南醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)摘要膿汁和糞便標(biāo)本中有不同的病原菌。為了探究?jī)煞N標(biāo)本中病原菌的種類、特性和生化反應(yīng)等，本實(shí)驗(yàn)將對(duì)膿汁和糞便中的病原菌進(jìn)行分離培養(yǎng)、革蘭染色、生化反應(yīng)、血清學(xué)反應(yīng)、細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)等操作。在實(shí)踐中學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的制備、消毒和滅菌，細(xì)菌的分離與培養(yǎng)，細(xì)菌群體和個(gè)體形態(tài)特征的觀察，細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定等操作方法。從而達(dá)到掌握各種微生物實(shí)驗(yàn)的操作方法，培養(yǎng)對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)的興趣，反思微生物實(shí)驗(yàn)中所遇到的問題并總結(jié)探討如何解決優(yōu)化的目的。引言 常見的化膿性病原菌有金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、腦膜炎球菌、肺炎鏈球菌、結(jié)核桿菌、淋病奈瑟菌、銅綠假單胞菌等。 臨床上，膿汁標(biāo)本在做細(xì)菌分離培

2、養(yǎng)的同時(shí)，須直接涂片檢查，觀察是否有典型形態(tài)的菌體，芽孢有無(wú)，為臨床提供最初的診治依據(jù)；糞便和經(jīng)離心的尿沉淀物等則直接接種與指定的培養(yǎng)基中。 糞便標(biāo)本中常見的病原菌有志賀氏菌屬、大腸埃希菌屬、弧菌屬、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、艱難梭菌等。糞便標(biāo)本中常含有很多雜菌，應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康木牟煌x擇培養(yǎng)基（如SS瓊脂、伊紅-美藍(lán)平板等），選擇培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)根據(jù)需要盡可能地抑制雜菌，以利于病原菌的檢出。本實(shí)驗(yàn)通過常規(guī)的病原菌檢測(cè)方法從膿汁標(biāo)本中分離出黃白兩種細(xì)菌，均為革蘭氏陽(yáng)性球菌，其中黃色是致病菌金黃色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；從糞便標(biāo)本中分離到紫黑色和粉紅色的細(xì)菌，均為革蘭氏陰性桿菌，其中紫黑色的是

3、大腸埃希菌，粉紅色的是痢疾志賀菌。1.實(shí)驗(yàn)材料1.1器材 酒精燈、接種環(huán)、接種針、打火機(jī)、試管、棉塞、油性筆、污物盤、普通冰柜、奧林巴斯 CX21型生物顯微鏡、拭鏡紙、稱量紙、藥勺、牛皮紙、電爐、橡皮筋、錐形瓶、刻度尺、鑷子、玻片、吸水紙、培養(yǎng)皿、高壓蒸汽滅菌器、隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱等。1.2 試劑藥品 膿汁標(biāo)本、糞便標(biāo)本、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯、半固體瓊脂、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基、斜面瓊脂、結(jié)晶紫、盧戈碘液、95%乙醇、稀釋品紅、香柏油、拭鏡油、葡萄糖微量發(fā)酵管（2支）、乳糖微量發(fā)酵管（2支）、青霉素抗菌素紙片、先鋒霉素抗菌素紙片、慶大霉素抗菌素紙片、蒸餾水、生理鹽水、兔血漿、福氏

4、志賀菌診斷血清等。2.實(shí)驗(yàn)方法與步驟實(shí)驗(yàn)的總流程：培養(yǎng)基的制備細(xì)菌的分離培養(yǎng)細(xì)菌的純培養(yǎng)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的生化試驗(yàn)等細(xì)菌的血清學(xué)試驗(yàn)、結(jié)果分析2.1培養(yǎng)基制備（1） 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂干粉與蒸餾水按適當(dāng)比例充分混合均勻加熱溶化高壓蒸汽滅菌倒平板分裝瓊脂完全凝固后，平板倒放4冰箱保存?zhèn)溆茫?） 斜面培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂干粉與蒸餾水按適當(dāng)比例充分混合均勻加熱溶化高壓蒸汽滅菌倒試管分裝培養(yǎng)基趁熱斜放瓊脂凝固以后，4冰箱保存?zhèn)溆?.2空氣與人體體表細(xì)菌學(xué)檢查2.2.1空氣的細(xì)菌學(xué)檢查2.2.1.1實(shí)驗(yàn)方法自然沉降法:根據(jù)空氣中細(xì)菌氣溶膠粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)

