國(guó)家自然科學(xué)基金成功中標(biāo)申請(qǐng)書-《通脈口服液》配伍規(guī)律及作用機(jī)制的研究

1、精品文檔項(xiàng)目類別申報(bào)學(xué)科代碼 1科學(xué)部編號(hào)AC030503國(guó)家自然科學(xué)基金申請(qǐng)書項(xiàng)目名稱： 通脈口服液 配伍規(guī)律及作用機(jī)制的研究 申 請(qǐng) 者： 所在單位：郵政編碼： 通訊地址： 電 話： 傳 真：申請(qǐng)日期：2002 年 3月 10日國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)一九九七年制填報(bào)說(shuō)明一、填寫申請(qǐng)書前，請(qǐng)先查閱國(guó)家自然科學(xué)基金有關(guān)項(xiàng)目申請(qǐng)辦 法及規(guī)定。申請(qǐng)書各項(xiàng)內(nèi)容，要實(shí)事求是，逐條認(rèn)真填寫。表達(dá)要明 確、嚴(yán)謹(jǐn)，字跡要清晰易辨。外來(lái)語(yǔ)要同時(shí)用原文和中文表達(dá)。第一 次出現(xiàn)的縮寫詞，須注出全稱。二、申請(qǐng)書為十六開(kāi)本，復(fù)印時(shí)用 B5復(fù)印紙，于左側(cè)裝訂成冊(cè)。 第三頁(yè)起各欄空格不夠時(shí)， 請(qǐng)自行加頁(yè)。一式六份（至少一

2、份為原件） ， 由所在單位審查簽署意見(jiàn)后， 按申報(bào)學(xué)科投送國(guó)家自然科學(xué)基金委員 會(huì)對(duì)口科學(xué)部。地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目，申請(qǐng)書另報(bào)送省（自治區(qū)）科委 一份原件。三、封面右上角“科學(xué)部編號(hào)”由對(duì)口科學(xué)部填寫，項(xiàng)目類別和 申報(bào)學(xué)科代碼 1 由申請(qǐng)者填寫。四、下列人員不得作為申請(qǐng)項(xiàng)目的負(fù)責(zé)人提出申請(qǐng)，但可作為項(xiàng) 目組成員參加研究：在讀（含在職）研究生已離退休的科研人員申請(qǐng)單位的兼職科研人員五、申請(qǐng)者和項(xiàng)目組中具有高級(jí)專業(yè)技術(shù)職務(wù)的主要成員申請(qǐng) （含參加）的項(xiàng)目數(shù)，連同在研的國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目數(shù)（不含重 點(diǎn)項(xiàng)目、重大項(xiàng)目） ，不得超過(guò)兩項(xiàng)。六、同一項(xiàng)目組研究?jī)?nèi)容相近的項(xiàng)目，只允許報(bào)送一個(gè)學(xué)科。七、申請(qǐng)者可因

3、同類項(xiàng)目競(jìng)爭(zhēng)等原因，提出不宜評(píng)議本項(xiàng)目的專 家名單（姓名與單位， 3 人以內(nèi)），密封于信封中，釘在申請(qǐng)書原件封 面，或另專函相關(guān)學(xué)科，供科學(xué)部選擇同行評(píng)議人時(shí)參考。科學(xué)部將 對(duì)此信息保密。八、國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)通訊地址：北京市海淀區(qū)花園北路35 號(hào)東門郵政編碼： 1000831歡迎。下載精品文檔11歡迎。下載、簡(jiǎn)表中 文通脈口服液配伍規(guī)律及作用機(jī)制的研究英 文Study on the combining regulation and effecting mechanism of TONGMAI oral liquid名稱類別申報(bào) 學(xué)科A. 自由申請(qǐng) B. 高技術(shù)探索 C. 青年 D. 地區(qū)

4、E. 重大 F. 重點(diǎn) H. 專項(xiàng) A 中醫(yī)臨床基礎(chǔ)名稱 1代碼 1申請(qǐng)金額所用實(shí)驗(yàn)室姓 中文 楊霓芝拼音C0305030 0 萬(wàn)元名稱 2代碼 2起止年月A. 國(guó)家重點(diǎn) B. 部門開(kāi)放A. 男中藥藥理學(xué)C03050205出生年月YANG NI ZHI專 業(yè) 名稱 教授 技術(shù) 職務(wù)名稱代碼011B. 女 BA. 博士B. 碩士C. 學(xué)士 C廣州中醫(yī)藥大學(xué)身份證號(hào)高技術(shù)探索 項(xiàng)目主題號(hào)A. 基礎(chǔ)研究B. 應(yīng)用基礎(chǔ) B2003 年 1 月至 2005 年 12 月實(shí)驗(yàn)室編號(hào)48 年 10 月名稱博士學(xué)位 授予國(guó)別 或地區(qū)系（所）440102481025402 國(guó)( 地區(qū))名代碼臨床醫(yī)學(xué)院代碼01中

