血型的鑒定方法及操作ppt課件

1、紅細胞血型系統(tǒng)及其檢測紅細胞血型系統(tǒng)及其檢測重慶醫(yī)科大學臨床血液教研室重慶醫(yī)科大學臨床血液教研室血型的發(fā)現(xiàn)血型的發(fā)現(xiàn)n1900年，年，ABO血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)n1940年，年，Rh血型系統(tǒng)血型系統(tǒng) n Karl Landsteiner血型血型blood type)n狹義地講，存在于紅細胞上的特異性同種抗原。n廣義地講，是人類遺傳多態(tài)性的一種表現(xiàn)，血液中各種成分都有其各自型別。紅細胞血型系統(tǒng)，抗原紅細胞血型系統(tǒng)，抗原n是存在于紅細胞上的化學構(gòu)造，化學本質(zhì)是糖和多肽，是紅細胞膜上的跨膜蛋白。n存在于紅細胞膜上完全抗原，也存在于上皮細胞以及各種體液和分泌液中半抗原。RBC存在于體液、分泌液中存在于體液

2、、分泌液中紅細胞血型抗體紅細胞血型抗體n天然抗體、免疫抗體天然抗體、免疫抗體n規(guī)那么抗體、不規(guī)那么抗體規(guī)那么抗體、不規(guī)那么抗體n完全抗體，不完全抗體完全抗體，不完全抗體n同種抗體，本身抗體同種抗體，本身抗體天然抗體和免疫抗體天然抗體和免疫抗體n天然抗體：天然抗體：ABO血型系統(tǒng)中，血型系統(tǒng)中，A型個體血漿中型個體血漿中天然存在抗天然存在抗B，B型個體血漿中存在抗型個體血漿中存在抗A。多。多數(shù)天然抗體是數(shù)天然抗體是IgM型，最正確反響溫度為室溫型，最正確反響溫度為室溫或更低?；蚋?。n免疫抗體：普統(tǒng)統(tǒng)過輸血、妊娠、注射三種方免疫抗體：普統(tǒng)統(tǒng)過輸血、妊娠、注射三種方式接受抗原刺激，多數(shù)免疫抗體是式

3、接受抗原刺激，多數(shù)免疫抗體是IgG型，最型，最正確反響溫度是正確反響溫度是37oC。天然抗體和免疫抗體特性比較天然抗體和免疫抗體特性比較規(guī)那么抗體和不規(guī)那么抗體規(guī)那么抗體和不規(guī)那么抗體n規(guī)那么抗體：規(guī)那么抗體：ABO系統(tǒng)產(chǎn)生抗、抗是有規(guī)律的。系統(tǒng)產(chǎn)生抗、抗是有規(guī)律的。nLandsteiner規(guī)律：規(guī)律：n型抗，型抗，型抗，抗型抗，型抗，型抗，抗n不規(guī)那么抗體：除不規(guī)那么抗體：除ABO 系統(tǒng)外，其他系統(tǒng)產(chǎn)生的抗系統(tǒng)外，其他系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體均不符合上述規(guī)律。體均不符合上述規(guī)律。n正常人血液中普通沒有不規(guī)那么抗體，又稱為不測正常人血液中普通沒有不規(guī)那么抗體，又稱為不測抗體抗體unexpected an

4、tibody。n完全抗體和不完全抗體完全抗體和不完全抗體n完全抗體：在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細胞抗體，多為完全抗體：在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細胞抗體，多為IgM抗體。抗體。n不完全抗體：能使紅細胞致敏，但在鹽水質(zhì)中不能凝集紅細胞，不完全抗體：能使紅細胞致敏，但在鹽水質(zhì)中不能凝集紅細胞，需求經(jīng)過抗球蛋白法或其他非鹽水介質(zhì)法進展檢測，多為需求經(jīng)過抗球蛋白法或其他非鹽水介質(zhì)法進展檢測，多為IgG抗體?？贵w?？箍笽gG同種抗體、本身抗體同種抗體、本身抗體n同種抗體：針對患者缺乏的抗原所產(chǎn)生的抗體即為同種抗體，如Rh陰性者輸血后產(chǎn)生的抗抗體。n本身抗體：針對本身抗原產(chǎn)生的抗體，如引起本身免疫型溶血性貧血。紅細胞