5、以后，計(jì)數(shù)菌落形成單位（ Colony-Forming Units，CFU），可了解空氣的污染情況。2.2.1.2實(shí)驗(yàn)步驟每組1個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，選擇采樣地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室、衛(wèi)生間、走廊等）將平板蓋打開，蓋朝下放置在平板旁邊平板暴露于空氣中15分鐘平板倒扣蓋上作標(biāo)記37溫箱培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果2.2.2人體體表的細(xì)菌學(xué)檢查2.2.2.1實(shí)驗(yàn)步驟甲常規(guī)洗手，乙標(biāo)準(zhǔn)洗手，甲和乙共用1個(gè)平板。按下圖在普通平板上接種手指上的細(xì)菌。第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對(duì)照。2.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng)2.3.1實(shí)驗(yàn)方法平板劃線法：借助于劃線，將混雜的多種細(xì)菌，在平板表面分散成單個(gè)細(xì)菌，并固定在某

6、一點(diǎn)上。培養(yǎng)以后細(xì)菌各自分裂繁殖，形成肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)（單菌落）。2.3.2實(shí)驗(yàn)步驟接種環(huán)燒灼滅菌分別取膿汁標(biāo)本與糞便標(biāo)本點(diǎn)在普通平板和伊紅美藍(lán)平板上，各做兩份燒掉接種環(huán)上多余的膿汁或糞便標(biāo)本冷卻后，使用分區(qū)劃線分離法，將膿汁標(biāo)本接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（2份），糞便標(biāo)本接種于伊紅美藍(lán)平板（2份）接種環(huán)燒灼滅菌將平板倒置37培養(yǎng)1824h觀察結(jié)果2.4細(xì)菌的群體生長(zhǎng)特性觀察和純化培養(yǎng)2.4.1實(shí)驗(yàn)方法斜面接種法：是一種從已經(jīng)生長(zhǎng)好的菌種中挑取少量菌種移植到另一個(gè)斜面培養(yǎng)基的飯方法。該法主要用于單個(gè)菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。用滅菌的接種環(huán)取單個(gè)菌落或少許細(xì)菌，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃

7、一條直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線，一直劃到斜面頂端。2.4.2實(shí)驗(yàn)步驟接種環(huán)燒灼滅菌挑選平板上典型的四種單菌落（白色、金黃色、紫黑色、粉紅色）進(jìn)行斜面接種純培養(yǎng)做好標(biāo)記接種環(huán)燒灼滅菌斜面培養(yǎng)基置于37培養(yǎng)過夜保存?zhèn)溆?.5細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)特征的觀察2.5.1實(shí)驗(yàn)方法:革蘭氏染色法和肉湯接種法2.5.2實(shí)驗(yàn)原理革蘭氏染色法：G菌的細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上，呈紫色。G菌的肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，稀釋品紅復(fù)染后呈紅色。2.5.

8、3實(shí)驗(yàn)步驟革蘭氏染色法：涂片 干燥 固定 染色 具體步驟如下：取潔凈玻片用滅菌操作后的接種環(huán)取生理鹽水1-2環(huán)于玻片上挑取細(xì)菌培養(yǎng)物少許與鹽水輕輕抹勻待涂片干燥后在酒精燈火焰外側(cè)快速來(lái)回2-3回合 結(jié)晶紫 初染1分鐘水洗盧戈碘液媒染1分鐘水洗95乙醇脫色約20秒鐘水洗稀釋品紅復(fù)染1分鐘水洗吸干,鏡檢。2.5.4肉湯接種法接種環(huán)燒灼滅菌分別在斜面培養(yǎng)物中挑取菌苔少許立即移入肉湯培養(yǎng)基管中在接近液面的管壁上輕輕研磨沾取少量肉湯調(diào)和混勻試管口通過火焰2-3次滅菌塞好棉塞35培養(yǎng)4-6小時(shí)2.6 藥敏試驗(yàn)2.6.1實(shí)驗(yàn)方法紙片擴(kuò)散法: 將含有定量抗菌素的紙片，平貼在已經(jīng)接種了試驗(yàn)細(xì)菌的平板上。紙片中的