5、國(guó) A. 院士B. 博士生導(dǎo)師C. 博士后156單位代碼51040701所 在 單 位性質(zhì)所在地總?cè)藬?shù)主 要 成 員不 含 申 請(qǐng) 者 ）A. 高等院校B. 科研機(jī)構(gòu)C. 其它郵政編碼510405隸屬名稱廣東省教育廳申請(qǐng)者電話(020)86591233-2267關(guān)系代碼944廣東省 （ 自治區(qū)、直轄市 ） 廣州 市（縣） 白云 區(qū) 機(jī)場(chǎng) 街（ 路） 12 號(hào)高級(jí)中級(jí)初級(jí)博士后博士生碩士生參加單位數(shù)姓名身份證號(hào)專業(yè)技術(shù) 職務(wù)所在單位名稱及代碼項(xiàng)目中 的分工簽字83115精品文檔研 究 內(nèi) 容 和 意 義摘要在既往對(duì)通脈口服液臨床和實(shí)驗(yàn)有效的基礎(chǔ)上進(jìn)一步系統(tǒng)研究其配伍規(guī)律闡明該制劑治療慢性腎炎的有

6、效物質(zhì)基礎(chǔ)及其形成規(guī)律并從細(xì)胞因子(致炎細(xì)胞因子IL-1、抗炎細(xì)胞因子L- 10)的角度探討其作用機(jī)理為開(kāi)發(fā)出具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的治療慢性腎炎、防治腎小球硬化的中藥新藥提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。主題詞中文中藥復(fù)方慢性腎炎組方機(jī)理英文Compound prescription of Chinese herbs; Chronic nephritis; Mechanism of composing and effects簡(jiǎn)表填寫要求一、簡(jiǎn)表內(nèi)容將輸入計(jì)算機(jī)，必須逐項(xiàng)認(rèn)真填寫，采用國(guó)家公布的標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)化漢字。簡(jiǎn)表中所有代碼以最新 發(fā)布的國(guó)家自然科學(xué)基金申請(qǐng)項(xiàng)目分類目錄及代碼為準(zhǔn)填寫。高技術(shù)探索課題主題號(hào)

7、按高技術(shù) 新概念新構(gòu)思探索課題項(xiàng)目指南中主題號(hào)填寫，申請(qǐng)其重點(diǎn)項(xiàng)目時(shí)項(xiàng)目類別也填寫B(tài)，并在申請(qǐng)書封面右上角加注“高技術(shù)探索課題重點(diǎn)項(xiàng)目” 。二、凡選擇性欄目，將相應(yīng)提示符 A、B 等之一填入該欄的右下角。三、部分欄目填寫要求：項(xiàng)目名稱 應(yīng)確切反映研究?jī)?nèi)容和范圍，最多不超過(guò)25個(gè)漢字 （ 包括標(biāo)點(diǎn)符號(hào)） ?；A(chǔ)研究 指以認(rèn)識(shí)自然現(xiàn)象、探索自然規(guī)律為目的，不直接考慮應(yīng)用目標(biāo)的研究活動(dòng)。應(yīng)用基礎(chǔ)研究 指有廣泛應(yīng)用前景，但以獲取新原理、新技術(shù)、新方法為主要目的的研究。申報(bào)學(xué)科 申請(qǐng)項(xiàng)目所屬的最基礎(chǔ)學(xué)科。如涉及多學(xué)科可填寫兩個(gè)，先填為主學(xué)科。申請(qǐng)金額 以萬(wàn)元為單位，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，注意小數(shù)點(diǎn)。起止年月

8、 起始時(shí)間從申請(qǐng)的次年 1月算起。終止時(shí)間為完成年度的 12 月。所用實(shí)驗(yàn)室 系指研究項(xiàng)目將利用的實(shí)驗(yàn)室，僅填寫國(guó)家計(jì)委批準(zhǔn)的國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室或部門批準(zhǔn)的 開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室。所在單位名稱及代碼 按單位公章填寫全稱。例如“中國(guó)科學(xué)院西安光學(xué)精密機(jī)械研究所”不得填“中科院西安光機(jī)所” 或“西安光機(jī)所” 。全稱中的數(shù)字， 一律寫中文， 例如： 中國(guó)航天工業(yè)總公司第七一所。首次申請(qǐng)國(guó)家自然科學(xué)基金的單位，尚未 編入單位代碼，其代碼暫不填寫。參加單位數(shù) 指研究項(xiàng)目組主要成員所在單位數(shù)，包括主持單位和合作單位（合作者所在單位 ） ，以阿拉伯?dāng)?shù)字表示。項(xiàng)目組主要成員 指在項(xiàng)目組內(nèi)對(duì)學(xué)術(shù)思想、技術(shù)路線的制訂與理論分析

9、及對(duì)項(xiàng)目的完成起重要作 用的人員，本人應(yīng)在申請(qǐng)書上親自簽名。本欄雙線右側(cè)內(nèi)容不輸入計(jì)算機(jī)。研究?jī)?nèi)容和意義 摘要與主題詞均錄入軟盤。23歡迎。下載精品文檔二、立論依據(jù)（包括項(xiàng)目的研究意義、國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析，并附主要參考文獻(xiàn)及出處） 對(duì)基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國(guó)際科學(xué)發(fā)展趨勢(shì)，論述項(xiàng)目的科學(xué)意義；對(duì)應(yīng)用基礎(chǔ)研究， 著重結(jié)合學(xué)科前沿、圍繞國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中的重要科技問(wèn)題，論述其應(yīng)用前景。慢性腎炎是一種常見(jiàn)病，其病程長(zhǎng)，遷延不愈，是目前我國(guó)引起慢性腎功能衰竭的主 要原因 1 ?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采用降壓、抗凝、利尿等對(duì)癥治療及激素和細(xì)胞毒藥物的應(yīng)用，尚 缺少針對(duì)發(fā)病機(jī)理進(jìn)行治療的藥物，與之相比，祖國(guó)醫(yī)學(xué)在治療慢