5、血型紅細胞血型n紅細胞血型分類：紅細胞血型分類：n ISBTThe International Society of Blood Transfusion)n 2002年，年，29個系統(tǒng)，個系統(tǒng)，200多個抗原多個抗原n 目前，目前，30個系統(tǒng)，個系統(tǒng)，300多個抗原多個抗原一、一、ABO血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)1. ABO血型抗原和抗體特性血型抗原和抗體特性2.ABO血型的遺傳與生化血型的遺傳與生化1ABO基因型與表型基因型與表型 A型型AA，AO B型型BB，BO AB型型AB O型型O A，B是顯性基因，是顯性基因，O是隱性基因是隱性基因 ABO基因不是產(chǎn)生基因不是產(chǎn)生ABO抗原的遺傳密碼抗原的遺

6、傳密碼2ABO血型的生化合成血型的生化合成nH基因基因 L-fucocyltransferase，19chrn nA基因基因 N-acetyl-0-galactosaminyltransferase，9chr nB基因基因galactosyltransferase, 9chrnO基因基因無效基因，不產(chǎn)生轉(zhuǎn)移無效基因，不產(chǎn)生轉(zhuǎn)移酶，酶，O型紅細胞含有型紅細胞含有H物質(zhì)物質(zhì)基因基因酶酶合成抗原合成抗原思索：思索：A、B、AB型紅細胞能否存在型紅細胞能否存在H物質(zhì)？物質(zhì)？3ABH可溶性抗原構(gòu)成可溶性抗原構(gòu)成n分泌型血型物質(zhì)：分泌型血型物質(zhì)：ABH抗原存在于紅細胞、抗原存在于紅細胞、內(nèi)皮細胞、血小板、

7、淋巴細胞、上皮細胞等，內(nèi)皮細胞、血小板、淋巴細胞、上皮細胞等，也可出如今除腦脊液外的分泌液中，唾液中最也可出如今除腦脊液外的分泌液中，唾液中最豐富。豐富。nSe，se基因基因與體液分泌有關(guān)，與體液分泌有關(guān)，Se編碼編碼 L-fucocyltransferase，構(gòu)成分泌液中的，構(gòu)成分泌液中的H抗抗原，原，H也可轉(zhuǎn)化為也可轉(zhuǎn)化為A或或B抗原，抗原，Se不影響紅細不影響紅細胞上胞上ABH構(gòu)成，構(gòu)成，Se為分泌型；為分泌型；se為非分泌型；為非分泌型；19chr。分泌型血型物質(zhì)的意義：分泌型血型物質(zhì)的意義：n在RBC抗原弱表達個體中確定ABO血型。n檢測唾液、羊水中的血型物質(zhì)，輔助鑒定血型和預測胎兒

8、血型。n能中和天然抗體IgM，有助鑒別Ab性質(zhì)。3.ABO亞型：亞型：n亞型：同一血型抗原的構(gòu)造、性能質(zhì)或抗原位點數(shù)量存在一定差別。nA亞型：A1，A2，A3，Ax，Ay，AmnB亞型：B1，B2，B3，Bx，Bm二、二、Rh血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)n1940年，Landerstein和Wiener用恒河猴rhesusRBC免疫家兔或豚鼠，得到一種抗體，可與85%白種人紅細胞發(fā)生反響。nRh系統(tǒng)有50個抗原，最復雜，重要性僅次于ABO血型。1.遺傳與發(fā)育規(guī)律遺傳與發(fā)育規(guī)律n胎兒早期充分發(fā)育，臍帶血/新生兒紅細胞同成人。n基因位于1chr，分別命名為RHD，RHCE，RHD編碼D抗原，RHCE編碼不同組

