果：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠外表或凝膠中，和或出現(xiàn)溶血?；虺霈F(xiàn)溶血。本卷須知：本卷須知：n公用程度離心機(jī)公用程度離心機(jī)n假陽(yáng)性：鐮型紅細(xì)胞、巨幼