10、性腎炎方面有著長(zhǎng)足的 優(yōu)勢(shì)。 目前對(duì)慢性腎炎的中醫(yī)藥治療主要可分為二大類,即辨病施治和辨證施治： 辨病施治主要是針對(duì)慢性腎炎的臨床表現(xiàn)如蛋白尿、血尿的治療。對(duì)蛋白尿的治療，多采用健脾固 腎、活血化瘀、清熱解毒等法 2 ；針對(duì)血尿的治療則主要以清熱涼血法、健脾固腎法、活 血化瘀法為主 3-4 。辨證施治方面目前尚沒(méi)有統(tǒng)一的分型標(biāo)準(zhǔn) , 各家仍各執(zhí)一說(shuō)：如余綺明 以臟腑結(jié)合陰陽(yáng)辨證為主，將慢性腎炎分為脾腎陽(yáng)虛、腎陰虛火旺、腎虛濕毒三型，分別 用參苓白術(shù)散合真武湯、知柏地黃丸、濟(jì)生腎氣丸合溫膽湯加減治療5 ；郭連川將慢性腎炎分為濕熱內(nèi)蘊(yùn)、濕熱犯中、水熱內(nèi)停、瘀血內(nèi)阻四個(gè)證型論治 6 等。但綜觀目前的

11、文獻(xiàn) 報(bào)道， 或是集中在某方治療某病上， 未能充分體現(xiàn)中醫(yī)辨證施治原則； 或是組方過(guò)于繁雜 , 不利于有效成分的分析提?。涣硗獗孀C分型標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，也不利于臨床療效的判定。這樣 都不可避免地會(huì)影響治療效果和藥物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。我們?cè)陂L(zhǎng)期的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，慢性腎炎發(fā)展過(guò)程中，氣虛血瘀型占很大比例，約占 56.3%7 。其由氣虛而發(fā)病，因血瘀而致疾病遷延難愈；與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)之慢性腎炎主要由免疫 失調(diào)而發(fā)病，因凝血障礙而致疾病發(fā)展惡化的病機(jī)極其相似 8 。因此，我們根據(jù)多年的臨 床經(jīng)驗(yàn)，摸索出有效驗(yàn)方，制成通脈口服液。方中黃芪為益氣要藥，有補(bǔ)氣升陽(yáng)、益衛(wèi)固 表、利水消腫之功，藥材中主要含皂甙 9-12 、異

12、黃酮 14-15 、多糖 16 等水溶性成分，黃芪水提 液及其中的黃芪多糖、黃芪皂甙對(duì)多種動(dòng)物免疫系統(tǒng)、體液免疫及細(xì)胞免疫均有顯著的調(diào) 節(jié)作用 17-22 ，而且能顯著降低大鼠血小板粘附率 23及減少腎小球疾病尿蛋白的排出量 24 。 三七和營(yíng)止血、通脈行瘀，藥材主要含皂甙、黃酮、多糖25 等水溶性成分，其中三七總皂甙及總黃酮均有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈 26 、抗心肌缺血 27 作用，總皂甙還有顯著的抗炎 28 、免疫增 強(qiáng)29 及延緩腎小球硬化發(fā)生作用 30 。經(jīng)過(guò) 1997.82000.8 廣東省科委重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目通脈 口服液防治慢性腎炎氣虛血瘀證的臨床與實(shí)驗(yàn)研究三年多嚴(yán)格的臨床與實(shí)驗(yàn)研究，充分 證明

13、該藥是治療慢性腎炎氣虛血瘀證患者的有效藥物，且未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用 31-34 。經(jīng)省 級(jí)鑒定，成果水平達(dá)國(guó)內(nèi)領(lǐng)先。因此本項(xiàng)目擬進(jìn)一步對(duì)其配伍規(guī)律及更深入的作用機(jī)制進(jìn) 行研究： . 配伍規(guī)律的研究：中藥復(fù)方配伍規(guī)律的研究，是一個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng)工程。臨床療效 是中藥復(fù)方研究的依據(jù)，復(fù)方的主要功效和配伍理論是中藥復(fù)方研究的前提。從物質(zhì)基礎(chǔ)角度探討方劑的組成原理和配伍規(guī)律，已逐漸在學(xué)術(shù)界引起重視，并進(jìn)行 35歡迎。下載精品文檔了有益的嘗試。如用薄層掃描法對(duì)四逆湯的三種烏頭堿類成分的測(cè)定表明，甘草及干姜均 能顯著降低附子的毒性成分，四逆湯的不同配伍對(duì)化學(xué)及藥效均產(chǎn)生影響35 。生脈散配伍化學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了

14、新物質(zhì)，經(jīng)UV，IR， MS及 NMR譜鑒定為 5-羥甲基 -2- 糠醛，研究表明，復(fù)方獨(dú)特療效有其獨(dú)特的物質(zhì)基礎(chǔ)，與單味藥及其簡(jiǎn)單加和在化學(xué)成分上有本質(zhì)區(qū)別 36 。對(duì)不同配伍的白頭翁湯中黃連素和秦皮素的測(cè)定表明，復(fù)方中被檢物質(zhì)的含量不符合 各單味藥成分含量的加和 37 。運(yùn)用現(xiàn)代分離方法提取有效部分，通過(guò)指紋圖譜定性、指標(biāo)成分定量等方法，可使含 有幾百種化合物的中藥復(fù)方分成十多類，每類含可定量的幾十種化合物。同時(shí)，將單味藥 中一種或幾種有效成分作為定性定量指標(biāo)，對(duì)復(fù)方中藥采取提取分離分析技術(shù)，與選定的 有效成分指標(biāo)進(jìn)行比較，從而說(shuō)明復(fù)方的配伍。在復(fù)方藥理研究及分析復(fù)方中各藥味已知 化學(xué)成分