9、抗菌素吸收培養(yǎng)基的水分，溶解后不斷向周圍擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。敏感細(xì)菌在紙片周圍的生長(zhǎng)受到抑制，而形成沒有細(xì)菌生長(zhǎng)的抑菌圈。2.6.2實(shí)驗(yàn)步驟接種環(huán)燒灼滅菌分別取之前實(shí)驗(yàn)中得到的四種菌液在普通平板密集涂布接種環(huán)燒灼滅菌 標(biāo)記:青、先、慶 鑷子火焰消毒貼青霉素、先鋒霉素、慶大霉素紙片 按壓鑷子消毒倒置37培養(yǎng)1824小時(shí) 觀察結(jié)果2.7 血漿凝固酶試驗(yàn)2.7.1實(shí)驗(yàn)方法：玻片法2.7.2實(shí)驗(yàn)步驟取干凈玻片一張?jiān)谧笥覂蛇叿謩e滴加兔血漿15l，生理鹽水15l滴接種環(huán)燒灼滅菌冷卻分別用接種環(huán)取之前實(shí)驗(yàn)所得到的白色和黃色菌苔(23個(gè)菌落的菌量)與血漿研磨混合邊混勻邊觀察結(jié)果接種環(huán)燒灼滅菌稍等片刻，觀

10、察結(jié)果2.8 糖發(fā)酵試驗(yàn)接種針燒灼滅菌用滅菌接種針分別刮取實(shí)驗(yàn)所得到的紫黑色和粉紅色菌苔分別接種在葡萄糖發(fā)酵微量管中和乳糖發(fā)酵微量管內(nèi)接種環(huán)燒灼滅菌將微量管平放在平板內(nèi)37培養(yǎng)過夜后觀察結(jié)果2.9 動(dòng)力試驗(yàn)2.9.1實(shí)驗(yàn)方法：半固體接種法2.9.2實(shí)驗(yàn)步驟接種針燒灼滅菌分別用接種針在紫黑色和粉紅色的斜面取菌從半固體培養(yǎng)基中心垂直刺入，可刺達(dá)近底管處，但不要到達(dá)管底循原來(lái)的路線退出接種針試管口迅速通過火焰2-3次滅菌塞好棉塞燒灼滅菌接種針37培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果2.10血清學(xué)實(shí)驗(yàn)取潔凈的玻片一張將磨面近端設(shè)為對(duì)照區(qū)滴加生理鹽水15ul遠(yuǎn)端設(shè)為試驗(yàn)區(qū)滴加福氏志賀菌診斷血清15ul接種環(huán)燒灼滅菌用接

11、種環(huán)分別取粉紅色菌苔研磨于鹽水或血清內(nèi)，混合均勻接種環(huán)燒灼滅菌玻片來(lái)回傾側(cè)觀察結(jié)果3.結(jié)果3.1空氣的細(xì)菌學(xué)檢查本小組將營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板放置在女洗手間外的走廊上，暴露了15分鐘，并在37溫箱培養(yǎng)了24小時(shí)，所得結(jié)果：營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上一共出現(xiàn)6個(gè)菌落。經(jīng)與實(shí)驗(yàn)室其他小組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，發(fā)現(xiàn)：若以菌落數(shù)的多少表示空氣細(xì)菌含量的多少，則秋實(shí)堂五棟內(nèi)，空氣細(xì)菌含量最少的為女洗手間，而窗臺(tái)、實(shí)驗(yàn)室等處空氣細(xì)菌含量最大。經(jīng)老師的指導(dǎo)與小組間的討論得出如下猜想：空氣細(xì)菌含量與場(chǎng)所人流量、通風(fēng)狀況等都有著密切的關(guān)系。人流量大且密閉不通風(fēng)的條件下空氣細(xì)菌含量大。3.2人體體表的細(xì)菌學(xué)檢查正常人的手作為人最常使用的部位