9、合的CE抗原，ce，cE，Ce，CE。2.命名和種類命名和種類n三種命名方式三種命名方式n n Fisher-Race、數(shù)字命名法、現(xiàn)代命名法、數(shù)字命名法、現(xiàn)代命名法Fisher-Race命名法命名法CDE命名法命名法3.Rh血型種類血型種類nD、E、C、e、cn抗原的強弱次序n DECce5.Rh抗體抗體nRh抗體產(chǎn)生抗體產(chǎn)生n 天然抗體稀有天然抗體稀有n 主要經(jīng)過輸血和妊娠免疫產(chǎn)生主要經(jīng)過輸血和妊娠免疫產(chǎn)生IgGn 初次免疫后初次免疫后36月出現(xiàn)，再次免疫后月出現(xiàn)，再次免疫后3周達頂周達頂峰峰nRh抗體種類抗體種類n 抗抗D，抗，抗E，抗，抗C，抗，抗c，抗，抗eABO和和Rh血型系統(tǒng)的臨

10、床意義血型系統(tǒng)的臨床意義n平安輸血的主要保證平安輸血的主要保證n新生兒溶血病的診斷新生兒溶血病的診斷n器官移植的必要條件器官移植的必要條件n其他：遺傳學研討，法醫(yī)學鑒定其他：遺傳學研討，法醫(yī)學鑒定四、四、ABO和和Rh血型鑒定血型鑒定n常用方法：常用方法： n 鹽水介質(zhì)法、酶介質(zhì)法、抗人球蛋白法、聚鹽水介質(zhì)法、酶介質(zhì)法、抗人球蛋白法、聚凝胺法凝胺法n 試管法、玻片法、微柱凝膠法試管法、玻片法、微柱凝膠法1.鹽水介質(zhì)法鹽水介質(zhì)法salt medium testn原理：根據(jù)原理：根據(jù)IgM類抗體與紅細胞膜上特異性抗類抗體與紅細胞膜上特異性抗原能發(fā)生凝集反響。原能發(fā)生凝集反響。n 正定型：知血型抗體

11、試劑正定型：知血型抗體試劑 + 紅細胞紅細胞n n 反定型：知規(guī)范紅細胞反定型：知規(guī)范紅細胞 + 血清血清鑒定紅細胞上血型抗原鑒定紅細胞上血型抗原鑒定血清中抗體鑒定血清中抗體n反響條件：生理鹽水介質(zhì)，室溫，肉眼可見凝反響條件：生理鹽水介質(zhì)，室溫，肉眼可見凝集反響集反響n平板法，試管法，微孔板法，試管離心法最可平板法，試管法，微孔板法，試管離心法最可信任。信任。n運用：運用：ABO血型定型、血型定型、RhD抗原定型抗原定型IgG+IgM，IgM單克隆抗體，交叉合血單克隆抗體，交叉合血結(jié)果判別結(jié)果判別本卷須知一：本卷須知一：n規(guī)范血清：安康壯年人混合血清，培育細胞株規(guī)范血清：安康壯年人混合血清，培

12、育細胞株的單克隆抗體的單克隆抗體n要求：要求：n 高效價：抗高效價：抗A、抗、抗B1：128n 高親和性：高親和性：15s內(nèi)出現(xiàn)凝集，內(nèi)出現(xiàn)凝集，3min后凝集塊后凝集塊 1mm2n 單克隆抗體具有檢出單克隆抗體具有檢出A2，A2B的才干的才干n 冷凝集素效價冷凝集素效價 1：4n 無菌，病毒滅活無菌，病毒滅活本卷須知二：本卷須知二：n紅細胞試劑：三個安康者同型新穎紅細胞混合，紅細胞試劑：三個安康者同型新穎紅細胞混合，用生理鹽水洗滌三次。用生理鹽水洗滌三次。n紅細胞懸液不能過濃或過淡，紅細胞懸液不能過濃或過淡，5%生理鹽水紅生理鹽水紅細胞懸液細胞懸液本卷須知三：本卷須知三：n一切器材清潔枯燥一