15、藥理作用的基礎(chǔ)上， 進(jìn)行藥效和作用機(jī)理研究， 這些研究可在整體、 離體、 細(xì)胞、 分子生物學(xué)等水平上進(jìn)行，從而確定君臣佐使藥的有效部位、有效成分，闡明復(fù)方藥物配 伍規(guī)律。這樣一來(lái)，不僅可以確定各有效部分的藥效作用，而且可發(fā)現(xiàn)有無(wú)更有效的新的 化學(xué)物質(zhì)出現(xiàn)。由于中藥復(fù)方用藥本身的復(fù)雜性，以上研究所取得的成果還很有限，仍未能在更深層 次闡明方劑組成原理， 未能更深入揭示方劑中各組成藥物在方中的作用、 地位及相互關(guān)系， 也難以有效地指導(dǎo)臨床制方和中藥新產(chǎn)品的研創(chuàng)。其中既有技術(shù)手段方面的不足，也有思 路與方法上的缺陷，突出表現(xiàn)在：1、對(duì)方劑產(chǎn)生療效的物質(zhì)基礎(chǔ)研究明顯滯后：對(duì)多數(shù)方劑而言，在為數(shù)眾多化學(xué)

16、成分中，究竟那些是有效成分，哪些是無(wú)效成分，哪些是起主 要作用的成分等尚未可知； 2、方劑物質(zhì)基礎(chǔ)的運(yùn)動(dòng)、變化關(guān)系研究相對(duì)薄弱：方劑君臣 佐使配伍以后， 在制劑過(guò)程及體內(nèi)過(guò)程中， 各藥的化學(xué)成分 （特別是效應(yīng)成分） 在數(shù)、 量、 分布及作用趨向發(fā)生了怎樣的變化多未能充分說(shuō)明；3、方劑組成原理研究綜合性不夠：沒(méi)能從藥效、作用機(jī)理及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的運(yùn)動(dòng)變化等多方面、多層次采用多學(xué)科手段進(jìn)行 綜合研究，來(lái)揭示君臣佐使的科學(xué)內(nèi)涵；4、“證”的客觀化研究有待加強(qiáng)：既往多為對(duì)較為單一的藥效學(xué)指標(biāo)進(jìn)行方劑君臣佐使藥物地位與作用分析，與“證”的結(jié)合不多，主要 是缺乏客觀、規(guī)范、 符合中醫(yī)藥理論的“證” 的動(dòng)物模

17、型，難以反映配伍效應(yīng)與主治“證” 之間的內(nèi)在聯(lián)系，與臨床實(shí)際有較大差距。因此本課題擬通過(guò)能從宏觀上反映中藥物質(zhì)群 的指紋圖譜法與顯示中藥微觀作用的腎小球系膜細(xì)胞篩選法二者的結(jié)合， 建立有效物質(zhì)群 評(píng)價(jià)法，系統(tǒng)研究黃芪與三七組方配伍前后有效物質(zhì)群的變化規(guī)律，科學(xué)地闡明通脈口服 液配伍規(guī)律及有效物質(zhì)基礎(chǔ)。對(duì)通脈口服液配伍規(guī)律進(jìn)行系統(tǒng)研究（目前針對(duì)黃芪與三七的配伍研究尚未見(jiàn)報(bào)道） 闡明該制劑治療慢性腎炎的有效物質(zhì)基礎(chǔ)及形成規(guī)律，對(duì)于該中藥制劑的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)有著 重要意義。 首先，有利于科學(xué)地制定該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并顯著提高該制劑工藝研究的水平， 從而開(kāi)發(fā)出易與國(guó)際接軌的高檔次的中藥復(fù)方藥物；其次，該組方

18、有效物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明，3a#歡迎。下載精品文檔也將為治療慢性腎炎的中藥新藥的開(kāi)發(fā)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。因此，開(kāi)展本項(xiàng)目研究，有利于 一系列具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的中藥新藥的開(kāi)發(fā)，對(duì)于其他中藥新藥研究和開(kāi)發(fā)也有重要的指 導(dǎo)意義。同時(shí)，開(kāi)展本項(xiàng)目研究，可揭示黃芪與三七配伍后各類成分結(jié)合衍化的重要途徑， 將為祖國(guó)醫(yī)藥學(xué)方藥配伍規(guī)律的科學(xué)闡述提供可靠的理論依據(jù)。. 作用機(jī)制的研究： 目前對(duì)中藥治療慢性腎炎作用機(jī)制的研究多數(shù)還局限于腎臟的功 能與形態(tài)、腎血流動(dòng)力學(xué)等方面的研究，而細(xì)胞生物學(xué)與分子生物學(xué)水平研究較少，已有 研究證實(shí)黃芪與三七對(duì)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)有影響，如黃芪可以降低慢性腎炎患者血中 sIL-2R 和 IL-6