12、之一，所接觸到的細(xì)菌會(huì)比較多，其中有常駐菌群和暫駐菌群。皮膚“常駐菌群”種類、數(shù)量相對(duì)比較固定，清洗后數(shù)量可以減少，但不會(huì)徹底消失。皮膚“暫駐菌群”是由于人體頻繁接觸外部環(huán)境而沾染上的各種細(xì)菌。如上圖所示，橫軸上方為標(biāo)準(zhǔn)洗手，橫軸下方為常規(guī)洗手。結(jié)果顯示：標(biāo)準(zhǔn)洗手后培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)目反而增多，且多于常規(guī)洗手所得的細(xì)菌數(shù)目。經(jīng)老師指導(dǎo)和小組間討論得如下猜想：在標(biāo)準(zhǔn)洗手的過程中如果搓手，那么會(huì)將原來(lái)隱藏在皮膚深處的細(xì)菌帶到手的表面，這樣的手在干燥后接觸培養(yǎng)皿時(shí)，會(huì)留下更多細(xì)菌。3.3細(xì)菌的分離培養(yǎng)根據(jù)任務(wù)分配，本人是乙，所取標(biāo)本為膿汁標(biāo)本，所接種的培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。37培養(yǎng)1824h后觀察得

13、上圖結(jié)果。本次分區(qū)劃線分離法操作成功，且得到了一定數(shù)目的單菌落，菌落顏色有黃色和白色兩種。另有伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基得到兩種菌落，顏色有紫黑色和粉紅色兩種。根據(jù)具體結(jié)果制得下表：細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果表標(biāo)本膿汁糞便菌落顏色金黃色白色紫黑色粉紅色形態(tài)特征圓形、隆起、表面光滑、邊緣整齊、不透明，菌落較小，直徑為2mm左右具有金屬光澤、大而隆起、不透明，菌落直徑23mm半透明，菌落較小，直徑為12mm結(jié)果根據(jù)形態(tài)特征可大膽推測(cè)為葡萄球菌；根據(jù)菌落顏色，金黃色的是金黃色葡萄球菌，白色的是白色葡萄球菌從形態(tài)上暫時(shí)不能鑒別是什么細(xì)菌，需要進(jìn)一步檢測(cè)鑒定3.4細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)特征的觀察 四種細(xì)菌在1000×油鏡下

14、觀察結(jié)果如上圖，具體形態(tài)如下圖： 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪制下表：細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)特征表菌落來(lái)源膿汁標(biāo)本糞便標(biāo)本菌落顏色黃色白色紫黑色淡粉紅色油鏡下特征呈紫色，均為G+球菌，呈葡萄串狀，排列不規(guī)則呈紅色，均為G-桿菌，散在排列3.5糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)和動(dòng)力試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪制下表：葡萄糖乳糖半固體紫黑色+粉紅色-：產(chǎn)氣產(chǎn)酸 +：產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或陽(yáng)性 -：不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或陰性經(jīng)查閱資料得腸道桿菌生化反應(yīng)特性如下表：葡萄糖乳糖半固體埃希菌屬+志賀菌屬-沙門菌屬/+ -+霍亂弧菌+-+變形桿菌屬-+：產(chǎn)氣產(chǎn)酸 +：產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或陽(yáng)性 -：不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣或陰性根據(jù)腸道桿菌生化反應(yīng)特性表與實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)照得結(jié)果為：紫黑色菌落為埃希

15、菌屬，粉紅色菌落為志賀菌屬。3.6血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果如上圖。放大觀察如下圖：根據(jù)致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白,附著于菌體表面,形成凝塊的原理，可得結(jié)果：金黃色菌落為金黃色葡萄球菌，白色菌落為白色葡萄球菌。3.7血清學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如上圖。放大觀察如下圖：菌液凝集者記為陽(yáng)性，菌液均勻混濁記為陰性。根據(jù)上圖得實(shí)驗(yàn)結(jié)果得：粉紅色菌落為志賀菌屬。3.8藥敏試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪制下表： 藥敏試驗(yàn)結(jié)果表一：菌落黃色白色紫黑色粉紅色青霉素+-先鋒霉素+慶大霉素+備注：“+”為敏感，“-”為耐藥表二：抑菌圈直徑（mm）青霉素慶大霉素先鋒毒素V金黃色菌落4