13、切器材清潔枯燥n普通先加血清，后加紅細胞普通先加血清，后加紅細胞n反響溫度：反響溫度：IgM抗體反響最適溫度為抗體反響最適溫度為40C，為防，為防止冷凝集素干擾，采用室溫，止冷凝集素干擾，采用室溫，370C反響減弱反響減弱n離心時間和速度：離心時間和速度：3000g,30sn反定型不宜用玻片法反定型不宜用玻片法n結(jié)果核對，防止筆誤結(jié)果核對，防止筆誤n正、反定型結(jié)果一致才干報告，否那么查找緣正、反定型結(jié)果一致才干報告，否那么查找緣由由正反定型不一致的能夠緣由一：正反定型不一致的能夠緣由一：n操作技術(shù)上的錯誤：主要緣由操作技術(shù)上的錯誤：主要緣由n n 離心過度或缺乏離心過度或缺乏n 細胞與血清反響

14、比例不適當細胞與血清反響比例不適當n 陽性反響產(chǎn)生溶血景象而未能識別陽性反響產(chǎn)生溶血景象而未能識別n 漏加試劑、結(jié)果判讀錯誤等漏加試劑、結(jié)果判讀錯誤等 正反定型不一致的能夠緣由二：正反定型不一致的能夠緣由二：n出現(xiàn)假陰性的常見緣由：出現(xiàn)假陰性的常見緣由：n n 某些白血病患者和難治性貧血等導致某些白血病患者和難治性貧血等導致ABO抗原減弱；抗原減弱；n 免疫系統(tǒng)尚未健全的新生兒、免疫系統(tǒng)尚未健全的新生兒、4月月6月內(nèi)月內(nèi)嬰兒、抗體程度下降的老人；嬰兒、抗體程度下降的老人；n 亞型紅細胞抗原性弱，難以檢出；亞型紅細胞抗原性弱，難以檢出；n 低丙種球蛋白血癥患者，血清定型時不凝低丙種球蛋白血癥患者

15、，血清定型時不凝集或弱凝集。集或弱凝集。 正反定型不一致的能夠緣由三正反定型不一致的能夠緣由三n出現(xiàn)假陽性的常見緣由：出現(xiàn)假陽性的常見緣由：n n 紅細胞出現(xiàn)多凝集景象；紅細胞出現(xiàn)多凝集景象；n 嚴重腸道革蘭氏陰性桿菌感染，可嚴重腸道革蘭氏陰性桿菌感染，可使紅細胞獲得類使紅細胞獲得類B景象；景象；n 異常的血漿蛋白升高、白蛋白異常的血漿蛋白升高、白蛋白/球蛋球蛋白異常，高濃度纖維蛋白原呵斥假凝白異常，高濃度纖維蛋白原呵斥假凝集景象；集景象；n 待檢血清中有不規(guī)那么抗體存在；待檢血清中有不規(guī)那么抗體存在；n 右旋糖酐、靜脈注射某些造影劑等右旋糖酐、靜脈注射某些造影劑等引起紅細胞引起紅細胞 類似凝