19、 水平38 ,可以使慢腎衰患者外周血中升高的IGF1、TGF-1、TNF和 IL-6 下調(diào)39 ，三七總皂甙可以降低背部滑膜炎模型大鼠血中 TNF 水平 40 及有機(jī)磷農(nóng)藥中毒患者血清 L-6 、IL-8 等水平 41 。但兩藥相互配伍后對(duì)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的影響目前還沒(méi)有研究報(bào)道。 細(xì)胞因子具有多種生物學(xué)效應(yīng)，目前已證實(shí)，幾乎所有腎臟固有細(xì)胞，均具有產(chǎn)生細(xì)胞因 子的能力，同時(shí)又是細(xì)胞因子生物學(xué)作用的靶細(xì)胞。腎臟疾病時(shí)細(xì)胞因子至少通過(guò)兩種途 徑參與病變過(guò)程： 一是作為“攻擊性”炎癥介質(zhì)，啟動(dòng)或促進(jìn)腎組織的炎癥和損傷， 如 IL-1 、 TNF-等；二是作為抗炎癥因子，參與腎臟的自身防御，促進(jìn)炎癥消散

20、和組織修復(fù)， 如 IL-4 、IL-10 等。腎小球疾病進(jìn)展的最終結(jié)果取決于促增殖與抑制性因子相互作用的綜 合結(jié)果 42 。腎小球系膜細(xì)胞是腎小球內(nèi)最活躍的固有細(xì)胞，已有報(bào)道系膜細(xì)胞可以自分 泌 IL-6 、 IL-1 、 TNF- 等炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子并可表達(dá)這些細(xì)胞因子的受體，而這些細(xì) 胞因子可趨化單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞并促使它們釋放炎性介質(zhì)進(jìn)一步激活系膜細(xì)胞，使局部 炎癥不斷擴(kuò)大并形成惡性循環(huán)，加速腎小球硬化 43 。因此本研究擬通過(guò)觀察慢性腎炎時(shí)系 膜細(xì)胞對(duì)細(xì)胞因子（ IL-1 及 IL-10 ）的表達(dá)及通脈口服液對(duì)其表達(dá)的影響，從促炎癥因 子及抗炎癥因子兩方面入手，研究中藥通脈口服液的作用

21、機(jī)制。為以益氣活血為主的通脈 口服液治療慢性腎炎提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和更充分的科學(xué)依據(jù)。參考文獻(xiàn)1. 王海燕主編 .腎臟病學(xué)(第二版). 北京:人民衛(wèi)生出版社 .1996:13852. 洪欽國(guó) .慢性腎炎的中醫(yī)治療 . 廣州醫(yī)藥 ,1998,(3):4-53. 王伯岳 ,王育仁 .中醫(yī)兒科學(xué) .北京: 人民衛(wèi)生出版社 ,1984.473-4744. 許方榮.中醫(yī)治療急慢性腎小球腎炎血尿 29例臨床觀察.江西中醫(yī)藥 ,1998,29(1):225. 余綺明 .通補(bǔ)兼施治療慢性腎炎 28 例臨床觀察 .湖北中醫(yī)雜志 ,1995,17(4):226. 郭連川 .分型辨治慢性腎炎 36 例.遼寧中醫(yī)雜志

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30、到治療慢性腎炎、防治腎小球硬化的作用。. 研究目標(biāo) ：通過(guò)系統(tǒng)研究， 闡明通脈口服液的配伍規(guī)律及治療慢性腎炎的有效物質(zhì) 基礎(chǔ)。 并從細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)水平探討通脈口服液治療慢性腎炎、 防治腎小球硬化 的作用機(jī)制。為通脈口服液治療慢性腎炎提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和更充分的科學(xué)依據(jù)。（3）. 研究?jī)?nèi)容 . 黃芪、三七單味藥材的質(zhì)控研究。 . 配伍前黃芪、 三七單味藥材的成分類別、 含量及指紋圖譜研究。 .不同比例 （黃芪與三七劑量比分別為 4:1 、3:1 、2:1） 配伍后組方的成分類別、含量 及指紋圖譜研究。 . 配伍后各組方主要部位及其匹配的藥效學(xué)篩選研究。 . 配伍后組方有效物質(zhì)群的藥效學(xué)評(píng)

31、價(jià)。 . 配伍后組方有效物質(zhì)群對(duì)腎小球系膜細(xì)胞（MsC）的增殖及促炎癥細(xì)胞因子 IL-1 和抗炎癥細(xì)胞因子 IL-10 蛋白及基因表達(dá)的影響。. 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題 . 闡明配伍前后組方各類化學(xué)成分的變化規(guī)律。 . 闡明配伍后組方治療慢性腎炎的有效物質(zhì)群及其作用機(jī)理。2. 擬采取的研究方法、技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方案及可行性分析 研究方法及實(shí)驗(yàn)方案 配伍規(guī)律及藥效學(xué)研究部分 :.單味藥材的質(zhì)控研究 ：對(duì)黃芪供試藥材 （黑龍江產(chǎn) ）以 HPLC法測(cè)定其黃芪甲甙含量， 以硫酸 -苯酚法測(cè)定其多糖含量， ；對(duì)三七供試藥材 （云南產(chǎn) ）以 HPLC法測(cè)定三七皂甙 R1含 量，以分光光度法測(cè)定總皂甙含量；并制定兩