16、63646白色菌落333136紫黑色菌落-2628粉紅色菌落-3034表三：常用藥敏試驗(yàn)紙片判斷標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物紙片含藥量抑菌圈直徑（mm）耐藥中毒敏感敏感青霉素G10單位28-29先鋒霉素V30微克1415-1718慶大霉素10微克1213-1415 從之前實(shí)驗(yàn)的種種的現(xiàn)象與結(jié)果可知，金黃色的是金黃色葡萄球菌，白色的是白色葡萄球菌，紫黑色的是大腸埃希菌，粉紅色的是痢疾志賀菌。其中，四種菌對(duì)先鋒霉素和慶大霉素都敏感，而金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌對(duì)青霉素敏感，大腸埃希菌和痢疾志賀菌對(duì)青霉素表現(xiàn)為耐藥。4.綜合結(jié)果討論4.1對(duì)膿汁中細(xì)菌的分析討論應(yīng)用分區(qū)劃線分離法，于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，從膿汁標(biāo)本中分離

17、出金黃色和白色兩種菌落。在1000×油鏡下觀察時(shí)，這兩種細(xì)菌均為G球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，符合典型葡萄球菌的特征。結(jié)合菌落的顏色，可以初步斷定，這是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通過血漿凝固酶試驗(yàn)，觀察到金黃色葡萄球菌能使血漿產(chǎn)生顆粒性物質(zhì)，白色葡萄球菌則沒有反應(yīng)，說明了金黃色葡萄球菌是致病菌。最后進(jìn)行的是藥敏試驗(yàn)，從培養(yǎng)基上可以觀察到，不同的抗生素所形成的抑菌圈不同，其中青霉素對(duì)金黃色葡萄球菌最敏感。用伊紅美藍(lán)平板分離菌落時(shí)，可以從糞便標(biāo)本中分離出紫黑色具有金屬光澤的菌落和粉紅色半透明菌落。4.2對(duì)糞便中細(xì)菌的分析討論在顯微鏡下觀察時(shí)，這兩種菌均為G桿菌，排列不規(guī)則，從形態(tài)上

18、暫時(shí)不能鑒別是什么細(xì)菌。球菌是致病菌。經(jīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)，可以觀察到，紫黑色菌落的細(xì)菌使能使葡萄糖和乳糖的試管變色和產(chǎn)生氣體，粉紅色菌落的細(xì)菌只能使葡萄糖的試管變色而無(wú)氣體，對(duì)乳糖無(wú)反應(yīng)。說明紫黑色菌落的細(xì)菌可以分解利用葡萄糖和乳糖，并產(chǎn)生氣體，粉紅色菌落的細(xì)菌只可以分解利用葡萄糖，且不產(chǎn)生氣體，不能分解利用乳糖。經(jīng)半固體動(dòng)力試驗(yàn)，觀察到紫黑色菌落的細(xì)菌使半固體培養(yǎng)基細(xì)菌擴(kuò)散生長(zhǎng),培養(yǎng)基混濁，粉紅色菌落的細(xì)菌沿接種線生長(zhǎng),培基清澈透明。說明紫黑色菌落的細(xì)菌有動(dòng)力（有鞭毛），粉紅色菌落的細(xì)菌無(wú)動(dòng)力（無(wú)鞭毛）。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論，紫黑色菌落的細(xì)菌為大腸埃希菌，粉紅色菌落的細(xì)菌為痢疾志賀菌。玻片凝集試驗(yàn)

19、，福氏志賀菌診斷血清與粉紅色菌落的細(xì)菌混合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，證明粉紅色菌落的細(xì)菌為痢疾志賀菌。最后進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌對(duì)青霉素不敏感，對(duì)慶大霉素和先鋒霉素都敏感。 綜上所述，膿汁標(biāo)本中分離得金黃色菌落為金黃色葡萄球菌，白色菌落為白色葡萄球菌，致病菌為金黃色葡萄球菌；糞便標(biāo)本中分離得紫黑色菌落為大腸埃希菌，粉紅菌落為福氏志賀菌，致病菌為福氏志賀菌。5. 討論 本次膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)微實(shí)驗(yàn)，是本人的第一次微生物實(shí)驗(yàn)。許多實(shí)驗(yàn)方法都是第一次接觸和親自操作。在老師耐心細(xì)致的指導(dǎo)下，通過自我總結(jié)和小組討論，本人有如下總結(jié)：5.1 在培養(yǎng)基制備中一定要規(guī)范操作，如果培養(yǎng)基的效果差