16、集。類似凝集。 方法學評價方法學評價n簡單，靈敏度低，只適宜簡單，靈敏度低，只適宜IgM抗體抗體n試管法：需時短，離心加強凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型試管法：需時短，離心加強凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型和較弱的反響，正、反定型皆適宜和較弱的反響，正、反定型皆適宜n玻片法：適宜大規(guī)模血型普查，反響時間長，玻片法：適宜大規(guī)模血型普查，反響時間長，有時漏掉弱反響，反定型不適宜。有時漏掉弱反響，反定型不適宜。2.酶介質(zhì)法酶介質(zhì)法enzymic medium test：n原理和方法：主要用于原理和方法：主要用于Rh血型鑒定血型鑒定IgG抗體抗體蛋白水解酶蛋白水解酶加強加強IgG抗體抗體的凝集作用的凝集作用本卷須知：本卷須知：n

17、Rh血型不需作反定型血型不需作反定型n每次實驗均需作陽性、陰性對照每次實驗均需作陽性、陰性對照方法學評價方法學評價n簡單經(jīng)濟簡單經(jīng)濟n穩(wěn)定性、準確性較差，不能檢出穩(wěn)定性、準確性較差，不能檢出MN、Duffy血血型系統(tǒng)型系統(tǒng)3.抗人球蛋白實驗抗人球蛋白實驗Coombs testn原理和方法原理和方法抗抗IgG待測紅細胞待測紅細胞 + 抗抗RhDIgG+ 抗人球蛋白抗人球蛋白紅細胞凝集紅細胞凝集運用延伸：運用延伸：n檢測紅細胞同種抗體的經(jīng)典方法，新生兒溶血、病、溶血性輸血反響、本身免疫性溶血性貧血n直接Coombsdirect antiglobulin test, DATn間接Coombsindi

18、rect antiglobulin test, IDATDAT：檢查紅細胞能否致敏：檢查紅細胞能否致敏IDAT：檢測血清中不完全抗體：檢測血清中不完全抗體4.聚凝胺介質(zhì)法聚凝胺介質(zhì)法polybrene testn原理和方法原理和方法n 低離子強度鹽溶液低離子強度鹽溶液low ionic strength salt solution, LISS)：降低介質(zhì)離子強度，添：降低介質(zhì)離子強度，添加抗原抗體結(jié)合加抗原抗體結(jié)合n 聚凝胺：中和紅細胞外表負電荷，使紅細胞聚凝胺：中和紅細胞外表負電荷，使紅細胞發(fā)生非特異性凝集。發(fā)生非特異性凝集。n 重懸液重懸液resuspension)方法學評價方法學評價n適

19、于各類抗體適于各類抗體IgM，IgGn快速、靈敏、可靠快速、靈敏、可靠n對檢測對檢測Kell血型系統(tǒng)抗體不理想，不能用肝素血型系統(tǒng)抗體不理想，不能用肝素抗凝?？鼓?.微柱凝膠法微柱凝膠法(gel cards with microtubes)n1986年法國人Dr. Yves Lappierre發(fā)明n1994年，獲美國FDA認證原理和方法原理和方法n葡聚糖做成微型凝膠柱葡聚糖做成微型凝膠柱，上端為反響室，下端，上端為反響室，下端凝膠柱為抗原抗體凝集凝膠柱為抗原抗體凝集反響的介質(zhì)。反響的介質(zhì)。n抗原與抗體結(jié)合后離心抗原與抗體結(jié)合后離心，經(jīng)過凝膠分子篩作用，經(jīng)過凝膠分子篩作用，游離紅細胞在凝膠底，游離紅細胞在凝膠底部，而與抗體結(jié)合凝集部，而與抗體結(jié)合凝集的紅細胞位于凝膠上部的紅細胞位于凝膠上部或懸浮于凝膠中。或懸浮于凝膠中。 反響室反響室凝膠柱凝膠柱結(jié)果判讀：結(jié)果判讀：n陽性結(jié)果：紅細胞凝集塊位于凝膠外表或凝膠中，和陽性結(jié)果：紅細胞凝集塊位于凝膠外表或凝膠中，和或出現(xiàn)溶血?；虺霈F(xiàn)溶血。本卷須知：本卷須知：n公用程度離心機公用程度離心機n假陽性：鐮型紅細胞、巨幼