32、供試藥材上述成分及部位的限量標(biāo)準(zhǔn)，確保 所用各批藥材的質(zhì)量均衡可控。. 配伍前各藥材成分類別、 含量及指紋圖譜研究 ：在參考前人資料的基礎(chǔ)上分別以 TLC 法配合顏色反應(yīng)等對(duì)兩藥材水提液不同萃取部分的成分類別進(jìn)行研究，再以分光光度法等 測(cè)定總皂甙、總黃酮、及多糖等主要化學(xué)部位的含量；并分別以HPLC法或 HPCE法制定各藥材不同萃取部分或部位指紋圖譜，配合HPLC-MS法等對(duì)所含主要成分定性，并確定相對(duì)含量。不同比例配伍后組方成分類別、 含量及指紋圖譜研究 ：以 TLC法配合顏色反應(yīng)等對(duì)組 方水提液不同萃取部分的成分類別進(jìn)行研究， 再以分光光度法等測(cè)定主要化學(xué)部位的含量； 并分別以 HPLC法

33、或 HPCE法制定其各萃取部分或主要部位的指紋圖譜，配合HPLC-MS法等對(duì)所含主要成分定性，并確定相對(duì)含量。不同比例配伍后組方及各萃取部分、主要部位及其匹配的藥效學(xué)篩選研究 ： 腎小球系膜細(xì)胞培養(yǎng)方法的建立：取水囊引產(chǎn)胎兒之腎臟，在無(wú)菌條件下分離提取腎 皮質(zhì)腎小球組織塊，照當(dāng)代腎臟病學(xué) （林善錟）法進(jìn)行腎小球 MsC培養(yǎng)和鑒定。410歡。迎下載精品文檔組方各萃取部分、主要部位匹配設(shè)計(jì)：照正交設(shè)計(jì)法，對(duì)組方各萃取部分進(jìn)行匹配，并 對(duì)總皂甙、總黃酮、多糖等主要部位進(jìn)行匹配。 組方及各萃取部分、主要部位及其匹配抗慢性腎炎作用的篩選研究 ：以金水寶為陽(yáng) 性對(duì)照 , 通過(guò)組方水提液及各萃取部分、 主要

34、部位及其匹配對(duì)體外培養(yǎng)的 MsC增殖影響的研 究，確定配伍后最隹組方及各組方的最佳匹配。5） 各組方配伍前后及不同匹配有效物質(zhì)群指紋圖譜對(duì)比研究：應(yīng)用 HPLC-MS法對(duì)配伍前后各萃取部分、主要部位及其匹配進(jìn)行指紋圖譜研究，確定并比較其主要成分種類及相對(duì)含 量，結(jié)合藥效學(xué)篩選，確定組方有效物質(zhì)群及其配伍前后的變化規(guī)律。（ 6）配伍后組方有效物質(zhì)群的藥效學(xué)評(píng)價(jià) : . 大鼠慢性腎炎模型的制備：采用抗Thy-1 抗體制備大鼠系膜增生性腎炎（ MsPGN）模型，參照文獻(xiàn) 1方法，將 A、B、C、D組大鼠由尾靜脈注射 ATS 1ml/100g ·bw（體重）， 每周 1次，連續(xù) 4 周。 .

35、大鼠“氣虛血瘀證”模型的建立：參照文獻(xiàn)2方法，在實(shí)驗(yàn)第 2 周時(shí)，予 A、B、C、 D組大鼠行游泳疲勞試驗(yàn)，連續(xù)兩周。.動(dòng)物處理：全部大鼠于造模第 2 周末及四周末用代謝籠收集 24小時(shí)尿液，并于 第四周末行眼球摘除采血，后處死取腎組織。 . 觀察指標(biāo)：尿蛋白定量：尿纖維蛋白降解產(chǎn)物（FDP）測(cè)定；血尿素氮、血肌酐測(cè)定；血液流變學(xué)測(cè)定； T 淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定及腎組織學(xué)檢查。免疫熒光學(xué)檢查：光學(xué)顯微鏡觀察：電子顯微鏡觀察。機(jī)理研究部分 :.人腎小球系膜細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定： （ 方法同前 ） . 實(shí)驗(yàn)血清制備： 腎炎模型血清制備： （造模方法同前） 。含藥血清制備. 細(xì)胞增殖測(cè)定： 采用 MTT比色

36、法 .ELISA 法測(cè)定 IL-1 和 IL-10 蛋白水平.系膜細(xì)胞 IL-1 mRNA和 IL-10mRNA表達(dá)檢測(cè) 細(xì)胞總 RNA提取cDNA第一鏈合成 PCR反應(yīng)， PCR產(chǎn)物分析參考文獻(xiàn)：1陳廣平，郭慕依，張?jiān)露穑?.大鼠 Thy-1 抗血清制備及系膜增生性腎炎模型的建立 . 臨床與實(shí)驗(yàn) 病理學(xué)雜志， 1996， 3：2412432李儀奎主編 . 中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué) . 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 1991.146.技術(shù)路線：標(biāo)準(zhǔn)化的黃芪、三七藥材 建立腎小球系膜細(xì)胞培養(yǎng)方法確定不同配伍比例提取分離各組方及單味藥各物質(zhì)群 各組方物質(zhì)群藥效篩選 HPLC-MS確定各組方物質(zhì)群組成 及