20、的話就會(huì)直接影響到后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，會(huì)導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)所得到的結(jié)果都受到影響。5.2空氣的細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)中，空氣細(xì)菌含量與場(chǎng)所人流量、通風(fēng)狀況等都有著密切的關(guān)系。人流量大且密閉不通風(fēng)的條件下空氣細(xì)菌含量大。5.3人體體表的細(xì)菌學(xué)檢實(shí)驗(yàn)中，在標(biāo)準(zhǔn)洗手的過程中如果搓手，那么會(huì)將原來(lái)隱藏在皮膚深處的細(xì)菌帶到手的表面，這樣的手在干燥后接觸培養(yǎng)皿時(shí)，會(huì)留下更多細(xì)菌。5.4細(xì)菌的分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，采用分區(qū)劃線發(fā)法分離細(xì)菌時(shí)，接種環(huán)與平板須成大致30°，涂布時(shí)切勿用過大的力度，以免劃破平板。5.5實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在火焰周圍1020厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。5.6伊紅美藍(lán)平板上，

21、大腸桿菌分解利用完乳糖之后，就要利用蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分解大多產(chǎn)生堿性物質(zhì)，中和了乳糖分解時(shí)產(chǎn)生的酸。因此培養(yǎng)、放置時(shí)間過長(zhǎng)或者平板上某個(gè)部位細(xì)菌比較多、菌落比較密集時(shí)，大腸桿菌菌落可能會(huì)由原來(lái)的紫黑色變成粉紅色，或者菌落中心黑色，邊緣粉紅色。5.7挑取細(xì)菌時(shí)，應(yīng)在菌落分布最稀疏的區(qū)域，選擇平板上相同的菌落數(shù)多的、典型的、容易挑取的單菌落。5.8細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查實(shí)驗(yàn)中，從斜面上取菌時(shí)，一般只取半個(gè)小菌落大小的菌量；接種環(huán)或接種針在菌苔上輕刮一下即可。倘若取菌過多，則在油鏡下觀察時(shí)會(huì)使視野中的細(xì)菌過于密集，出現(xiàn)重疊，難以觀察細(xì)菌形態(tài)，且常常會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn)。5.9革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫

22、色程度，若脫色過度，則陽(yáng)性菌可被誤染為陰性菌：若脫色不夠時(shí)，陰性菌可被誤染為陽(yáng)性菌。因此應(yīng)該要操作迅速，控制在20秒以內(nèi)。此外，染色時(shí)通常會(huì)用新鮮的細(xì)菌培養(yǎng)物，因?yàn)榫g會(huì)影響染色結(jié)果，如陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。5.10在糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，存放的時(shí)間不應(yīng)過長(zhǎng)，否則會(huì)使產(chǎn)氣的微量發(fā)酵管的氣體排出，導(dǎo)致所看到的現(xiàn)象不準(zhǔn)確。此外，實(shí)驗(yàn)完成后，管口不能朝上，這是因?yàn)楣芸诔蠒r(shí)，反應(yīng)過程中產(chǎn)生的氣體會(huì)溢出，觀察不到正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最終會(huì)影響到細(xì)菌的最終鑒定。5.11在糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，若出現(xiàn)四支微量發(fā)酵管均呈黃色，可能是因?yàn)榧兣囵B(yǎng)時(shí)，菌落挑錯(cuò)了或所取的不是單菌落，無(wú)菌操作不嚴(yán)格導(dǎo)致污染雜菌，或接種時(shí)未協(xié)調(diào)好，接種錯(cuò)誤。5.12玻片凝集實(shí)驗(yàn)中，在適量電解質(zhì)存在的情況下，顆粒性抗原(細(xì)菌)與特異性抗體結(jié)合，如果比例合適，則出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊。因此該實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意取適量的細(xì)菌。5.13在操作動(dòng)力實(shí)驗(yàn)的過程中，接種針應(yīng)該要順著原路退出，如果此過程中接種針左右擺動(dòng)了，會(huì)出現(xiàn)本沒有鞭毛的細(xì)菌經(jīng)培養(yǎng)呈現(xiàn)一片渾濁，難以判斷是操作有誤還是細(xì)菌