37、其配伍前后的變化規(guī)律 確定組方有效物質(zhì)群有效物質(zhì)群作用機(jī)制研究闡明組方有效物質(zhì)群及配伍前后的變化規(guī)律 闡明組方作用機(jī)制闡明通脈口服液配伍規(guī)律及作用機(jī)制可行性分析. 通脈口服液組方簡(jiǎn)單、藥源豐富、制劑穩(wěn)定，為本項(xiàng)目的順利開(kāi)展提供了保障。. 通脈口服液有良好的前期工作基礎(chǔ)，現(xiàn)已證實(shí)黃芪、三七配伍后組成的通脈口服液 對(duì)慢性腎炎有確切的療效，顯著優(yōu)于配伍前的單味藥；對(duì)配伍前后水提液酯萃取等部分的 預(yù)試驗(yàn)顯示，其指紋圖譜已產(chǎn)生顯著變化，為本項(xiàng)目提供了初步的科學(xué)依據(jù)。. 申請(qǐng)人及項(xiàng)目組主要成員長(zhǎng)期從事通脈口服液相關(guān)研究，已完成廣東省科技廳相關(guān)項(xiàng)目研究，并通過(guò)省級(jí)鑒定。已建立開(kāi)展本申報(bào)項(xiàng)目所需的腎小球系膜細(xì)

38、胞培養(yǎng)技術(shù)和指 紋圖譜技術(shù)，所需儀器基本齊備，有能力如期完成本申報(bào)項(xiàng)目的研究工作。. 本項(xiàng)目組成員均為本校人員及研究生組成，科研經(jīng)驗(yàn)豐富，主要成員經(jīng)長(zhǎng)期合作， 配合默契 , 能確保本項(xiàng)目順利進(jìn)行。12歡。迎下載5精品文檔3. 項(xiàng)目特色與創(chuàng)新之處. 首次將在“宏觀上反映中藥物質(zhì)群的指紋圖譜法”與“顯示中藥微觀作用的腎小 球系膜細(xì)胞篩選法”相結(jié)合，建立有效物質(zhì)群評(píng)價(jià)法，系統(tǒng)研究黃芪與三七組方配伍前后 有效物質(zhì)群的變化規(guī)律，科學(xué)地闡明通脈口服液配伍規(guī)律及有效物質(zhì)基礎(chǔ)。. 首次從促炎性細(xì)胞因子及抑炎性細(xì)胞因子兩方面探討中藥對(duì)慢性腎炎的作用機(jī)制。4. 年度研究計(jì)劃及預(yù)測(cè)進(jìn)展全部工作將在三年內(nèi)完成：.20

39、03.12003.3試驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作.2003.32004.3組方配伍前后物質(zhì)群的變化規(guī)律研究.2004.1-2004.12藥效學(xué)及配伍規(guī)律研究.2005.12005.10組方作用機(jī)理研究.2005.102005.12 項(xiàng)目總結(jié)及結(jié)題報(bào)告的撰寫：對(duì)所研項(xiàng)目完成情況及取得的進(jìn)展進(jìn)行工作總結(jié)和技術(shù)總結(jié)，整理研究資料并寫出結(jié)題報(bào)告。5. 預(yù)期研究成果(1) . 首次科學(xué)地闡明通脈口服液治療慢性腎炎的有效物質(zhì)基礎(chǔ)，為該制劑的深入開(kāi)發(fā) 奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，在此基礎(chǔ)上將開(kāi)發(fā)出多層次的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的中藥新藥，從而產(chǎn)生 巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。(2) . 建立能科學(xué)地闡明中藥復(fù)方配伍規(guī)律的有效物質(zhì)群評(píng)價(jià)法。

40、(3) . 闡明通過(guò)影響腎臟的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，抑制致炎細(xì)胞因子的表達(dá)及 / 或促進(jìn)抗炎細(xì) 胞因子的表達(dá)是通脈口服液治療慢性腎炎的機(jī)制。(4) . 在國(guó)家或國(guó)外核心期刊發(fā)表 58 篇研究論文。(5) . 培養(yǎng)博士后及博士研究生各一名。三、研究基礎(chǔ)與本項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累和已取得的研究工作成績(jī). 經(jīng)過(guò) 1997.82000.8 廣東省科委重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目通脈口服液防治慢性腎炎氣虛血 瘀證的臨床與實(shí)驗(yàn)研究三年多嚴(yán)格的臨床與實(shí)驗(yàn)研究，充分證明通脈口服液是治療慢性 腎炎氣虛血瘀型患者的有效藥物，療效確切，臨床總有效率達(dá)93.75% ，優(yōu)于對(duì)照組（ P<0.01 ）；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示該藥可顯著減輕腎臟病理?yè)p

41、害，突出表現(xiàn)在減輕了系膜區(qū)IgG的沉積，抑制了系膜細(xì)胞與系膜基質(zhì)的增生，達(dá)到防治腎小球硬化的目的；且未發(fā)現(xiàn)明顯 毒副作用。課題按期結(jié)題，經(jīng)鑒定，成果水平達(dá)國(guó)內(nèi)領(lǐng)先。 2000 年“通脈口服液及其配制 研究”已申報(bào)中國(guó)發(fā)明專利，專利申請(qǐng)?zhí)?01129938.X 。. 已在國(guó)家核心刊物上發(fā)表通脈口服液相關(guān)論文多篇. 通過(guò)多年的持續(xù)研究，已建立了與本項(xiàng)目相關(guān)的植化、藥理學(xué)、化學(xué)分析（含指 紋圖譜）、細(xì)胞培養(yǎng)等研究技術(shù)及方法 , 所需儀器設(shè)備基本齊備。（4）主要研究人員曾承擔(dān)廣東產(chǎn)化橘紅指紋圖譜的研究課題, 其相關(guān)技術(shù)可應(yīng)用于本項(xiàng)目研究。（5）經(jīng)過(guò)初步的臨床研究、藥效學(xué)研究、急性毒性試驗(yàn)、藥物工藝、劑

42、型及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的 研究，通脈口服液現(xiàn)已被制成院內(nèi)制劑，臨床上應(yīng)用于防治慢性腎炎及其他各種腎病，收 到了滿意的療效 , 創(chuàng)造了良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益附已發(fā)表的與該課題有關(guān)的論文 : 1. 包崑,楊霓芝 .慢性腎小球腎炎氣虛證及其兼夾標(biāo)證分析 .江 蘇中醫(yī) ,2000,5:10112.楊霓芝,包崑, 王立新,等. 通脈口服液對(duì)慢性腎炎氣虛血瘀證大鼠模型的藥效學(xué)研究.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào) ,2000,17（4）:332-336楊霓芝 ,包崑,王立新 ,等. 通脈口服液對(duì)大鼠慢性腎炎“氣虛血瘀證”模型的組織形態(tài)學(xué)影響.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志 ,2001,15（3）:31-33 王 立新 , 楊霓芝 , 包崑

43、 , 等 . 通 脈 口 服 液對(duì)系膜增生性腎炎大鼠血液流變學(xué)的影響. 中 醫(yī) 藥 研究,2001,17（1）:42-435. 王 立 新 , 楊 霓 芝 , 包 崑 , 等 . 通 脈 口 服 液 對(duì) 慢 性 腎 炎 氣 虛 血 瘀 證 免 疫 功 能 的 影 響 , 中 醫(yī) 藥 研 究,2000,16（5）:16-181. 已具備的實(shí)驗(yàn)條件，尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑（包括利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和 部門開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃與落實(shí)情況）已落實(shí)設(shè)于本校的國(guó)家中藥現(xiàn)代化技術(shù)工程研究中心的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及藥理室、 中心實(shí)驗(yàn) 室等實(shí)驗(yàn)室，可供本項(xiàng)目?jī)?yōu)先使用。有關(guān)預(yù)試驗(yàn)已在本校植化室、儀器分析室、中心實(shí)驗(yàn) 室進(jìn)

44、行。經(jīng)長(zhǎng)期的相關(guān)研究積累，目前項(xiàng)目所需儀器設(shè)備基本齊備。 需購(gòu)置實(shí)驗(yàn)相關(guān)的動(dòng)物、試劑等 714歡。迎下載精品文檔15歡。迎下載精品文檔* 論文：作者·題目·刊名·年份·卷（期） ·頁(yè)碼 專著：作者·書名·出版者·年份五、經(jīng)費(fèi)預(yù)算支出科目金額 (萬(wàn)元)計(jì)算根據(jù)及理由合計(jì)201. 科研業(yè)務(wù)費(fèi)(合計(jì))3.5(1) 調(diào)研費(fèi)1.5含產(chǎn)地調(diào)研及學(xué)術(shù)會(huì)議費(fèi)用。(2) 業(yè)務(wù)資料費(fèi)2.0含論文發(fā)表費(fèi)、資料整理、打印及鑒定等費(fèi)用。2. 實(shí)驗(yàn)材料費(fèi) (合計(jì) )11.7(1) 試劑、藥品費(fèi)7.0含提取分離、測(cè)試試劑及藥效用藥盒、藥品等費(fèi)用

45、。(2) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物費(fèi)3.5含實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)置、飼養(yǎng)所需費(fèi)用(3) 低耗材料費(fèi)1.2HPLC、HPLC-MS分析用相關(guān)軟件的購(gòu)買、 升級(jí)等費(fèi)用。3. 儀器設(shè)備費(fèi) (小計(jì) )1.0(1) 儀器保養(yǎng)費(fèi)1.0含 HPLC-MS、HPCE、 HPLC等儀器保養(yǎng)、維修費(fèi)用。4. 實(shí)驗(yàn)室改裝費(fèi)0.5植化實(shí)驗(yàn)室的改裝費(fèi)用。5. 協(xié)作費(fèi)2.3協(xié)作費(fèi)用。(1) 測(cè)試分析費(fèi)2.3含化學(xué)成分的測(cè)試分析費(fèi)、實(shí)驗(yàn)室化驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)等費(fèi) 用。6. 項(xiàng)目組織實(shí)驗(yàn)費(fèi)1.0科研經(jīng)費(fèi)等的管理、項(xiàng)目實(shí)施。注: 預(yù)算支出科目按下列順序填寫 : 1. 科研業(yè)務(wù)費(fèi) 2. 實(shí)驗(yàn)材料費(fèi) 3. 儀器設(shè)備費(fèi) 4. 實(shí)驗(yàn)室改裝費(fèi)5. 協(xié)作費(fèi) 6. 項(xiàng)目組織實(shí)施費(fèi)。開(kāi)支范圍詳見(jiàn)國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目財(cái)務(wù)管 理辦法第二章。六、申請(qǐng)者正在承擔(dān)的其它研究項(xiàng)目（攀登計(jì)劃、 863 計(jì)劃、攻關(guān)任務(wù)和各部委、省市任務(wù)等項(xiàng)目的名稱及編號(hào)、任務(wù)來(lái) 源、 起止年月、負(fù)責(zé)或參加以及與本申請(qǐng)項(xiàng)目的關(guān)系等情況）益氣固腎透析液對(duì)維持性血液透析病人的影響 300012 廣東省中醫(yī)藥管理